四君子汤含药血清抑制晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的　观察四君子汤含药血清对人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cell，HLEC）凋亡的抑制作用，从而探讨四君子汤防治老年性白内障的机制。方法　30只SD大鼠随机分为2组，分别用四君子汤（1.725 g·kg^-1·d^-1）和生理盐水灌胃，用药7 d后经腹主动脉采血，离心提取四君子汤含药血清和空白血清冻存备用。细胞实验分为4组:阴性对照组、过氧化氢组（300 μmol·L^-1过氧化氢作用4 h）、空白血清组（300 μmol·L^-1过氧化氢作用4 h后加入体积分数20%空白血清作用12 h）和四君子汤含药血清组（300 μmol·L^-1过氧化氢作用4 h后加入体积分数20%四君子汤含药血清作用12 h），流式细胞仪检测HLEC细胞周期；透射电子显微镜观察各组HLEC超微结构的改变。结果　流式细胞仪检测结果示:过氧化氢组G1期细胞比例为（67.127±2.615）%，较阴性对照组明显增加，S期细胞比例为（24.603±2.547）%、 G2期细胞比例为（8.270±1.149）%，均较阴性对照组减少，差异均具有统计学意义（均为P＜0.05）。四君子汤含药血清组G1期细胞比例为（41.517±20.008）%，较过氧化氢组明显减少，S 期细胞比例为（38.423±10.213）%、G2期细胞比例为（20.060±11.004）%，均较过氧化氢组明显增加，差异均具有统计学意义（均为P＜0.05）。透射电子显微镜结果显示:阴性对照组胞膜完整，各细胞器结构正常；过氧化氢组细胞表面微绒毛消失，染色质凝集成块分布于核膜下，核膜欠完整，细胞质内可见溶酶体；空白血清组细胞质内空泡增多，线粒体、内质网等细胞器结构仍可见；四君子汤含药血清组胞膜完整，细胞质内可见少许空泡，线粒体、内质网等细胞器结构清晰。结论　四君子含药血清能有效抑制过氧化氢诱导的HLEC凋亡，这可能是四君子汤防治老年性白内障的机制之一。     

猕猴眼屈光生物学参数的检测

目的：观察人工繁育猕猴眼球的屈光生物学参数,为眼动物实验提供可靠的参考数据。方法采用电脑验光仪、IOL-Master、角膜超声测厚仪,对47只猕猴93眼的屈光度数、角膜曲率半径、眼轴长度、中央角膜厚度等屈光生物学参数进行测量。结果各年龄组猕猴眼中央角膜厚度比较无统计学差异（P>0.05）;眼轴长度在2.5岁以前随年龄的增长不断变长,2.5岁以后眼轴长度可能不再变化;0.5岁组角膜曲率半径最小,随年龄增长有变长趋势,1.5岁以后趋于稳定;等效球镜屈光度数越小,轴率比就越大,2.5岁~4.5岁期间轴率比维持在一个较稳定的范围。结论与人类相比,人工繁育猕猴眼中央角膜厚度更薄,眼轴长度更短,角膜曲率半径也更小,角膜曲率半径和眼轴长度的变化规律和人类接近,可作为理想的动物眼实验模型。     

绝经后女性雌激素水平与老年性白内障的关系

目的:探讨绝经后女性雌激素水平与老年性白内障的关系。方法:实验分两组:对照(绝经后健康妇女)组、绝经后老年性白内障患者组。放射免疫检测法检测绝经后老年性白内障患者和对照组血清雌二醇(β-Estradiol,E2)的水平。结果:绝经后老年性白内障患者E2水平较绝经后健康妇女明显下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:绝经后女性老年性白内障的发生与缺乏雌激素有关,雌激素对白内障有保护作用。     

准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术（LASEK）患者应用5-氟尿嘧啶和丝裂霉素C对术后haze及视力的影响

目的　探讨准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术（laser-assisted subepithelial keratomileusis，LASEK）患者应用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-Fu）和丝裂霉素C（mitomycin C，MMC）对术后haze及视力的影响。方法　回顾性分析我院诊治的72例（144眼）屈光度在-6.50~-9.00 D均接受LASEK治疗的近视患者临床资料。按照患者术中用药情况分为5-Fu组（浓度为25 g·L^-1）和MMC组（浓度为0.2 g·L^-1）。5-Fu组32例，MMC组40例，两组患者的年龄、性别、术前等效球镜度数及最佳矫正视力比较差异均无统计学意义（均为P＞0.05）。分别于术后1周、1个月、3个月、6个月检查两组患者角膜上皮愈合时间、haze出现和消退时间及haze的分级、最佳矫正视力等。结果　5-Fu组患者上皮愈合时间为（5.26±1.12）d，MMC组为（4.66±1.28）d，两组比较差异无统计学意义（P>0.05），两组患者均未见上皮延迟愈合。术后haze出现时间，5-Fu组与MMC组差异无统计学意义（P＞0.05）；术后MMC组haze消退时间为（62.46±12.83）d，5-Fu组为（88.45±15.36）d，两组差异有统计学意义（P＜0.05）。术后1周和术后3个月两组患者haze分级差异均无统计学意义（均为P＞0.05）；术后2周和术后1个月两组haze分级比较，MMC组均优于5-Fu组，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。术后1周和术后1个月MMC组最佳矫正视力均优于5-Fu组，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）；术后3个月两组最佳矫正视力均恢复至术前水平，与术前比较差异均无统计学意义（均为P＞0.05），但两组之间比较差异有统计学意义（P＜0.05）；术后6个月两组最佳矫正视力均优于术前水平，术前术后比较差异均有统计学意义（均为P＜0.05），但两组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论　LASEK术中局部应用抗代谢药物5-Fu和MMC均能提高手术疗效，术后3个月haze基本消退，视力恢复到最佳矫正视力，在目前MMC缺乏的情况下可考虑替代使用5-Fu。     

Mitochondrial proteomic analysis of isopsoralen protection against oxidative damage in human lens epithelial cells

Objective:To investigate the protective effects of the natural medicinal monomer isopsoralen（ISR） with estrogenic activity against oxidative damage in human lens epithelial cells B3（HLE-B3） caused by hydrogen peroxide（H₂O₂） and to pursue the possible mitochondrial proteomic regularity of the protective effects.Methods: HLE-B3 cells were treated with H₂O₂（300μmol/L）,β-estradiol(E₂:10^-8 mol/L) and H₂O₂,ISR(10^-5 mol/L) and H₂O₂,or left untreated.Altered expressions of all mitochondrial proteins were analyzed by protein array and surfaceenhanced laser desorption ionization time of flight mass spectrometry（SELDI-TOF-MS）.The mass/charge（m/z） ratios of each peak were tested by the Kruskal-Wallis rank sum test,and the protein peak value of the m/z ratio for each treatment by pair comparison was analyzed with the Nemenyi test.Results:H₂O₂ up-regulated the expressions of two protein spots（with m/z of 6532 and 6809）.E₂ mitigated the oxidative damage,and the expression of one protein spot（m/z 6532） was down-regulated.In contrast,ISR down-regulated both of protein spots（m/z 6532 and 6809）.Conclusions:ISR could effectively inhibit H₂O₂-induced oxidative damage in HLE-B3 cells.The protein spot at m/z of 6532 might be the target spot of ISR against oxidative damage induced by H₂O₂.     

榄香烯-羧甲基壳聚糖缓释药膜制备及体外释放研究

目的探讨榄香烯-羧甲基壳聚糖缓释药膜制备及体外释放,以期为有效防治后发性白内障提供新的给药途径。方法将榄香烯乳液和羧甲基壳聚糖完全溶涨,混合均匀后涂布在玻璃板上,烘干备用,采用高效液相色谱法检测药膜的浓度;并通过体外释放实验摸索药膜的体外释放特性。结果显微镜观察结果显示制备的药膜呈乳白色半透明柔软薄膜,成膜性能良好;体外释放实验结果显示随着时间的延长释药速率逐渐减慢,4小时累计释药率为72.59%。结论榄香烯-羧甲基壳聚糖药膜成膜性能良好,与榄香烯原药相比,榄香烯-羧甲基壳聚糖药膜具有一定的缓释性能,为临床后发性白内障的防治途径及中药给药途径的更新提供了基本参考。     

蜕皮甾酮对H2O2诱导氧化损伤的人晶状体上皮细胞核因子κBp65表达的影响

目的探讨具有雌激素活性的牛膝的有效中药单体蜕皮甾酮(ecdysterone,ECR)对过氧化氢(H2O2)诱导氧化损伤的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)核因子κB(nuclear factor-kap-paB,NF-κB)p65表达的影响。方法实验分5组:正常组、H2O2组、雌二醇(E2)组、ECR组、核因子抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)组;采用流式细胞术(FCM)测定各组标本中HLEC的NF-κBp65的表达率。结果正常HLEC能表达一定的NF-κBp65(9.53%),H2O2组NF-κBp65的表达率明显增高(39.87%,P<0.01),PDTC组则明显降低(5.90%,P<0.01),ECR组(13.99%)和E2组(25.18%)介于正常组与H2O2组之间,均低于H2O2组(P<0.01)。结论 H2O2可以诱导HLEC的NF-κB的活化表达,具有雌激素活性的中药单体ECR可以有效抑制NF-κB的活化表达。     

中药单体榄香烯体外对人晶状体上皮细胞内胶原蛋白合成的影响

目的:探讨中药单体榄香烯(effects of elemene,Ele)对人晶状体上皮细胞系(human lens epithelial cells B3,HLE-B3)内Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白合成的影响。方法:利用10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)诱导HLE-B3增殖,将80mg/L的Ele作用在处于增殖状态下的HLE-B3,24h后采用双抗体夹心ABC-酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测Ele作用后HLE-B3内Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达。结果:rhbFGF作用后HLE-B3内Ⅰ型胶原蛋白浓度为53.5±5.4μg/L,较正常组(38.5±2.3μg/L)明显升高,Ele作用后HLE-B3内Ⅰ型胶原蛋白的浓度为29.5±2.9μg/L,较rhbFGF组明显下降(P<0.01)。rhbFGF作用后HLE-B3内Ⅲ型胶原蛋白浓度为1.27±0.29μg/L,较正常组(0.83±0.12μg/L)明显升高,Ele作用后HLE-B3内Ⅲ型胶原蛋白的浓度为0.69±0.11μg/L,较rhbFGF组明显下降(P<0.01)。结论:Ele抑制rhbFGF诱导的HLE-B3增殖的同时也能抑制HLE-B3内Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白合成,干扰HLE-B3纤维化,可望成为防治后囊膜混浊的理想药物。     

自体角膜缘干细胞移植联合MMC治疗105例翼状胬肉临床观察

目的 探讨自体角膜缘干细胞移植联合MMC(丝裂霉素C)治疗翼状胬肉的临床效果和手术方法。方法 对105例翼状胬肉患者实施胬肉切除术和自体角膜缘干细胞移植联合MMC治疗。结果 105例行此手术，术后观察3～36月，5例复发，复发率为3．92%。结论 自体角膜缘干细胞移植联合MMC可安全有效治疗翼状胬肉，较大程度减低胬肉术后复发率。