Ⅰ型过敏试验动物模型比较研究

目的:通过观察速发型过敏反应发生时的敏感指标的含量变化,比较常用于中药注射剂速发型过敏反应的几种动物模型的优劣.方法:①以卵蛋白为致敏原,直接对SD大鼠、BN大鼠、豚鼠进行致敏和激发,通过观察过敏反应的症状,ELISA法测量血清中的IgE、组胺、类胰蛋白酶以及β-氨基己糖苷酶的含量变化.②SD大鼠皮下注射致敏后的动物血清进行被动皮肤过敏试验,观察大鼠皮下是否出现蓝斑以及蓝斑面积.结果:①在致敏和激发途径、注射卵蛋白的剂量、次数、间隔时间相同的情况下,SD大鼠、BN大鼠、豚鼠血清中IgE、组胺、类胰蛋白酶以及β-氨基己糖苷酶的含量与相应的生理盐水组比均具有显著性的差异.其中豚鼠血清中IgE、类胰蛋白酶以及β-氨基己糖苷酶的变化率均高于SD大鼠和BN大鼠.BN大鼠血清中的组胺变化率高于豚鼠和SD大鼠.②被动过敏试验显示:BN大鼠卵蛋白组在SD大鼠上可造成明显的蓝斑.结论:仅采用豚鼠作为评价中药注射剂过敏反应的动物模型尚不能完全反映注射剂是否能引起过敏反应,增加不同品种试验动物以及相关检测指标,能更加全面的评价中药注射剂的致敏性.     

鱼腥草注射液I型过敏反应试验

目的 观察鱼腥草注射液经静脉注射给药后是否出现全身主动过敏反应和被动皮肤过敏反应.方法 豚鼠分别腹腔注射鱼腥草注射液5 ml/kg,0.9%NaCl注射液5 ml/kg及牛血清白蛋白生理盐水注射液 5 ml(60 mg)/kg ,隔日1次,连续3次进行致敏.末次致敏后12 d各组静脉单次注射2倍剂量的以上相应受试物进行激发,观察30 min内是否出现过敏反应;SD大鼠皮内注射相应抗血清0.1 ml被动致敏48 h后,分别静脉注射鱼腥草注射液10 ml/kg,0.9% NaCl注射液10 ml/kg和牛血清白蛋白生理盐水溶液10 ml(100 mg)/kg,及1%伊文思蓝溶液1 ml进行激发,30 min后处死动物,观察注射点皮肤蓝斑直径.结果 鱼腥草注射液致敏期间豚鼠未出现任何异常反应,给予激发剂量后亦未出现明显异常反应,未引起豚鼠死亡;鱼腥草注射液组和0.9%NaCl注射液组大鼠背部皮肤内层均未出现蓝斑.结论 在该试验剂量条件下,鱼腥草注射液豚鼠全身过敏反应、大鼠被动皮肤过敏均为阴性.     

致敏RBL-2H3细胞在清开灵、痰热清中药注射剂过敏性评价中的应用

目的探索采用血清抗体致敏的RBL-2H3细胞对清开灵、痰热清2种中药注射剂过敏性进行初步评价。方法以阳性药卵白蛋白(OVA)、清开灵注射液、痰热清注射液分别与Al(OH)3凝胶佐剂混合作为致敏源,Wistar大鼠sc致敏源制备抗体血清,采用放免法检测血清总Ig E水平。取抗体血清致敏RBL-2H3细胞,48 h后再以药物激发致敏细胞,检测细胞脱颗粒后上清液中β-氨基己糖苷酶释放率。另取大鼠进行被动皮肤过敏(PCA)实验,观察动物皮肤蓝斑阳性反应率。结果与对照组相比,OVA、清开灵、痰热清组大鼠抗体血清总Ig E水平著显升高(P0.05、0.01)。致敏细胞脱颗粒结果显示:采用OVA和清开灵、痰热清注射液抗体血清致敏细胞,再经药物激发后RBL-2H3细胞上清液中β-氨基己糖苷酶释放率明显增加(P0.05、0.01),与对照组比较,最大的相对释放倍数分别为3.7、1.53、1.98。大鼠PCA实验结果显示,各给药组大鼠蓝斑阳性反应最高百分率分别为100%、100%、86%。RBL-2H3细胞实验与PCA实验结果具有较好的一致性。结论血清抗体致敏RBL-2H3细胞模型可以用于对中药注射剂过敏性的初筛或评价。     

中药注射剂致敏反应的研究进展

目的 :探讨中药注射剂致敏反应实验研究概况,为中药注射剂的研究及应用提供思路。 方法 :概括归纳近年来国内外中药注射剂致敏性相关实验研究。 结果 :中药注射剂的过敏性抗原物质尚不明确,研究尚缺乏系统性,对致敏因素、致敏模型的研究还处于摸索阶段。 结论 :加强绿原酸及附加剂的抗原性研究,建立致敏动物模型,充分利用免疫化学和免疫芯片技术,为中药注射剂的开发和应用,提供新的研究思路。     

BN大鼠与豚鼠用于药物致敏性评价的比较

目的:比较豚鼠和BN大鼠过敏试验,以寻找用于致敏原检测的更为敏感的动物模型.方法:将白色豚鼠和BN大鼠(Brown Norway rat)分别随机分为2组:1正常对照组,2牛血清白蛋白组.牛血清白蛋白组于试验的1,3,5 d分别腹腔注射0.6%牛血清白蛋白以致敏,1 mL/次,共3次.对照组腹腔注射给予相同体积的生理盐水注射液.于末次致敏后第7,14天,牛血清白蛋白组分别静脉注射2.4%牛血清白蛋白1 mL/次以激发过敏;而对照组静脉注射相同体积生理盐水.分别于第1次及第2次静脉注射后,观察每只动物过敏反应情况,根据过敏反应症状评分,评价过敏反应强弱;并从眼眶静脉丛取血,分离血清,采用ELISA竞争试验法检测IgE含量;此外,采用激发后动物的血清,用SD大鼠进行被动皮肤过敏试验,计算蓝斑面积,测定并计算伊文思蓝染料的渗出量.结果:豚鼠第1次及第2次激发后,牛血清白蛋白组的过敏症状评分与对照组比较无明显差异;BN大鼠第1次及第2次激发后,牛血清白蛋白组出现明显的过敏反应,经非参数秩和检测与对照组比较均有显著性差异;被动皮肤过敏试验显示,BN大鼠牛血清白蛋白组血清在SD大鼠上可造成明显的蓝斑和伊文思蓝渗出量明显增加.而豚鼠牛血清白蛋白组的蓝斑不明显,伊文思蓝渗出量与对照组比较无明显差异.同种动物比较,牛血清白蛋白组和对照组血清IgE含量无明显差异.结论:BN在主动全身过敏反应和被动皮肤过敏反应中均显示牛血清白蛋白呈现阳性反应,而豚鼠反应不明显,因此,BN大鼠用于致敏原检测比豚鼠更为敏感.同时,BN大鼠在技术操作上比豚鼠更方便和容易.     

双黄连注射剂的不良反应研究

目的观察黄芩苷、绿原酸和双黄连注射剂的致敏性。方法将黄芩苷、绿原酸、黄芩苷和绿原酸等比混合物(黄绿混合物)和双黄连注射剂与正常BN大鼠血清体外孵育制备完全抗原,免疫BN大鼠,制备抗血清,并采用ELISA法检测组胺含量及其抗血清效价。结果黄芩苷抗血清效价为1:8,绿原酸抗血清效价为1:32,黄绿混合物抗血清效价为1:64,双黄连注射剂抗血清效价为1:128。结论黄芩苷、绿原酸、双黄连注射剂具有致敏性,推测双黄连注射剂作为一个复方引起不良反应可能与黄芩苷和绿原酸相关。     

中药注射剂致敏物质筛选方法

中药注射剂不良反应病例报道逐渐增多,中药注射剂的安全性问题,引起了政府、企业、医生、患者以及社会其他人员的质疑和空前关注。建立准确、早期、快速的中药过敏反应检测方法势在必行。本文综述了筛选中药注射剂中致敏物质的体内和体外方法,为探求过敏原,选择高效、灵敏的致敏检测方法,提高准确率,解决中药注射剂的不良反应,保证临床安全用药提供有益的参考。     

刺五加注射液致敏性物质筛选的初步研究

目的：评价刺五加注射液的过敏性,筛选刺五加注射剂中的致敏物质。方法：采用体内外方法同时评价刺五加注射液的过敏性,将被动皮肤过敏试验（PCA）方法进行改良,应用改良后的方法,以随机选取的三批刺五加注射液经冻干浓缩后与弗氏佐剂混合作为抗原,进行对大鼠的PCA试验,结合致敏后大鼠腹腔肥大细胞内外组胺量判断刺五加注射液的致敏性,采用PCA试验对致敏批次的刺五加注射液的致敏部位进行了初步筛选。结果：三批刺五加注射液中,有一批可引起大鼠产生阳性蓝斑过敏反应,致敏大鼠细胞组胺量升高,经PCA试验初步分析,醇沉部位可引起阳性过敏反应。结论：临床上出现的有过敏反应的某些批号的刺五加注射液可引起大鼠产生过敏反应,但由于动物之间的个体差异性以及临床用药缺乏合理性,未能将收集到的所有临床上发生过敏反应的刺五加注射液的过敏性检出,临床应用刺五加注射液的不良反应中,应考虑I型变态反应的存在,其致敏物质可能是由于刺五加注射液生产工艺中醇沉不完全,导致大分子物质残留所致。     

辛芩片剂治疗过敏性鼻炎的主要药效学研究

目的:研究辛芩片剂对过敏性鼻炎的治疗作用.方法:采用抗血清致大鼠同种被动皮肤过敏和小鼠耳异种被动皮肤过敏,二甲苯致小鼠耳肿胀,组胺致大鼠鼻粘膜毛细血管通透性增高实验模型,研究辛芩片剂(细辛、荆芥、抗风、白芷等)对过敏性鼻炎的影响,并与辛芩颗粒剂进行同步比较.结果:与空白溶媒组比较,辛芩片剂(3g生药·kg-1)能抑制大鼠同种被动皮肤过敏、小鼠耳肿胀和组胺致大鼠鼻粘膜毛细血管通透性的增加(P＜0.05),而辛芩片剂(6g生药·kg-1)能明显抑制大鼠同种被动皮肤过敏、小鼠耳异种被动皮肤过敏反应、小鼠耳肿胀和组胺致大鼠鼻粘膜毛细血管通透性的增加(P＜0.01),同时辛芩片剂与辛芩颗粒抗过敏性鼻炎的作用没有差异(P＞0.05).结论:辛芩片剂具有明显的抗过敏、抑制炎性水肿和拮抗组胺的作用,可用于过敏性鼻炎的治疗.     

辛香颗粒主要药效学的实验研究

目的：探讨辛香颗粒治疗过敏性鼻炎理论依据。方法：用抗血清致大鼠被动皮肤过敏，二甲苯致小鼠耳肿胀等动物模型和方法。结果：辛香颗粒对被动皮肤过敏大鼠有明显保护作用。能明显抑制小鼠耳肿胀，具有较好的抗炎作用。结论：辛香颗粒对过敏性鼻炎有一定的治疗作用。     

青黛克银丸抗过敏作用的实验研究

目的:研究青黛克银丸的抗过敏作用.方法:采用卵蛋白(OA)致大鼠同种被动皮肤过敏(PAC)和豚鼠离体回肠平滑肌过敏性收缩反应以及2.4-二硝基氯苯诱发NIH小鼠迟发性超敏反应(DTH)动物模型,现察青黛克银丸的抗过敏作用.结果:青黛克银丸对OA致敏豚鼠离体回肠平滑肌具有快速拮抗过敏性收缩作用,对大鼠同种被动皮肤过敏和小...     

2种品系大鼠被动皮肤过敏反应的差异性比较

目的:比较SD,Wistar 2种品系大鼠对卵蛋白(OVA)、天花粉蛋白(TCS)诱导的被动皮肤过敏(passive cutaneous anaphylaxis,PCA)反应的差异性。方法:选用SD,Wistar 2种品系大鼠,以OVA,TCS为致敏原,PCA反应时出现蓝斑的直径及阳性反应率作为判别标准,进行大鼠同种或小鼠异种PCA试验,并考查佐剂的应用与否对试验结果产生影响。结果:大鼠同种PCA加或不加佐剂的TCS反应均为阳性,蓝斑直径大小SD大鼠＞Wistar大鼠;加入氢氧化铝凝胶佐剂可提高两品系大鼠对OVA的过敏反应阳性率,且Wistar大鼠的敏感性高于SD大鼠;小鼠异种PCA试验显示:耳廓皮内分别注射两种品系大鼠不加佐剂致敏的OVA抗血清时均呈阴性反应,注射SD大鼠天花粉蛋白抗血清后,呈阳性反应;分别注射加入佐剂致敏的OVA,TCS抗血清,则小鼠异种PCA反应均呈阳性。结论:2种品系大鼠对OVA,TCS的敏感性存在较大差异,SD大鼠对TCS较敏感,而Wistar大鼠对OVA的敏感性较强;加入佐剂可提高两种品系大鼠对OVA的过敏反应阳性率。     

不同品系大鼠对天花粉蛋白诱导被动皮肤过敏差异性的比较研究

目的比较SD、Wistar和F344三种品系大鼠对天花粉蛋白诱导的被动皮肤过敏(Passive cutaneous ana-phylaxis,PCA)反应的差异性。方法选用SD、Wistar和F344三种品系大鼠,用天花粉蛋白为致敏原,以PCA反应时出现蓝斑的直径及蓝斑OD值变化率作为判别标准,进行大鼠同种或小鼠异种PCA试验。结果大鼠同种PCA试验显示,每只大鼠注射天花粉蛋白0.9 mg后,三种品系大鼠PCA反应均为阳性,蓝斑直径大小及蓝斑OD值变化率从大到小依次为:SD、F344大鼠Wistar大鼠;小鼠异种PCA试验显示,耳廓皮内分别注射三种品系大鼠天花粉蛋白抗血清后,小鼠异种PCA反应均为阳性,耳廓蓝染OD值变化率从大到小依次为:SD大鼠抗血清组F344大鼠抗血清组Wistar大鼠抗血清组。结论三种品系大鼠对天花粉蛋白的敏感性存在差异,其中以SD大鼠最为敏感。     

检测原代肥大细胞组胺释放分析中药注射剂致类过敏性

目的: 通过检测组胺释放考察19种临床常用中药注射剂致大鼠腹腔原代肥大细胞脱颗粒情况,为评价中药注射剂致类过敏性提供参考。 方法: 应用荧光法检测组胺,并进行条件优化以适用于中药注射剂所致肥大细胞释放组胺的检测。分离大鼠腹腔肥大细胞,分别将19种中药注射剂、阳性药C48/80和肥大细胞混合孵育1h,采用优化的荧光法检测组胺,再计算组胺释放率并进行统计学分析。 结果: 荧光法检测组胺最佳缩合反应时间为3 min,终止反应后7.5~30 min缩合物稳定性好;采用间接检测组胺释放率与直接检测组胺释放率两方法结果间无显著差异。痰热清、清开灵、参麦、丹参、血塞通、参附、双黄连、生脉、香丹、热毒宁、复方当归等11种中药注射剂致肥大细胞释放组胺作用明显。脉络宁、黄芪、艾迪、醒脑静、黄芪多糖、红花、盐酸川芎嗪、参芪等8种注射剂未见明显致肥大细胞释放组胺作用。 结论: 中药注射剂引发的过敏样反应可能大多为类过敏,检测组胺释放分析原代肥大细胞脱颗粒试验可以为评价中药注射剂的致类过敏性提供参考。     

注射用双黄连与生脉注射液对Hartley豚鼠与BN大鼠主动全身过敏反应的影响

目的:研究注射用双黄连、生脉注射液对Hartley豚鼠与棕色挪威(BN)大鼠的主动全身过敏反应(active systemic anaphylaxis,ASA)及其相关指标,为完善中药注射剂过敏性评价提供实验依据。方法:取Hartley豚鼠或BN大鼠随机分为卵蛋白(OVA)组、注射用双黄连(双黄连)组、生脉注射液(生脉)组、正常组。2种动物分别隔日ih受试药物致敏液3次,于致敏后第14天静脉注射相应的激发液,观察激发后30 min动物的全身过敏反应症状,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变。放射免疫法检测BN大鼠在致敏前及激发后血清总免疫球蛋白E(Ig E)水平的变化、致敏激发后血清类胰蛋白酶变化。结果:对Hartley豚鼠或BN大鼠,OVA组、双黄连组动物均呈现过敏反应症状,肺组织病理切片显示均有明显淋巴细胞浸润等炎症病理表现,但双黄连组较轻。生脉组则未见过敏反应症状以及肺组织病理异常。与正常组比较,OVA组、双黄连组、生脉组大鼠激发后血清总Ig E水平显著升高(P0.05,P0.01)。与致敏前同组动物血清总Ig E水平比较,激发后OVA组、双黄连组血清总Ig E水平显著升高(P0.05,P0.01)。与正常组比较,OVA组、双黄连组大鼠激发后血清类胰蛋白酶水平显著升高(P0.01,P0.05),生脉组有升高趋势,但是无显著差异。结论:采用不同品种实验动物及增加相关检测的指标,能更全面评价注射用双黄连、生脉注射液潜在的致敏性。     

被动皮肤过敏试验影响因素初步研究

目的：探讨被动皮肤过敏试验（PCA）的影响因素,为选择敏感试验条件和提高试验预测的准确性提供试验依据。方法：采用卵白蛋白为抗原,在不同试验条件下（动物种属、致敏剂量、致敏途径）进行PCA试验。结果：①对抗原的免疫应答敏感性方面,豚鼠明显强于SD大鼠。②一定剂量范围内,豚鼠PCA反应强弱呈现出剂量依赖性,低于一定剂量时,不能得到阳性结果。③在临界致敏剂量下不同致敏途径对豚鼠PCA试验没有明显影响。④加用佐剂能够显著增强豚鼠和SD大鼠的免疫应答敏感性。⑤在抗原微量时,增加免疫次数能够增强免疫应答的敏感性。     

大鼠主动全身过敏试验方法的探讨

目的建立大鼠主动全身过敏试验模型,评价中药注射剂过敏反应。方法选用豚鼠和BN、F344、SD、Wistar4种品系大鼠,以卵白蛋白(OVA)、天花粉蛋白(TCS)、清开灵注射液、注射用灯盏花素为受试物,分别隔日腹腔注射致敏,共3次,于末次致敏后第14天静脉注射2倍致敏剂量激发。同时设生理盐水对照组。观察各组动物的过敏反应发生率及过敏反应症状。结果阳性药卵白蛋白和天花粉蛋白可引起豚鼠和大鼠发生过敏反应,发生率均为100%,豚鼠发生的过敏反应症状程度略高于大鼠。清开灵注射液可引起豚鼠和BN大鼠发生过敏反应,发生率分别为50%和100%。注射用灯盏花素导致F344、BN和SD大鼠发生过敏反应,发生率分别为100%、100%、83.33%,且F344大鼠呈现强阳性反应,而豚鼠则呈现阴性反应。结论大鼠可推荐作为主动全身过敏试验的动物模型之一,对致敏原的敏感性在动物不同品系间可能存在差异。     

鼻炎口服液抗过敏作用的实验研究

目的:研究鼻炎口服液的抗过敏作用。方法:采用抗血清致大鼠同种被动皮肤过敏、大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒、卵蛋白(OA)引起豚鼠鼻黏膜过敏反应、磷酸组胺致豚鼠过敏反应与2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱发的DTH小鼠迟发性超敏反应模型,观察鼻炎口服液的抗过敏作用。结果:与空白对照组比较,鼻炎口服液能显著抑制大鼠同种被动皮肤过敏和豚鼠鼻黏膜过敏反应,阻止大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒、提高豚鼠对磷酸组胺的致敏阈并缩短过敏反应的持续时间,抵制DTH小鼠迟发性超敏反应。结论:鼻炎口服液具有一定的抗过敏作用。     

3种品系大鼠对灯盏花素所致 被动皮肤过敏差异性研究

目的:比较F344,SD,Wistar 3种品系大鼠对灯盏花素诱导的被动皮肤过敏(passive cutaneous anaphylaxis,PCA)反应的差异性。方法:取3种品系大鼠随机分为阴性对照组、天花粉组、灯盏花素组。采用sc给药方式,分别给予各组动物不同的药物,进行大鼠同种或大鼠-小鼠异种PCA试验,检测给予灯盏花素后动物皮肤蓝斑吸光度(A),比较药物对F344,SD,Wistar 3种品系大鼠的A变化率。结果:大鼠同种PCA试验显示:3种品系大鼠注射灯盏花素25 mg.kg-1致敏后,F344大鼠皮肤蓝斑A为0.064±0.005 7,明显升高(P<0.05),SD,Wistar大鼠PCA反应均为阴性。大鼠-小鼠异种PCA试验显示:注射F344大鼠抗血清后,小鼠异种PCA反应为阳性,A为0.10±0.01(P<0.05),注射SD,Wistar大鼠抗血清后,反应均为阴性。结论:2种试验方法结果均显示,3种品系大鼠对灯盏花素的敏感性存在差异,其中以F344大鼠最为敏感。     

0期临床试验与中药注射剂上市后临床安全性再评价

中药注射剂不良反应时有发生,临床安全性问题亟待解决,需要进行上市后临床安全性再评价,过敏反应是不良反应评价的主要内容之一.对含有毒药材的中成药、有安全问题的中药注射剂需要开展0期临床试验,0期临床试验使用“微剂量”研究周期内收集必要的药物安全性及药代动力学试验数据,微剂量可以反映中药注射剂的致敏情况.0期临床试验为上市后中药注射剂的安全性再评价提供了新的方法,是否进行0期临床试验,应依据品种是否有安全性问题而定,中药注射剂初始剂量以及样本含量的确定是研究设计的关键问题.