脑膜炎奈瑟氏菌逃避人类固有免疫系统的机制

脑膜炎奈瑟氏菌(Nm)引起的脑脊髓膜炎在世界范围内是一种具有严重危害性的传染性疾病.因此研究其侵袭机制显得非常必要.Nm表现出对人类免疫系统的高度适应,通过其菌体自身结构如荚膜、脂多糖及对宿主的分子模拟能有效地避开抗菌肽、补体系统、吞噬细胞等宿主固有免疫系统.目前对脑膜炎奈瑟氏菌逃避及抵抗人类固有免疫系统的机制研究已取得了许多进展.     

碱性成纤维细胞生长因子基因对猪缺血心肌侧支血管生成的作用

目的探讨经导管冠状动脉内注射碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因(pcDNA3-bFGF)对猪缺血心肌侧支血管生成的作用。方法实验猪分为3组:手术对照组(n=6)、bFGF基因左冠状动脉注射组(n=6)和bFGF基因右冠状动脉注射组(n=6)。开胸结扎冠状动脉左回旋支(LCX),建立急性心肌梗死动物模型。术后2周,分别行选择性冠状动脉造影,并经导管冠状动脉内注射pcD-NA3-bFGF 2 000μg。给药后2周,再次行选择性冠状动脉造影观察冠状动脉侧支血管形成情况,并通过病理切片光镜观察、免疫组化染色进行血管计数,观察猪缺血心肌侧支血管生成情况。结果(1)病理切片及免疫组化染色结果显示左、右冠状动脉注射基因组血管计数较对照组明显增加;(2)术后4周选择性冠状动脉造影显示左、右冠状动脉注射基因组侧支血管明显多于对照组,左冠状动脉注射基因组侧支血管多于右冠状动脉基因注射组。结论经导管冠状动脉内注射bFGF基因能促进猪缺血心肌侧支血管生成。     

慢病毒介导的HIF-1α mODD在肿瘤细胞中的高表达

目的在肿瘤细胞中利用重组慢病毒介导缺氧诱导因子-1α突变体(HIF-1α mODD)在正常氧压下高表达,以模拟肿瘤缺氧微环境下肿瘤细胞中HIF-1α的高表达,为研究HIF-1介导的缺氧信号通路及其在肿瘤细胞中的作用提供实验模型。方法将含HIF-1αmODD基因片段的慢病毒表达质粒pWPI GW/HIF-1α mODD,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装制备重组慢病毒,重组病毒经过纯化后直接感染GLC、H157和YTMLC等肿瘤细胞,并在正常氧压条件下培养,通过RT-PCR、免疫印迹等方法检测HIF-1α mODD在细胞中的表达水平。结果重组慢病毒介导HIF-1α mODD在GLC、H157和YTMLC细胞内获得高表达。结论成功模拟了肿瘤细胞在缺氧微环境下高表达HIF-1α的情况,为体外研究HIF-1α在肿瘤血管新生及肿瘤生长中的作用提供途径。     

粪便标本中诺如病毒GⅡ拷贝数定量检测方法的建立和应用

目的 构建诺如病毒GⅡ（Norovirus Genogroup Ⅱ,NoV GⅡ）拷贝数标准质粒及其检测体系。方法 将合成高度保守的NoV GⅡ基因序列片段克隆至pUC57载体上,构建NoV GⅡ标准质粒,采用聚合酶链反应（PCR）进行验证。通过实时荧光定量PCR扩增曲线结果绘制Ct值与病毒拷贝数的标准曲线,求得其相应的标准曲线方程。采用建立的标准质粒及其检测体系对2018年12月昆明市儿童医院4份临床粪便标本进行检测。结果 经PCR验证,NoV GⅡ拷贝数的标准质粒构建正确。采用实时荧光定量PCR的扩增曲线获得Ct值与病毒拷贝数相对应的标准曲线方程为Y=-3.972X+39.03,R²=0.991,4份粪便标本原液NoV GⅡ病毒拷贝数分别为30 443.45、9 468.40、53 176.69、4 493.12 copies/μL。结论 成功建立用于检测粪便标本中NoV GⅡ病毒拷贝数的标准质粒及其检测体系,可为疾病的预防控制和相关试验研究提供有效的定量检测方法。     

云南省2007--2009年流行性腮腺炎病毒SH和HN基因的遗传特征分析

目的 分析2007-2009年云南省腮腺炎病毒(MuV)分离株的SH和HN遗传特征.方法 采用反转录-聚合酶链反应从Vero细胞分离的病毒株基因组中扩增出SH基因和HN基因,测序后用Mega4.1软件分析其遗传特征.结果 云南省分离14株MuV的SH基因其核苷酸和氨基酸同源性为98.3%～100.0%和96.5%～100.0%,与其他省份比较其同源性为92.6%～99.4%和87.7%～100.0%,其中Wsh1和Wsh2与其他F基因型差异较大;与疫苗株同源性为84.5%～85.1%和77.2%;与其他基因型同源性为83.4%～90.9%和70.1%～86.0%.6株MuV分离株的HN基因与核苷酸和氨基酸同源性分别为99.3%～99.5%和99.1%～99.7%;与中国分离株SP株的核苷酸和氨基酸同源性均为99.8%;与其他基因型同源性为94.7%～96.8%和95.5%～99.1%;与疫苗株的同源性为92.4%～93.2%和95.5%～96.4%.结论 2007-2009年云南省流行的MuV均为F基因型;其HN基因比SH基因保守.

Abstract：

Objective To analyze genetic characterization of the small hydrophobic and hemagglutinin-neuraminidase genes of mumps virus(MuV)isolated in Yunnan province,China from 2007 to 2009.Methods Fourteen MuV strains were isolated in Yunnan,China from 2007 to 2009.Using RT-PCR,the SH gene fragments contained 316 nucleotides in all strains and HN gene of six strains were sequenced.The sequences were aligned with other mumps virus sequences downloaded from GenBank using Mega 4.1 software.Results Fourteen isolated strains were closely related to other reference strains of F genotypes.In SH gene,the homology of nucleotide and amino acid among the fourteen isolated strains were 98.3%-100.0%and 96.5%-100.0%,respectively,and 92.6%%-99.4%and 87.7%-100.0% of homology when compared with that of strains isolated from other provinces in China,respectively.Wsh1 and Wsh2 strains had less homology when compared to other strains of F genotypes.The fourteen strains had homology of 84.5%-85.1%and 77.2%compared to vaccine strains on nucleotide and amino acid,respectively,and had homology of 83.4%-90.9% and 70.1%-86.0% compared to that of other genotypes.In HN gene,the homology of nucleotide and amino acid among the six isolated strains were 99.3%-99.5% and 99.1%-99.7%,respectively,and also 99.8% and 99.8% of homology respectively when compared to the SP strain in China.All the six strains had homology of 92.4%-93.2% and 95.5%-96.4% when compared to the vaecine strains on nucleotide and amino acid,respectively,and had homology of 94.7%-96.8% and 95.5%-99.1%compared to other genotypes.Conclusion Fourteen strains isolated in Yunnan from 2007 to 2009belonged to F genotype of MuV while the HN gene seemed more conservative than SH gene.     

脑膜炎奈瑟氏菌逃避人类固有免疫系统的机制

脑膜炎奈瑟氏菌(Nm)引起的脑脊髓膜炎在世界范围内是一种具有严重危害性的传染性疾病.因此研究其侵袭机制显得非常必要.Nm表现出对人类免疫系统的高度适应,通过其菌体自身结构如荚膜、脂多糖及对宿主的分子模拟能有效地避开抗菌肽、补体系统、吞噬细胞等宿主固有免疫系统.目前对脑膜炎奈瑟氏菌逃避及抵抗人类固有免疫系统的机制研究已取得了许多进展.     

一株引起无菌性脑膜脑炎柯萨奇B组3型病毒的分离和VP1基因分析

目的对一株从无菌性脑膜脑炎患者中分离到的柯萨奇B组3型病毒(coxsackie virus B3,CVB3)分离株KMA103-09进行VP1区的基因特征分析。方法采用Hep-2、RD细胞对患者粪便标本进行病毒分离,肠道病毒组合血清进行鉴别,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒目的片段,测序后进行VP1基因分析,用Mega4.1等软件分析处理。结果肠道病毒组合血清鉴别为柯萨奇病毒B组3型(Cox.B3),从病毒性脑膜脑炎患者粪便标本中,分离到CVB3,其VP1区的核苷酸长度为849bp,未发现核苷酸插入与丢失。与山东04433/SD/CHN/2004/CB3株、山东05280/SD/CHN/2005/CB3株及山东YZ127/SD/CHN/2005/CB3株氨基酸同源,与其余国内分离株同源性高于为99.29%,与国外毒株的同源性为95.41%~96.47%。在进化树上与AM06HZ/SD/CHN/2006/CB3株显示在同一个分支上。结论分离的肠道病毒为柯萨奇病毒B组3型(Cox.B3),分离株(KMA103-09)VP1区变异较小。     

头颈部鳞状癌肿瘤干细胞的研究进展

全世界每年头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)新发病例约50万,且位居所有癌症病死率的第6位,而目前尚无合适的治疗方法.研究证实,HNSCC中存在肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs),这种细胞具有自我更新及分化能力.当前主要采用化疗与放疗的结合来治疗HNSCC,这些治疗方法只能选择性杀伤处于分裂期的肿瘤细胞,而对CSCs无效,无法避免肿瘤的生长及复发.因此,对CSCs的进一步研究会提高我们对HNSCC的理解,发现新的治疗方法.近年来,在头颈鳞癌肿瘤干细胞研究方面取得了一系列重要的研究进展,本文回顾与展望肿瘤干细胞在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展.     

昆明地区571例门诊患者HPV感染情况分析

目的探讨昆明地区女性子宫颈感染人乳头瘤病毒(human Papillomavirus,HPV)的基因型分布和感染率情况。为预防HPV感染和宫颈癌防治提供依据。方法以MY09/MY11为外引物,GP5+/GP6+为内引物,通过巢式PCR(n PCR)检测妇科门诊样本571例,并将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,将在150bp处有条带的样本送测序,测序结果通过NCBI网站blast功能开展核酸比对,并进行基因分型。结果 535例门诊患者中阳性病例111例,阳性率20.75%,其中高危型77例,占总阳性率69.37%,低危型34例,占总阳性率30.63%。结论昆明地区女性子宫颈感染HPV最常见的亚型依次为16、58、33、35、18和31。低危型最常见的亚型依次为6、81、11、91。高危型为常见类型,占总阳性率的69.37%,16型和58型为主要高危感染亚型,6型为主要低危感染亚型。     

病霉与细胞凋亡

近年来的研究表明病毒感染与细胞凋亡之间有着密切的关系，在感染病毒引起细胞凋亡的过程中有许多新基因和新蛋白得到表达，并且参与作用，另外许多细胞因子直接或间接地参与了该过程。本文对最近几年在ＨＩＶ，ＨＢＶ，ＨＣＶ．ＥＢＶ，ＨＰＶ等病毒在细胞凋亡方面的研究进展进行了综合介绍。