红霉素、阿奇霉素、磺胺嘧啶、大蒜素体外抗弓形虫作用的研究

目的　比较阿奇霉素、红霉素、磺胺嘧啶、大蒜素体外抗弓形虫的效果。方法　用弓形虫RH株速殖子感染培养的巨噬细胞 ,每一种药物根据预实验设立 2至 3个浓度 ,分别在速殖子侵入细胞前和侵入细胞后用不同浓度的药物处理 ,每隔 1h在倒置显微镜下观察细胞及弓形虫的形态及生长情况 ,9d后取出盖玻片 ,染色透明后 ,镜下观察。再将培养液及培养细胞注入鼠腹腔 ,观察小鼠的发病情况。结果　阿奇霉素的浓度在 2 0 μg/ml时具有抑制虫体生长的作用 ,>40 μg/ml时对巨噬细胞有明显的毒性。红霉素的浓度在 10 0 μg/ml、15 0 μg/ml时可抑制弓形虫的生长与繁殖 ,但不能完全杀死虫体 ,形成假包囊。将假包囊及培养液接种小鼠腹腔 6d后小鼠发病死亡 ,解剖小鼠后 ,可见大量的虫体。没有观察到 10 0 μg/ml、2 0 0 μg/ml的磺胺嘧啶及 2 0 μg/ml、40 μg/ml的大蒜素有抑制弓形虫生长的作用。 结论　阿奇霉素具有明显杀灭速殖子的作用。低浓度的红霉素有利于包囊形成。磺胺嘧啶、大蒜素体外无杀灭速殖子的作用。     

阿奇霉素对体外弓形虫作用的实验研究

目的：了解阿奇霉素体外抗弓形虫的作用效果。方法：在细胞培养板里，将小鼠肾细胞作为弓形虫速殖子的滋养细胞，加入不同药物浓度的阿奇霉素(实验组)和乙酰螺旋霉素(阳性对照组)，用细胞计数和染色方法测定药物对弓形虫的抑制和杀灭作用。结果：药物作用72h后，当阿奇霉素浓度为0．625mg/L时，相对抑制率为13．12％，虫体死亡率为10．61％，乙酰螺旋霉素浓度为3．125mg/L时，相对抑制率和虫体死亡率分别为3．14％和0．85％。两种药物的浓度与作用效果均成正相关。结论：阿奇霉素对体外弓形虫具有抑制和杀灭作用，在常量药物浓度下，阿奇霉素对弓形虫的杀灭作用比乙酰螺旋霉素明显。     

鼠巨噬细胞培养弓形虫RH株速殖子的实验研究

目的用鼠巨噬细胞培养弓形虫RH株速殖子及观察弓形虫速殖子入侵鼠巨噬细胞及在其内繁殖的过程.方法按培养传代细胞的常规方法培养鼠巨噬细胞,将鼠巨噬细胞接种到盖玻片上,用弓形虫RH株速殖子感染巨噬细胞,每隔1.5小时取出盖玻片,经吉氏染色、二甲苯透明后,镜下观察摄片.结果弓形虫速殖子大多在感染后0.5 ～1小时侵入巨噬细胞,10小时后,假包囊形成,20小时后,假包囊破裂,在室温条件下,速殖子可在巨噬细胞中存活20天.结论鼠巨噬细胞可代替小鼠用于弓形虫病的诊断及保种.     

阿奇霉素、乙酰螺旋霉素、青蒿琥酯及联合用药体外抗弓形虫作用的研究

目的:观察阿奇霉素、乙酰螺旋霉素、青蒿琥酯及联合用药体外抗弓形虫的效果.方法:将小鼠弓形虫速殖子腹水悬液定量分装到细胞培养板,平均约2.5×104个虫体/孔,以生理盐水作为空白对照组,不同浓度的阿奇霉素、乙酰螺旋霉素、青蒿琥酯及乙酰螺旋霉素青蒿琥酯联合用药为实验组;用细胞计数法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定药物对弓形虫的抑制和杀灭作用.结果:加药24 h后,3种药物及联合用药对弓形虫表现出不同的作用效果,与未加药组相比差异均有统计学意义(P<0.01).最好为阿奇霉素,其次是青蒿琥酯;乙酰螺旋霉素青蒿琥酯联合用药的疗效低于青蒿琥酯,但高于乙酰螺旋霉素.结论:阿奇霉素、乙酰螺旋霉素、青蒿琥酯及联合用药对体外弓形虫均有抗虫效应,在常规药物浓度下,阿奇霉素对弓形虫的杀灭作用比其他药物明显,杀虫效果与剂量呈正相关.     

细胞内外弓形虫速殖子的形态观察

目的 观察细胞内（假包囊）、外弓形虫速殖子的形态差异。方法 收集小鼠腹腔内和体外培养中的细胞内、外弓形虫，染色后镜检，观察细胞内、外弓形虫速殖子的形态差异。结果 假包囊内的速殖子明显大于细胞外的速殖子，结构疏松，近圆形和椭圆形。随着繁殖数量的增加，虫体可排列成弧形及花瓣状。结论 细胞内、外弓形虫速殖子的形态差异较大。     

弓形虫慢性感染鼠形成包囊的实验研究

目的分别采用弓形虫Fukaya株速殖子和包囊感染小鼠,观察其脑内成囊情况,以期寻求一个稳定、易建立的慢性感染动物模型,为研究弓形虫的致病机理提供一个良好的实验工具.方法用弓形虫Fukaya株速殖子4×104个和包囊5～10个经腹腔感染昆明小鼠,给适量药物使之形成慢性感染,统计小鼠的死亡率、脑内包囊数和成囊率.结果感染弓形虫速殖子组小鼠的死亡率为30%,脑内包囊数约为15个,成囊率为42.9%;感染弓形虫包囊组小鼠的死亡率、脑内包囊数、成囊率分别为0、40个和100%.接种包囊比速殖子小鼠死亡率低,脑内包囊数多,成囊率高.结论接种虫体感染阶段(包囊或速殖子)是影响成囊的重要因素,感染包囊小鼠脑内易成囊.     

复方一枝蒿颗粒体外抗弓形虫RH株速殖子的超微结构观察

目的 探索复方一枝蒿颗粒体外对弓形虫RH株速殖子超微结构的影响。方法 收集弓形虫RH株速殖子感染72 h后的昆明（KM）小鼠腹腔冲洗液,加入复方一枝蒿颗粒水溶液使药物终浓度达到0.8 mg/mL,并以0.04 mg/mL剂量阿奇霉素作为阳性药物对照,同时设立空白对照组。置二氧化碳孵箱作用2 h,分别制备吉瑞氏复合染色涂片和透射电镜样本,比较观察各实验组弓形虫速殖子光镜下形态和透射电镜下超微结构。结果 空白对照组虫体符合弓形虫速殖子超微结构正常形态,而阳性药物对照组和复方一枝蒿颗粒作用组均显示着色较浅的异常形态虫体：虫体肿胀变形,两端钝圆。细胞质着色浅且偶见空泡,个别虫体细胞膜似有断裂缺如,胞膜不完整。透射电镜下可见阳性药物对照组和复方一枝蒿组弓形虫速殖子细胞质疏松并出现大量不规则空泡等异常形态,复方一枝蒿颗粒还可使弓形虫速殖子超微结构发生胞膜断裂、破损,核膜破损,致密颗粒增多等改变。结论 复方一枝蒿颗粒具有损伤弓形虫速殖子超微结构的直接作用。     

弓形虫病一例报道

目的 探讨弓形虫感染致多脏器损害病例的诊断与治疗。方法 对1例弓形虫病的临床资料进行分析总结。结果 患者以双下肢进行性浮肿起病,逐渐出现左眼飞蝇感、咳嗽、气急等;大便隐血弱阳性;心电图示窦速,左心室高电压;胸片示心影增大,二肺弥漫性片状浸润阴影;B超示肝肿大;弓形虫TOXO－IgG（＋）2次;眼底检查有异常,确诊为弓形虫病,经对症治疗好转出院。结论 弓形虫病主要根据临床表现,免疫学检查及治疗效果综合分析作出;治疗以乙胺嘧啶和磺胺嘧啶联合治疗为首选。     

弓形虫速殖子感染对HeLa细胞凋亡的影响

目的: 探讨不同数量弓形虫速殖子感染对HeLa细胞凋亡的影响。方法: 24孔板培养HeLa细胞16 h,各孔接种不同数量弓形虫速殖子继续培养4 h,在培养液中加入终质量浓度为0.5 μg/mL放线菌素D诱导凋亡,于加放线菌素D后8、12、24、36 h收集细胞,采用Hoechst 33258染色法和Annexin V FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率。结果： 当虫体量/细胞量（MOI）≤1时,弓形虫感染表现为抑制放线菌素D诱导的HeLa细胞凋亡;随着虫体数量增加（MOI＞1）和感染时间延长（≥24 h）,虫体感染则表现为促进HeLa细胞凋亡。结论： 弓形虫感染可影响体外培养的HeLa细胞的凋亡,影响程度与感染虫体数量相关。     

磺胺嘧啶在肝损伤的小鼠体内药物动力学变化及益肝药的作用

目的 观察了阿魏酸钠、大蒜素、当归醇沉物对磺胺嘧啶在肝损伤小鼠体内的药动学影响。方法 用氢化泼海尼松建立小鼠肝损伤模型,测定ＡＬＴ及ＧＳＴ活性,静脉注射磺胺嘧啶,测定血药浓度,计算动力学参数。结果 阿魏酸钠、大蒜素及当归醇沉物均能一定程度上改善氢化泼尼松所致的肝损伤,使血清ＡＬＴ及ＧＳＴ活性明显下降,使肝匀浆中ＡＬＴ、ＧＳＴ及苯胺羟化酶活性明显升高,并使磺胺嘧啶在体内α相参数恢复正常,但并不能缩短     

经口感染弓形虫在小鼠组织内的动态分布

目的 观察经口感染弓形虫速殖子在小鼠小肠组织、实质器官内的动态分布.方法 BALB/c小鼠96只,随机分为8组,0d组用0.5ml PBS/只灌胃,其余组用RH株弓形虫速殖子1×104个灌胃感染,感染后2、4、6、8、10、12、14d处死小鼠,每次处死12只,取十二指肠、空肠、回肠、肝脏、脾、肾、肺、心和脑做组织印片,吉-瑞氏染色,镜检.结果 感染后2d 在十二指肠、空肠、回肠、肺和心,4d在脾,6d在肾和肝脏发现虫体,脑内未发现虫体.十二指肠、空肠、回肠组织内虫体数量呈上升趋势,第6天达高峰后稍有下降.肝内虫体数量呈上升趋势,第6天最多;脾内虫体数量在6d达峰值后保持较高水平;实验期间肾、肺和心内虫体数量保持较低水平.结论 弓形虫经口感染小鼠后2d,小肠组织出现大量速殖子;同时肺和心内有少量速殖子;4d在脾、6d在肾和肝脏发现虫体;速殖子在上述组织内增殖,并形成假包囊,脑内未发现虫体.     

大蒜素对弓形虫感染小鼠黏膜免疫应答的影响

目的通过测定弓形虫感染小鼠大蒜素治疗后黏膜部位SIgA含量,研究大蒜素在弓形虫感染免疫中所起作用。方法将雌性小鼠分成治疗组、感染组和对照组,用5×10~4个/只RH株弓形虫速殖子经口感染小鼠后大蒜素治疗,每天1次,于治疗后第0、2、4、6、8、10、12周断颈处死,冲洗上呼吸道、下呼吸道、肠道、阴道、子宫黏膜,夹心ELISA法测定SIgA抗体含量。结果在观察的时间段内,治疗组SIgA含量高于对照组和感染组,治疗后4、6、8周差异具有显著性(P0.05)。结论大蒜素治疗经口感染弓形虫速殖子小鼠,能提高黏膜(特别是消化道黏膜)SIgA抗体含量,保护机体抵御病原体感染。     

激光照射对弓形虫活力及免疫原性的作用

目的 观察激光照射对弓形虫活力及免疫原性的影响.方法 分别用经2.0,2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,5.5,6.0 W/cm2光通量1 min激光照射的RH株弓形虫速殖子常规腹腔内感染BALB/c小鼠,观察存活小鼠体内弓形虫包囊的形成和抗体效价、弓形虫速殖子的活力及繁殖力.结果 4.5-6.0 W/cm2光通量激光照射后的虫体接种小鼠,小鼠全部存活,并能诱导IgG抗体的产生.此外,该光通量激光照射能使弓形虫的分裂繁殖及包囊形成抑制,活力明显减弱,死亡虫数增加.结论 激光照射能有效抑制弓形虫繁殖和分裂能力,照射后的虫体能有效诱导小鼠体液免疫应答.     

扁桃酸治疗小鼠急性弓形虫病后肝细胞超微结构的变化

目的：观察扁桃酸对急性弓形虫病小鼠肝细胞超微结构的影响。方法：扁桃酸200mg/kg，2次/d，经口灌服或尾静脉注射治疗感染小鼠，于感染后24h、72h和死亡后分别解剖小鼠，取肝脏制作电镜标本，设立扁桃桃酸阴性对照和乙胺嘧啶药物对照组。结果：弓形虫阳性对照组小鼠肝细胞肿胀，线粒体和内质网肿胀破裂，核膜迂曲，核固缩裂解，且破坏程度随感染时间延长而明显加重。扁核酸两治疗组肝细胞破坏程度均明显轻于相应时期的阳性对照组。扁桃酸对肝细胞内弓形虫速殖子也有明显的杀伤作用。乙胺嘧啶虽能有效杀灭虫体，但同时破坏不量肝细胞。结论：扁桃酸能减轻弓形虫对肝细胞的破坏，且副作用少，优于乙胺嘧啶。扁桃酸是高效低毒的抗弓形虫药物。     

蒿甲醚、甘草对实验性弓形虫病的疗效

小鼠腹腔接种１万个速殖子，２ｈ后分别灌胃给予：甘草３２ｇ／ｋｇ、甘草１６ｇ／ｋｇ、蒿甲醚２００ｍｇ／ｋｇ、蒿甲醚１００ｍｇ／ｋｇ、乙胺嘧啶５０ｍｇ／ｋｇ及５％淀粉溶液（对照组），连续１４ｄ。甘草各组与对照组小鼠死亡天数无差异。蒿甲醚２００ｍｇ／ｋｇ组的疗效与乙胺嘧啶组接近。图象分析表明：蒿甲醚２００ｍｇ／ｋｇ组的虫体，其周长、面积、体积均数大于对照组说明虫体有肿胀。在透射电镜下，速殖子的核膜消失，染色质减少，对类锥体、棒状体等细胞器无影响。作者首次在实验弓形虫病中证明蒿甲醚２００ｍｇ／ｋｇ的疗效与乙胺嘧啶５０ｍｇ／ｋｇ接近，并探讨了其作用机理。     

大蒜素对弓形虫感染小鼠黏膜免疫应答的影响

目的通过对大蒜素治疗弓形虫感染小鼠黏膜部位SIgA、IgG含量测定，研究黏膜在弓形虫感染免疫中所起作用。方法将雌性小鼠分成治疗、感染和对照3组，用5×10^4个，只RH株弓形虫速殖子经口感染小鼠后大蒜素治疗，每天1次，于治疗后第0．2、4、6、8、10、12周断颈处死，冲洗上呼吸道、下呼吸道、肠道、阴道、子宫黏膜，夹心ELISA法测定SIgA、IgG抗体含量。结果在观察的时间段内SIgA治疗组高于对照和感染组，治疗后4、6、8周差异具有显著性（P〈0．05）。结论大蒜素治疗经口感染弓形虫速殖子小鼠，能提高黏膜、特别是消化道黏膜产生SIgA抗体，保护机体抵御病原体感染。     

免疫组织化学ABC法观察扁桃酸对小鼠急性弓形虫病肝脏病变的作用

目的 用免疫组织化学ABC法观察扁桃酸治疗小鼠急性弓形虫病肝脏的病变,探讨扁桃酸对病变肝脏的保护作用.方法 扁桃酸200 mg/kg,2次/d,口服和静脉注射治疗弓形虫感染小鼠,同时设立乙胺嘧啶及扁桃酸药物对照组,治疗不同时间后取肝脏组织,常规制作病理切片,免疫组织化学ABC法常规染色.结果 阳性对照组可见大量肝细胞坏死区,其内可见形态典型的弓形虫速殖子,扁桃酸治疗组仅见少量散在的黄染肝细胞,乙胺嘧啶对照组小鼠肝组织内也仅见少量散在的黄染肝细胞,但肝细胞受到明显的毒性损害.因而扁桃酸能有效地抑制弓形虫速殖子入侵肝细胞.减轻弓形虫速殖子对肝细胞的破坏程度,且扁桃酸对肝细胞的毒副作用极少.结论 扁桃酸对弓形虫感染小鼠的肝脏有明显的保护作用.     

刚地弓形虫感染昆明种及Babl/c小鼠的病理特征研究

目的 研究弓形虫感染昆明种及Babl/c小鼠的病理特征.方法 分别以刚地弓形虫速殖子感染昆明种及Babl/c小鼠,观察小鼠感染发病情况,并用病理组织切片,直接染色或免疫组化法检测小鼠体内弓形虫包囊或抗原.正常对照组小鼠未感染弓形虫.结果 两种小鼠对刚地弓形虫均易感,昆明种小鼠感染刚地弓形虫后2、3 d开始发病,感染后7～10 d死亡,死亡率95.00%;Babl/c小鼠于感染后4、5 d开始发病,呈一过性急性发作,绝大多数小鼠能度过急性期逐步恢复而长期存活,仅少数小鼠死亡,死亡率为10.00%.昆明种小鼠感染后主要表现为肝细胞变性、坏死、大量炎细胞浸润,小肠黏膜坏死脱落,腹腔内可见大量弓形虫速殖子;Babl/c小鼠在急性感染期表现为肝细胞水变性,腹腔内可见弓形虫速殖子,度过急性期后继续存活的小鼠体内虽未见到大量包囊、但在肝、脑等组织中可检出弓形虫抗原.对照组小鼠在实验期间无任何异常.结论 两种小鼠对刚地弓形虫的易感性不同,Babl/c鼠感染弓形虫后经历了急性和慢性感染的转换过程,是研究弓形虫感染与免疫的良好模型.     

金诺芬通过促进自噬对弓形虫增殖的影响

目的：金诺芬对弓形虫速殖子的作用及对弓形虫感染小鼠的自噬初步探讨。方法：透射电子显微镜观察用药前后刚地弓形虫超微结构的变化;采用免疫荧光、免疫组化和免疫印迹法检测感染有弓形虫的脑组织中自噬蛋白LC3的变化。HE染色观察金诺芬作用前后小鼠脑部的弓形虫速殖子变化。结果：透射电镜显示10 ?滋g/mL组（B组）的弓形虫速殖子内部结构被破坏,虫体细胞膜破裂,细胞质均质样改变,20 ?滋g/mL组（C组）的虫体内容物溢出,线粒体及粗面内质网消失,核固缩,核膜断裂,细胞质出现许多空泡,严重者虫体崩解呈均质样改变。免疫荧光结果显示实验组（77.49±15.68）的LC3蛋白的表达量较对照组（53.81±15.24）明显增加（P=0.001）。免疫组化结果显示用药后（1 208.55±580.07）的LC3蛋白表达量比对照组（544.54±225.04）明显增高（P=0.000）。免疫印迹法检测结果显示用药后（41 738.52±0.00）的LC3蛋白表达量比对照组（25 383.88±607.34）明显增高（P=0.000）。用药后（218.80±21.17）寄生在小鼠脑部的弓形虫速殖子增殖数量明显少于对照组（495.40±31.91）（P=0.000）。结论：金诺芬在体外有破坏弓形虫速殖子的作用,同时金诺芬可以提高弓形虫感染小鼠的自噬水平从而抑制弓形虫增殖。     

激光照射弓形虫诱导的免疫保护力

本实验采用激光致弱弓形虫速殖子接种ＩＣＲ小鼠腹腔,以期提高小鼠抗弓形虫感染的免疫保护力。结果表明：激光照射能够抑制虫体的繁殖和分裂能力。照射虫体免疫小鼠能诱导产生持续升高的ＩgＧ抗体。免疫鼠经弓形虫ＲＨ株攻击后,其发病和死亡时间延长,表现出部分的免疫力。提示：激光对弓形虫速殖子的作用明显,可望在弓形虫形虫病的治疗和预防中得到应用。