RNA原位杂交法动态观察弓形虫速殖子对BALB/c小鼠小肠黏膜的黏附及侵入

目的 RNA原位杂交法观察弓形虫速殖子黏附和侵入小肠黏膜的部位及时间。 方法 30只BALB/c小鼠随机分为两组,实验组（24只）每鼠灌胃感染2×104个弓形虫速殖子（悬于0.2 ml PBS）,对照组（6只）给予等量PBS。分别于感染后15 min、30 min、1 h、2 h、4 h和8 h各处死实验组小鼠4只和对照组小鼠1只,取十二指肠、空肠和回肠标本制备石蜡切片,并作RNA原位杂交。光学显微镜观察原位杂交切片,随机选取50个视野,计数所有观察视野内的虫体总数并计算平均数。 结果 侵入的弓形虫速殖子可位于小肠上皮细胞（吸收细胞、杯状细胞和内分泌细胞）的纹状缘、吸收细胞胞浆内或相邻吸收细胞间及固有层内。感染后15 min,黏附于空肠的速殖子数量（4.93±3.949）显著高于回肠（3.78±3.102） （P<0.05）;侵入空肠的速殖子数量（4.92±4.164）显著高于十二指肠（4.10±3.532）和回肠（3.68±3.301） （P＜0.05）。随着感染后时间的延长,黏附于各肠段的速殖子数量逐渐减少,而侵入的数量逐渐増多。与感染后15 min相比,感染后8 h,黏附于十二指肠（2.32±3.039）、空肠（3.15±3.241）和回肠黏膜（2.59±3.028）的速殖子数量均显著减少（P<0.05）,而侵入十二指肠（8.92±8.955）、空肠（9.11±6.667）和回肠黏膜（9.15±10.192）的速殖子数量均显著增加（P<0.05）。 结论 弓形虫速殖子对其所黏附的小肠上皮细胞无严格的选择性,但其侵入小肠的部位具有选择性,空肠为速殖子侵入的易感部位。     

弓形虫STAg不同途径免疫小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答动态变化

目的动态观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)滴鼻和皮下免疫小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答。方法6周龄BALB/c小鼠90只随机分为3组,分别以20μg STAg滴鼻或皮下注射免疫小鼠2次,间隔2周,对照组不做处理。末次免疫后1、2、3、4和5周,每组随机处死6只小鼠。ELISA法测定小肠冲洗液sI-gA和血清IgG,分离并计数小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)和脾淋巴细胞。结果对照组小鼠小肠冲洗液sIgA水平和IEL数及血清IgG水平和脾淋巴细胞数均维持在较低水平。滴鼻免疫组小鼠小肠冲洗液sIgA水平升高,与对照组比较差异有统计学意义(FsIgA=10.074,FIEL=14.747,P0.01),其中第5周sIgA水平、第2~5周IEL数量与皮下免疫组比较差异有统计学意义(FsIgA=7.862,FIEL=9.807,P0.05)。皮下免疫组小鼠血清IgG水平和脾淋巴细胞数均升高,与对照组比较差异有统计学意义(FIgG=8.207,F脾细胞=11.209,P0.05),第5周脾淋巴细胞数与滴鼻组比较差异有统计学意义(F=6.826,P0.05)。结论20μg STAg滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答水平优于同剂量的皮下免疫,同时也诱导了较高水平的系统免疫应答。皮下免疫可诱导较高水平的系统免疫应答,但其诱导的黏膜免疫应答较弱。     

糖尿病患者情绪障碍和社会支持的城乡分布特点

[目的]探讨糖尿病患者焦虑、抑郁情绪和社会支持的城乡分布状况. [方法]对山西省4个地区8个调查点的2132名城乡居民,其中包括139名糖尿病患者,进行问卷调查,了解其一般情况以及情绪状况、社会支持等社会心理因素.[结果]城乡糖尿病患者问社会支持差异显著,城乡糖尿病患者与非糖尿病患者交互作用在抑郁得分差异显著.[结论]糖尿病患者情绪障碍和社会支持在城乡间分布是有差异的,这为临床根据社区、乡镇糖尿病患者各自特点,有针对性地实施心理干预提供了依据.     

STAg和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织细胞免疫应答

目的研究可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后鼻相关淋巴组织(nasal-associatedlymphoidtissue,NALT)的免疫效应及持续时间。方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以免疫原性好的STAg(20μg/只)为抗原,CT(1μg/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死6只小鼠。分离NALT的淋巴细胞,计数并涂片,用免疫细胞化学法(immunocytochemistry,ICC)检测其CD4 、CD8 T细胞亚群水平。结果小鼠免疫后,NALT淋巴细胞第1、2、6、8、12(P<0.05)周显著增生,可持续至免疫后第12周;CD4 T细胞第1周至第6周(P<0.05)持续显著增高,CD8 T细胞在第1周至第4周持续增高(P<0.01),CD4 /CD8 比值第2、3周显著降低(P<0.05)。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠能够有效诱导NALT的免疫效应,并可持续较长时间。     

医学寄生虫学实践教学模式的建立

针对医学寄生虫学的专业特点,在进行理论课和实验课教学改革的同时,深入开展实践教学。建立了以实践教学为平台,与育人和社会服务相结合的教学模式。在实践教学中对学生进行知识、能力、素质教育三位一体的培育模式。     

STAg和霍乱毒素不同程序滴鼻免疫小鼠诱导抗弓形虫作用

目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和霍乱毒素(cholera toxin,CT)佐剂不同程序滴鼻免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染能力,确定STAg和CT滴鼻免疫的最佳程序。方法BALB/c小鼠随机分为3组:1次、2次和3次免疫组,用20 μg STAg 1 μg CT/只分别滴鼻免疫1次,2次或3次,前2次间隔2周,末次间隔1周。末次免疫后第14天,用4×104个速殖子/只灌胃攻击所有小鼠,观察小鼠健康及死亡情况,攻击后第30天处死,ELISA法检测血清IgG和粪便IgA,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子,分离并计数派伊尔结(Peyer′spatches,PP)和脾淋巴细胞数。结果2次和3次免疫组小鼠存活率明显高于1次免疫组(P<0.05),肝、脑组织内虫荷显著低于1次免疫组(P<0.001),血清IgG和粪便IgA高于1次免疫组,PP和脾淋巴细胞数无显著性变化。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫2次或3次能有效诱导小鼠抗弓形虫感染。     

经口感染弓形虫在小鼠组织内的动态分布

目的 观察经口感染弓形虫速殖子在小鼠小肠组织、实质器官内的动态分布.方法 BALB/c小鼠96只,随机分为8组,0d组用0.5ml PBS/只灌胃,其余组用RH株弓形虫速殖子1×104个灌胃感染,感染后2、4、6、8、10、12、14d处死小鼠,每次处死12只,取十二指肠、空肠、回肠、肝脏、脾、肾、肺、心和脑做组织印片,吉-瑞氏染色,镜检.结果 感染后2d 在十二指肠、空肠、回肠、肺和心,4d在脾,6d在肾和肝脏发现虫体,脑内未发现虫体.十二指肠、空肠、回肠组织内虫体数量呈上升趋势,第6天达高峰后稍有下降.肝内虫体数量呈上升趋势,第6天最多;脾内虫体数量在6d达峰值后保持较高水平;实验期间肾、肺和心内虫体数量保持较低水平.结论 弓形虫经口感染小鼠后2d,小肠组织出现大量速殖子;同时肺和心内有少量速殖子;4d在脾、6d在肾和肝脏发现虫体;速殖子在上述组织内增殖,并形成假包囊,脑内未发现虫体.     

肠黏膜免疫:刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后,肠相关淋巴组织受刺激,促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞(IgAASC)的形成,并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A(sIgA),IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用.BALB/c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后,小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖,小肠冲洗液sIgA水平持续增高,发挥抗虫效应.小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关(r＝0.732,P<0.01).用可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠可诱导卜二指肠黏膜固有层IsAASC高表达,小肠液和血清sIgA水平升高,表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用.     

ESA和STAg鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染作用

目的 观察弓形虫速殖子排泄一分泌抗原(excreted/secreted antigen,ESA)和可溶性速殖子抗原(solubletachyzoite antigen,STAg)鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染作用.方法 BALB/c小鼠64只随机分为4组,每组16只,分别用磷酸盐缓冲液(PBS)(对照组)20μl/只、体外排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen in vitro,ESAv)20μg/只、腹腔排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen in mice,ESAm)20μg/只和STAg20μg/只滴鼻免疫小鼠2次,间隔14 d.末次免疫后14 d每组处死8只小鼠,ELISA法检测血清IgG和小肠冲洗液sIgA.每组剩余8只小鼠用RH株弓形虫速殖子1×106个/只灌胃攻击,记录小鼠健康情况.攻击后30 d处死小鼠,计数脾、脑组织内弓形虫虫荷(速殖子数).结果 ESAm组小鼠于2次免疫后出现轻微竖毛、倦怠等症状,其他各组小鼠健康状况良好.免疫后14 d,各抗原组血清lgG水平均明显高于对照组(P<0.001);ESAv(P<0.05)、ESAm(P<0.001)和STAg(P<0.001)组肠液sIgA水平明显高于对照组,EsAm(P<0.001)和sTAg(P<0.05)组高于EsAv组.弓形虫攻虫后:30 d,各抗原组小鼠脾、脑组织内虫荷显著低于对照组(P<0.01),EsAv、ESAm和sTAg组脾内速殖子减虫率分别为49.2%,49.52%和51.94%,脑内减虫率分别为46.83%,50.81%和51.18%.结论 ESAv、ESAm和STAg鼻内免疫均能产生抗弓形虫感染的部分保护,但ESAm可能对机体有毒副作用,不适宜直接鼻内免疫.     

弓形虫感染致发育毒性与垂直传播机制研究

刚地弓形虫是一种广泛寄生于人体及温血动物体有核细胞内的专性寄生虫,引起人兽共患的弓形虫病。人类和许多哺乳类、鸟类及爬行类动物均可自然感染,家畜的阳性率可达10％～50％,常形成局部暴发流行,严重影响畜牧业发展。全世界约有5亿～10亿的人感染弓形虫。成人大多为隐性感染,孕妇初次感染可导致流产、畸胎或死胎,成为优生优育的严重障碍。免疫功能低下或缺陷者,常造成严重后果。弓形虫病已成为影响人口质量和社会经济发展的严重障碍,是关系到优生优育的基本国策。