快速分离YAC末端的方法(论著摘要)

近年来发展的酵母人工染色体ＹｅａｓｔＡｒｔｉｆｉｃａｌＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅ（ＹＡＣ）可以克隆长至几百ｋｂ的ＤＮＡ片段。目前世界上已有一些ＹＡＣ文库，可以用ＰＣＲ方法或传统的原位杂交法来筛选高密度克隆膜以得到单一ＹＡＣ克隆，建立染色体特定区域的ＹＡＣ重...     

遗传性视网膜色素变性3型全基因区的克隆及图谱分析

用酵母人工染色体（ＹＡＣ）克隆遗传性视网膜色素变性３型（ＲＰ３）基因区并建立酶切物理图谱。方法选用和ＲＰ３位点紧密连锁的位标鸟氨酸氨甲酰转移酶（ＯＴＣ）基因作探针，通过菌落原位杂交法筛选Ｘ染色体ＹＡＣ文库；对筛出的阳性ＹＡＣ进行长度测定，顺序标志位点（ＳＴＳ）及酶切图谱分析；综合上述数据，对ＹＡＣ进行重叠排序。结果获得一个覆盖ＲＰ３位点，长度为１．６Ｍｂ的ＹＡＣ重叠群（ｃｏｎｔｉｇ）；并建立了包括ＲＰ３位点范围，酶切位点，ＣｐＧ岛位置和ＹＡＣ定位等信息的精细物理图谱。结论本工作为ＲＰ３基因的识别和克隆打下了基础。     

抗肌萎缩蛋白基因YAC克隆的筛选和鉴定

应用完整的ＤＭＤｃＤＮＡ探针，从人ＹＡＣ基因文库中筛选并Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定５个ＹＡＣ－ＤＭＤ克隆，其分子量分别为９００ｋｂ，８００ｋｂ，６５０ｋｂ，４５０ｋｂ和４５０ｋｂ。这些克隆是抗肌萎缩蛋白基因特定区域ＤＮＡ用之不竭的源泉，为抗肌萎缩蛋白基因结构和发病机制的研究创造了条件。     

中国人基因组YAC文库的构建及首批克隆鉴定

本文采用ＰＪＳ９７／ＰＪＳ９８及ＴＰＨ２７４载主宿系统构建中国汉族男性基因组ＹＡＣ文库，在初探基础上不断改进方法，通过控制脉冲条件的原位筛选去除小片段ＤＮＡ分子，用多胺溶液防止６８℃对大片段ＤＮＡ分子的破坏作用，并采用Ａｇａｒａｓｅ消解低熔点胶。转化获克隆１００００余个，采用甘油一步到位法保存８０００余个，对其中一批克隆进行鉴定，转化子阳性率为９５％，其中７５％的片段介于１００～２００ｋｂ间，１０     

Alu-PCR联合荧光原位杂交技术鉴定bcr基因相关YAC克隆

目的制备慢性髓细胞性白血病（ＣＭＬ）ｂｃｒ基因重排的ＤＮＡ探针。方法应用Ａｌｕ－ＰＣＲ和荧光原位杂交（ＦＩＳＨ） 技术,对３个酵母人工染色体（ＹＡＣ）候选克隆进行鉴定,制备ＤＮＡ探针,并经正常人外周血淋巴细胞和慢性髓细胞性 白血病患者骨髓细胞筛选。结果确定了ＹＡＣ７６５Ｅ３为非嵌合体,定位于染色体２２ｑｌｌ ｂｃｒ基因区域,而且可在Ｐｈ染 色体阳性细胞中易位至９ｑ３４。探针特异性杂交效率达９５％。结论ＦＩＳＨ技术是染色体、染色体畸变鉴定和染色体上特 殊序列定位的重要检测方法。联合应用Ａｌｕ－ＰＣＲ技术特异性扩增载体ＹＡＣ中人类基因组来源的ＤＮＡ制备探针,为慢性髓细胞白血病的诊断和监测微小残留病提供了一个新的手段。     

大鼠自发性高血压和心肌肥厚时热休克蛋白70基因表达的研究

本工作采用热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）核酸分子杂交方法，检测了自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）与其正常对照（ＷＫＹ）大鼠离体培养的主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）受热刺激后以及大鼠腹主动脉缩窄后心肌肥厚时左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的水平，并对ＳＨＲ和ＷＫＹ肝组织基因组ＤＮＡ进行了限制性酶切片断长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。结果表明：ａ．３７℃培养的ＳＨＲＡＳＭＣ及整体ＳＨＲ肝组织ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的基础表达水平均低于ＷＫＹ大鼠，ＳＨＲＡＳＭＣ受热刺激（４２℃１５ｍｉｎ）后２ｈ，ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达增加的程度明显大于ＷＫＹ大鼠。ｂ．大鼠腹主动脉缩后造成左室压力超负荷，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ在压力超负荷４ｈ时已明显升高，１ｄ、２ｄ、１ｗ均维持在高水平，１ｗ后逐渐降低。ｃ．ＳＨＲ和ＷＫＹ鼠肝组织基因组ＤＮＡ经ＢａｍＨＩ酶切后，ＳＨＲＨＳＰ７０基因缺失一条约５．６ｋｂ的片段。提示：ＳＨＲＡＳＭＣ对热敏感性增加；压力负荷增加早期，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达明显增加；ＨＳＰ７０基因结构异常可能与高血压发生有关。     

CEA,CYFRA21—1测定在胸腔积液诊断中的价值

用酶联免疫方法，联合测定胸腔积液患者胸液的ＣＥＡ、ＣＹＦＲＡ２１－１，结果显示恶性胸腔积液组的ＣＥＡ１ＣＹＦＲＡ２１－１水平与良性胸腔积组相比有显著差异性；ＣＥＡ、ＣＹＦＲＡ２１－１联合测定有并协效果；ＣＹＦＲＡ２１－１的特异性、敏感性，准确性无高于ＣＥＡ；ＣＹＦＲＡ２１－１与疾病的病程及治疗过程变化有显著相关性。     

单克隆抗体对LAK细胞抗胰腺癌作用的影响

本文介绍了淋巴因子活化的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞），在ＹＰＣ３抗人胰腺癌单克隆抗体（ＹＰＣ３ｍＡｂ）的介导下，对体外、体内人胰腺癌细胞生长的影响。体外４ｈ５１Ｃｒ释放试验表明，特异性识别Ｃａｐａｎ－２人胰腺癌细胞的ＹＰＣ３ｍＡｂ能通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ＡＤＣＣ）显著增强ＬＡＫ细胞对Ｃａｐａｎ－２细胞的杀伤作用，这种作用随ｍＡｂ的浓度增加而加强，５０μｇ／ｍｌ的ＹＰＣ３ｍＡｂ提高ＬＡＫ细胞杀伤率约６０％。对照ｍＡｂ无此作用。裸鼠体内实验发现，ＹＰＣ３ｍＡｂ与ＬＡＫ细胞联合应用能完全阻止Ｃａｐａｎ－２胰腺癌移植瘤的生长，优于ＬＡＫ细胞、新鲜脾淋巴细胞和ＹＰＣ３ｍＡｂ的单独作用（成瘤率分别为２５％、１００％和１００％）。ＹＰＣ２ｍＡｂ增强ＬＡＫ细胞的抗肿瘤作用可以为胰腺癌的生物学治疗提供一个新方法。     

针灸足三里穴对环磷酰胺小鼠丙二醛的影响

本文采用针灸足三里穴，对环磷酰胺（ＣＹ）小鼠丙二醛（ＭＤＡ）含量的影响作了初步观察，结果提示：针灸足三里穴能降低因ＣＹ所致的ＭＤＡ增高，从而可以克服ＣＹ在治癌过程中带来的不利影响。     

丝裂素活化蛋白激酶介导同型半胱氨酸诱导的血管平滑 …

目的；研究同型半胱氨酸（ＨＣＹ）促进血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的增殖及其机制。方法：采用同位素技术测量＾３Ｈ－ＴｄＲ参入和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性。结果：ＨＣＹ促进ＶＳＭＣ增殖，同时ＨＣＹ增加ＭＡＰＫ活性，二者均具有剂量效应关系，而且二者之间呈显著正相关。结论：ＨＣＹ促进ＶＳＭＣ增殖，可能是通过增加ＭＡＰＫ活性的途径实现的。     

一种新的细胞凋亡相关基因—高同型半胱氨酸诱导基 …

目的 探讨高同型半胱氨酸（ＨＣＹ）血症引起心血管病和出生性缺陷的作用机制。方法 采用诱导筛选方法克隆高同型半胱氨酸诱导基因ＨＣＹ－２，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析检测ＨＣＹ－２基因在大鼠不同组织中的表达，以免疫组化方法验证ＨＣＹ－２蛋白在大鼠不同组织中的表达。结果 以诱导筛选方法从大鼠血管平滑肌细胞内克隆到一个新的全长ｃＤＮＡ，即高同型半胱氨酸诱导基因ＨＣＹ－２，它编码１４２个氨基酸。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ     

丝裂素活化蛋白激酶介导同型半胱氨酸诱导的血管平滑肌细胞增生

目的：研究同型半胱氨酸（ＨＣＹ）促进血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的增殖及其机制。方法：采用同位素技术测定３ＨＴｄＲ参入和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性。结果：ＨＣＹ促进ＶＳＭＣ增殖，同时ＨＣＹ增加ＭＡＰＫ活性，二者均具有剂量效应关系，而且二者之间呈显著正相关。结论：ＨＣＹ促进ＶＳＭＣ增殖，可能是通过增加ＭＡＰＫ活性的途径实现的     

YAG激光晶体内乳化术

ＹＡＧ激光晶体内乳化术孙建初徐建伟李卫朱蔚（△无锡市第五人民医院眼科，无锡２１４０７３）关键词ＹＡＧ激光；晶体内乳化ＹＡＧ激光晶体内乳化术，目前国内、外报道较少，现将本院１９９５年５月至１９９６年１０月施行ＹＡＧ激光晶体内乳化５０例５１只眼的临床报告...     

强化表达分泌型酵母载体YEp5101和YEp5102的构建

采用ＰＣＲ二段扩增法，从酵母基因组中获取６３５ｂｐ完整的ＭＦα（α─ｍａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ）基因及１８０ｂｐ的ＵＡＳＰＧＫ（３─磷酸甘油酸激酶基因的上游激活序列）ＤＮＡ片段。首先，将４３０ｂｐ的ＭＦα基因启动子和信号序列与１８０ｂｐＵＡＳｐＧＫ片段分别克隆到ＰＵＣ１８载体上；然后，从含有ＭＦα基因启动子和信号序列的阳性重组子ｐＭＦα１与含有ＵＡＳＰＧＫ阳性重组子ｐＵＡＳ８质粒中，分别获得ＭＦα基因启动子和信号序列及ＵＡＳＰＧＫ片段，构建成含ＭＦα基因启动子和信号序列的表达分泌型载体ＹＥｐ５１０１及含ＭＦα启动子和信号序列与ＵＡＳＰＧＫ的强化表达分泌型载体ＹＥｐ５１０２。这两种载体可用于外源基因表达的比较研究，探讨ＵＡＳ对外源基因表达的调控作用。     

单克隆抗体对LAK细胞抗胰腺癌作用的影响

本文介绍了淋巴因子活化的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞），在ＹＰＣ３抗人胰腺癌单克隆抗体（ＹＰＣ３ｍＡｂ）的介导下，对体外、体内人胰腺癌细胞生长的影响。体外４ｈ＾５１Ｃｒ释放试验表明，特异性识别Ｃａｐａｎ－２人细胞的杀伤作用，这种作用随ｍＡｂ的浓度增加而加强，５０μｇ／ｍｌ的ＹＰＣ３ｍＡｂ提高ＬＡＫ细胞杀伤率约６０％。对照ｍＡｂ无此作用。裸鼠体内实验发现，ＹＰＣ３ｍＡｂ与ＬＡＫ细胞联合应用能完全阻止Ｃａｐａ     

Unrelated marrow donor registry for Chinese.

ＵｎｒｅｌａｔｅｄｍａｒｏｗｄｏｎｏｒｒｅｇｉｓｔｒｙｆｏｒＣｈｉｎｅｓｅＲａｙｍｏｎｄＬｉａｎｇ，Ｃ．Ｋ．Ｌｅｅ，ＦｒｅｄｅｒｉｃｋＣｈｅｎ，Ｙ．Ｌ．Ｋｗｏｎｇ，Ｃ．Ｓ．Ｃｈｉｍ，Ｗ．Ｙ．Ａｕ，Ｓ．Ｙ．Ｈａ，Ｃ．Ｆ．Ｃｈａｎ，Ｙ．Ｌ．ＬａｕａｎｄＢ...     

细胞角蛋白19,癌胚抗原联全检测对良恶性胸腔积液的诊断价值

目的 探讨细胞角蛋白１９（ＣＹＦＲＡ２１－１）、癌胚抗原（ＣＥＡ）联全检测对良恶性胸腔积液（以下简称胸液）的诊断价值。方法 采用放射免疫分析法（ＲＩＡ）检测５２例良恶性胸液中的ＣＹＦＲＡ２１－１和ＣＥＡ。同时检测１６例恶性胸液患者化疗前后血清ＣＹＦＲＡ２１－１、ＣＥＡ。结果 良恶性胸液中ＣＹＦＲＡ２１－１、ＣＥＡ差异明显（Ｐ〈０．０１）,如以ＣＹＦＲＡ２１－１〉３．３％ｎｇ／ｍｌ,ＣＥＡ〉１５ｎｇ     

DMD基因第50号和第51号内含子的克隆和测序

用ＤＭＤｃＤＮＡ８探针从假肥大型肌营养不良（Ｄｕｃｈｅｎｎｅｍｕｓｃｕｌａｒｄｙｓｔｒｏｐｈｙ，ＤＭＤ）基因的ＹＡＣ克隆的ｃｏｓｍｉｄ亚克隆库中筛选到９个阳性ｃｏｓｍｉｄ克隆，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定ｃｏｓｍｉｄＣ０４６１含ＤＭＤ基因的第５１号外显子，将该ｃｏｓｍｉｄ亚克隆于ｐＶＣ１１８中，获得含ＤＭＤ基因第５０和５１号内含子的３．１ｋｂ－ＨｉｎｄⅢ片段的亚克隆，将亚克隆的插入片段分别用Ｓａｕ３ＡⅡ完全和部分酶切克隆于ｐＵＣ１１８中，Ｓａｎｇｅｒ法双链测序测出质粒克隆的序列并重叠所测出的序列，确定该片段的长度为３１７９ｂｐ。与Ｓｐｅｅｒ测出的该段序列（３１５９ｂｐ）比较相差２０ｂｐ，有３３处不同。并发现有重复顺序存在，它们之间可能会发生重组并可能导致第５１号外显子的缺失。     

血清CYFRA21—1和NSE联检在肺癌临床诊断中的价值

本文对１１６例肺癌病人同时测定血清中ＣＹＦＲＡ２１—１和ＮＳＥ水平，并与健康人及肺部良性疾病作对照。对其中２０例ＮＳＣＬＣ患者血清ＣＹＦＲＡ２１—１水平在治疗过程中连续观察。结果肺癌患者在治疗前血清ＣＹＦＲＡ２１—１水平明显高于ＢＰＤ组（Ｐ＜０．０１）及正常对照组（Ｐ＜０．０１）。在肺癌组，血清ＣＹＦＲＡ２１—１升高主要在ＮＳＣＬＣ组，阳性率为７２．７３％、ＳＱＣ组为７９．２０％、ＡＤＥ组为６０．１３％，ＬＣＣ组为５０％，均高于ＳＣＬＣ组（１６．６７％）。ＮＳＣＬＣ组血清ＣＹＦＲＡ２１—１与肿瘤分期是正相关。血清ＮＳＥ水平升高以ＳＣＬＣ为主阳性率６６．６７％，高于ＮＳＣＬＣ组２７．２８％（Ｐ＜０．０１）。联合检测血清ＣＹＦＲＡ２１—１和ＮＳＥ可提高整体肺癌的阳性诊断率，从而提高早期诊断。临床上连续动态监测血清ＣＹＦＲＡ２１—１水平对ＮＳＣＬＣ特别是ＳＱＣ的进程、疗效及预后判断有一定价值     

THE EFFECTS OF BREVISCAPIN ON AT－Ⅲ ACTIVITY， tPA AND PAI IN DOGS DURING ACUTE MYOCARDIAL ISCHEMIA

ＴＨＥＥＦＦＥＣＴＳＯＦＢＲＥＶＩＳＣＡＰＩＮＯＮＡＴ－ⅢＡＣＴＩＶＩＴＹ，ｔＰＡＡＮＤＰＡＩＩＮＤＯＧＳＤＵＲＩＮＧＡＣＵＴＥＭＹＯＣＡＲＤＩＡＬＩＳＣＨＥＭＩＡＳｈｅｎｇＪｉｎｇ（盛净），ＸｕＪｉｍｉｎ（徐济民），ＹａｎｇＪｕｘｉａｎ（杨菊贤），...