小鼠HCV皮下移植瘤的建立及使用DNA疫苗的治疗作用

建立小鼠丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)皮下移植瘤 ,并以其为ＨＣＶ感染动物模型 ,观察ＨＣＶ核心 (Ｃ)基因ＤＮＡ疫苗 ( ｐｃＤＮＡ ＨＣＶ Ｃ)在体内对ＨＣＶ感染的治疗作用。将 ｐｃＤＮＡ ＨＣＶ Ｃ用脂质体 (Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ)法转染ＢＡＬＢ/ｃ小鼠骨髓瘤ＳＰ2 /0 (Ｈ 2 ｄ)细胞 ,经Ｇ4 18筛选获稳定表达ＨＣＶＣ抗原之后 ,以 5× 10 5个细胞 /10 0 μｌ注射ＢＡＬＢ/ｃ小鼠右肋皮下 ,3ｄ后 30只试验小鼠分成 3组 ,即 :生理盐水对照组、ｐｃＤＮＡ3对照组和 ｐｃＤＮＡ ＨＣＶ Ｃ治疗组。观察并记录成瘤时间、肿瘤大小及小鼠存活时…     

丙型肝炎病毒核心蛋白基因重组质粒的构建及其在真核细胞中的表达

目的：构建包含丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白（Ｃ）基因片段的重组真核表达载体，并在肝细胞癌细胞株７７２１细胞中表达。方法：将从ｐＢＲＴＭＨＣＶ１－３０１１质粒切下的ＨＣＶＣ基因片段插入ｐｃＤＮＡ３质粒的ＣＭＶ启动子下游，构建真核表达质粒ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ，然后，采用脂质体转染技术，转染７７２１细胞进行瞬时表达，转染细胞裂解煮沸后，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达的核心抗原。结果：用限制性内切酶酶切后，片段大小与计算值相符。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实，表达抗原的Ｍｒ约为２２０００。结论：ＨＣＶＣ基因能够插入ｐｃＤＮＡ３真核表达载体，并使其在真核细胞中表达，为进一步ＨＣＶ基因疫苗的研制和探讨抗ＨＣＶ感染打下了基础。     

含有丙型肝炎病毒核心基因表达质粒的构建及其基因免疫

目的：研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心（Ｃ）基因免疫诱生特异性免疫应答的可行性。方法：将ＨＣＶ Ｃ基因片段插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３质粒ＣＭＶ启动子的下游,构建真核表达载体ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ,分别转染小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０和人肝癌细胞７７２１进行瞬时表达,用免疫荧光法和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测表达产物,将重组质粒注射,ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ－２＾ｄ）小鼠股四头肌,ＥＬＩＳＡ法检测血清中抗体产生水     

慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎患者外周血T细胞亚群及其细胞膜IFN-γ,IL-6表达的变化

在我国慢性乙型肝炎(CHB)和慢性丙型肝炎(CHC)发病率较高，临床上，这两类肝炎有许多不同之处．我们通过检测CHB、CHC患者外周血淋巴细胞亚群以及T淋巴细胞(PBMC)细胞因子的膜定位，并将CHB与CHC进行比较，探讨患者机体在细胞免疫方面差异．更深入地了解两类肝炎的发病机制的异同，为临床免疫治疗提供理论依据．     

半乳糖受体介导的拉米夫定肝细胞导向作用的体内外研究

探讨修饰后拉米夫定（lamivudine，LA）对乙型肝炎病毒（HBV）的抑制作用及肝细胞的靶向性。以半乳糖苷为载体，构建十六酸拉米夫定酯固体脂质纳米粒（LAP-GSLN），将其导入2.2.15细胞，用免疫荧光法及ELISA观察2.2.15细胞内HbeAg及用免疫定量PCR检测细胞培养上清中HBV DNA；将LAP-GSLN经尾静脉注入小鼠体内，用RP-HPLC测定LA在血清、肝、肾、肺及脾中的分布。结果显示，LA及LAP-GSLN对2.2.15细胞HbeAg的表达和对HBV-DNA的复制均有抑制作用；LAP-GSLN组肝脏的含药量为LA组的3.3倍。表明LAP-GSLN能有效地抑制HbeAg表达和HBV DNA的复制，在体内具有明显靶向性。     

Construction and expression of the bicistronic expression vector with RANTES and SDF-1 genes

Objective: To construct bicistronic expression vector with RANTES and SDF-1 genes, the ligands of HIV-1 principal coreceptors, and identify its expression. Methods: RANTES-KDEL was amplified from plasmid pCMV-R-Kby PCR and cloned into eukaryotic expression vector pCMV-S/K. Gene transfection into HeLa cells was carried out by lipofectin. Indirect immumofluorescence and radioimmunoprecipitation were used to confirm the expression of RANTES and SDF-1. Results:The construction of pCMV-R-K-S-K was confirmed by enzymatic digestion and sequencing.RANTES and SDF-1 were shown expressed in HeLa cells by indirect immumofluorescence and radioimmunoprecipitation. Conclusion: pCMV-R-K-S-K was constructed and expressed in cell line Hela successfully, which will contribute to further study of gene therapy of AIDS by HIV-1 coreceptors knockout.     

肾综合征出血热患者B淋巴母细胞系的建立方法及意义

目的 :探讨EB病毒 (EBV)转化B淋巴细胞的最佳方法 ,为进一步研究肾综合征出血热 (HFRS)患者的细胞免疫功能奠定基础。　方法 :采用环孢素A(CsA)法、微量全血法和冻存全血法三种方法建立B淋巴母细胞样细胞系 (B LCL) ,比较建立细胞系成功率和所用时间。　结果 :EBV成功转化后的B LCL ,其体积增大并永生化 ,进而增生的淋巴细胞积聚成团。CsA法、微量全血法和冻存全血法转化的成功率分别为 73.3%、2 6 .7%和 4 6 .7%。　结论 :CsA法成功率高 ,建立细胞系所用时间短 ,是建立B LCL的最佳选择。     

DNA改组及其在疫苗研制中的应用

DNA改组(DNA shuffling)是上世纪90年代中期发展起来的一种全新的分子水平上的人工定向进化技术。它模拟自然界进化的机制，改变了传统的进化途径，通过体外重组来改造靶基因，并定向筛选具有预期性状的突变体，从而大大加速了蛋白质的进化进程。该技术自建立以来，已在生物工程各领域得到了越来越广泛的应用。本文总结了DNA改组的基本原理、技术路线、特点、改进与发展，并综述了其在疫苗研制方面的研究进展。     

军医大学研究生教育发展问题初探

作者就军医大学近20年来研究生教育发展的速度、规模、结构、效益等，通过与全国研究生教育发展的帽互比较，找出军医大学研究生教育的优势与不足，初步探讨速度、结构、效益的相互作用，为制订下一步的发展战略寻求依据，