腘窝淋巴结免疫细胞多种表面分子在PLNA评价致敏性中的综合分析

目的利用腘窝淋巴结实验(popliteal lymph node as-say,PLNA)分析腘窝淋巴结免疫细胞多个表面分子在PLNA评价致敏性中的综合变化,旨在提高PLNA的可靠性和灵敏性。方法选用♀BALB/c小鼠,选取具有致敏潜能物质氯化汞(HgCl2)、链脲佐菌素(STZ)、2,4,6-三硝基苯磺酸(TN-BS)和D-青霉胺(D-pen)为供试品,后肢足趾部注射免疫动物1次,5 d后处死动物,取注射侧腘窝淋巴结制备细胞悬液,流式细胞术检测腘窝淋巴结淋巴细胞、效应T细胞、抗原提呈细胞及其MHCⅡ、协同刺激和早期活化等十余种表面分子的变化,探讨这些表面分子在供试品致敏后的综合改变。结果 HgCl2和TNBS引起腘窝免疫细胞多种表面分子明显变化,D-pen和STZ所致的相应变化不明显。结论腘窝淋巴结免疫细胞表面分子变化的综合分析可以判断供试品的致敏潜能;不同供试品引起表面分子变化的种类和强弱有所不同,在致敏性评价中应综合考察各细胞表面分子的变化。     

香菇多糖对免疫抑制小鼠肠道派氏结T细胞的影响

目的研究香菇多糖对环磷酰胺免疫抑制小鼠的肠道派氏结T细胞的影响。方法通过胸腺指数,脾脏淋巴细胞的增殖转化和迟发型超敏反应情况观察香菇多糖对免疫抑制小鼠系统免疫功能的影响;在迟发型超敏反应条件下,通过肠道派氏结T细胞比例、亚群和活化的情况观察香菇多糖对免疫抑制小鼠肠道派氏结T细胞的影响。结果香菇多糖对环磷酰胺诱导的小鼠胸腺指数降低,脾淋巴细胞增殖和迟发型超敏反应能力下降表现出明显的恢复作用;对环磷酰胺诱导的DTH小鼠小肠派氏结数目减少,派氏结中T淋巴细胞比例升高、活化水平降低等肠道黏膜免疫系统抑制状态同样具有明显改善作用。结论香菇多糖可以正向调节免疫抑制小鼠肠道派氏结的T细胞功能,提示香菇多糖对肠道黏膜免疫系统具有一定的免疫调节作用。     

一种大鼠腹腔肥大细胞分离方法

目的介绍一种密度梯度离心分离大鼠腹腔肥大细胞(RPMC)的技术。方法比较改良方法和原方法2种分离的细胞量、活性及纯度。台盼蓝染色检测细胞存活率;甲苯胺蓝染色检测肥大细胞纯度。将弃去密度梯度离心上液2 m(lA方法)与2.5 m(lB方法)比较,以分析弃去的细胞液的量与肥大细胞纯度的关系。用C48/80刺激分离的RPMC,检测细胞释放的β-氨基己糖苷酶和组胺以确定分离的RPMC脱颗粒活性;透视电镜扫描观察细胞。结果改良方法分离的细胞显著多于原方法分离的细胞数;两种方法分离的细胞存活率都在99%以上;肥大细胞纯度都在90%以上。C48/80刺激RPMC,分离的细胞释放大量的β-氨基己糖苷酶和组胺,高于空白对照组。电镜观察细胞具有明显的肥大细胞形态。结论改良的Percoll密度梯度离心分离大鼠腹腔肥大细胞的方法可行。     

香菇多糖口服和注射给药对DTH小鼠耳后淋巴结和小肠派氏结中T淋巴细胞的影响

目的:通过比较口服和注射香菇多糖对DTH小鼠耳后淋巴结和小肠派氏结中T淋巴细胞的影响,探讨肠道粘膜免疫系统在口服药物发挥免疫调节作用中的重要性。方法:28只6～8周龄NIH小鼠随机分为对照组、环磷酰胺免疫抑制模型组、香菇多糖灌胃组、香菇多糖注射组,各组小鼠用2,4-二硝基氟苯背部致敏,4天后耳廓攻击。攻击30小时后,对比各组小鼠耳肿胀差异,并应用流式细胞术检测被攻击耳廓的耳后淋巴结和小肠派氏结中T淋巴细胞的比例变化和活化水平。结果:与环磷酰胺免疫抑制模型组比较,香菇多糖能有效增强小鼠DTH反应,降低耳后淋巴结和小肠派氏结的T细胞比例,提高T细胞活化水平,且口服组的作用明显优于注射组。结论:对比注射给药,口服香菇多糖可以更有效地调节肠道粘膜免疫系统和整体免疫系统功能,提示肠道粘膜免疫系统在口服药物发挥免疫调节作用中扮演着重要的角色。     

大黄牡丹汤对肠道菌群的体外作用

【目的】观察大黄牡丹汤对肠道菌群结构及功能的影响。【方法】分别采用16S r DNA测序法、平板计数法和气相色谱法考察大黄牡丹汤对肠道菌群及其分泌短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)功能的影响。【结果】16S r DNA测序结果表明拟杆菌属、埃希菌属细菌明显减少,乳杆菌属、乳球菌属、变形菌属细菌增多。平板计数结果表明大黄牡丹汤能显著抑制脆弱拟杆菌体外增殖(P0.001)。气相色谱法检测结果表明大黄牡丹汤可显著抑制SCFAs的分泌(P0.05或P0.01或P0.001)。【结论】肠道菌群及其代谢产物可能是大黄牡丹汤发挥药效的靶点。     

农杆菌介导的抗菌肽基因转化阳春砂愈伤组织的研究

目的确定遗传转化条件,将抗菌肽CN基因转入阳春砂愈伤组织。方法以阳春砂愈伤组织为受体材料,以农杆菌EHA105/pCAMBIA1305.2-CN工程细胞介导抗菌肽CN基因转化阳春砂,设计正交实验,通过分析gus报告基因的瞬时表达比较转化影响因素,并对目的基因CN进行PCR检测。结果农杆菌浓度、侵染时间、共培养温度、共培养时间及乙酰丁香酮浓度对转化率的影响有显著差异性。阳春砂愈伤组织遗传转化的最佳条件组合是:农杆菌浓度为OD600=0.5,侵染时间10 min,共培养温度24℃,共培养时间4 d,共培养培养基添加乙酰丁香酮200μmol.L-1。gus基因瞬时表达呈阳性的愈伤组织DNA经目的基因CN的PCR检测可见清晰的目的条带。结论建立了农杆菌介导的阳春砂愈伤组织的转化条件,目的基因CN已转入阳春砂愈伤组织。     

几种常见中药注射剂对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响

目的 通过研究几种常见中药注射剂(TCMI)对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,探讨RBL-2H3细胞模型应用于体外评价TCMI引起类过敏反应的可行性.方法 体外培养RBL-2H3细胞,血塞通等7种TCMI与其共同培养,通过中性红染色法计数脱颗粒的RBL-2H3细胞,显色法计算β-氨基己糖苷酶释放率,ELISA法检测培养上清中组胺含量,观察TCMI对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响.结果 正常RBL-2H3细胞出现少量脱颗粒现象,血塞通、清开灵、双黄连、脉络宁、香丹、穿琥宁等能显著引起细胞脱颗粒;血塞通、穿琥宁和柴胡注射液能不同程度促进β-氨基己糖苷酶的释放;血塞通、清开灵注射液可显著引起RBL-2H3细胞组胺释放.结论 RBL-2H3细胞脱颗粒的检测方法敏感、重复性好,其结果与临床报道有一定的相关性,提示其有评价TCMI所致的类过敏反应的潜在应用价值.     

四君子汤复方总多糖对小鼠肠上皮间淋巴细胞的免疫调节作用

目的 初步探讨四君子汤复方总多糖对小鼠肠上皮间淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocyte,ilEL)免疫功能的影响.方法 取NIH小鼠,按体重随机分为正常组、模型组、四君子汤复方总多糖(Polysaccharides of Si-Jun-Zi Decoction,SJZPS)组和四君子汤去蛋白多糖(Free protein of SJZPS,SJZFP)组,非连续密度梯度离心法提取iIEL,流式细胞(Flow Cytometry,FCM)技术检测iIEL中CD3+和CD69+细胞比例,ELISA法检测iIEL上清液的IFN-γ和IL-2浓度.结果 ilEL中CD3+细胞比例为88.46%;环磷酰胺可使iIEL中CD69+细胞比例下降,iIEL上清液中IFN-γ和IL-2浓度降低,与正常组比较,具有非常显著性差异(P<0.01);SJZPS和SJZFP组中iIEL的CD69+细胞比例以及IFN-γ和IL-2分泌水平明显升高,与模型组比较,具有显著性差异(P<0.05或P<0.01).结论 SJZPS和SJZFP均可提高环磷酰胺抑制的小鼠肠上皮间淋巴细胞的免疫功能,具有肠道黏膜免疫调节作用.     

抗菌肽cecropin B和兔NP-1融合基因转化鱼腥草的研究

目的:将抗菌肽cecropin B和兔NP-1(CN)融合基因转入鱼腥草,培育鱼腥草基因工程新品种。方法:设计并合成抗菌肽融合基因CN,构建重组质粒pBI121-CN,并转入农杆菌LBA4404,以农杆菌介导法转化鱼腥草外植体,将卡那霉素筛选获得的再生抗性植株以快速筛选PCR法进一步筛选阳性植株,再提取基因组DNA进行PCR-Southern鉴定,RT-PCR分析目的基因在鱼腥草中的表达,以大肠杆菌K12抑菌圈实验和立枯丝核菌感染实验分析转基因鱼腥草抗菌能力。结果:抗菌肽基因已整合到转基因鱼腥草基因组中并表达,表现出抗菌能力增强的性状。结论:以抗菌肽融合基因CN转化鱼腥草,初步获得抗菌活性提高的转基因植株。     

接触性超敏反应小鼠不同部位T细胞亚群的变化

[目的]比较接触性超敏反应(CHS)小鼠不同部位CD4 +/CD8+T细胞以及辅助性T细胞(Th1/Th2)、细胞毒性T细胞(Tc1/Tc2)的平衡状态.[方法]以二硝基氟苯(DNFB)致敏和攻击BALB/c小鼠,建立CHS模型.采用三色流式细胞术分析CHS小鼠脾脏(SP)、耳后淋巴结(RLN)、小肠派氏结(PPs)和肠系膜淋巴结(MLN)中CD4+T细胞和CD8+T细胞的变化及其胞内细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)与白细胞介素-4(IL-4)的表达水平,观察CHS小鼠不同部位Th1/Th2、Tc1/Tc2比例的变化.[结果]与正常组比较,CHS组RLN与SP中CD4/CD8比值显著下降(均P＜0.01),RLN中以Tc1与Th1占优势,SP中以Tc1与Th2占优势,PPs中Tc1细胞比例、CD4/CD8比值显著上升(均P＜0.05),MLN中各指标无显著性差异.[结论]DNFB诱发的CHS小鼠机体总体免疫平衡向Th1类偏移,Tc1(CD8+ IFN-γ+)细胞是主要的效应细胞.