抑制端粒酶活性对人肾癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨抗端粒酶在肾细胞癌治疗中的意义。方法：采用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体)导入人肾癌GRC—1细胞系中，采用TRAP法测定端粒酶活性，通过MTT法检测细胞动力学，观察细胞的增殖，电镜下观察其对细胞凋亡的影响。结果：端粒酶反义RNA能显著抑制细胞的端粒酶活性，抑制细胞增殖并促进其凋亡。结论：以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗肾癌的潜在途径。     

丹参注射液对慢性肝炎（中度）患者的IL—6及透明质酸作用的观察

为了探讨丹参注射液对于慢性肝炎（中度）的治疗作用，采用静滴丹参注射液，观察治疗前后血清白细胞介素－６（ＩＬ－６）有透明质酸（ＨＡ）的变化。结果表明：丹参可使患者血清中的ＩＬ－６及ＨＡ明显降低，提示丹参可以调节淋巴细胞因子引起的肝细胞的炎症损伤，保护肝细胞以及抑制间质细胞增生，有抗纤维化作用。     

HCV结构基因腺病毒表达载体骨架质粒pAd.HCV-S的构建、鉴定及表达

目的：构建能表达HCV结构基因（C＋E1＋E2）的腺病毒表达载体的重组骨架质粒,为进一步包装能高效表达HCV结构基因的腺病毒载体做准备,方法：用分别含有BglⅡ及HindⅢ酶切位点的HCV结构基因上、下游引物,以含有HCVH株基因序列的质粒pBRTM/BCV1-3011为模板,通过PCR扩增获得HCV结构基因片段,基因片段回收后,以BglⅡ及HindⅢ双酶切,定向插入到腺病毒骨架质粒pAd.CMV-Link.1中CMV启动子下游BglⅡ及HindⅢ位点之间,获得重组表达质粒pAd.HCV-S.通过BglⅡ／HindⅢ双酶切、PCV及插入片段序列测定对质粒进行了鉴定。以抗HCVC单克隆抗体为一抗,利用间接免疫荧光法检测了pAd.HCV-S在人肝癌细胞7721中的瞬时表达。结果：酶切、PCR及测序鉴定证实,pAd.HCV-S插入片段为HCVCE1＋E2区基因片段,免疫荧光法检测表明其可以在7721细胞中瞬时表达。结论：构建的质粒pAd.HCV-S 可以表达HCV结构基因,为包装表达HCV结构基因的腺病毒载体奠定了基础。     

抗HBV核酶的研究进展

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）是引起乙型肝炎的病原体,据统计全球ＨＢＶ慢性携带者的总数超过２８亿。我国是ＨＢＶ感染的高发区。据血清流行病学调查ＨＢｓＡｇ携带率达１０％,约１５亿。虽然传统的抗病毒药物及新一代的核苷类和干扰素有部分作用,但远期疗效均不显著。...     

"本科生导师制"在临床实习教学中的应用

目的 探索临床实习教学的实施及管理方法,全面提高军医大学附属综合性医院临床实习带教质量.方法 在临床实习教学工作中运用"本科生导师制"的先进带教模式,严格带教管理,注重带教质量控制,建立激励机制.结果 经过实践证明,临床实习教学满意度呈上升趋势.结论 "本科生导师制"的应用,提高了整体带教水平,使临床实习教学质量得以持续改进.     

人工进化丙型肝炎病毒C和E1区噬菌体展示文库的构建及初步筛选

目的构建人工进化丙型肝炎病毒(HCV)C和E1区基因噬菌体展示文库,并进行初步筛选。方法应用DNA改组技术进行不同基因型的HCV C和E1区基因的人工进化,克隆于噬菌体载体,以辅助噬菌体M13K07援救后,构建噬菌体展示文库,应用HCV C和E1区单克隆抗体进行初步筛选。随机选取筛选后的20个噬菌体克隆,用高滴度HCV阳性血清通过双抗体夹心酶联免疫吸附法进行抗原抗体结合反应,以正常人血清作为对照。结果人工进化HCV C和E1区噬菌体展示文库库容达1．64×106,重组率为0．86。以C和E1区单克隆抗体淘筛4轮,噬菌体展示文库得到特异性富集。筛选获得12个阳性克隆。结论所构建的噬菌体展示文库的库容和多样性符合筛选的要求。筛选获得的阳性克隆具有较好的抗原抗体结合反应活性,表现出较好的亲和力。     

定量PCR检测血清中乙型肝炎病毒DNA及其意义

目的检测血清中乙型肝炎病毒DNA拷贝数,并了解HBV感染的不同血清学指标组合相应的HBV DNA含量分布,以指导临床。方法 采用定量PCR和定性PCR方法,检测216份不同临床类型血清标本的HBV DNA,再用ELISA方法测定HBV-M,统计不同免疫指标组合的HBV DNA平均含量。结果病毒量分为高、中、低三度,大于107拷贝mL-1为高滴度:107-105拷贝mL-1为中等滴度;105拷贝mL-1以下为低滴度。60例HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)血清,HBV DNA全部阳性,平均含量为1.9×108拷贝mL-1。51例HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)血清,HBV DNA平均含量为5.4×106拷贝mL-1;33例HBsAg(+)HBeAb(+)血清,HBV DNA平均含量为7.5×105拷贝mL-1;114例HBsAb(+)HBeAb(+)HBeAb(+)血清,HBV DNA平均含量为1.8×105拷贝mL-1。定性和定量PCR阳生率分别为59.3％和61.6％。两种方法相对符合率为94.5％。结论定量PCR可真实反应HBV感染、复制及病程变化,对乙型肝炎临床诊断及治疗均有较大的指导意义。     

IL-12对乙型肝炎DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的影响

目的　观察编码鼠 IL - 12的真核表达载体对 HBVDNA疫苗诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响 .方法　肌肉注射 DNA疫苗 ,EL ISA法检测小鼠血清抗 HBs,4h5 1 Cr释放法检测小鼠脾细胞 CTL杀伤活性 .结果　免疫 8wk后 ,单纯注射 p CR3.1- S及共注射 IL - 12真核表达载体的小鼠血清 45 0 nm A值分别为 0 .87± 0 .1及 1.6 7± 0 .15 .CTL 细胞杀伤活性分别为 (5 0 .5± 6 .4) %及 (73.3± 8.8) % ,两组均有明显差异 (P<0 .0 1) ,脾细胞悬液经抗 CD4+ 单克隆抗体处理后 CTL 细胞杀伤活性分别为 (48.3± 5 .9) % ,(75 . 6±9.1) % ,抗 CD8+单克隆抗体处理后分别为 (10 .6± 1.4) % ,(16 .9± 2 .3) % .结论　 IL - 12的真核表达载体能够提高小鼠对 DNA疫苗的免疫应答 ,CTL细胞杀伤活性主要由 CD8+执行 .基因疫苗可能用于预防及治疗 HBV感染     

抗丙型肝炎病毒核酶的细胞内免疫及其意义

目的 探讨抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核酶（Ｒｚ）预先转染的细胞内免疫效应。方法 人前构建的ＨＣＶ２锤头结构Ｒｚ（Ｒｚ２１３），通过脂质体介导的基因转染方法，转染人肝癌细胞（ＨＨＣＣ），经Ｇ４１８筛选转染Ｒｚ２１３的生，应用１ｕｃ报告基因的表达活性，观察该细胞克隆对靶基因（ｐＣＭＶＮＣＲ１ｕｃ）转染的抑制作用。结果 Ｇ４１８筛选能使ｚ２３１在转染细胞内有效表达Ｒｚ ＲＮＡ，转染Ｒｚ的多克隆细胞能有效地     

腺病毒表达Ribozyme在细胞内对HBV的免疫作用

了解利用腺病毒腺体表达针对乙型肝炎病毒（HBV）的核酶在细胞内对HBV表达的抑制作用。将针对HBV的多位点核酶克隆入腺病毒载体中，利用包装细胞包装出含核酶及突变核酶的重组腺病毒，将腺病毒感染2．2．15细胞（含HBV），检测感染细胞中核酶及突变核酶的表达，利用ELISA，打点杂交及激光共聚光共聚焦等方法，检测核酶对细胞内乙型肝炎病毒表达的抑制作用。结果显示核酶及突变核酶的确被克隆入腺病毒载体，并经过包装后可形成包装腺病毒，感染2．2．15细胞后可表达出目的核酶，并发挥核酶的剪切作用，其对HBV表达的抑制率最高可达87．1％。证实包装腺病毒表达的多位点核酶对HBV的复制有明确的抑制作用，支持核酶的抗病毒效果，有希望成为HBV治疗的潜在方法之一。