反相高效液相色谱法测定兔房水中万古霉素含量

目的:应用反相高效液相色谱(RP-HPLC)技术,建立定量检测兔房水万古霉素的方法.方法:房水样品中加入适量10%硫酸锌,高速离心,蛋白质沉淀后进行RP-HPLC检测.检测条件:分析柱为C8柱;流动相为甲醇(A)-醋酸(B),梯度洗脱.兔眼结膜囊内滴入纳米-万古霉素滴眼液后于120 min收集房水样本检测万古霉素浓度.结果:房水中药物峰与杂质峰分离良好,在0.5～20.0μg/ml范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系.1、10、18 μg/ml 3种浓度的平均回收率为(98.670±0.321)%,日内和日间RSD分别为(3.40±1.30)%,(3.80±2.20)%.兔眼房水中万古霉素药物浓度在滴入纳米-万古霉素滴眼液后120 min为:0.83±0.05μg/ml.结论:建立了简便、敏感的检测房水中万古霉素的RP-HPLC方法,可用于眼内万古霉素药代动力学研究.     

羊膜移植对兔前房药物浓度的影响

目的探讨羊膜移植兔真菌性角膜溃疡面后,用抗真菌药物滴眼在不同的时间段测定前房药物浓度的变化。方法制作家兔真菌性角膜溃疡的动物模型,实验组在模型成功后右眼溃疡面行羊膜移植,左眼为对照组未行羊膜移植,羊膜移植后24、72、120h以0.5%氟康唑滴眼液滴眼,分别取不同时间段的房水用反相高效液相色谱法（HPLC）进行定量测定药物浓度。结果房水中氟康唑液药物浓度在实验组羊膜移植120h后10min含量最高达（3.290±0.612）mg/L,与对照组（1.955±0.338）mg/L比较差异明显（P〈0.05）。结论真菌性角膜溃疡在羊膜移植后局部用药,前房药物浓度提高,而且药物浓度的峰值提前,羊膜移植可以用于真菌性角膜溃疡的辅助治疗。     

加替沙星眼用凝胶制剂与加替沙星滴眼液兔眼药动学的比较

目的 比较加替沙星眼用凝胶制剂（G组）和加替沙星滴眼液（D组）单次给药后兔眼角膜、结膜和房水中的药物浓度。方法 日本大耳白兔双眼给药,分别于给药后5、10、15、30、45、60、120、180、240和360min处死兔子,采集角膜、结膜和房水,反相高效液相色谱法测定药物浓度。结果 G组角膜、结膜和房水中药物的达峰时间分别为10、10和60min;达峰浓度则分别为36.065±16.728μg/g、37.460±16.333μg/g和3.010±0.658μg/ml;G组各组织中4h前所有时间点的药物浓度均显著高于D组对应时间点的药物浓度（P<0.05）;AUC_（0~360）分别为2296.617μg/（g·min）、1402.143μg/（g·min）和271.558μg/（ml·min）,分别是D组相应组织中加替沙星AUC_（0~360）的4.7、8.6和4.1倍。结论 加替沙星眼用凝胶与加替沙星滴眼液相比,可在兔眼结膜、角膜及房水中达到更高的药物浓度,进入兔眼组织和房水的速度更快。     

兔眼角膜基质内注射两性霉素B的安全性评价

目的 探讨兔眼角膜基质内注射两性霉素B的安全性,寻找角膜基质内注射两性霉素B的安全浓度.方法 健康家兔20只(40眼)按随机数字表法分为5组(每组8眼).A组:角膜基质内注射0.1 ml平衡盐溶液(BSS);B、C、D、E组角膜基质内分别注射0.1 ml浓度为5、10、15、20 μg/0.1 ml的两性霉素B注射液,每4天注射1次,共注射5次.观察角膜透明性、上皮完整性、角膜新生血管生长情况,测鼍角膜厚度,第5次注射后30 d处死动物,行角膜病理组织学检查、内皮细胞活性率测定及角膜内皮超微结构观察.结果 兔角膜基质内注射浓度为5、10μg/0.1 ml的两性霉素B注射液后不影响兔角膜正常生理功能,角膜透明、上皮完整,角膜内皮细胞无异常,与BSS组比较,未见明显差异(P>0.05).15、20 μg/0.1 ml浓度组,角膜出现明显水肿,角膜上皮脱落,严重的角膜新生血管长入,与BSS组比较,差异显著(P<0.05).结论 角膜基质内注射药物可能是一种可选择的、简单易行的给药途经.两性霉素B的药物浓度在5μg/0.1 ml、用量在0.1 ml范围内是安全的;两性霉素B的药物浓度在10 μg/0.1 ml、用量0.1 ml可能安全.角膜基质内注射安全浓度的两性霉素B可能是治疗顽同真菌性角膜溃疡的一种较好选择.     

局部应用两性霉素B脂质体滴眼治疗兔曲霉菌性角膜溃疡的药物毒性评价

目的观察两性霉素B脂质体(AmBL)对兔实验性曲霉菌性角膜溃疡模型内皮细胞的损伤,探讨临床上两性霉素B脂质体对角膜内皮细胞的损伤机制。方法 30只健康成年新西兰白兔,采用角膜"#"形划痕法制作实验性曲霉菌性角膜溃疡模型,随机分为3组,每组10眼。A组应用5g/LAmBL滴眼液点眼;B组应用2.5g/LAmBL滴眼液点眼;C组为生理盐水对照组。造模后3d开始点眼,每天6次。3、7、10、15d行临床共聚焦显微镜检查角膜内皮细胞形态、内皮细胞平均密度(ECD)、内皮细胞面积变异系数(CV)、六边形细胞百分率(6A)。结果造模3d内皮细胞平均密度,内皮细胞面积变异系数,六边形细胞百分率各组间无显著性差异(P>0.05);7dA组与B组比较无显著性差异(P>0.05),与C组比较有显著性差异(P<0.05);10、15d各组间比较有显著性差异(P<0.05)。结论两性霉素B脂质体可对角膜内皮细胞造成损伤,随药物浓度越高,给药时间越长程度越重。     

两性霉素B脂质体胶联羊膜药膜的体内外缓释研究

目的研究两性霉素B脂质体(amphotericin B liposome,AmBL)胶联羊膜药膜的体内外缓释性能。方法将两性霉素B脂质体与纤维蛋白胶混合,再与羊膜胶联,制备成两性霉素B脂质体胶联羊膜药膜,光镜及扫描电镜观察形态学。将药膜置于生理盐水中,连续10d置换浸出液,高效液相色谱法测定药物浓度。兔右眼眼表行药膜移植,考察房水中药物浓度变化,左眼滴入自制的两性霉素B脂质体眼液作为对照。结果药物-纤维蛋白胶与羊膜基底面贴合紧密,药物附着在胶原纤维网状孔隙内。浸出液中前3d药物浓度分别为59.9、34.1、27.9μg/ml,以后逐渐减少,第10天为0.78μg/ml。兔眼表药膜移植后,前2d房水中药物浓度较高,分别为113.1、61.2ng/ml,以后逐渐降低;对照组房水中药物浓度维持在较低水平,平均值为26.1ng/ml。结论两性霉素B脂质体胶联羊膜药膜是一种较好的药物缓释系统。     

曲霉菌临床分离株的分子鉴定及体外抗真菌药物敏感性分析

目的 研究曲霉菌临床分离株的分子鉴定及体外抗真菌药物的敏感性。方法 采用Internal Transcribed Spacer（ITS）及β-tubulin基因部分测序对临床分离的53株经形态学鉴定为曲霉的菌株进行分子鉴定,并按照美国临床实验室标准化协会（CLSI）推荐的M38-A2微量液基稀释法测定唑类（伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑）,两性霉素B和棘白菌素类（米卡芬净、阿尼芬净和卡泊芬净）共7种抗真菌药物对所有菌株的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）或最低有效浓度（minimum effective concentration, MEC）。结果 53株曲霉菌包含烟曲霉复合体22株（烟曲霉21株和仑图卢斯曲霉1株）,黑曲霉复合体23株（塔宾曲霉16株、黑曲霉5株和百岁兰曲霉2株）及土曲霉和黄曲霉各4株;米卡芬净、阿尼芬净、卡泊芬净、泊沙康唑、伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B对曲霉菌株的MIC90为0.031、0.031、0.25、0.5、0.5、1、2μg/mL。除1株烟曲霉对伊曲康唑（MIC≥16μg/mL）和伏立康唑（MIC为2μg/mL）耐药及1株仑图卢斯曲霉对两性霉素B耐药（MIC为8μg/mL）外,其余菌株对7种药物均敏感。4种曲霉复合体对7种抗真菌药物的敏感性差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 棘白菌素类药物体外抗曲霉菌活性最好,两性霉素B体外抗曲霉菌活性相对较差,唑类药物介于以上两者之间。不同种曲霉菌对不同抗真菌药物的敏感性存在差别。     

UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆甘草酸及其代谢物的浓度及药物动力学研究

目的 建立测定大鼠血浆中甘草酸及其代谢产物甘草次酸含量的超高效液相色谱-串联四极杆质谱(UPLC-MS/MS)方法，进行大鼠体内药物动力学研究。方法 采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈(2.1 mm×150 mm, 1.7μm),以5 mmol/L乙酸铵(A)-乙腈(B)为流动相，梯度洗脱，流速0.3 mL/min,电喷雾离子源，负离子模式下，多反应监测(MRM)方式，以格列喹酮为内标；大鼠口服给药，取血后血样经甲醇沉淀蛋白，检测大鼠血药浓度。结果 甘草酸与甘草次酸血浆浓度在0.009 9～2.899 0μg/mL与0.040 0～26.890 0μg/mL范围内线性关系良好，方法学各项指标均符合要求。药动学参数甘草酸T_max为(1.83±0.41) h, C_max为(0.42±0.04)μg/mL,AUC_0-∞为(2.13±0.43) h·μg^-1·mL^-1,t_1/2为(16.74±8.45) h。代谢产物甘草次酸T     

两性霉素B脂质体注射剂与市售注射剂家兔体内药代动力学行为的比较

目的：比较自制的两性霉素B脂质体注射剂（amph otericin B liposomes,LAmB ）和市售两性霉素B注射剂（market amphotericin B,MAmB）在家兔体内的药代动力学行为。方法：分别静脉注射单剂量（1 mg*kg －1 ）的LAmB 和MAmB,用HPLC法测定血浆中的药物浓度,用3P97程序和Excel处理和分析数据,求算有关药代动力学参数。结果：经3P97程序拟合,家兔静脉注射单剂量LAmB 和MAmB后其血药浓度 -时间数据分别符合权重为1/C和1的三室模型;静脉注射LAmB和MAmB后 C max分别为（8.4±2.1）和（2.4±0.6） mg*L －1,AUC分别为（22.5±6.8）和（9.0±1.9） mg*h *L －1,CL分别为(0.050±0. 024)和(0.114±0.022) L*h －1, V c分别为（0.13±0.04）和（0.46 ±0.18） L,可见LAmB比MAmB 注射后具有更高的血药浓度水平和更大的血药浓度-时间曲线下面积,以及较低的总体清除率和较小的表观分布容积。结论：LAmB和MAmB在家兔体内的药代动力学行为有显著的不同,这些药代动力学特性的改变,有利于AmB毒性的降低和疗效的增加。     

C-反应蛋白抑制缺氧状态下人脐静脉内皮细胞表达低氧诱导因子-1α

目的 研究C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)对低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响。方法 利用COCl₂(浓度为100μmol/L)模拟缺氧环境,使其分别与4个试验组的CRP(浓度分别为5,10,50,100μg/ml)同时作用于脐静脉内皮细胞,以仅加CoCl₂(100μmol/L)组为对照;同时设空白对照组。刺激24h后提取蛋白。用Western-blotting半定量检测HIF-1α的蛋白表达量,数据用SPSS11.0软件进行统计分析。结果 CRP在5μg/ml水平即减少HIF-1α表达(P<0.001),在100μg/ml水平达到最大作用,其作用效果呈剂量反应关系(P<0.001)。结论 CRP抑制缺氧状态下人脐静脉内皮细胞表达HIF-1α。此结果证实CRP直接作用于血管,抑制缺氧组织血管新生。     

Determination of drug concentration in aqueous humor of cataract patients administered gatifloxacin ophthalmic gel

Background Ophthalmic gel has been developed to increase the drug concentration in aqueous humor and to retard the loss of drug from the conjunctival sac.The research was to compare the drug concentration in aqueous humor of cataract patients administered 0.3% gatifloxacin ophthalmic gel with that in patients administered 0.3% gatifloxacin ophthalmic solution.Methods Ninety-six patients with cataract （96 eyes） were randomly assigned to 8 groups.The patients in groups 1-4received topical gatifloxacin 0.3% ophthalmic gel and those in groups 5-8 received gatifloxacin 0.3% ophthalmic solution.The dose regimen was 1 drop, 4 times a day for 3 consecutive days prior to cataract surgery.On the day of surgery, 1drop was applied at 15, 30, 60 or 120 minutes before commencement of cataract surgery in groups 1 and 5, groups 2 and 6, goups 3 and 7, and groups 4 and 8, respectively.Aqueous humor was extracted during the cataract surgery for the analysis of gatifloxacin concentration..Results The concentrations of gatifloxacin in aqueous humor were （0.24±0.25） μg/ml, （1.11±0.74） μg/ml, （2.32±2.01）μg/ml and （1.85±1.14） μg/ml in groups 1 to 4, and （0.16±0.25） μg/ml, （0.31±0.24） μg/ml, （0.75±0.28） μg/ml and （0.33±0.22） μg/ml in groups 5 to 8, respectively.Patients receiving gatifloxacin ophthalmic gel showed greater mean values of gatifloxacin concentration in aqueous humor than those receiving gatifloxacin solution, and such differences were significant with P 〈0.05 for all comparisons except that between groups 1 and 5.Conclusion Topical gatifloxacin ophthalmic gel can attain significantly greater drug concentrations in human aqueous humor than gatifloxacin ophthalmic solution.     

口服熊胆粉到达房水能力的实验研究

目的　探讨口服中药熊胆粉后,其标志成份牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA)能否通过血-房水屏障到达房水内。方法　将5 6只家兔随机分成2组,对照组8只,给药组4 8只。给药组4 8只,随机分成6组,每组8只。空腹12h后给予熊胆粉10 0mg/mL灌胃,分别在灌胃后0 5、1,2、4、6、8h取其双眼房水。应用高效液相色谱仪(HPLC)法测定玻璃体内熊胆粉标记物熊脱氧胆酸(TUDCA)的质量浓度。结果　家兔灌胃后0 5、1、2、4、6、8h ,房水中TUDCA的分别为(2 3 70±1 4 1) μg/mL ,(35 16±3 6 3) μg/mL ,(41 5 1±2 83) μg/mL ,(47 78±4 6 9) μg/mL ,(32 38±5 2 4 ) μg/mL ,(44 72±7 4 8) μg/mL ,对照组几乎测不到TUDCA ,各时间点玻璃体内TUDCA浓度与对照组相比较差异具有显著性(P均<0 0 1) ,4h达高峰。结论　利用高效液相色谱仪法(HPLC)可准确测得房水中TUDCA的质量浓度;中药熊胆粉中主要成份TUD CA可透过血-房水屏障到达房水内。     

白细胞介素-1受体拮抗剂抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的 观察白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)抑制大鼠高危角膜移植后免疫排斥反应、促进植片存活的作用。方法 对40只SD大鼠(40眼)用缝线法诱导角膜新生血管增生,选取其中的30只大鼠(30眼)并随机分为实验Ⅰ、Ⅱ组及对照组Ⅲ组,每组均接受同种异系(Wistar大鼠)供体角膜,行穿透性角膜移植术。实验组于术后第1日起分别滴用50 μg/ml的IL-1ra滴眼液(Ⅰ组)和1%的CsA滴眼液(Ⅱ组),每日3次。受试动物术后均每日滴用典必殊滴眼液及托品卡胺滴眼液3次,连续14 d。术后比较各组大鼠免疫排斥反应发生的时间,对角膜植片存活情况进行评分,观察其效果。结果 两实验组角膜植片平均存活时间分别为(12.00±1.50) d和(10.44±1.13) d,明显高于对照组(8.00±1.25) d,差异有显著性(P<0 01);两实验组间比较,差异亦有显著性(P<0 01)。结论 IL-1ra可抑制高危角膜移植后的免疫排斥反应,减少新生血管的生成,减轻免疫性炎性反应,延长角膜植片的存活时间。     

人表皮生长因子真核细胞缓释型滴眼剂的基因治疗研究

目的:构建人表皮生长因子的真核表达载体,探讨用人表皮生长因子对角膜损伤治疗的可行性。方法:采用基因重组技术将人表皮生长因子基因插入pcDNA.3.1真核表达穿梭质粒,用脂质体包裹制成人表皮生长因子基因缓释型滴眼剂,滴眼治疗家兔角膜碱烧伤。结果:将hEGF-pcDNA3.1重组体进行限制性酶切及PCR扩增可见目的片段;基因治疗组在模型治疗后第7 d,角膜荧光着色变浅,溃疡面变小;第18～21 d溃疡面消失;在基因治疗后第1至28 d,从角膜组织中均可检测出hEGF mRNA,基因治疗组蛋白质表达水平明显升高,第7d达高峰,为224.286 ng/g角膜湿重,持续可表达3周以上;基因治疗眼角膜免疫组织化学染色可在角膜细胞内见hEGF蛋白质表达,第7 d达高峰,细胞转染率高达95%以上,并可持续表达3周以上。结论:用pcDNA.3.1真核表达穿梭质粒作为载体,携带人表皮生长因子基因,用脂质体包裹后制成缓释型滴眼液,以滴眼的方式给药转染角膜,可达到极高的转染率,具有良好的应用前景。     

苦参碱眼液调控TLR4/NF-κB通路影响实验性葡萄膜炎家兔相关细胞因子的表达

目的 探究苦参碱眼液调控Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)通路对家兔实验性葡萄膜炎相关细胞因子水平的影响。 方法 建立实验性葡萄膜炎家兔模型,采用随机数字表的方法分为模型组、妥布霉素地塞米松滴眼液组、苦参碱眼液低(0.50 g/L)、中(0.75 g/L)、高(1.00 g/L)剂量组,每组8只,另取8只设为对照组。造模后妥布霉素地塞米松滴眼液组、苦参碱眼液低、中、高剂量组分别以妥布霉素地塞米松滴眼液、苦参碱眼液滴眼治疗,对照组、模型组家兔以相同剂量生理盐水滴眼,持续7 d。裂隙灯观察各组家兔眼前节炎症反应并对其进行临床评分,苏木精-伊红染色(HE)观察各组家兔视网膜组织病理形态并对其进行病理评分,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组家兔血清及房水中细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1(IL-1)]水平,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测视网膜组织中TLR4/NF-κB通路蛋白TLR4、MyD88、NF-κB p65的表达。 结果 与对照组相比,模型组家兔临床评分、病理评分,血清和房水中IL-6、IL-1、TNF-α水平,视网膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65表达均显著升高(均P<0.05);与模型组相比,苦参碱眼液各剂量组和妥布霉素地塞米松滴眼液组家兔临床评分、病理评分,血清和房水中IL-6、IL-1、TNF-α水平,视网膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65表达均降低且苦参碱眼液各剂量组之间呈剂量依赖性(均P<0.05);苦参碱眼液高剂量组和妥布霉素地塞米松滴眼液组各指标相比,差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 苦参碱眼液可降低血清及房水中细胞炎症因子水平,减轻炎症反应,改善家兔葡萄膜炎症状,可能是通过下调TLR4/NF-κB通路实现。      

诺帝滴眼液对碱烧伤诱导角膜新生血管的抑制作用

目的 观察自制诺帝滴眼液（Nordy eye drop）对Long．Evans大鼠角膜碱烧伤后新生血管（CRNV）有无抑制作用及其对正常角膜有无毒副作用。方法 采用0．025％、0．1％两个不同浓度诺帝滴眼液滴眼21d,通过裂隙灯、光镜、电镜观察检测诺帝滴眼液的毒副作用。建立角膜碱烧伤后角膜新生血管模型,0．025％、0．1％两个不同浓度诺帝滴眼液4次／d滴眼治疗,0．1％地塞米松磷酸钠滴眼液作为阳性对照、空白溶液作为阴性对照,观察诺帝治疗效果。结果 诺帝滴眼液滴眼21d后观察正常大鼠,无畏光、结膜充血等刺激症状,组织学检查显示结构正常,未见炎性细胞浸润。大鼠角膜碱烧伤后1d时仅见角膜缘血管网扩张,3d时新生血管长入,7～14d达高峰,14d时治疗组和地塞米松组新生血管开始退化;比较各组CRNV面积与角膜面积的比值,治疗组和阳性对照组均小于阴性对照组并有非常显著性差异（P〈0．01）。治疗组与阳性对照组间、0．025％与0．1％治疗组间均无显著性差异（P〉0．05）。结论 0．025％、0．1％的诺帝滴眼液局部滴眼无明显毒副作用,并且对CRNV有显著抑制作用。     

Antifungal activity of ibuprofen against aspergillus species and its interaction with common antifungal drugs

Background The incidence of invasive aspergillosis （IA） has increased in frequency in immunocompromised patients with a variety of diseases. The poor prognosis might be due to limited treatment option. This study aimed to evaluate antifungal activity of ibuprofen against clinical isolates of aspergillus species, as well as its interaction with azoles or with amphotericin B or with micafungin. Methods Antifungal activity of ibuprofen against 10 strains of Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, and Aspergillus terreus were tested with both disk diffusion assay and standard broth microdilution method. To determine whether ibuprofen combined with itraconazole, voriconazole, amphotericin B, or micafungin had interactive effects on aspergillus spp., we used both disk diffusion assay and Chequerboard method. Results As for disk diffusion method, ibuprofen produced a zone of growth inhibition with diameters of （20.1±3.9） mm at 48 hours of incubation. As for broth microdilution method, the minimal inhibitory concentration （MIC） ranges of ibuprofen against aspergillus spp. were 1000-2000 μg/ml, and the minimal fungicidal concentration （MFC） ranges of that was 2000-8000 μg/ml. For 2 of 5 isolates, when ibuprofen combined with itraconazole or voriconazole, the zones of growth inhibition were larger than those of the individual drug. The results of Chequerboard method showed that fractional inhibitory concentration index （FICI） ranges were 1.125-2.500. Conclusions Ibuprofen is active against aspergillus spp.. And ibuprofen does not affect the in vitro activity of itraconazole, voriconazole, amphotericin B or micafungin against aspergillus spp.     

雷帕霉素眼膏在兔眼房水中药物分布研究

目的探讨RAPA（雷帕霉素）眼膏涂眼后在兔眼房水中药物分布。方法制备载药率5.140%RAPA眼膏,给新西兰白兔双眼结膜囊涂布眼膏,给药后30、60、120、240、480、720min应用高效液相色谱法（HPLC）测定房水中RAPA药物浓度,计算反映RAPA眼膏的生物利用度的指标：最大浓度（maximal concentration,Cmax）、达峰时间（maximal time,Tmax）、曲线下面积（Area under the curve,AUC）等。结果涂眼30、60、120、240、480、720min后,RAPA房水浓度为0.5120±0.0650μg·l^-15.024±0.307μg·l^-120.38±1.14μg·l^-14.723±0.352μg·l^-13.169±0.198μg·l^-11.335±0.161μg·l^-1;RAPA眼膏房水持续释药720min,房水Cmax为20.38±1.45μg·l^-1Tmax120min。房水中释药模式亦大致呈三相,即初始突释、稳态缓释和减弱释药。稳态缓释相房水维持600min,平均释药浓度为3.169±0.19μg·l^-1随即表现为减弱至检测限以下;AUC为5711μg·min.l-1。结论我们制备的RAPA眼膏在兔眼放水中有良好的穿透性和有效的治疗浓度。RAPA眼膏完全可以用来治疗角膜移植免疫排斥和眼表免疫相关性疾病。     

人表皮生长因子缓释型滴眼剂对角膜碱烧伤的基因治疗

目的观察人表皮生长因子基因对角膜细胞的转染情况,探讨用人表皮生长因子基因对角膜损伤治疗的可行性。方法利用基因重组技术构建了人表皮生长因子全基因序列,将该基因序列插入 pcDNA3.1真核表达高效穿梭质粒,用脂质体制成人表皮生长因子基因缓释型滴眼剂,滴眼治疗家兔角膜碱烧伤。在治疗后的不同天数,分别测定了角膜组织中人表皮生长因子 mRNA 和 DNA 的表达,用 ELISA 法测定了人表皮生长因子在兔角膜组织中的含量。结果在基因转染后24h 至28天,角膜组织分别用 RT-PCR 和 PCR 均可检测出人表皮生长因子 mRNA 和 DNA 表达。用 ELISA 法测定人表皮生长因子蛋白质表达水平。结果表明,在转染后24h,实验组分别与对照组和空白组平行对比,实验组蛋白质表达水平明显升高(P<0.01),第7天达高峰,为224.286mg/g 角膜湿重,随后逐渐降低,持续可表达20天以上;在转染后24h,免疫组织化学染色在全层角膜细胞内亦可见 hEGF 蛋白质表达,第7天达到高峰,细胞转染率高达98%以上,随后逐渐降低,持续可表达20天以上。结论用 pcDNA3.1真核表达高效穿梭质粒作为载体,携带人表皮生长因子基因用脂质体包裹后制成缓释型滴眼液,以滴眼的方式给药转染角膜,可达到极高的转染率,具有良好的应用前景。     

双氯芬酸胆碱滴眼液对兔眼球穿孔伤后房水蛋白升高的抑制作用

目的：观察双氯芬酸胆碱滴眼液对兔眼球穿孔伤后房水蛋白升高的抑制作用。方法：采用兔眼前房穿刺和花生四烯酸（AA）刺激眼前部模型，用Lowry法测定兔眼球穿孔后房水蛋白含量的变化。结果：Lowry法测定兔眼球穿孔后房水蛋白含量的回收率为91.8%－104.1%，平行实验的相对标准偏差为0.46%，双氯芬酸胆碱滴眼液对兔眼球穿孔伤后房水蛋白升高的抑制率为90.3％，对AA刺激引起的房水蛋白升高的抑制率为76.1％。结论：1.0g/L双氯芬酸胆碱滴眼液对前房穿刺及AA刺激引起的房水蛋白升高有显著抑制作用，并且明显优于醋酸可的松滴眼液。