熊去氧胆酸通过调控TGF-β1/Smads信号通路对博来霉素诱导大鼠肺纤维化的影响

目的 基于转化生长因子-β1(Transforming growth factor beta1,TGF-β1)/Smads信号通路探讨熊去氧胆酸(Ursodeoxycholic Acid, UDCA)调控通过博来霉素诱导的大鼠肺纤维化的作用机制。方法 选取100只成年健康雄性Wistar大鼠作为研究对象,采用随机数表法进行分组,分为空白组、模型组、低剂量熊去氧胆酸+博来霉素组、中剂量熊去氧胆酸+博来霉素组、高剂量熊去氧胆酸+博来霉素组,每组各20只。除空白组大鼠外,其余各组均给予大鼠单次气管内滴注博来霉素来建立实验性的肺纤维化动物模型。于造模当天开始给予低剂量熊去氧胆酸+博来霉素组、中剂量熊去氧胆酸+博来霉素组、高剂量熊去氧胆酸+博来霉素组大鼠熊去氧胆酸(剂量分别为50 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)、200 mg/(kg·d))1次/d灌胃。实验第1、7、14、21天所有各组分别抽取4只大鼠,采用酶联免疫吸附剂测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)检测大鼠血清中TGF-β1的表达水平。第21天采用苏木素-伊红染色(H...     

依那普利对博来霉素致大鼠肺纤维化的影响

目的探讨依那普利对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中细胞因子和肺纤维化的影响。方法 60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量依那普利组、中剂量依那普利组、高剂量依那普利组和泼尼松对照组,每组10只。博来霉素诱导大鼠肺纤维化模型。对各组大鼠进行肺泡炎、肺纤维化半定量评分,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中转化生长因子-β1(TGF-β1)、干扰素-γ(INF-γ)、白细胞介素(IL)-1、IL-2、IL-4和IL-6含量,肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(HYP)含量,BALF和血清中间质金属蛋白酶(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的浓度,以及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)m-RNA的表达。结果依那普利剂量依赖性地降低博来霉素诱导的肺纤维化大鼠的肺纤维化评分和肺泡炎评分(P<0.05);降低大鼠BALF中TGF-β1、IL-1、IL-2、IL-4、IL-6的含量(P<0.05),并升高INF-γ含量(P<0.05);升高肺组织中SOD含量(P<0.05),并降低MDA和HYP含量(P<0.05);降低血清及BLAF中MMP-9、TMP-1的含量,降低MMP-9/TMP-1值(P<0.05);降低肺组织TNF-αm-RNA的表达(P<0.05)。结论依那普利可以有效抑制博来霉素诱导的大鼠肺纤维化。     

合成肽S247预先给药对大鼠呼吸机相关性肺损伤的影响

目的 研究合成肽S247预先给药对大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)的影响及其机制.方法 24只雄性SD大鼠随机分为3组(n=8),对照组(C组):不进行机械通气;高潮气量组(H组):潮气量40 ml/kg,呼气末正压0cmH2O,呼吸频率40次/min,吸入氧浓度21%;S247预先给药组(S组):腹腔注射S247 100 mg/(kg·d),1次/d,持续2周,在最后一次注射30 min后开始机械通气,机械通气的参数设定同H组.C组和H组在相同的时间点注射等量生理盐水.机械通气4 h后放血处死大鼠,取肺组织,光镜下观察肺病理变化,测定肺湿/干重比(W/D),免疫组化检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定总蛋白(TP)含量、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)的浓度,并进行白细胞(WBC)计数.结果 与C组比较,H组和S组W/D、WBC计数、TP含量和TGF-β1的表达升高(均P<0.01),H组的MIP-2浓度升高(P<0.01)并且肺组织病理学改变严重;与H组比较,S组W/D、WBC计数、TP含量、TNF-α和MIP-2浓度及TGF-β1的表达降低(P<0.05或P<0.01),肺组织病理学改变明显减轻.结论 S247预先给药可减轻大鼠VILI,其机制与抑制了TGF-β1的激活有关.     

硫化氢对TGF-β1诱导的HK-2细胞上皮间充质转化的抑制作用

目的:观察硫化氢(H2S)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞转分化的影响,并初步探讨其作用的可能机制。方法:以体外培养的HK-2细胞为研究对象,分别用10μg/LTGF-β1、100μmol/LNaHS(H2S的供体)及2者联合作用进行干预,以正常培养的细胞作正常对照。孵育0、15、30及60min后,Westernblot检测4组细胞磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)和Smad2蛋白的表达;孵育48h后,观察细胞形态变化,Westernblot检测4组细胞E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,TGF-β1组细胞发生梭形变,E-cadherin蛋白表达下降(F=1262.535,P<0.001),α-SMA蛋白表达上调(F=1456.030,P<0.001);NaHS+TGF-β1组细胞发生梭形变的程度较TGF-β1组明显减轻,E-cadherin蛋白表达增加(F=65.330,P<0.001),α-SMA蛋白表达下降(F=288.300,P<0.001)。TGF-β1组细胞在15、30及60min时p-Smad2/3表达均较正常对照组增加,而NaHS+TGF-β1组细胞p-Smad2/3的表达较TGF-β1组降低(P<0.05)。结论:H2S可抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化,该作用可能部分通过影响Smad2/3磷酸化程度来完成。     

硫化氢对大鼠MIRI心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨H2S后处理对大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡及缺氧诱导因子- 1α (Hypoxia-inducible faetor-1alpha,HIF-1α)/血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响.方法:以硫氢化钠(Sodium hydrosulfide,NaHS)作为外源性H2S供体.健康雄性SD大鼠24只,随机平均分为3组:假手术(Sham)组、缺血再灌注(Ischemia-reperfusion,IR)组、H2S后处理组.用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(Apoptoticindex,AI),RT-PCR法检测心肌组织HIF-1α和VEGFmRNA表达,Westernblot检测HIF-1α和VEGF蛋白的表达情况.结果:相对于IR组,H2S组心肌细胞AI明显下降(P＜0.01),HIF-1αmRNA及蛋白表达水平明显增加(分别为P＜0.01和P＜0.05),VEGF mRNA和蛋白表达水平亦显著增加(均为P＜0.01).结论:H2S后处理能促进HIF-1α/VEGF的高表达,对心肌缺血-再灌注损伤(Myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)诱导的心肌细胞凋亡有抑制作用.     

复苏中β_1-肾上腺素能受体对大鼠心肌细胞的影响

目的 研究在心肺复苏中,心肌细胞膜β1-肾上腺素能受体(β1-AR)对自主循环恢复(ROSC)前大鼠心肌细胞的影响.方法 SD雄性大鼠50只,随机分为4组:空白对照组(A)、复苏对照组(B)、标准剂量肾上腺素组(S)、大剂量肾上腺素组(H).采用大鼠心肺复苏模型,心跳恢复立即取心肌标本,检测各组心肌组织Na+K+-三磷酸腺苷酶(Na+K+-ATPase)和超氧化物歧化酶(SOD)活力、环磷腺苷(cAMP)和丙二醛(MDA)浓度并进行统计分析;电镜观察心肌细胞超微结构变化.结果 S组与H组心肌ATP酶和SOD活力、MDA浓度差异有统计学意义;心肌cAMP含量S组、H组差异无统计学意义并与心肌损伤程度无相关性.结论 在心肺复苏中,自主循环恢复前心肌细胞β1-AR的兴奋程度可能并不是心肌组织损伤的原因.     

心肌缺血再灌注损伤大鼠胱硫醚β-合酶/硫化氢和血红素氧合酶-1/一氧化碳的相互作用

目的 研究胱硫醚母β-合酶(CBS)/硫化氢(H2S)体系和血红素氧合酶-1(HO-1)/一氧化碳(CO)体系在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的相互作用.方法 30只SD大鼠随机分为5组(n=6):对照组(C组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、心肌缺血再灌注+锌原卟啉(HO-1抑制剂)组(I/R+Z组)、心肌缺血再灌注+羟氨(CBS抑制剂)组(I/R+H组)、心肌缺血再灌注+锌原卟啉+羟氨组(I/R+Z+H组).I/R+Z组、I/R+H组和I/R+Z+H组夹闭左冠状动脉前30 min分别腹腔注射锌原卟啉45μmol/kg、5 mmol/L羟氨1 ml和5 mmol/L羟氨1 ml+锌原卟啉45μmol/kg,C组和I/R组腹腔注射等量生理盐水.缺血30 min再灌注2 h后处死大鼠取心肌组织,测定大鼠心肌组织中H2S、NO、GSH、MDA含量、SOD活性及CBS-mRNA和HO-1-mRNA表达的变化;电镜下观察心肌组织线粒体的变化.结果 与C组相比,I/R组H2S、CO和MDA含量增高,GSH含量和SOD活性降低,CBS-mRNA和HO-1-mRNA表达增高.与I/R组相比,I/R+Z组CO含量降低,H2S和GSH含量增高,CBS-mRNA表达增高,HO-1-mRNA表达降低;I/R+H组H2S和GSH含量降低,CO含量增高,CBS-mRNA的表达降低,HO-1-mRNA表达增高;I/R+Z+H组H2S、CO、GSH含量和SOD活性降低,MDA含量增高,CBS-mRNA和HO-1-mRNA的表达均降低;I/R+Z+H组大鼠心肌组织线粒体损伤加重(P<0.05).结论 CBS/H2S体系和HO-1/CO体系在大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中有相互作用.     

氯沙坦对大鼠肺纤维化的干预作用及机制探讨

目的研究AT1受体拮抗剂氯沙坦对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的干预作用,并探讨其机制。方法雄性SD大鼠45只随机分为三组,每组15只,分别为对照组、博来霉素组(气管内注入博来霉素)及氯沙坦组(气管内注入博来霉素,并给予氯沙坦灌胃)。采用HE染色了解肺泡炎和肺纤维化的情况,免疫组化检测肺内气道的Ⅰ型胶原,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-8(IL-8)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平的变化,并观察BALF中的中性粒细胞数变化。结果氯沙坦组与博来霉素组比较,灌注后第7和21d肺泡炎明显减轻;第21d肺纤维化明显减轻(P均<0·05)。博来霉素组肺间质中Ⅰ型胶原表达持续增强,氯沙坦组Ⅰ型胶原表达明显减少(P<0·05)。氯沙坦组BALF中的中性粒细胞数、IL-8及TGF-β1水平于第7d明显低于博来霉素组(P<0·05),第21d差异无统计学意义(P>0·05)。结论氯沙坦对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型有抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β1水平有关。     

黄连素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响及相关炎症因子的表达变化

目的探讨黄连素在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用。方法 40只雄性SD大鼠随机分为对照组(S组)、模型组(IR组)、黄连素组(H组)和黄连素+Exendin-(9-39)组(HE组)。S组给予生理盐水及行假手术处理,IR组给予生理盐水,H组给予黄连素,HE组给予黄连素+Exendin-(9-39),三组制作大鼠肾脏缺血再灌注模型。观察肾组织病理学改变,检测造模前及造模12 h和24 h后血清中肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平及血清白细胞介素(IL)-10、血管内皮生长因子(VEGF)以及肾组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β、IL-6的含量。本次实验研究时间为2016年9～11月。结果模型制作成功,血清BUN、Cr水平在H组中低于IR组(P0.05),而HE组低于H组(P0.05);IR组、H组、HE组中IL-10、IL-6、TNF-α、VEGF水平均高于S组(P0.05),HE组IL-6、TNF-α水平较H组明显降低(P0.05)。四组IL-1β水平无明显变化。结论黄连素能有效改善肾脏缺血再灌注大鼠的肾功能,其机制可能与抑制肾脏组织炎症反应有关。     

浒苔多糖对非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢及多器官H2S生成的影响

目的 探讨浒苔多糖(EP)对高脂饲料诱导非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂质代谢及多器官内源性硫化氢(H2S)生成的影响.方法 50只成年雌性SD大鼠随机分为5组,每组10只.空白对照组(Normal diet+H2O)、EP对照组[Normal diet+200 mg/(kg·bw·d)EP]、模型组(High-fat diet+ H2O)、EP干预组[High-fat diet+200 mg/(kg·bw·d)EP]、硫氢化钠组[High fat diet+56 μmol/(kg·bw·d)NaHS],持续干预35 d.比较各组大鼠体重、肝脏以及血脂、H2S、CSE、CBS的差异.结果 与模型组比较,EP可显著改善NAFLD大鼠肝细胞脂肪变,降低高脂饲料喂养大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平(P＜0.05),升高血清H2S水平(P＜0.05),增加多个脏器中胱硫醚-β-合成酶(CBS)/胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性(P＜0.05).Western blot分析显示,与模型组比较,EP干预后,NAFLD大鼠大脑中CBS和CSE蛋白表达水平、脾脏和肝脏中CBS蛋白表达水平、心脏和肾脏中CSE蛋白表达水平增高(P＜0.05).结论 EP可能通过促进大鼠多器官生成内源性H2S,改善脂质代谢.     

外源性硫化氢调节TGF-β1/Smad7信号通路改善高同型半胱氨酸血症所致的大鼠心肌纤维化

目的:观察外源性硫化氢(hydrogen suifide,H2S)对高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)诱导的大鼠心肌纤维化及转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和Smad7蛋白表达的影响.方法:将40只成年雄性SD大鼠随机均...     

硫化氢急性中毒大鼠肺组织细胞因子和核因子κB的改变及乌司他丁的影响

目的 探讨硫化氢(H2S)急性中毒大鼠肺组织TNF-α、IL-6、IL-10及核因子κB(NF-κB)的动态变化及乌司他丁(UTI)对其的影响.方法 将96只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组(NS组,n=8),UTI对照组(UTI组,n=8),H2S染毒模型组(H2S组,n=40)和UTI干预组(H2S+UTI组,n=40),分别予以空气、H2S 及UTI.建模后在不同时点处死后采用ELISA法和RT-PCR法测定肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α的水平和mRNA表达变化;RT-PCR法和Western blot法检测肺组织NF-κB mRNA和蛋白的表达;并观察肺组织病理学改变.结果 与NS组比较,2、6、12、24、48 h H2S组大鼠肺组织TNF-α、IL-6、IL-10水平和mRNA表达以及NF-κB mRNA和蛋白表达均明显升高(均P<0.01);与H2S组比较,H2S+UTI组2、6、12、24、48 h TNF-α、IL-6水平和mRNA表达以及NF-κB mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05或0.01),IL-10水平和mRNA表达明显升高(均P<0.01).光镜下见H2S组在染毒后24h肺组织损害明显,H2S+UTI组肺损伤有所减轻.结论 H2S吸入性中毒可致急性肺损伤,早期肺组织中NF-κB表达增加,细胞因子TNF-α、IL-6及IL-10水平升高,而UTI干预能显著降低NF-κB表达及TNF-α、IL-6水平,提高抗炎因子IL-10水平,减轻肺损伤.     

香烟烟雾提取物对转化生长因子β1刺激的人肺成纤维细胞增殖及分泌过氧化氢的影响

目的 观察香烟烟雾提取物(CSE)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的人肺成纤维细胞(HLF)增殖及分泌过氧化氢(H2O2)的影响,探讨CSE可能参与肺纤维化发病的机制.方法 将体外分离培养的HLF细胞分为对照组和TGF-β1(5 ng/mL)刺激组,用不同浓度的CSE(0%、2.5%、5%、10%)进行干预.应用Brdu ELISA法检测细胞增殖;荧光分光光度法测定细胞分泌的H2O2;免疫荧光标记分泌的H2O2和细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.结果 TGF-β1刺激组细胞经免疫荧光标记显示α-SMA阳性表达,说明HLF在TGF-β1,刺激下转化为肌成纤维细胞(MF).TGF-β1,刺激组中,与0%浓度CSE比较,2.5%、5%浓度的CSE干预可以显著促进细胞增殖(P<0.01或0.05),10%浓度的CSE干预抑制细胞增殖(P<0.01).对照组中,与0%浓度CSE比较,2.5%、5%、10%浓度的CSE均使细胞增殖显著减弱(P<0.01或P<0.05),并呈剂量依赖性.TGF-β1刺激HLF细胞能产生一定量的H2O2,CSE干预后分泌产生的H2O2明显增加(P<0.01),经NADPH氧化酶抑制剂二苯基碘(DPI)预处理后检测不到H2O2.免疫荧光标记显示分泌的H2O2来源于α-SMA阳性表达的MF细胞.结论 低浓度的CSE能够促进TGF-β1刺激HLF细胞转化的MF细胞增殖,并显著增加MF细胞向细胞外分泌H2O2,提示CSE可能通过氧化应激参与肺纤维化的发生、发展.     

沉默Rho GDIα抑制矽肺上皮间质转化及其作用机制

目的探讨沉默Rho GDP解离抑制因子α(Rho GDP dissociation inhibitorα,Rho GDIα)对矽肺上皮间质转化的作用及机制。方法转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,分为空载体慢病毒组(LEV)、沉默Rho GDIα慢病毒感染组(Lv-Rho GDIα-inhibition)、TGF-β1诱导LEV组(LEV+TGF-β1)、TGF-β1诱导Lv-Rho GDIα-inhibition组(Lv-Rho GDIα-inhibition+TGF-β1)。采用Western blot法、免疫细胞化学染色检测Rho GDIα、RhoA、Rho激酶(Rho kinase,ROCK)、E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和I型胶原(collagen-I)蛋白表达,采用Western blot法及CCK-8检测细胞增殖能力。结果 Western blot法及免疫细胞化学染色结果显示,与LEV对照组相比,Lv-Rho GDIα-inhibition组Rho GDIα、RhoA、ROCK蛋白表达下降,E-cad蛋白表达上调,α-SMA和collagen-I蛋白表达下降; LEV+TGF-β1组Rho GDIα、RhoA、ROCK蛋白表达上升,E-cad蛋白表达下调,α-SMA和collagen-I蛋白表达上升。与LEV+TGF-β1组相比,Lv-Rho GDIα-inhibition+TGF-β1组Rho GDIα、RhoA、ROCK蛋白表达下降,E-cad蛋白表达上调,α-SMA和collagen-I蛋白表达下降。CCK-8及cyclin D1蛋白检测结果显示,与LEV对照组相比,Lv-Rho GDIα-inhibition组细胞增殖受到抑制,LEV+TGF-β1组细胞增殖增强,与LEV+TGF-β1组相比,Lv-Rho GDIα-inhibition+TGF-β1组细胞增殖受到抑制。结论沉默Rho GDIα可通过调控RhoA/ROCK信号通路抑制上皮间质转化发挥抗矽肺纤维化作用。     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌纤维化及NF-κB p65和TNF-α表达的影响

目的探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌纤维化以及TNF-α和NF-κB p65表达的影响。方法将30只雄性成年SD大鼠分为3组:对照组(Control组)、糖尿病大鼠组(STZ组)、硫化氢干预糖尿病大鼠组(STZ+H2S组),每组10只。用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,40 mg/kg)建立糖尿病模型;Control组每天腹腔注射生理盐水;STZ+H2S组每天腹腔注射硫氢化钠(H2S供体)溶液(100μmol/kg),8周后处死大鼠,HE染色观察心肌组织病理学变化;Western blot检测Ⅳ型胶原蛋白和NF-κB p65和TNF-α的表达。结果与STZ组相比,H2S干预后的心肌细胞间质纤维化明显改善,而与Control组相比,STZ组的Ⅳ型胶原及TNF-α和NF-κB p65蛋白的表达明显增加(P<0.05);与STZ组相比,STZ+H2S组Ⅳ型胶原及TNF-α和NF-κB p65蛋白的表达则明显减少(P<0.05)。结论 H2S改善糖尿病大鼠心肌纤维化,抑制NF-κB/TNF-α的信号通路是其可能机制之一。     

七氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的延迟性保护作用

目的:观察活性氧(reactive oxygen species, ROS)及线粒体ATP敏感性钾离子通道(mitochondrial ATP -sensitive potassium channel, mitoKATP) 介导七氟醚对局灶性脑缺血损伤后炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的影响,探讨七氟醚延迟性脑保护作用机制.方法:84只健康雄性SD大鼠,体质量250～280 g,采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO)并随机分为7组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚预处理组(Sevo组)、ROS清除剂2-硫基丙酰氨基乙酸(2-MPG)+七氟醚(MPG+Sevo组)、mitoKATP通道特异性抑制剂5-羟葵酸盐(5-HD)+七氟醚(5-HD+Sevo组)、单纯MPG及5-HD组,缺血2 h,再灌注24 h后,HE染色,计算神经凋亡指数(AI)并观察组织结构变化,检测缺血侧脑组织TNF-α以及IL-1β含量,并使用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测缺血侧半球皮层半影区TNF-α及IL-1β mRNA表达的变化.结果:与S组比较,缺血再灌注损伤后脑组织AI与TNF-α及IL-1β蛋白水平以及mRNA表达显著升高,应用七氟醚预处理后,AI和脑组织TNF-α及IL-1β蛋白水平以及mRNA表达明显降低.使用ROS清除剂2-硫基丙酰氨基乙酸(2-MPG)以及线粒体ATP敏感性钾离子通道特异性抑制剂5-HD能取消七氟醚预处理效应,但单独使用MPG和5-HD无明显影响(P>0.05).结论:七氟醚对局灶性脑缺血再灌注损伤起延迟性保护作用,其机制可能与降低TNF-α和IL-1β蛋白水平及mRNA表达有关.     

海洛因成瘾大鼠硫化氢/胱硫醚β-合酶体系的变化

目的观察海洛因成瘾对大鼠硫化氢(hydrogen sulfide,H2 S)/胱硫醚β-合酶(cystathionine-β-synthase,CBS)体系产生的影响。方法实验大鼠分成健康对照组、heroin组、heroin+硫氢化钠(NaHS)组,每组10只。heroin组、heroin+NaHS组按剂量递增原则皮下注射海洛因9 d,对照组按同样方式注射等量生理盐水,heroin+NaHS组在每次注射海洛因前30 min腹腔注射NaHS,第10天纳洛酮腹腔注射观察戒断症状。采用亚甲基蓝比色法测定大鼠血浆及海马组织H2S含量,Real-time PCR检测海马组织CBS mRNA表达量。结果 heroin组与健康对照组比较,血浆及海马H2 S含量均明显降低(P<0.05),CBS mRNA表达量显著增高(P<0.05);heroin+NaHS组与健康对照组比较,海马H2S含量明显降低(P<0.05);heroin+NaHS组与heroin组比较,血浆及海马H2S含量明显增高(P<0.05),CBS mRNA表达量明显降低(P<0.05)。结论海洛因依赖可导致大鼠体内H2S水平下降,内源性H2S与CBS之间存在负反馈调节作用,使内源性H2S维持在生理浓度水平。     

秋水仙碱对博来霉素致气道纤维化大鼠白细胞介素-8和肿瘤坏死因子-α含量的影响

目的 观察秋水仙碱对气道内滴入博来霉素导致肺纤维化大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响.方法 将60只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(对照组)、模型组、秋水仙碱干预组(干预组).每组20只,模型组及干预组采用一次性气管内滴入博来霉素(5 m...     

硫化氢对Aβ25-35诱导的小鼠Neuro-2a细胞自噬的影响

目的 探讨硫化氢(H2S)对Aβ25-35诱导的小鼠成神经细胞瘤细胞Neuro-2a自噬的影响及其潜在机制.方法 将Neuro-2a细胞随机分为空白对照组、Aβ25-35处理组、Aβ25-a5+NaHS组、Aβ25 35+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、NaHs组及Aβ25-35+ NaHS+ LY294002组.Aβ25-35+ NaHS组和Aβ25-35+ 3-MA组细胞分别用NaHS和3-MA预处理2h后均加用Aβ25-35继续处理24 h;Aβ25-35+ NaHS+ LY294002组除加入NaHS预处理外需在Aβ25-35处理前0.5h加入特异性PI3K/Akt通路抑制剂LY294002.采用MTT法观察各组细胞存活率,蛋白质印迹法检测自噬蛋白Beclin-1、微管相关蛋白(LC3)及P62的表达,免疫荧光法检测LC3的表达及分布,透射电镜法观察自噬体的形成.结果 (1)与空白对照组相比,Aβ25-35作用细胞后细胞存活率降低(P＜0.05),Beclin-1及LC3-Ⅱ表达增加,P62表达降低(P＜0.05),荧光显微镜及电镜下可见细胞自噬体明显增多.(2)与Aβ25-35组相比,Aβ25-35+3-MA组和Aβ25-35+NaHS组细胞存活率均增高(P＜0.05),Beclin-1及LC3-Ⅱ表达降低,P62表达增高(P＜0.05),自噬体减少.(3)Aβ25-35+NaHS组p-Akt和p-mTOR的表达高于Aβ25-35组(P＜0.05),而加入LY294002后,Aβ25-35+NaHS+ LY294002组细胞p-Akt和p-mTOR表达与Aβ25-35+ NaHS组相比降低(P＜0.05).结论 外源性H2S能对抗Aβ25-35的细胞毒性,可能与活化PI3K/Akt/mTOR途径抑制Aβ25-35引起的细胞自噬相关.     

紫檀芪通过激活线粒体自噬减轻小鼠肾缺血再灌注损伤

目的 研究紫檀芪(PTE)对小鼠肾缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及相关机制。方法 将24只C57小鼠分成4组(n=6),包括假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(IR组)、肾缺血再灌注+5 mg/kg PTE组(IR+PTE1组)和肾缺血再灌注+10 mg/kg PTE组(IR+PTE2组)。采用苏木素-伊红(HE)及TUNEL染色评估肾组织损伤。采用相关试剂盒检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平。采用Western blot检测肾脏组织Bcl-2相互作用蛋白3(BNIP3)和微管相关蛋白轻链(LC)-3Ⅱ的表达。结果 与S组比较,IR组血清Cr、BUN、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,肾小管损伤评分及凋亡指数升高,BNIP3和LC3-Ⅱ表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);与IR组比较,IR+PTE1组血清Cr、BUN、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,肾小管损伤评分及凋亡指数降低,BNIP3和LC3-Ⅱ表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)...