血清蛋白质指纹图谱与非小细胞肺癌临床分期关系的研究

目的 检测非小细胞肺癌患者的血清蛋白质谱,探讨非小细胞肺癌血清蛋白质指纹图与临床分期的关系,为非小细胞肺癌预后判断、临床治疗决策选择提供依据。方法 共收集69例非小细胞肺癌患者血清,应用阳离子交换蛋白(CM10)芯片,通过表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测非小细胞肺癌患者血清蛋白质质谱,应用生物信息学方法分析血清蛋白质指纹图与非小细胞肺癌临床分期的关系。结果 比较28例Ⅰ～Ⅱ期与41例Ⅲ～Ⅳ期非小细胞肺癌蛋白指纹图,共筛选出68个有显著性差异的质荷比峰(m/z),最终筛选出2个潜在标志物5632m/z、13779m/z。5632m/z、13779m/z均在Ⅲ～Ⅳ期非小细胞肺癌中高表达,在Ⅰ～Ⅱ期非小细胞肺癌中低表达。将此标记物作为非小细胞肺癌分期模型,其正确指数为0.587,一致率为79.5%,Kappa=0.32。结论 SELDI-TOF-MS技术检测非小细胞肺癌患者血清蛋白质质谱,筛选出m/z位于5632、13779的蛋白质峰可能是非小细胞肺癌术前临床分期的标记物。     

基于支持向量机对肾母细胞瘤患者血清蛋白质标记物的检测分析

目的 检测肾母细胞瘤患儿血清蛋白质,筛选特异的蛋白质标记物,构建用于肾母细胞瘤早期诊断的血清蛋白质指纹图谱模型。方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测75例血清标本（肾母细胞瘤30例,其他小儿腹腔实体肿瘤25例,正常小儿20例）的蛋白质质谱,并结合生物信息学方法（支持向量机）分析数据。结果筛选出4个质荷比（m／z）位于6984．5、6455．5、6914,0、3256．7的蛋白质标记物,构建肾母细胞瘤早期诊断模型。经留一法交叉验证,区分肾母细胞瘤和正常小儿的血清蛋白质指纹图谱模型特异性为100％,敏感性为100％;区分肾母细胞瘤与其他腹腔实体肿瘤的血清蛋白质指纹图谱模型特异性为100％,敏感性为93．3％。结论表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术结合支持向量机建立肾母细胞瘤血清蛋白质指纹图谱模型是早期诊断肾母细胞瘤的一种特异性强、敏感性高的新方法,可用于肾母细胞瘤早期诊断与肿瘤标志物筛选研究。     

应用SELDI-TOF-MS技术预测非小细胞肺癌患者对TC方案化疗的敏感性

目的 用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）筛选非小细胞肺癌患者中适合接收紫杉醇与卡铂联合（TC）方案化疗的血清蛋白标志物.方法 78例接受TC方案化疗的非小细胞肺癌患者,应用SELDI-TOF-MS技术检测患者治疗前后血清标本的蛋白质质谱,分析疗效不同患者间的差异表达蛋白.结果 本实验共检测到73个有效的蛋白质波峰,其中m/z位于分子质量2000～10000的波峰有47个.筛选出m/z分子质量为7458.12,6598.64,4211.39,2258.31Da的4个血清标志物做为肺癌化疗疗效判定的候选指标.结论 应用SELDI-TOF-MS技术平台和生物信息技术筛选的血清蛋白标志物为预测非小细胞肺癌患者对化疗方案的敏感性提供了新的手段.     

WCX纳米磁珠在子宫内膜癌血清蛋白质组中的应用

目的利用弱阳离子交换型(WCX)纳米磁珠联合表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析子宫内膜癌患者血清蛋白质谱,筛选潜在的特异性肿瘤标志物,探讨其临床意义。方法应用WCX纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS对24例子宫内膜癌患者及28例正常人血清标本进行蛋白质质谱分析,用BiomarkWizard软件分析差异蛋白峰,并在Swiss蛋白数据库中搜索鉴定差异蛋白,受试者工作特征(ROC)曲线评价该技术的应用价值。结果在质荷比(m/z)2 000~20 000范围内,子宫内膜癌患者血清中筛选出与正常人血清有统计学意义的差异蛋白11个(P<0.05),其中6个高表达:m/z分别为4 175、5 315、7 970、8 047、15 930、16 074;5个低表达:m/z分别为4 592、4 675、7 019、9 188、9 358。m/z为7 970的差异蛋白与子宫珠蛋白(UG)相符。应用ROC曲线分析,确定11个差异蛋白对子宫内膜癌有中等诊断价值,灵敏度为70.5%~96.4%,特异度为89.3%~100%。结论 WCX纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS能在子宫内膜癌患者血清中筛选出灵敏度和特异度较好的差异表达蛋白,其有助于子宫内膜癌的筛查、早期诊断及预后监测。     

肾母细胞瘤血清蛋白质标记物检测与应用研究

目的筛选。肾母细胞瘤患儿特异性血清蛋白质标记物，并建立其临床分期模型与CT分期进行对照分析，评价其临床应用价值。方法应用SELDI-TOF-MS技术检测80例血清标本（术前肾母细胞瘤30例，其它恶性肿瘤30例，正常儿童20例），用ZUCI-Protein Chip Data Analyze System分析软件进行数据处理，结合支持向量机（support vector machine，SVM）建立。肾母细胞瘤临床分期模型。结果筛选出2个m／z位于4153．9和3257．6的蛋白质标记物，区分肾母细胞瘤Ⅲ和Ⅳ期与。肾母细胞瘤Ⅰ和Ⅱ期蛋白质谱差异表达模型的敏感性为83．33％，特异性为93．75％；区分。肾母细胞瘤与正常儿童，腹腔实体肿瘤及。肾脏其它恶性肿瘤的特异性是100．00％，敏感性是100．00％，80．00％，100．00％；临床分期模型可以特异性将各期区分开来，其特异性及敏感性均为100．00％；通过。肾母细胞瘤早期诊断模型中的2个m／z（6984．4，6455．5）血清标记物分析得知其各期情况如下：Ⅳ期相对于Ⅲ期低表达；Ⅲ期相对于Ⅱ期低表达；Ⅱ期相对于Ⅰ期低表达；Ⅰ期相对于正常儿童低表达；后者相对高表达；临床分期越晚m／z强度就越低表达。蛋白芯片分期准确性与病理基本一致，达到100．00％，在分期定性问题上优于CT（Ⅰ期100．00％，Ⅱ期85．00％，Ⅲ期85．00％，Ⅳ期75．00％）。结论用SELDI—TOF—MS结合SVM建立的。肾母细胞瘤临床分期模型可弥补CT在肾母细胞瘤分期定性上的不足。     

结核病患者血清蛋白质/多肽谱的初步研究

目的 了解结核病患者血清蛋白质/多肽的表达,为新型结核病血清学诊断方法的研究提供基础依据.方法 (1)应用WCX蛋白质芯片和表面增强激光解析-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对99例肺结核患者和18例肺外结核患者进行了血清蛋白质/多肽谱检测,采用ClinProTools分析软件进行比较分析.(2)以"结核"、"双向电泳"、"表面增强激光解析-电离飞行时间质谱"、"血清学"、"蛋白质组学"及相应英文为检索词在万方医学数据库、PUBMED中检索中、外文献进行文献复习.结果 WCX蛋白质芯片从血清中捕获到99种蛋白质/多肽,其中m/z为5 753.76的蛋白质在肺结核与肺外结核两组间差异有显著性,在肺外结核患者血清中表达上调,其平均质谱峰面积在肺结核患者和肺外结核患者中分别为15.42±4.86、28.29±14.08.结论 结核病的发生可产生大致相同的血清蛋白质/多肽谱,在不同类型结核结核病患者血清中可以找到共同的血清学诊断标志物.     

表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术筛选蕈样肉芽肿血清生物标志物

目的 应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛选蕈样肉芽肿患者血清中的生物标志物.方法 采用CM10蛋白质芯片捕获14例蕈样肉芽肿患者(研究组)和17例对照者(对照组)血清中的蛋白质,结合BiomarkerWizard软件进行分析.结果 所有标本在相对分子质量0～50000范围内均能检测出131个左右的蛋白峰.两组血清样本的蛋白质指纹图谱存在14个差异表达蛋白质峰,其中相对分子质量为7670的蛋白质峰与C-C基序趋化因子22相符.结论 SELDI-TOF-MS可用于蕈样肉芽肿患者血清生物标志物的筛选.     

胰腺癌血清蛋白组学的研究

目的 采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测血清蛋白指纹图,通过差异蛋白组学筛选胰腺癌特有的蛋白标记物,为研究胰腺癌的病理过程和实验诊断奠定基础.方法 用Ciphergen公司生产的PBSII/c型蛋白质指纹图谱仪和ProtienChip CM10(弱阳离子交换表面)蛋白芯片采集23例胰腺癌、25例正常对照组和19例胰腺对照组血清蛋白质谱图,采用Biomaker Wizard 3.1版分析软件筛选差异蛋白.结果 发现胰腺癌患者与正常对照、胰腺对照的血清蛋白质指纹图谱有44个差异表达的蛋白质(P<0.05),其中m/z 2732敏感性为91.30%(21/23),特异性为68.18%(30/44),受试者工作特征曲线下面积(AUC)=0.76;m/z 9111敏感性为52.17%(12/23),特异性为81.82%(36/44),AUC=0.57.结论 利用SEL-DI-TOF-MS技术和CM10芯片能发现胰腺癌患者血清中的特征蛋白,对胰腺癌的早期诊断具有重要意义.     

应用SELDI-TOF-MS技术建立胃癌筛选血清蛋白质指纹图谱模型

目的 应用SELDI蛋白质芯片检测胃癌患者血清蛋白质指纹图谱,筛选候选肿瘤标志物以建立诊断模型,并探讨其诊断早期胃癌的临床意义.方法 表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱(SEL-DI-TOF-MS)技术及其配套蛋白质芯片检测40例胃癌患者和30例健康人的血清蛋白质组图谱,运用判别分析处理数据筛选标志物并建立诊断模型.结果 8592m/z、13725m/z、8678m/z等3个蛋白质峰组合所构建的诊断模型能达到鉴别胃癌患者和健康人的最佳诊断效果,灵敏度为90%(36/40),特异性为86.5%(26/30).结论 该方法 在胃癌的诊断尤其是早期诊断、术前分期及候选肿瘤标志物筛选等方面具有一定价值,值得进一步研究.     

口腔鳞癌肿瘤标记物血清蛋白组学的初步研究

目的筛选口腔鳞癌及健康人血清表达差异的蛋白质,为进一步研究口腔鳞癌发生机制和建立口腔癌标记物体系奠定基础。方法收集口腔鳞癌患者外周血清17例,健康人外周血清17例,采用固相pH梯度双向凝胶电泳、质谱鉴定和生物信息学分析,筛选在口腔鳞癌患者血清中差异表达的蛋白质。结果口腔鳞癌患者和健康人血清中有7个蛋白点差异表达明显,其中2个蛋白质点分别为触珠蛋白、触珠蛋白同型前原蛋白,它们在口腔鳞癌患者的血清中均高表达。结论触珠蛋白在口腔鳞癌患者外周血和健康人外周血中的表达发生了改变。     

Characterization of acute renal allograft rejection by human serum proteomic analysis

To identify acute renal allograft rejection biomarkers in human serum, two-dimensional differential in-gel electrophoresis （2-D DIGE） and reversed phase high-performance liquid chromatography （RP-HPLC） followed by electrospray ionization mass spectrometry （ESI-MS） were used. Serum samples from renal allograft patients and normal volunteers were divided into three groups： acute rejec- tion （AR）, stable renal function （SRF） and normal volunteer （N）. Serum samples were firstly processed using Multiple Affinity Removal Column to selectively remove the highest abundance proteins. Differentially expressed proteins were analyzed using 2-D DIGE. These differential protein spots were excised, digested by trypsin, and identified by RP-HPLC-ESI/MS. Twenty-two differentially expressed proteins were identified in serum from AR group. These proteins included complement C9 precursor, apolipoprotein A-IV precursor, vitamin D-binding protein precursor, beta-2-glycoprotein 1 precursor, etc. Vitamin D-binding protein, one of these proteins, was confirmed by ELISA in the independent set of serum samples. In conclusion, the differentially expressed proteins as serum biomarker candidates may provide the basis of acute rejection noninvasive diagnosis. Confirmed vitamin D-binding protein may be one of serum biomarkers of acute rejection. Furthermore, it may provide great insights into understanding the mechanisms and potential treatment strategy of acute rejection.     

应用蛋白质芯片技术在人血清中发现肾癌差异蛋白

目的研究肾癌患者手术前血清与对照人群血清的蛋白质差异及其临床意义。方法采用蛋白质芯片CM10技术鉴定40例肾癌患者(肾癌组)手术前血清与40例正常人(对照组)血清的蛋白质质谱的差异。结果两组质谱显示初步筛出质荷比在1 038、1 568、1 723、7 976、8 058、1 5 940、1 545、16 107、1 433、1 701、1 500共11个蛋白峰有明显差异,其敏感性为88.95%,特异性为83.68%。结论肾癌特异性蛋白质的发现,对进一步研究其发生机理及临床特异性标记物的发现有重要的意义。     

肠道病毒71型致轻症手足口病患儿血清蛋白质组分析

目的探讨肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV-71)感染致轻症手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的致病机制,筛选相关的血清蛋白生物标志物。方法应用差异荧光双向电泳(Two-dimensional difference ingel electrophoresis,2D-DIGE)分析比较8例轻症手足口病儿童和8名健康儿童血清蛋白表达谱,以DeCyder V6.5软件分析得到有显著差异的蛋白质点,以基质辅助激光解吸离子飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)鉴定差异蛋白质。结果建立了轻症手足口病与正常对照的2D-DIGE图谱,经MALDI-TOF-MS/MS鉴定得到14个差异蛋白。与对照组相比,在轻症手足口病组中表达下调的是:Alpha-2-antiplasmin、Antithrombin-III、Vitamin D-binding protein、Fibrinogengamma chain、Apolipoprotein A-IV、Clusterin、Ig lambda chain C regions、Apolipoprotein A-I、Transthyretin、ApolipoproteinC-III、Apolipoprotein A-II;表达上调的是:Leucine-rich alpha-2-glycoprotein、Haptoglobin、Serum amyloid A protein。结论鉴定得到EV-71感染后轻症手足口病患者血清中差异表达的多种蛋白,这些与炎症反应、免疫应答和神经系统相关蛋白质的差异表达与病毒的感染和宿主的防御过程有关,为进一步研究EV-71致病机理提供一定的理论基础,也为寻找潜在的治疗靶点提供了思路。     

Using SELDI-TOF-MS technology for screening serum markers of hepatic carcinoma in rats

Objective:To identify potential serum markers of hepatic carcinoma in rats through Surface-Enhanced Laser Desorption Ioniza- tion-Time of Flight-Mass Spectrometry(SELDI-TOF-MS)Technology.Methods:A rat model of hepatic carcinoma was established. The serum samples of hepatic carcinoma and normal rats were analyzed via SELDI-TOF-MS Technology.The changes of the serum protein fingerprint patterns were observed between the experimental group of hepatic carcinoma and the controls.The analysis was conducted by statistical software-Biomarker Wizard.Results:Fifty-six protein peaks in the serums were found.Within m/z 0-20 000, the protein peaks of m/z 1158,8 835 and 15 302 of hepatic carcinoma serums were obviously higher in the rat models compared with those in the controls(P<0.01).Conclusion:Three peaks were considered as potential biomarkers according to the serum protein fingerprint patterns of the hepatic carcinoma group and the control group.     

冠心病患者血清载脂蛋白C-Ⅱ、C-Ⅲ、E含量的分析

目的 :分析血清载脂蛋白C Ⅱ (apoC Ⅱ )、载脂蛋白C Ⅲ (apoC Ⅲ )、载脂蛋白E(apoE)在冠心病 (CHD)中的变化特点。方法 :测定 196例CHD人、16 5例健康老年人的常规血脂及apoC Ⅱ、apoC Ⅲ和apoE的血清含量 ,并分析它们之间的关系。结果 :CHD组与健康老年组比较 ,胆固醇 (TC)     

采用血清蛋白指纹图谱技术筛选食管鳞状细胞癌特异相关性蛋白的研究

目的应用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测食管鳞状细胞癌患者血清蛋白指纹图谱,筛选候选肿瘤标志物并建立诊断模型,初步探讨所建的诊断模型在食管鳞癌诊断中的临床意义。方法144例经手术后病理证实的食管鳞状细胞癌患者和50例健康人血清,用SELDI—TOF—MS检测各血清标本获得血清蛋白指纹图谱。用Biomarker Wizard筛选差异峰。扩大样本量,采用SPSS12．0中ROC曲线分析入选差异峰用于食管癌诊断的灵敏度和特异性。结果在分子量1500～30000范围内,共检测到93个蛋白峰,其中10个差异峰有统计学意义（P〈0．01）。ROC曲线面积超过08的有2768、2745、3403、6638、5972、6440、3321和3978m/z差异峰。当差异峰3403m／z以3．0为临界值时,其敏感性和特异性分别为87．5％和94．0％;3978m/z以2．0为临界值时,其敏感性和特异性分别为8417％和72．0％。其诊断价值均超过CA724、CEA和CA242单独或联合检测。结论3978和3403m/z两个蛋白对区分食管鳞癌患者和健康人群具有较好的诊断价值。     

与肝癌肝移植术后复发相关的肿瘤组织标记物筛选

 目的 在肝肿瘤细胞中筛选与肝癌肝移植术后复发相关的差异蛋白,为预测患者预后寻找更灵敏、特异的生物标记物。方法 19例符合“上海标准”的肝癌肝移植患者纳入本项研究,6例术后出现肿瘤复发和转移(复发组),其余13例患者均无瘤存活(无瘤生存组)。利用表面加强激光解吸电离 飞行时间质谱技术(surface enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectroscopy,SELDI TOF MS)建立肝肿瘤细胞蛋白质指纹图谱,生物信息软件(Biomarker Wizard)比较两组之间的蛋白质差异。结果 利用弱阳离子交换(weak cation exchange,WCX2)蛋白质芯片在质核比(m/z)2 000～30 000范围内共检测出163个蛋白峰。在建立的蛋白指纹图谱中,复发和无瘤生存组相比较,6个蛋白差异有统计学意义 (P＜0.05)。复发组中上调蛋白4个,m/z分别为212 9、220 3、295 0和306 2;下调2个,m/z分别为370 8和118 56。 结论 由SELDI-TOF筛选出的肿瘤细胞差异蛋白对判断肝癌肝移植患者预后可能有重要意义,差异蛋白可能与微血管癌栓形成有关。     

原发性干燥综合征合并肺间质病变患者血清特异性标志物的筛选

目的:用纳米磁珠与基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测原发性干燥综合征(primary Sjgren’s syndrome,pSS)合并肺间质病变(interstitial lung disease,ILD)患者血清蛋白质组,筛选候选蛋白标志物并建立诊断模型,初步探讨所建立的诊断模型在pSS-ILD诊断中的临床意义。方法:采用弱阳离子(WCX)纳米磁性微球捕获69例pSS患者血清中的蛋白质,所获蛋白质经PBSⅡ-C蛋白质芯片阅读仪绘制蛋白指纹图谱,经Ciphergen ProteinChip和Biomarker Wizard软件分析之后,再用Biomarker Patterns软件识别,最终筛选出pSS-ILD的特异性蛋白标志物,并优化组合建立诊断模型。结果:在pSS-ILD患者和对照组之间共找到7个差异蛋白峰(P<0.05),其中质荷比(m/z)为3 778.3、3 318.3和2 236.6的3个蛋白峰用于建立pSS-ILD诊断模型,该模型对pSS-ILD诊断的敏感性为93.1%,特异性为87.5%。经双盲实验验证,该模型对pSS-ILD诊断的敏感性为84%,特异性为85.7%。结论:应用WCX纳米磁性微球联合MALDI-TOF-MS技术可检出pSS-ILD患者血清中的特异性蛋白标志物,并建立敏感性和特异性均较好的pSS-ILD诊断模型。