磁性小干扰RNA纳米微粒的制备及其转染人膀胱癌细胞对沉默survivin基因表达影响的研究(英文)

目的研究磁性小干扰RNA（silkNA）重组质粒纳米微粒的制备及其在外磁场协同作用下转染人膀胱癌细胞对膀胱癌细胞凋亡和沉默survivin基因表达的影响。方法利用化学共沉淀法制备葡聚糖磁性纳米微粒（DMN）并作为基因载体，通过多聚赖氨酸静电吸附作用制备磁性siRNA—survivin—DMN重组质粒纳米微粒，并在外磁场的协同作用下体外转染人膀胱癌BIU-87细胞，分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术法、半定量逆转录聚合酶链反应和Westem Blotting检测BI—U-87细胞的生长抑制率（IR）、凋亡指数（AI）、survivinmRNA及其蛋白的相对表达水平。结果构建成功的siRNA-DMN直径、有效粒径、比饱和磁化强度分别为10-12nm、94．8nm、0．19emu／g。DMN在外磁场的协同作用下转染siRNA重组质粒入BIU-87细胞后的IR（39．60％）、AI（28．72％）均分别显著高于对照组和无磁场协同作用的siRNA—DMN组（1．99％、3．75％和20．96％、16．71％）（均P〈0．05），survivin mRNA及其蛋白相对表达水平均显著低于后2组。结论磁性siRNA—DMN纳米微粒在外磁场的协同作用下转染BIU-87细胞后可有效抑制survivin基因表达并诱导细胞凋亡，为膀胱肿瘤的磁靶向基因治疗提供实验依据。     

Effects of blocking androgen receptor expression with specific hammerhead ribozyme on in vitro growth of prostate cancer cell line

Aseriesofstudieshaveindicatedthatandrogenreceptor(AR) playsakeyroleinthedevelopmentofprostatecancerbymediatingandrogenactivityontargetcells 1Ithasbeen proposedthatdecreasingandrogenandARlevelscouldbeaneffectivetherapeuticstrategyforprostatecancer 2 　InthisstudyaribozymeapproachtoselectivedegradationofARmRNAwasusedtoexploretheeffectsofblockingARexpressiononinvitrogrowthofhumanprostatecancercells METHODSRibozymedesignandsynthesisUsingtheMFOLDcomputerprogramanARspecificribozyme(RZ)was…     

CXCR4基因158沉默对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡及迁移能力的影响

目的 探讨CXCR4基因沉默后对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。 方法 将T24细胞分为3组,即干扰组、阴性对照组和空白对照组。采用阳离子脂质体转染试剂Lipofectamine 2000将靶向沉默CXCR4基因的小干扰RNA(siRNA)序列转染至膀胱癌T24细胞株中,Western-blot检测转染后T24细胞中CXCR4蛋白的表达水平,MTT比色法检测细胞凋亡,Transwell迁移试验观察T24细胞迁移能力。 结果 转染siRNA后,CXCR4蛋白表达量明显下调(P<0.05),与空白对照组及阴性对照组的T24细胞比较,沉默CXCR4基因后,显著抑制膀胱癌T24细胞的增殖活性(均为P<0.05),促进T24细胞凋亡(均为P<0.05); Transwell实验结果提示,RNAi干扰CXCR4表达后能显著抑制膀胱癌T24细胞的迁移能力(P<0.05)。 结论 RNAi干扰CXCR4表达水平能够抑制T24细胞增殖、促进细胞凋亡及降低细胞的迁移能力,推测CXCR4基因可能是膀胱肿瘤细胞增殖及迁移的重要调控因子之一。     

survivin 靶向siRNA 对膀胱癌细胞增殖和凋亡作用的体外研究

目的 观察靶向survivin的siRNA对膀胱癌细胞T-24增殖和凋亡的影响.方法 使用lipofectamineTM2000将靶向survivin的siRNA真核表达载体转染至膀胱癌细胞T-24,半定量RT-PCR检测T-24细胞survivin基因表达的变化;MTT法检测对T-24细胞增殖的影响;膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术检测诱导凋亡的影响.结果 靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效率抑制T-24细胞survivin基因在基因水平的表达,mRNA抑制率为61.73%;细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为32.42%和37.48%;转染24h后可以诱导细胞凋亡16.76%.结论 利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制T-24细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在膀胱癌的基因治疗中具有一定价值.     

Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株中Survivin和SMAC/DIABLO基因表达的影响

目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3中survivin、Smac/DIABLO表达的影响,探讨survivin、Smac/DIABLO在ASODN诱导卵巢癌细胞凋亡和细胞周期改变中的作用和分子机制.方法 用脂质体(LipofectamineTM 2000)介导survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数、细胞周期分布及survivin、Smac蛋白表达改变,逆转录酶链反应检测survivin、Smac/DIABLO基因表达改变.结果 同对照组比较,不同浓度ASODN作用后细胞生长明显减慢,转染后48 h IC50在600 nmol/1左右.用600 nmol/LASODN转染48h后,细胞凋亡指数(AI)明显增加,(t=6.3671,P＜0.05);更多的细胞停留在G0/G1期(t=10.3832,P＜0.01).Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.5031,P＜0.05,t=7.8146,P＜0.01),SmacmRNA和蛋白表达上调(t=2.8011,P＜0.05,t=11.3917,P＜0.01).结论 ASODN诱导细胞凋亡,使更多的细胞停留在G0/G1期,减少进入有丝分裂细胞数的作用,是通过下调survivin基因,上调Smac基因表达来共同完成的,survivin、Smac/DIABLO基因在调节SKOV3细胞周期、凋亡的功能上密切相关,二者的相互作用是卵巢癌发生、发展的重要分子机制之一.     

Effects of Smac gene over-expression on the radiotherapeutic sensitivities of cervical cancer cell line HeLa

Background　Thesecondmitochondria derivedactivatorofcaspases(Smac) isanovelproapoptoticgene,whichplaysanimportantroleintheapoptosis inducingeffectsofirradiationontumorcells ThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheeffectsofextrinsicSmacgenetransferanditsover expressioninradiotherapeuticsensitivitiesofcervicalcancercells Methods　AftertheSmacgenewastransferredintothecervicalcancercelllineHeLa, subclonedcellswereobtainedbypersistentG418selection CellularSmacgeneexpressionwasdetectedbyRT PCR…     

Inhibition of survivin expression and mechanisms of reversing drug-resistance of human lung adenocarcinoma cells by siRNA

Background Survivin, a member of the inhibitor of apoptosis protein （IAP） family, overexpresses in tumor cells and not expresses in terminally differentiated adult tissues. This study aimed to investigate the effects of survivin-specific siRNA on cell proliferation, apoptosis and chemosensitivity to cisplatin in vitro and in vivo and explore the mechanisms about decreasing expression of survivin in reversing cancer cells resistance to chemotherapeutic drug.Methods Survivin-specific siRNA was transfected into A549/DDP cells. The expression of survivin and lung resistance-related protein （LRP） mRNA levels were determined by RT-PCR, chemosensitivity of A549/DDP （cisplatin）cells to cisplatin was determined by MTT assay, and apoptosis and cell cycle were determined by flow cytometry （FCM）.The protein expression levels of survivin, LRP, cyclin-D1, caspase-3 and bcl-2 were determined by Western blotting analyses. The effect of survivin siRNA inhibition on tumor growth was studied in athymic nude mice in vivo.Results Survivin-specific siRNA efficiently down-regulated survivin expression. The cell cycle was arrested at G2/M phase, and apoptosis was obviously found. Inhibition of survivin expression could make the IC50 and drug-resistant index of cisplatin decrease, and enhance the cancer cells sensitivity to cisplatin. After transfection by survivin-specific siRNA, expression of LRP and cyclin-D1 were downregulated, caspase-3 expression was upregulated, bcl-2 expression had no obvious change. The animal experiment confirmed knockdown of survivin could inhibit the tumor growth.Conclusions Survivin-specific siRNA can efficiently suppress the expression of survivin, increase apoptosis, inhibit cells proliferation and enhance the chemosensitivity to cisplatin in vitro and in vivo. Suppression of survivin expression helping to reverse drug-resistance may have relationship with downregulation of LRP and upregulation of caspase-3.Anti-tumor strategies based on the inhibition of survivin may be useful in targeting lung adenocarcinomas.     

Survivin siRNA协同5-FU抑制MCF-7细胞的增殖

目的 研究以survivin为靶标的小干扰RNA（siRNA）与化疗药5-FU联合应用抑制MCF-7细胞增殖的作用。方法 利用T7RNA聚合酶体外转录合成siRNA并筛选出一条RNA干扰survivin基因的靶序列。以脂质体为载体，将survivin siRNA转染至人乳腺癌MCF-7细胞中，用四氮唑盐（MTT）法染色并计算siRNA联用5-FU对MCF-7细胞的抑制率，用SAS统计软件及金正均9值法进行统计分析。结果 单用5-FU处理细胞，其IC50为4．42μg／ml，而加入5nmoFLsiRNA后，其IC50降为1．18μg/ml，siRNA与5-FU联用对MCF-7细胞的抑制作用较单用5-FU明显增强（F=26．74，P〈0．01）；Q值分析表明survivin siRNA与中低浓度的5-FU联用，有较好的协同作用（0≥1．15）。结论 survivin siRNA可显著增强5-FU对MCF-7细胞增殖的抑制，提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，克服耐药性的产生。     

靶向survivin的siRNA诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 采用RNA干扰技术（siRNA）阻断survivin基因的表达，观察其抑制胰腺癌细胞增殖及诱导胰腺癌细胞凋亡的作用。方法 构建靶向survivin的siRNA质粒表达载体，采用Lipofectamine^TM2000转染胰腺癌细胞PC-2，采用半定量RT-PCR、免疫组化技术检测转染前后PC-2细胞survivin基因表达的变化；采用MTT法检测对PC-2细胞增殖的抑制作用：采用流式细胞术检测其诱导PC-2细胞凋亡的作用。结果 靶向survivin的序列特异性的siRNA可以高效地抑制PC-2细胞survivin基因表达，在mRNA水平其表达抑制率为81．25％，在蛋白质水平其表达抑制率为74．24％。转染靶向survivin的siRNA质粒表达载体可以显著抑制PC-2细胞的增殖，细胞接种24、48h后其增殖抑制率分别为28．00％和33.38％：转染后24、48h可以诱导8．46％、7．53％的细胞凋亡。结论 所构建的靶向survivin的siRNA质粒表达载体可以有效地阻断PC-2细胞survivin基因表达。阻断survivin基因表达可以显著地抑制PC-2细胞的增殖并在一定程度上诱导其凋亡，靶向survivin的siRNA在胰腺癌的基因治疗中具有一定的价值。     

染色质重构复合体蛋白PBRM1对膀胱癌细胞生物学功能的影响

目的探讨染色质重构复合体蛋白PBRM1对膀胱癌细胞株EJ、T24细胞生物学功能的影响。方法针对PBRM1 mRNA序列设计合成siRNA,转染膀胱癌细胞,沉默PBRM1基因后进行如下检测：RT-PCR法检测PBRM1 mRNA表达变化及凋亡、迁移相关指标;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western印迹法检测凋亡蛋白Caspase3表达水平;划痕实验及Matrigel实验检测细胞迁移及侵袭能力变化。结果 PBRM1siRNA能有效抑制膀胱癌细胞中PBRM1的表达。PBRM1基因沉默后,与空白对照组相比,细胞增殖能力显著增强,同时细胞凋亡减少,细胞迁移及侵袭能力明显减弱。凋亡及迁移相关基因mRNA水平及蛋白水平也出现相应变化。结论 PBRM1对膀胱癌细胞株EJ、T24生物学功能有重要影响,可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡、迁移及侵袭。     

Bcl-3在人乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的影响

目的: 探讨Bcl-3在乳腺癌中的表达及沉默后对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法: 选取80例乳腺癌组织及相应癌旁组织,采用免疫组织化学法检测其中Bcl 3蛋白表达,并分析癌组织中Bcl-3表达与临床病理参数间的关系;将乳腺癌MDA-MB-231细胞随机分为空白对照组(常规培养),阴性对照组(转染对照siRNA)和Bcl 3 siRNA组(转染Bcl-3 siRNA)。转染48 h后,免疫印迹法检测各组Bcl-3表达;MTT、平板克隆实验及流式细胞术分别检测各组细胞增殖能力、克隆形成能力和细胞凋亡。结果： Bcl-3蛋白在乳腺癌及相应癌旁组织中阳性表达率分别为72.5%和51.3%。乳腺癌组织中Bcl-3蛋白表达与组织学分级、淋巴结转移及Her 2表达呈正相关(P＜0.05),而与年龄、肿瘤大小、病理分型及雌、孕激素受体无关(P＞0.05)。空白对照组和阴性对照组Bcl-3表达水平明显高于Bcl 3 siRNA组(P均<0.01)。与空白对照组和阴性对照组比较,Bcl-3 siRNA组细胞增殖率和克隆形成率降低,细胞凋亡率增高(P均<0.01)。结论： Bcl 3在乳腺癌组织中呈高表达,其沉默后起抑癌作用,乳腺癌细胞增殖能力及克隆形成率降低、凋亡率增高。     

RNAi抑制Survivin基因的表达对乳腺癌SKBr-3细胞的影响

目的 应用RNA干扰技术抑制人Survivin基因表达,观察其对乳腺癌SKBr-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成靶向Survivin基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染乳腺癌SKBr-3细胞,采用MTT比色法检测细胞增殖率、RT-PCR和Western blot法观察乳腺癌细胞Survivin mRNA和蛋白质的表达、流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 MTt检测显示Survivin-siRNA组对细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05),其细胞最高抑制率为(43.1±O.3)%;RT-PCR检测显示Survivin-siRNA组mRNA表达明显下调(P<0.01),其相对表达量分别为0.203 ±0.018、0.229±0.019,抑制率分别为55.2%、49.4%;Western blot检测显示Survivin-siRNA组蛋白表达下调(P<0.01),其蛋白相对表达量分别为0.702±0.007、0.684±0.016,抑制率分别为34.8%、36.4%;流式细胞仪检测显示Survivin-siRNA组细胞凋亡率明显增高(P<0.01),分别为(14.2±1.4)%、(16.8±0.6)%.结论 Survivin-siRNA能有效封闭Survivin的表达,抑制SKBr-3细胞增殖并诱导细胞凋亡,推测Sur-vivin基因可能成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点.     

7-二氟亚甲基-5, 4'-二甲氧基染料木黄酮对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：检测7-二氟亚甲基-5, 4'-二甲氧基染料木黄酮(7-difluoromethoxy-5, 4'-dimethoxygenistein,DFMG)对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响并探讨其可能机制。方法：体外培养宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测HeLa细胞的增殖;AO/EB染色检测HeLa细胞凋亡形态学改变;FCM检测HeLa细胞凋亡率;DNA琼脂糖电泳检测HeLa细胞凋亡的DNA条带;RT-PCR和Western 印迹检测DFMG对HeLa细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果：DFMG在体外呈浓度(0.25~64 μg/mL)和时间(24~72 h)依赖性抑制HeLa细胞增殖,其作用48 h的IC50值为4.62 μg/mL,HeLa细胞出现典型的凋亡形态学改变,典型的凋亡DNA条带,凋亡率呈浓度依赖性增高,伴随c-myc mRNA和蛋白表达增高,其下游蛋白bax,cyto-c,caspase-9表达增高,而bcl-2蛋白表达降低。用siRNA干扰沉默c-myc基因,能部分抵消DFMG对HeLa细胞增殖抑制和凋亡诱导效应,而用c-myc cDNA转染HeLa细胞,则能协同DFMG对细胞增殖的抑制作用及对凋亡的诱导作用。结论：DFMG在体外具有抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与钝化c-myc基因,启动线粒体凋亡途径有关。     

靶向survivin的siRNA表达载体的构建和表达及对HeLa细胞的影响

目的应用RNA干扰技术(RNAi)针对凋亡抑制因子survivin存活素的siRNA抑制Hela细胞株内源survivin基因的表达以及可促进Hela细胞凋亡。方法构建重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2并分别转染Hela细胞株,通过免疫荧光和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及mRNA转录水平的变化,并通过流式细胞仪使用PI-AnnexinV双染法检测Hela细胞株的凋亡。结果构建的2种重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均能明显抑制survivin基因的表达;应用免疫荧光检测survivin基因的表达,转染重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2的实验组survivin荧光强度明显低于转染空载体pGE-1和pshRNA阴性非特异对照质粒;通过半定量RT-PCR检测到survivin基因mRNA转录明显减少;通过PI-AnnexinV双染法检测Hela细胞的凋亡分别达(36.02±2.12)%(P<0.01)和(35.29±2.02)%(P<0.01)。结论重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均可明显抑制Hela细胞内源survivin的表达和mRNA的转录均可并明显促进Hela细胞的凋亡,为survivin介导的肿瘤基因沉寂疗法提供良好的实验基础。     

Knockdown of Survivin Expression by siRNA Induces Apoptosis of Hepatocellular Carcinoma Cells

Survivin, a newly identified member of lAP family, is a powerful apoptosis-inhibiting factor. It is expressed in embryonic tissues as well as in the majority of human cancers, but not in most normal adult tissues. The cancer-specific expression of survivin makes it a potential target for cancer treatment. A survivin-specific small inhibitory RNA （siRNA） was introduced into hepatocellular carcinoma cells to investigate its effect on cancer cell apoptosis, growth and sensitivity to chemotherapeutic drugs. It was found that expressions of survivin protein and proliferation index （PI） in siRNA groups were significantly decreased, the apoptosis index （AI） of siRNA groups was significantly higher than those of others groups, and the growth inhibition rate （GIR） of chemotherapeutic drugs in siRNA groups were significantly higher than those of other groups. Our study suggests that the expression of survivin may be significantly decreased in hepG2 cell after siRNA transfection. siRNA targeting survivin could induce cell apoptosis, inhibit cell proliferation and sensitize hepatocarcinoma cells to chemotherapy. Our findings provide preliminary evidence for the therapeutic use of survivin-targeted RNA interference for human tumors that express high levels of this molecule.     

三氧化二砷逆转A549细胞对TRAIL耐药的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)逆转人非小细胞肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)耐药的机制。方法将处于对数生长期的A549细胞分为对照组(仅加入DMEM)及实验组,实验组又分为As2O3组(1μmol/LAs2O3处理)、TRAIL组(100μg/L TRAIL处理)及联合组(1μmol/L As2O3、100μg/L TRAIL联合处理)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测A549细胞核因子kappa B(NF-κB)、caspase-3、survivin mRNA的表达。结果作用24、48、72h后,联合组A549细胞的增殖抑制明显增强(P<0.05),且呈时间依赖性。As2O3、TRAIL联合作用48h可明显下调NF-κB、survivin mRNA,上调caspase-3mRNA的表达。结论 As2O3通过NF-κB通路下调survivin,上调caspase-3,从而增强TRAIL诱导A549细胞的凋亡。     

减毒沙门菌携带survivin特异性siRNA对肝细胞癌的生长抑制作用及其相关机制

目的：探讨survivin特异性siRNA对肝细胞癌HepG2细胞的生长抑制作用及减毒沙门菌携带survivin siRNA对裸鼠肝癌皮下移植瘤生长抑制作用及其相关机制。方法：针对survivin的siRNA表达载体,脂质体和空质粒2个对照组分别转染肝细胞癌HepG2细胞后,应用RT-PCR和Western blott...     

BIRC5基因沉默对人膀胱癌细胞系T24增殖抑制的研究

目的 探讨靶向抑制膀胱癌细胞系T24中BIRC5基因的表达后,该基因编码产物Survivin蛋白对膀胱癌增殖的影响.方法 将设计合成的靶向BIRC5序列的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染膀胱癌细胞系T24,应用RT-PCR技术和Western blot方法检测目的基因转录及表达水平.通过生长曲线来检测survivin基因沉默后细胞增殖的改变.结果 特异性siRNA转染后,survivin mRNA及蛋白水平均明显下降.与空白对照组相比较,转染组细胞增殖情况明显受到抑制,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 特异靶向survivin的siRNA能有效抑制survivin的表达,显著抑制细胞的增殖,为膀胱癌的临床治疗提供新方向.