血清差异表达多肽谱用于人卵巢癌诊断的研究

目的:建立卵巢癌患者血清差异表达多肽谱,并探讨其潜在诊断价值?方法:应用磁珠富集多肽结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)检测方法,筛选上皮性卵巢癌组和健康对照组差异表达多肽峰,利用ClinProTools软件比较两组血清多肽表达差异并建立差异表达多肽谱及早期诊断模型?结果:在卵巢癌组血清中,m/z 2 662.02?2 653.68?5 859.21?5 901.69?5 937.06表达显著上调;m/z 1 857.82?2 074.28?2 856.33表达显著下调?差异表达图谱建立的诊断模型预测早期卵巢癌的准确率达到81.8%(9/11),利用9例宫颈癌血清验证均为阴性,特异性达100%(0/9)?结论:磁珠富集-质谱结合ClinProTools生物信息学分析技术,有望成为新的人卵巢癌辅助诊断技术?     

肝癌血清高表达多肽——人血纤肽A的发现及生物信息学分析

目的 筛选和鉴定肝癌血清高表达的蛋白分子,并对筛选出的人血纤肽(fibrinopeptide)A进行初步分析.方法 运用ClinProt技术系统筛选并鉴定出肝癌血清高表达的蛋白分子,应用生物信息学方法对该蛋白进行分析.结果 一个在肝癌患者血清中高表达的m/z为1465的多肽,经鉴定为fibrinopeptide A,其在肝癌等多种肿瘤中表达上调.结论 fibrinopeptide A可能是肝癌候选血清标志物.     

血清多肽图技术建立子宫内膜异位症诊断模型

目的 利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF-MS)技术分析血清多肽图,建立子宫内膜异位症(Ems)的血清诊断模型.方法 采用MALDI-TOF技术和Clinprotools软件分析21例Ems血清和29例健康对照血清多肽图谱,建立诊断模型.用10例Ems血清和15例健康对照血清进行盲样验证.结果 在m/z 1000～10000的范围内共得到18个有统计学意义的差异多肽峰(P<0.01),表达上调的多肽有6个,下调的有12个,该模型盲样验证得到90.9%的敏感性和100%的特异性,准确率96.2%.结论 可以利用MALDI-TOF-MS技术和Clinprotools软件来筛选子宫内膜异位症标记物.     

糖尿病肾病维持性血透患者透析前后血清差异蛋白质组学研究

目的 应用基质辅助激光解吸附电离/飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)技术检测和探讨糖尿病肾病维持性血透患者透析前后血清以及透析废液中的差异蛋白质的变化. 方法 收集糖尿病肾病维持性血透患者透析前后的血清以及透析废液,经MALDI-TOF MS分析检测,并对差异蛋白质进行多肽指纹图谱鉴定.同时在蛋白质数据库Mascot Search进行检索以确定其性质. 结果①透析前后的血清经WCX磁珠处理后,在质荷比(m/z)为1 866,2 022,2 661和5 905处,检测到具有差异的多肽指纹图谱变化;②透析前后的血清以及透析废液经WCX磁珠处理后,均发现m/z为2 661的蛋白峰,且透析后强度小于透析前的强度;③采用Mascot Search进行蛋白质数据库检索,在m/z为2 022处,鉴定为补体片段C3f. 结论 糖尿病肾病维持性血透患者血液透析前后的血清中存在差异蛋白质.     

结核病患者血清蛋白质/多肽谱的初步研究

目的 了解结核病患者血清蛋白质/多肽的表达,为新型结核病血清学诊断方法的研究提供基础依据.方法 (1)应用WCX蛋白质芯片和表面增强激光解析-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对99例肺结核患者和18例肺外结核患者进行了血清蛋白质/多肽谱检测,采用ClinProTools分析软件进行比较分析.(2)以"结核"、"双向电泳"、"表面增强激光解析-电离飞行时间质谱"、"血清学"、"蛋白质组学"及相应英文为检索词在万方医学数据库、PUBMED中检索中、外文献进行文献复习.结果 WCX蛋白质芯片从血清中捕获到99种蛋白质/多肽,其中m/z为5 753.76的蛋白质在肺结核与肺外结核两组间差异有显著性,在肺外结核患者血清中表达上调,其平均质谱峰面积在肺结核患者和肺外结核患者中分别为15.42±4.86、28.29±14.08.结论 结核病的发生可产生大致相同的血清蛋白质/多肽谱,在不同类型结核结核病患者血清中可以找到共同的血清学诊断标志物.     

2型糖尿病视网膜病变患者的血清低分子量蛋白质指纹图谱

目的研究2型糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）患者特异的血清低分子量蛋白质指纹图谱。方法应用表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-MS）技术，选用H4蛋白质芯片，优化技术参数，对16例正常人，27例2型糖尿病不伴DR患者及21例2型糖尿病伴DR患者的血清标本进行检测，应用Biomarker Wizard软件筛选DR患者血清中差异表达蛋白质。结果H4芯片在激光强度210，灵敏度为9的条件下可获得较理想的图谱。在m／z2000至20000范围内共出现31个蛋白质／多肽峰；其中有5个差异表达蛋白质或多肽,m／z为7440，7639，7839，8147和8925（P〈0．05）。结论SELDVTOF-MS蛋白质芯片技术是一种快速、简便和高通量分析方法，能直接筛选出DR患者血清中的潜在标记物。     

应用血清蛋白组学指纹识别技术诊断胃癌

背景与目的:目前仍然缺少精确的胃癌血清生物学标志物,作者应用表面-增强激光解吸附/电离蛋白质芯片技术,试图寻找对胃癌具有潜在诊断意义的血清标志物。方法:该研究分为3个阶段:①使用胃癌患者与对照者的血清寻找潜在的诊断标志物;②建立一个诊断模型;③使用不同队列的胃癌患者和对照者对诊断模型进行独立确认。使用两种蛋白质芯片矩阵,负载铜离子的IM AC30矩阵和CM10(弱阳离子交换)矩阵,对血清蛋白质/多肽进行分析。结果:在该研究中,31个表面-增强激光解吸附/电离蛋白组学特征的峰强度在胃癌患者中明显升高。质量/电荷(m/z)值分别为509…     

纳升超高效液相色谱-飞行时间质谱检测斑马鱼胚胎中小分子多肽的初步研究

目的 探讨纳升超高效液相色谱-飞行时间质谱(nano-UPLC-TOF-MS)检测斑马鱼胚胎中小分子多肽的方法.方法 收集受精后发育24 h的斑马鱼胚胎,去除外层胶膜,采用机械力破碎法去除斑马鱼早期胚胎中的卵黄,并用显微镜和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测去除效果,然后用小分子肽提取液获得肽液样品后,用nano-UPLC-TOF-MS检测小分子肽相对分子质量.结果 经处理的胚胎卵黄几乎完全被去除,nano-UPLC-TOF-MS结果显示在22～24.5 min处有一明显的样品峰,单质量/电荷比(m/z)显示,绝大部分肽段峰位于800～1400 m/z范围内.结论 Nano-OPLC-MS是检测小分子多肽的有效方法,早期斑马鱼胚胎中存在着小分子多肽,其相对分子质量集中在800～1400范围内.     

WCX纳米磁珠在子宫内膜癌血清蛋白质组中的应用

目的利用弱阳离子交换型(WCX)纳米磁珠联合表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析子宫内膜癌患者血清蛋白质谱,筛选潜在的特异性肿瘤标志物,探讨其临床意义。方法应用WCX纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS对24例子宫内膜癌患者及28例正常人血清标本进行蛋白质质谱分析,用BiomarkWizard软件分析差异蛋白峰,并在Swiss蛋白数据库中搜索鉴定差异蛋白,受试者工作特征(ROC)曲线评价该技术的应用价值。结果在质荷比(m/z)2 000~20 000范围内,子宫内膜癌患者血清中筛选出与正常人血清有统计学意义的差异蛋白11个(P<0.05),其中6个高表达:m/z分别为4 175、5 315、7 970、8 047、15 930、16 074;5个低表达:m/z分别为4 592、4 675、7 019、9 188、9 358。m/z为7 970的差异蛋白与子宫珠蛋白(UG)相符。应用ROC曲线分析,确定11个差异蛋白对子宫内膜癌有中等诊断价值,灵敏度为70.5%~96.4%,特异度为89.3%~100%。结论 WCX纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS能在子宫内膜癌患者血清中筛选出灵敏度和特异度较好的差异表达蛋白,其有助于子宫内膜癌的筛查、早期诊断及预后监测。     

应用蛋白质芯片筛选壮族单纯性室间隔缺损血清标志蛋白

目的:应用蛋白质芯片技术筛选壮族单纯性室间隔缺损(VSD)血清标志蛋白.方法:用表面增强激光解吸、电离飞行时间质谱技术和CM10芯片检测25例壮族单纯性VSD患儿与36例儿科常见病患儿血清,用Ciphergen公司的Biomark Wizard软件分析数据.结果:有12个蛋白具有统计学差异,其中质荷比(m/z)6 640.784、8570.154、8698.278、2244.582、5321.868、6441.972和7973.310 7个蛋白在VSD患儿血清高表达,质荷比(m/z)2 213.579、4604.572、2142.465、9198.582和2169.264 5个蛋白下调.结论:蛋白质芯片技术是发现与筛选室间隔缺损血清标志蛋白的快速、有效的蛋白质组学工具.     

血清蛋白质指纹图谱筛选上皮性卵巢癌及预测肿瘤复发的应用研究

目的:建立人上皮性卵巢癌蛋白质组诊断模型,并盲法验证.方法:应用蛋白质芯片SELDI-TOF MS技术和生物信息学方法,比较40例上皮性卵巢癌患者手术前后、29例卵巢癌复发患者、22名健康人血清蛋白质谱,用45例包括良恶性卵巢病变患者和健康人的血清作肓筛验证.结果:卵巢癌和正常人血清比较,P＜0.01的差异蛋白峰有7个,用其中的质荷比4 162.69、5 804.26、6 749.37建立诊断模型,诊断的敏感度为98.3％,特异度为95.7％,阳性预测值为96.7％.卵巢癌术前、术后血清蛋白质谱比较,P＜0.01的差异蛋白峰有4个,术后化疗后复发与正常人血清差异蛋白质峰有5个,其中质荷比5 804.26蛋白峰术后下降、复发时升高.结论:应用SELDI方法建立人卵巢癌血清蛋白质谱诊断模型可用于卵巢癌的筛查,质荷比5 804.26蛋白峰有望成为卵巢癌疗效监测特异蛋白峰.     

高血压病痰湿壅盛证患者血清蛋白质组学研究

目的：对高血压病痰湿壅盛证患者血清蛋白质组学进行研究,试图寻找与痰湿壅盛证相关的特异蛋白质。方法：纳入59例高血压患者,将其分为痰湿壅盛组（39例）和非痰湿壅盛组（20例）,并选择30例健康体检者作为正常对照。采用弱阳离子纳米磁性微球捕获血清中的蛋白质,Ciphergen PBS-Ⅱc型蛋白质芯片阅读检测仪绘制成蛋白指纹图谱。所有蛋白指纹图谱采用Biomarker Wizard3.1分析之后用Biomarker PatternsSoftware5.0识别痰湿壅盛证特异表达的蛋白质,并建立诊断模型。结果：高血压病痰湿壅盛证（痰湿壅盛）与对照组之间共检测出有显著差异的蛋白质峰102个（P〈0.05）。以质荷比（mass to charge ratio,m/z）为9334.958（表达增高）、9280.191（表达降低）、8030.794（表达增高）和2941.551（表达增高）4个蛋白峰组成的诊断模型能很好地将痰湿壅盛区分出来。该诊断模型的敏感性为93.103%（27/29）,特异性为92%（23/25）,假阳性率为8%（2/25）,假阴性率为6.897%（2/29）,Youden指数为85.103%。盲法检验其敏感性为90%（9/10）,特异性为88%（22/25）,假阳性率为12%（3/25）,假阴性率为10%（1/10）,Youden指数为78%。结论：差异表达的蛋白质很可能是高血压病痰湿壅盛证的物质基础,筛选出的差异蛋白质是该证型患者血清蛋白标记物中区别于正常人和非此证型的高血压患者的共性特异蛋白。以此建立的分子生物学诊断模型,为中医辨证提供了一种更加客观准确的辨证手段。     

与肝癌肝移植术后复发相关的肿瘤组织标记物筛选

 目的 在肝肿瘤细胞中筛选与肝癌肝移植术后复发相关的差异蛋白,为预测患者预后寻找更灵敏、特异的生物标记物。方法 19例符合“上海标准”的肝癌肝移植患者纳入本项研究,6例术后出现肿瘤复发和转移(复发组),其余13例患者均无瘤存活(无瘤生存组)。利用表面加强激光解吸电离 飞行时间质谱技术(surface enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectroscopy,SELDI TOF MS)建立肝肿瘤细胞蛋白质指纹图谱,生物信息软件(Biomarker Wizard)比较两组之间的蛋白质差异。结果 利用弱阳离子交换(weak cation exchange,WCX2)蛋白质芯片在质核比(m/z)2 000～30 000范围内共检测出163个蛋白峰。在建立的蛋白指纹图谱中,复发和无瘤生存组相比较,6个蛋白差异有统计学意义 (P＜0.05)。复发组中上调蛋白4个,m/z分别为212 9、220 3、295 0和306 2;下调2个,m/z分别为370 8和118 56。 结论 由SELDI-TOF筛选出的肿瘤细胞差异蛋白对判断肝癌肝移植患者预后可能有重要意义,差异蛋白可能与微血管癌栓形成有关。     

Mitochondrial proteomic analysis of isopsoralen protection against oxidative damage in human lens epithelial cells

Objective:To investigate the protective effects of the natural medicinal monomer isopsoralen（ISR） with estrogenic activity against oxidative damage in human lens epithelial cells B3（HLE-B3） caused by hydrogen peroxide（H₂O₂） and to pursue the possible mitochondrial proteomic regularity of the protective effects.Methods: HLE-B3 cells were treated with H₂O₂（300μmol/L）,β-estradiol(E₂:10^-8 mol/L) and H₂O₂,ISR(10^-5 mol/L) and H₂O₂,or left untreated.Altered expressions of all mitochondrial proteins were analyzed by protein array and surfaceenhanced laser desorption ionization time of flight mass spectrometry（SELDI-TOF-MS）.The mass/charge（m/z） ratios of each peak were tested by the Kruskal-Wallis rank sum test,and the protein peak value of the m/z ratio for each treatment by pair comparison was analyzed with the Nemenyi test.Results:H₂O₂ up-regulated the expressions of two protein spots（with m/z of 6532 and 6809）.E₂ mitigated the oxidative damage,and the expression of one protein spot（m/z 6532） was down-regulated.In contrast,ISR down-regulated both of protein spots（m/z 6532 and 6809）.Conclusions:ISR could effectively inhibit H₂O₂-induced oxidative damage in HLE-B3 cells.The protein spot at m/z of 6532 might be the target spot of ISR against oxidative damage induced by H₂O₂.     

蛋白质芯片技术检测血清室间隔缺损特异标志物的研究

目的应用蛋白质芯片技术筛选单纯性室间隔缺损血清特异标志物。方法采用病例对照设计。用CMIO蛋白质芯片检测56例单纯性室间隔缺损患儿与85例儿科常见痛患儿血清，筛选血清差异蛋白。结果有21个蛋白具有统计学差异．其中质荷比6640、784、8571，079、6441、972、8698．804、3322．549、2128．960、2291、255、2055，652、2243．846和2．99．661等10个蛋白在VSD患儿血清中呈高表达，而质荷比2050．946、9306．537、7783．535、9198．666、2143．745、4604．572、7993．109、2824．602、2230．218、2083．311和9360．675等11个蛋白下调。结论蛋白质芯片技术是进行室间隔缺损分子流行病学研究的有效工具，所筛选出的蛋白成分可能是单纯性室间隔缺损的血清标志物。     

大肠癌唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型研究

目的：研究建立大肠癌（colorectal cancer,CRC)）唾液蛋白质指纹图谱新型分子诊断模型。方法采集34例肠癌患者、45例健康志愿者（正常组）的唾液标本,用弱阳离子交换型（WCX）纳米磁珠联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术进行检测,获得各标本的蛋白指纹图谱。用Biomarker Wizard软件分析所获得的蛋白指纹图谱找出差异蛋白,再用Biomarker Patterns 5.0.2建立鉴别诊断模型。结果共检测到312个肠癌差异蛋白质峰,两组比值大于3（肠癌/正常对照＞3,或者正常对照/肠癌＞3）,其中有37个差异蛋白质峰有统计学意义（P＜0.05）;其中有7个差异蛋白质峰肠癌组表达上调,28个差异蛋白质峰肠癌组表达下调,有35个差异蛋白质峰有显著差异（P＜0.01）。筛选建立了由m/z为2501.26、4779.95、3140.39的3个差异蛋白峰组成的肠癌与正常组的诊断模型,该模型的灵敏度和特异度分别为88%（30/34）和98%(44/45);通过交叉验证法进一步验证诊断模型的可靠性,结果该模型的灵敏度和特异度分别为85%(29/34)和88%(37/45)。结论用WCX结合MALDI-TOF-MS技术建立的唾液蛋白诊断模型为肠癌的诊断提供了新途径。     

应用蛋白质芯片筛选汉族单纯性室间隔缺损血清标志蛋白

目的应用蛋白质芯片技术筛选汉族单纯性室间隔缺损（VSD）血清标志蛋白。方法用表面增强激光解吸／电离飞行时间质谱技术和CM10芯片检测21例汉族单纯性VSD患儿与33例儿科常见病患儿血清，用Ciphergen公司Biomark Wizard软件分析数据。结果有8个蛋白的差异具有统计学意义，其中质荷比6442．233、3322．694、6640．853、5122．828、8702．852、2746．566和8574．304等7个蛋白在VSD患儿血清中高表达，质荷比2823．419下调。结论蛋白质芯片技术是发现与筛选VSD血清标志蛋白的快速、有效的蛋白质组学工具。     

肾母细胞瘤患儿血清蛋白质标记物的筛选及鉴定

目的 筛选肾母细胞瘤患儿特异性血清蛋白质标记物并对其进行鉴定,以确定其作为肾母细胞瘤血清学诊断和预后监测的特异标志物.方法 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测肾母细胞瘤患儿手术前后及正常小儿的血清蛋白质组,筛选差异蛋白质峰,并对目标蛋白质进行分离纯化、酶解,采用液质联用串联质谱(LC-MS/MS)分析,用SEQUST检索程序查询美国Bioworks公司提供的蛋白质序列数据库.结果 经SELDI-TOF-MS技术筛选出m/z位于6455.5和6984.4的蛋白质标志物在肾母细胞瘤组低表达(表达强度为1029±364、297±126),正常小儿组高表达(2108 ±837、753±226),差异均有统计学意义(均P＜0.01);m/z位于9190.8的蛋白质标志物在肾母细胞瘤术前组低表达(283±154),术后组和正常小儿组高表达(5974 ±657、6231±519)差异均有统计学意义(均P＜0.01).对m/z位于6455.5和9190.8的标志物进行鉴定,结果分别为载脂蛋白CⅢ和触珠蛋白.结论 检测血清中载脂蛋白CⅢ和触珠蛋白含量可能成为肾母细胞瘤的血清学诊断、恶性度分级和预后监测指标,值得进一步研究与应用.     

采用血清蛋白指纹图谱技术筛选食管鳞状细胞癌特异相关性蛋白的研究

目的应用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测食管鳞状细胞癌患者血清蛋白指纹图谱,筛选候选肿瘤标志物并建立诊断模型,初步探讨所建的诊断模型在食管鳞癌诊断中的临床意义。方法144例经手术后病理证实的食管鳞状细胞癌患者和50例健康人血清,用SELDI—TOF—MS检测各血清标本获得血清蛋白指纹图谱。用Biomarker Wizard筛选差异峰。扩大样本量,采用SPSS12．0中ROC曲线分析入选差异峰用于食管癌诊断的灵敏度和特异性。结果在分子量1500～30000范围内,共检测到93个蛋白峰,其中10个差异峰有统计学意义（P〈0．01）。ROC曲线面积超过08的有2768、2745、3403、6638、5972、6440、3321和3978m/z差异峰。当差异峰3403m／z以3．0为临界值时,其敏感性和特异性分别为87．5％和94．0％;3978m/z以2．0为临界值时,其敏感性和特异性分别为8417％和72．0％。其诊断价值均超过CA724、CEA和CA242单独或联合检测。结论3978和3403m/z两个蛋白对区分食管鳞癌患者和健康人群具有较好的诊断价值。