沙丁胺醇对大鼠气道平滑肌细胞内eotaxin表达的影响及其机制探讨

目的 观察气道平滑肌细胞(ASMC)经致敏血清刺激后嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)的表达变化及沙丁胺醇对其表达的影响,探讨其可能的作用机制及β2受体激动剂在哮喘治疗中的作用.方法 无菌条件下分离SD大鼠气管段,组织块贴壁法体外培养ASMC.建立SD大鼠哮喘模型,采血收集血清.以致敏动物血清刺激体外培养的ASMC并收集培养上清及细胞.采用酶联免疫吸附法测定培养液上清中的eotaxin水平；放射免疫法测定培养细胞胞内环磷酸腺苷(cAMP)的表达；逆转录-聚合酶链反应半定量检测培养细胞中的eotaxin mRNA的表达.结果 哮喘大鼠被动致敏后,气道平滑肌细胞可表达eotaxin(n =4,P＜0.05),其表达水平与胞内的cAMP水平呈负相关(P＜0.01,r =0.788)；沙丁胺醇干预后,ASMC中eotaxin的表达明显下降(n=4,P＜0.05).结论 气道平滑肌细胞在致敏状态下eotaxin的表达显著增强,作为炎性分泌细胞参与哮喘发生过程,是哮喘发病机制的重要组成部分.沙丁胺醇可以在哮喘发病中有效抑制炎性细胞因子的表达.     

柴芩承气汤对急性胰腺炎大鼠肠道平滑肌细胞三磷酸肌醇的影响

目的探讨柴芩承气汤（CQCQD）对急性坏死性胰腺炎大鼠肠道平滑肌细胞三磷酸肌醇浓度的影响。方法将30只SD大鼠随机分成对照组、急性坏死性胰腺炎（ANP）组及CQCQD组,采用8%左旋精氨酸腹腔注射制作AP大鼠模型。CQCQD组管喂CQCQD,于6h取血清检测乙酰胆碱（Ach）、胆囊收缩素-8（CCK-8）及5-羟基色氨酸（5-HTP）水平,胰腺组织做病理检查,结肠检测平滑肌细胞内三磷酸肌醇（IP3）及Ca2＋浓度变化。结果CQCQD组胰腺病理评分（4±0.7）低于ANP组（7±1.1）（P〈0.05）。CQCQD组血清CCK-8浓度（31.5±6.2）ng/mL低于对照组（44.0±8.1）ng/mL和ANP组（46.0±7.6）ng/mL（P〈0.05）;ANP组血清Ach浓度（236.1±23.6）ng/mL低于对照组（310.0±26.1）ng/mL和CQCQD组（298.5±24.7）ng/mL（P〈0.05）;ANP组肠道平滑肌细胞IP3（16.3±1.1）pg/mL及钙离子浓度（[Ca2＋]i）（108.0±15.5）低于对照组肠道平滑肌细胞IP3（21.9±1.3）pg/mL及[Ca2＋]i（141.2±20.2）和CQCQD组肠道平滑肌细胞IP3（21.6±1.7）pg/mL及[Ca2＋]i（138.8±16.3）（P〈0.05）。结论 ANP存在血清Ach及平滑肌细胞内IP3水平降低,CQCQD可促进ANP大鼠血清Ach水平及平滑肌细胞IP3浓度升高,促进肠道平滑肌细胞钙库释放[Ca2＋]i,但具体作用机制尚需进一步研究。     

地塞米松对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖及ERK1／2 mRNA表达水平的影响

目的探讨地塞米松对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖及ASMCs上ERK1／2 mRNA表达水平的影响。方法建立哮喘大鼠模型,取气道平滑肌细胞进行原代培养,实验分对照组、哮喘组、地塞米松干预组（终浓度为100HM）。采用流式细胞仪检测各组ASMCs增殖周期的变化。RT—PCR检测ASMCs上ERK1／2 mRNA表达。结果与对照组相比,哮喘组S＋G2/M期细胞所占比例明显增高,G0／G1期细胞所占比例明显减小（均P〈0．01）;与哮喘组相比,地塞米松干预组S＋G/M期细胞所占比例明显降低,G0／G1期细胞所占比例明显增高（均P〈0．01）;干预组S＋G2／M期细胞所占比例仍高于对照组（P〈0．01）。哮喘组ERK1／2 mRNA表达量较对照组和干预组显著增加（均P〈0．01）,干预组与对照组之间比较无差异（P〉0．05）。结论哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖明显,ERK1／2 mRNA表达上调,该结果提示细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）可能参与了气道重塑中平滑肌细胞的增殖过程。地塞米松能下调哮喘大鼠ASMCs上ERK1／2 mRNA的表达,能抑制气道重塑中平滑肌细胞的异常增殖。早期给予地塞米松干预可能延缓气道重塑的进程。     

姜黄素对氧化型低密度脂蛋白诱导的大鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达、细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨姜黄素对大鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达、增殖和凋亡的影响。方法分离SD大鼠血管平滑肌细胞进行培养传代,采用不同浓度的姜黄素作用于氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导的大鼠平滑肌细胞,根据作用药物浓度进行分组,对照组（不加任何药物）,Ox-LDL 100μg/mL组,Ox-LDL 100μg/mL＋姜黄素20μmol/L组,Ox-LDL 100μg/mL＋姜黄素40μmol/L组,Ox-LDL 100μg/mL＋姜黄素80μmol/L组。分析姜黄素对大鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达、对细胞的增殖的影响。按照加入药物浓度进行分组,对照组（不加任何药物）,姜黄素50μmol/L组,姜黄素100μmol/L组,姜黄素120μmol/L组,分析姜黄素对细胞凋亡的影响。结果 Ox-LDL 100μg/mL组MCP-1分泌[（812.6±78.7）ng/L]及MCP-1 mRNA表达水平[（1.18±0.11）]较对照组[（91.3±6.1）ng/L,（0.16±0.04）]显著升高,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。姜黄素对OxLDL诱导的大鼠血管平滑肌细胞MCP-1分泌及MCP-1 mRNA表达、细胞增殖具有显著的抑制作用,对细胞凋亡有诱导作用,并且随着姜黄素浓度的增加,作用越明显（P〈0.01）。结论姜黄素能够抑制Ox-LDL诱导的大鼠细胞平滑肌细胞MCP-1表达以及细胞增殖,诱导大鼠细胞平滑肌细胞凋亡。     

基质金属蛋白酶9在哮喘大鼠中性粒细胞中的表达

目的：观察基质金属蛋白酶9（MMP-9）在哮喘大鼠血中性粒细胞（PMN）中的表达,探讨PMN能否通过合成MMP-9参与哮喘的发病。方法：健康雄性SD大鼠30只,随机分成哮喘组（A组）、布地奈德治疗组（B组）和正常对照组（C组）,用卵蛋白（OVA）致敏和激发的方法建立哮喘模型。分离纯化血PMN,免疫细胞化学法检测MMP-9的表达水平,ELISA法检测血清基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的浓度。结果：A组（0.196±0.011,OD值）PMNMMP-9的表达水平显著高于C组（0.100±0.010,OD值）（P〈0.01）,B组（0.135±0.008,OD值）PMNMMP-9的表达水平显著低于A组但高于C组（均P〈0.01）。A组血清TIMP-1为（34.96±4.54）ng/mL,表达水平显著高于C组的（26.14±3.43）ng/mL（P〈0.01）,B组血清TIMP-1的表达水平显著低于A组但高于C组（P〈0.05或P〈0.01）。MMP-9与TIMP-1的表达水平呈显著正相关（n=29,r=0.713,P〈0.01）。结论：哮喘大鼠PMN合成MMP-9的功能增加,PMN可能部分通过增加合成MMP-9参与哮喘的发病,这种功能可以部分被布地奈德所抑制。     

孟鲁司特钠通过抑制TLR4/NF-κB信号通路影响哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡

目的：探讨孟鲁司特钠（Mon）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡及炎症因子分泌的影响,阐明哮喘大鼠气道重塑及炎症反应的分子机制。方法：采用卵清蛋白致敏和激发构建急性哮喘大鼠模型,原代培养大鼠气道平滑肌细胞,取第5代细胞用于实验。实验分为对照组（正常气道平滑肌细胞）、模型组（哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞）和治疗组（哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞+Mon干预）。采用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测各组细胞上清液中白细胞介素6（IL-6）和转化生长因子β1（TGF-β1）水平,Western blotting法检测各组细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、Toll样受体4（TLR4）和核因子κB（NF-κB）p65蛋白表达水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞中TLR4和NF-κB p65 mRNA表达水平。结果：与对照组比较,模型组和治疗组细胞活性明显升高（P<0.05）,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）,IL-6和TGF-β1水平升高（P<0.05）,PCNA、CyclinD1、Bcl-2、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平及TLR4和NF-κB p65 mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）,而Bax蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,治疗组细胞增殖活性明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,IL-6和TGF-β1水平降低（P<0.05）,PCNA、CyclinD1、Bcl-2、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平及TLR4和NF-κB p65 mRNA表达水平均明显降低（P<0.05）,而Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：Mon可抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡,减轻哮喘气道炎症反应,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

七氟烷对卵白蛋白致敏的高反应气道平滑肌cAMP的影响

目的 观察七氟烷对卵白蛋白致敏的豚鼠的高反应气道平滑肌细胞内环磷酸腺苷(cAMP)的影响。方法40只雄性豚鼠随机分为5组:正常组、致敏组、致敏对照组、致敏2%七氟烷组和致敏4%七氟烷组,每组8只。应用卵白蛋白和测量肺阻力变化曲线建立并评价豚鼠的致敏气道模型。检测致敏豚鼠气道平滑肌细胞cAMP的表达,评价不同浓度七氟烷对高反应致敏气道的扩张作用。结果 与正常组相比,致敏组能显著升高豚鼠的肺阻力变化曲线;与致敏对照组相比,致敏2%七氟烷组和致敏4%七氟烷组的气道平滑肌细胞内cAMP的表达明显增高。结论 七氟烷能够增加卵白蛋致敏的豚鼠的气道平滑肌细胞内cAMP的表达,提示七氟烷可以通过提高高反应致敏气道平滑肌cAMP的表达发挥扩张作用。     

P27kip-1蛋白对支气管哮喘大鼠模型气道平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨P27^kip-1对哮喘大鼠模型气道平滑肌细胞凋亡的影响。方法清洁级（SPF）雄性SD大鼠30只,随机分成对照组、哮喘4周组、哮喘6周组,每组10只。用卵清蛋白（OVA）致敏与激发建立大鼠哮喘模型,HE染色观察和测量气道形态学变化;末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法（TUNEL）检测ASMCs凋亡并计算凋亡指数（AI）;免疫组化法检测P27^kip-1蛋白表达。结果哮喘4周和6周组支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度均显著高于对照组（P〈0．01）,且6周组高于4周组（P〈0．01）;哮喘4周和6周组凋亡指数均显著低于对照组（P〈0．01）,且6周组低于4周组（P〈0．01）;哮喘4周和6周组P27^kip-1蛋白表达显著低于对照组（P〈0．05）。结论哮喘大鼠模型气道平滑肌细胞凋亡减少,可能与P27^kip-1蛋白表达减少有关。     

屋尘螨诱导气道上皮TLR4表达和影响T淋巴细胞分化在哮喘气道炎症中的作用

目的研究屋尘螨（HDM）对于气道上皮Toll样受体4（TLR4）表达及T淋巴细胞分化的影响,以进一步探讨其在哮喘小鼠气道炎症中作用。方法雌性BALB/c小鼠30只随机分为OVA哮喘模型组（OVA组）、HDM组和生理盐水对照组（对照组）。OVA组用卵白蛋白（OVA）致敏与激发建立小鼠哮喘模型,HDM组给予HDM提取液替代OVA致敏与激发,对照组用生理盐水替代OVA。观察小鼠气道及肺组织病理炎症浸润情况,支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及细胞分类计数。ELISA检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ和IL-17的含量。实时荧光定量PCR法测定气道上皮TLR4 mRNA的表达,免疫印迹法测定气道上皮TLR4蛋白的表达。流式细胞技术检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4＋T淋巴细胞百分率情况。结果 OVA组支气管黏膜下水肿,黏液腺增生,以嗜酸粒细胞为主的炎症细胞浸润;HDM组出现肺泡腔及间质充血,中性粒细胞等炎症细胞浸润;对照组小鼠气道上皮无增厚,无炎症细胞浸润,肺泡壁完整。与OVA组比较,HDM组BALF细胞总数及分类计数除嗜酸粒细胞无显著差异外（P〉0.05）,其余均显著升高（P〈0.05）;HDM组BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17水平较OVA组明显增高（P〈0.05）,IFN-γ的表达无显著差异（P〉0.05）;HDM组气道上皮TLR4 mRNA及TLR4蛋白的表达明显增高（P〈0.05）,OVA组与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。与OVA组比较,HDM组外周血Th2、Th17细胞显著增高（P〈0.05）,而Th1细胞无明显变化（P〉0.05）。结论 HDM诱导气道上皮TLR4表达增高,使Th2与Th17淋巴细胞活化,气道内炎症细胞浸润,可能在哮喘气道炎症中起重要作用。     

p-ERK1／2及ERK2mRNA在哮喘大鼠气道中的表达变化

目的探讨细胞外信号调节激酶在哮喘大鼠气道中表达变化及其对气道平滑肌细胞增殖的影响。观察细胞外信号调节激酶是否参与了哮喘气道重构这一病理过程。方法18只6周龄雄性wistar大鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松干预组各6只。以腹腔注射10％卵蛋白和1％卵蛋白雾化吸入复制慢性哮喘模型。干预组在每次激发前给予地塞米松干预。用免疫组化与原位杂交法检测p-ERK1／2及ERK2mRNA在不同大鼠肺组织的表达程度，采用图像分析系统进行图象分析。结果（1）哮喘模型组气道壁面积和平滑肌厚度较对照组和干预组显著增加（P〈0．05）。（2）哮喘组p-ERK1／2及ERK2mRNA在大鼠肺组织的表达程度较对照组和干预组显著增加（P〈0．05）。（3）直线相关性分析显示，哮喘组气道壁面积和平滑肌厚度与大鼠肺组织中p-ERK1／2表达水平呈正相关（分别为r=0．858，r=0．848，P均〈0．05），哮喘组气道壁面积和平滑肌厚度与大鼠肺组织中ERK2mRNA表达水平呈正相关，（分别为r=0．918，r=0．860，P均〈0．05）。结论哮喘大鼠肺组织p-ERK1／2及ERK2mRNA表达上调，并与气道重构密切相关，该结果提示细胞外信号调节激酶可能参与了气道重构中平滑肌的增殖过程。     

沙美特罗替卡松粉吸入剂联合孟鲁司特对支气管哮喘患儿细胞免疫及血清瘦素、嗜酸性粒细胞趋化因子、ECP、LPO的影响

目的探讨沙美特罗替卡松粉吸人剂联合孟鲁司特对支气管哮喘患儿细胞免疫及血清瘦素、嗜酸性粒细胞趋化因子、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）和脂质过氧化物（LPO）的影响。方法将榆林市儿童医院2011年10月-2012年12月收治的90例支气管哮喘患儿根据治疗方法分为研究组和对照组,每组各45例,研究组给予沙美特罗替卡松粉吸入剂联合盂鲁司特治疗,对照组给予沙美特罗替卡松粉吸入剂治疗。比较两组患儿治疗前后细胞免疫及血清瘦素、嗜酸性粒细胞趋化因子、ECP、LPO的变化情况。结果治疗前两组患儿的CD3＋、CD4＋、CD8’及CD4／CD8水平,差异无统计学意义（均P〉0．05）。治疗6：12周时研究组患儿的CD3＋、CD4＋、CD4／CD8f（64．35±7．55）％,（36．42±4．22）％,（1．69±0．15）;（68．56±8．11）％,（39．01±4．77）％,（1．85±0．17）]明显高于对照组[（60．02±6．04）％,（32．96±3．23）％,（1．25±0．14）;（63．31±6．87）％,（34．82±3．88）％,（1．42±0．16）],差异有统计学意义（均P〈0．05）;而研究组CD8±[（28．66±2．45）％]明显低于对照组[（25．21±5．43）％],差异有统计学意义（P〈0．05）。治疗前两组患儿的血清瘦素、嗜酸性粒细胞趋化因子、ECP、LPO比较,差异无统计学意义（均P〉0．05）。治疗6、12周后研究组患儿的血清瘦素、嗜酸性粒细胞趋化因子、ECP、LPO水平[（7．05±0．48）μg／L,（16．35±1．94）ng／L,（11．03±1．35）pg／L,（9．46±0．10）nmol／L;（6．52±0．47）μg／L,（6．48±O．90）ng／L,（6．05±0．79）pg/L,（7．03：t0．55）nmol／L]均低于对照组[（8．73±0．72）μg／L,（25．24±3．15）ng／L,（16．25±1．76）pg/L,（12．83±1．50）nmol／L;（7．95±0．55）μg/L,（9．25±1．03）ng／L,（10．09±1．24）pg／L,（10．22±1．09）nmol／L],差异有统计学意义（P〈0．05）。结论沙美特罗替卡松粉吸人剂联合孟鲁司特对支气管哮喘患儿细胞免疫及血清瘦素、嗜酸性粒细胞趋化因子、ECP、LPO水平的改善有重要作用。     

哮喘患儿血清IL-18水平测定的临床意义

目的探讨IL-18水平在婴幼儿哮喘中的变化和意义。方法采用双抗体夹心ELISA法检测30例哮喘患儿和20例健康对照组患儿血清中IL-18、IL-4和INF-γ的含量,并对检验结果进行统计学处理。结果与对照组相比,哮喘患儿血清中IL-18和INF-γ的含量明显增高（IL-18：202.61±72.30与154.49±48.50 ng/L,P〈0.01;INF-γ：64.36±25.72与43.29±22.24 ng/L,P〈0.01）,IL-4的含量降低（206.20±88.66与228.38±81.79 ng/L）,但差异无显著性（P〉0.05）。结论婴幼儿中哮喘患儿血清IL-18表达增高,可能参与了哮喘的病理过程。     

病毒感染所致的喘息性支气管炎患儿血清嗜酸性粒细胞趋化因子的检测及临床意义

目的探讨血清嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）在病毒感染喘息性支气管炎发病中的作用。方法采用酶联免疫吸附试验方法测定60例病毒感染喘息性支气管炎急性期和40例恢复期患儿以及40例健康儿童血清Eotaxin水平,比较三组儿童的血清Eotaxin水平,分析病毒感染喘息性支气管炎喘息反复发作的可能相关因素。结果急性期血清Eotaxin水平高于恢复期和对照组,差异均具有统计学意义（P〈0．05）;恢复期血清Eotaxin水平与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。随访期内有20例患儿喘息反复发作,其血清Eotaxin水平为（139．45±41．631pg／ml。有特应质性疾病史、家族遗传史和体重肥胖患儿血清Eotaxin水平显著高于无特应质性疾病史、家族遗传史和体重正常患儿,组间比较其差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论血清Eotaxin在病毒感染喘息性支气管炎的发生和发展中起着一定的作用,参与了喘息复发和其他病毒感染所致的喘息性支气管炎患儿易喘息的反复发作。     

川芎嗪对自发性高血压大鼠血清内皮抑素浓度的影响

目的探讨川芎嗪对自发性高血压大鼠血清内皮抑素浓度的影响及其意义。方法 20周龄的自发性高血压大鼠(SHR)随机分为川芎嗪干预组10只和对照组10只。20周龄的Wistar大鼠(WKY)10只作为正常对照组。川芎嗪干预组给予川芎嗪20 mg·kg~(-1)·d~(-1)腹腔注射,共4周,对照组和正常对照组给予等量生理盐水腹腔注射。应用双抗体夹心法(ELISA法)测定血清内皮抑素浓度。结果血清内皮抑素浓度川芎嗪干预组(57±16)ng/ml,对照组(44±3)ng/ml,正常对照组(59±16)ng/ml。干预组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);干预组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论川芎嗪能使自发性高血压大鼠血清内皮抑素浓度升高,这可能是川芎嗪抗动脉粥样硬化的机制之一。     

幽门螺杆菌感染性慢性胃炎患者血清胃泌素、生长抑素的变化

目的了解幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）感染性慢性胃炎患者血清胃泌素、生长抑素的变化,探讨Hp引起慢性胃炎的致病机制。方法选择本院经胃镜和病理诊断的慢性胃炎患者96例,其中慢性浅表性胃炎（CSG）44例,慢性萎缩性胃炎（CAG）52例,采用放免法测定血清胃泌素、生长抑素浓度,用快速尿素酶试验和Giemsa染色检查是否存在幽门螺杆菌感染,比较CSG和CAG血清胃泌素、生长抑素水平以及合并Hp阳性感染组和Hp阴性组血清胃泌素、生长抑素水平变化。结果CAG组血清胃泌素低于CSG组（54．53±23．54）ng／Lvs（77．90±31．77）ng／L,（P〈0．01）,慢性浅表性胃炎Hp阳性组血清胃泌素高于Hp阴性组（86．34±34．35）ng／Lvs（62．53±38．25）ng/L,（P〈0．01）;而慢性萎缩性胃炎Hp阳性感染组和Hp阴性组血清胃泌素水平无差异（P〉0.05）。CAG组血清生长抑素低于CSG组（106．24±28．31）ng/Lvs（132．19±25．86）ng／L,（P〈0．01）;慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎Hp阳性组血清生长抑素均低于同组的Hp阴性组（128．59＋29．12）ng／Lvs（145．99±32．68）ng／L;（95．35±24．88）ng／Lvs（112．36±26．35）ng/L,（P〈0．05）。结论幽门螺杆菌感染引起慢性浅表性胃炎和慢性萎缩性胃炎患者的生长抑素降低;但对于血清胃泌素,慢性浅表性胃炎患者升高,慢性萎缩性胃炎患者下降,Hp感染并不能改变慢性萎缩性胃炎的低胃泌素状态。     

PDGF对哮喘大鼠气道平滑肌细胞中ERK通路的影响研究

目的：研究血小板源性生长因子（PDGF）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）中ERK信号通路的调控作用。方法建立哮喘大鼠模型,原代分离培养ASMC,设未干预组（A组）、ERK阻断剂组（B组）、PDGF组（C组）和PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。A组不加干预;B组又分为B1、B2、B3、B4组,分别加入浓度为0.1、1、5、10μmol/L的ERK阻断剂U0126;C组又分为C1、C2、C3、C4组,分别加入浓度为1、10、25、50μg/L的PDGF同二聚体PDGF- BB;D组加入10μmol/L的U0126和50μg/L的PDGF- BB。以RT- PCR法检测各组ERK1和TGF-β1的mRNA表达,免疫组化法检测A、B4、C4和D组中以上蛋白的表达。结果 RT- PCR提示B1、B2、B3、B4组ERK1 mRNA表达均显著低于A组（均P＜0.01）,U0126以浓度依赖的方式抑制PDGF诱导的ASMC中ERK的活化,C1、C2、C3、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（均P＜0.01）,ERK1 mRNA的表达与PDGF- BB存在明显的浓度依赖关系,D组与A组比较无统计学差异（P＞0.05）。免疫组化提示B4组ASMC中ERK1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）;B4组TGF-β1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组,同时C4组显著高于B4组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）。结论 PDGF可剂量依赖性激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路,同时伴随TGF-β1信号通路的活化。ERK通路参与了ASMC增殖的细胞内信号转导过程,PDGF可能经ERK环节促进TGF-β1通路活化。     

阿芬太尼预处理对下肢缺血再灌注患者外周血白细胞介素-6、白细胞介素-10及其mRNA表达的影响

目的观察阿芬太尼预处理对下肢缺血再灌注患者外周血白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）及其mRNA表达的影响。方法选取2011年1～7月在青岛市市立医院硬膜外麻醉下使用止血带的单侧下肢择期手术患者24例,随机分为两组：阿芬太尼组（A组）和对照组（C组）,每组12例。上止血带前5 min A组患者缓慢静注阿芬太尼10μg/kg＋生理盐水5 mL;C组患者给予5 mL生理盐水。分别于上止血带前（T1）、松止血带后30 min（T2）、4 h（T3）取静脉血检测细胞因子IL-6和IL-10的mRNA表达及其血浆浓度。结果于T1时A组和C组IL-6[（21.1±3.9）ng/L比（20.8±3.6）ng/L]、IL-10[（30.9±5.3）ng/L比（31.6±4.9）ng/L]浓度、IL-6/IL-10比值[（0.67±0.16）比（0.66±0.15）]及IL-6 mRNA/IL-10 mRNA比值[（1.98±0.47）比（1.94±0.50）]相比T2～3明显升高（P〈0.05）。T2～3时,与C组比较,A组IL-6血浆浓度[（27.9±4.8）、（29.6±5.2）ng/L]、mRNA[（1.05±0.17）、（1.36±0.25）]、IL-6/IL-10[（0.71±0.12）、（0.73±0.15）]及IL-6 mRNA/IL-10 mRNA[（2.03±0.42）、（2.32±0.49）]比值明显低于C组（P〈0.05）。结论术前应用小剂量阿芬太尼预处理用于下肢缺血再灌注患者可有效抑制促炎性细胞因子生成,有益于维持促炎性细胞因子/抗炎性细胞因子相对平衡。     

哮喘小鼠肺组织和肺T细胞β1,3-N-乙酰糖基转移酶的表达

目的研究支气管哮喘模型小鼠肺组织及肺T细胞中三种β1,3-N-乙酰糖基转移酶（Fringe）RFNG、LFNG、MFNG的基因和蛋白表达的特点,探讨Fringe是否与哮喘发病有关。方法使用卵白蛋白腹腔注射后雾化吸入法制备BALB/c小鼠哮喘模型,并设置生理盐水对照组。经Perco1及尼龙毛法分离获取肺T细胞。采用半定量RT-PCR检测两组小鼠肺组织及肺T细胞中RFNG、LFNG、MFNGmRNA表达;Westernblot检测两组小鼠肺组织中RFNG、LFNG、MFNG蛋白表达。结果两组小鼠肺组织及肺T细胞中均存在三种Fringe表达。哮喘组肺组织及肺T细胞的RFNGmRNA表达较对照组增加（肺组织：0.92±0.35比0.51±0.13,P〈0.01;肺T细胞：0.33±0.06比0.18±0.07,P〈0.01）;LFNGmRNA表达较对照组减少（肺组织：0.77±0.32比1.61±0.31,P〈0.01;肺T细胞：0.49±0.19比0.71±0.03,P〈0.01）。MFNG在肺组织中的表达无明显差异（肺组织：1.44±0.29比1.70±0.44,P〉0.05）,但MFNG在肺T细胞中的表达明显减少（0.11±0.03比0.52±0.18,P〈0.01）。肺组织中三种Fringe蛋白表达与肺组织的mRNA结果相似。哮喘组的RFNG蛋白表达高于对照组（1.17±0.04比0.68±0.07,P〈0.05）,MFNG蛋白表达在两者之间没有明显的差异（8.10±0.60比9.12±0.07,P〉0.05）,而LFNG的蛋白表达则低于对照组（4.11±0.38比6.41±0.11,P〈0.05）。结论三种Fringe的异常表达可能与支气管哮喘的发病有关。     

中药脑心通对血管内皮细胞的保护作用

目的：研究脑心通对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）损伤血管内皮的保护作用及其分子机制.方法：在建立人脐静脉内皮细胞（HUVEC）ox-LDL（50mg/L）损伤模型的基础上,以阿托伐他汀（1μmol/L）作为阳性对照,并给予0.2,0.4,0.6,0.8g/kg不同剂量脑心通含药血清预先干预.采用硝酸还原酶法、放免法、分光光度计比色法、流式细胞技术等检测HUVECNO,ET-1,LDH释放量,细胞内Caspase-3活性和早期凋亡率.结果：HUVEC损伤后,ox-LDL组（4.74±1.61）μmol/L与对照组（9.96±1.57）μmol/L相比较,NO的合成显著减少,而ET-1释放明显增加[（44.72±2.01）ng/Lvs（21.42±2.84）ng/L,P〈0.01].与ox-LDL组（4.74±1.61）μmol/L相比较,ox-LDL＋脑心通0.2,0.4,0.6,0.8g/kg组[（8.33±1.78）,（11.35±2.14）,（14.80±2.40）,（17.82±2.02）μmol/L,P〈0.05）]呈剂量依赖性,并可促进NO合成,但对ET-1释放无明显影响.而ox-LDL＋阿托伐他汀组不仅可以促进NO合成,且能抑制ET-1释放（P〈0.01）;ox-LDL可显著提高HUVEC的Caspase-3酶活性,促进LDH释放（P〈0.05）,与ox-LDL组比较,ox-LDL＋脑心通组对此呈剂量依赖性抑制作用[（193.00±16.81）μmol/Lvs（168.00±11.51）,（135.00±11.18）,（117.00±10.37）,（99.00±9.62）μmol/L,P〈0.05],[（470.28±23.34）μmol/Lvs412.14±25.67）,（311.37±28.34）,（294.57±20.22）,（276.49±25.32）μmol/L,P〈0.05],但阿托伐他汀对LDH释放无明显影响.脑心通、阿托伐他汀均能明显抑制ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡（P〈0.01）.结论：中药脑心通可促进内皮细胞NO释放,减轻内皮细胞的损伤与凋亡,是其保护血管内皮的可能机制.     

奥硝唑对牙周炎患者疗效以及炎症因子影响的临床价值分析

目的分析奥硝唑牙周炎治疗中的临床价值。方法选取2011年2月至2013年3月在广东医学院附属医院进行治疗的牙周炎患者78例,采取随机数字表法分为奥硝唑组和甲硝唑组,各39例,奥硝唑组用奥硝唑0.5 g与地塞米松0.75 g混匀,之后再加入10 mL的甘油,将混合糊状药剂在探针的引导下放入患者的牙周袋当中,每日2次,连续使用1周,甲硝唑组采用甲硝唑0.5 g与地塞米松0.75 g混匀,之后再加入10 mL的甘油,将该混合糊状药剂在探针的引导下放入患者的牙周袋当中,每日2次,连续使用1周。对奥硝唑组和甲硝唑组患者治疗前后的牙周相关指标、临床疗效以及对于炎性因子的影响进行观察。结果奥硝唑组治疗后的探测深度以及附着丧失程度显著低于甲硝唑组(P<0.05);奥硝唑组的有效率(92.31%)显著高于甲硝唑组的有效率(82.05%),P<0.05;奥硝唑组与甲硝唑组相比,CRP[(1.61±0.23)mg/L vs(2.13±0.27)mg/L]、白细胞介素6[(15.31±2.63)ng/L vs(19.82±3.92)ng/L]、干扰素γ[(26.18±7.86)ng/L vs(53.41±15.73)ng/L]均显著低于甲硝唑组(P<0.05);白细胞介素4水平[(19.73±4.12)ng/L vs(14.96±2.78)ng/L]显著高于甲硝唑组(P<0.05)。结论奥硝唑能有效治疗牙周炎,疗效显著,临床可广泛推广。