脑溢安对血红蛋白损伤神经元神经生长因子和白细胞介素-1β表达的影响

目的 :观察脑溢安对体外培养神经元血红蛋白损伤后的保护作用及神经生长因子与白细胞介素 1表达的影响。方法 :以 5 0 μmol·L-1血红蛋白造成培养海马神经元损伤 ,运用活细胞计数、Northern杂交、酶联免疫检测神经元存活数量、神经生长因子与白细胞介素 1mRNA及其蛋白表达水平。结果 :体外培养大鼠海马神经元在含 2 %牛血清的培养液中可存活 5个月以上。加入 5 0 μmol·L-1血红蛋白培养 2 4h神经元死亡率为 38 5 % ,同时加入脑溢安药液能显著降低神经元死亡率。血红蛋白可引起培养神经元白细胞介素 1mRNA与蛋白表达水平显著升高及神经生长因子的短暂升高 ,脑溢安能降低白细胞介素 1表达 ,维持神经生长因子持续表达。结论 :脑溢安对血红蛋白损伤神经元具有保护作用 ,其机理与调节神经元白细胞素 1、神经生长因子表达有关。     

脑溢安对大鼠脑出血后神经生长因子和白细胞介素-1β表达的调节作用

目的:观察脑出血后神经生长因子(NGF)和白细胞介素-1 β(IL-1 β)的表达及中药制剂脑溢安的干预作用.方法:用Ⅶ型胶原酶于脑内定位注射诱导大鼠脑出血模型,通过Northern杂交与ELISA方法检测出血后脑内NGF与IL-1 β mRNA及其蛋白的表达与含量.结果:大鼠脑出血后第1 d NGF与IL-1 β mRNA表达增加,第2 d NGF mRNA下降至正常组水平,第4 d、7 d低于正常组水平;IL-1 β mRNA下降缓慢,至第7 d始降至正常组水平.NGF和IL-1 β蛋白含量在出血后第1 d显著增高,至第7 d仍高于正常水平.脑溢安治疗组NGF mRNA与蛋白含量变化同模型组,IL-1 β mRNA和蛋白在出血后各时间点均低于模型组.结论:大鼠脑出血损伤后NGF与IL-1 β表达水平增加.脑溢安对IL-1 β表达有抑制作用,对NGF上增性表达有维持作用.     

脑溢安含药血清对谷氨酸致培养大鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的 :研究中药复方脑溢安对培养大鼠皮层神经元谷氨酸兴奋毒损伤的保护作用 ,为脑溢安用于治疗中风提供实验依据。方法 :建立谷氨酸致离体培养的大鼠皮层神经元兴奋毒损伤模型 ,用中药脑溢安浸膏粉含药血清进行干预 ,检测各组细胞培养液中的乳酸脱氢酶 (LDH)活性。结果 :脑溢安浸膏粉含药血清能显著地对抗培养皮层神经元的谷氨酸兴奋毒损伤 ,培养液中LDH活性明显降低 (P <0 .0 1)。实验过程中 ,含药血清加入量 5 %至 2 0 %均可。致神经元损伤的谷氨酸浓度以 1mmol·L- 1 以下为宜。结论 :脑溢安含药血清对谷氨酸致培养皮层神经元损伤具有明显保护作用     

脑溢安对新生大鼠海马神经干细胞缺氧损伤及p38MAPK活性的影响

目的探讨中药脑溢安颗粒(简称脑溢安)对神经干细胞缺氧损伤的影响及其保护作用机制.方法体外培养神经干细胞来自新生3～5 d SD大鼠海马组织,造缺氧损伤模型,用原位末端标记法(TUNEL)进行细胞凋亡检测,应用免疫共沉淀、激酶反应及Western blot技术研究脑溢安对缺氧损伤神经干细胞内p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 Mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)活性的影响.结果培养神经干细胞缺氧损伤后发生凋亡,脑溢安能促进缺氧损伤神经干细胞存活及减少神经干细胞凋亡;缺氧损伤后神经干细胞内p38MAPK活性增强,脑溢安血清组p38MAPK活性显著低于模型组和正常血清组(P＜0.01).结论脑溢安能保护缺氧损伤神经干细胞,抑制缺氧损伤激活的p38MAPK信号转导通路可能为其保护作用机制之一.     

丹参酮ⅡA在体外对海马神经元细胞放射性损伤的保护作用

目的探讨丹参酮ⅡA在体外对海马神经元细胞放射性损伤的影响,以及其在放射性损伤保护过程中的相关机制。方法体外培养海马神经元细胞株HT-22,实验分为对照组(Control)、照射组(RT)、照射+丹参酮ⅡA处理组(RT+Tan)、照射+丹参酮ⅡA+自噬抑制剂3-Methyladenine(3-MA)处理组(RT+Tan+3-MA)。采用MTT法检测各组细胞的存活分数,流式细胞技术检测细胞凋亡,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-I、LC3-Ⅱ的表达水平。结果照射后海马神经元细胞存活分数下降,而丹参酮ⅡA能提高放射线照射后海马神经元细胞的存活分数,并减少细胞凋亡。相对于单纯照射组,RT+Tan组的海马神经元细胞HT-22的自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达上升。而加入自噬抑制剂3-MA后,放射处理后的海马神经元细胞LC3蛋白表达下降,且存活分数明显下降。结论丹参酮ⅡA能明显减轻放射线在体外对海马神经元细胞的放射损伤作用,其保护机制可能与调节放疗过程中自噬相关。     

内毒素预处理对大鼠全脑缺血后海马内生性IL-1Rα的影响

目的探讨内毒素预处理对大鼠全脑缺血／再灌注后海马内生性白细胞介素-1受体拈抗剂(IL-1Rα)的影响及意义。方法采用大鼠全脑／缺血再灌注模型,动态观察内毒素预处理后海马组织IL-1Rα的表达、含量及CA1区神经元计数的变化。结果内毒素预处理后脑组织内生性IL-1Rα表达及含量显著增加,海马CA1区神经元计数下降幅度减少。结论内毒素预处理对全脑缺血／再灌注后神经元的损伤有明显保护作用;其机制可能与诱导了中枢神经系统内生性抗损伤蛋白IL-1Rα的合成有关。     

神经生长因子对脊髓神经元损伤后c-fos mRNA表达的影响

目的：探讨神经生长因子(NGF)对脊髓神经元保护作用的机制。方法：采用Allen‘s法制成大鼠TB脊髓损伤模型，用原位杂交方法检测神经元c—fos mRNA的表达。结果：脊髓损伤后神经元c—fos mRNA表达较正常对照未损伤神经元显著增加，表达高峰出现在损伤后1h；NGF能显著抑制损伤后神经元c—fos mRNA的异常表达。结论：NGF对损伤后神经元保护作用机制，可能是其抑制了c—fos基因异常表达，保护了神经元。     

黄芪对原代培养海马神经元的作用及其对抗缺血缺氧损伤的机制

目的：研究黄芪注射液对体外培养的海马神经元的影响;探索缺血缺氧对海马神经元的损伤作用及黄芪对抗缺血缺氧损伤的机制．方法：在体外培养新生大鼠大脑海马神经元,实验组加入不同浓度的黄芪,观察黄芪对培养的海马神经元的量效作用,应用MTT法检测神经元存活率作为反应指标;通过运用无糖DMEM培养基、去除培养液中的血清外加N2取代O2造成神经元缺血缺氧细胞损伤模型,加入最适剂量的黄芪,观察黄芪对上述损伤的作用;通过MTT法测定存活细胞数,乳酸脱氢酶（LDH）漏出量的检测,BDNF,NGF及NT-3免疫细胞化学染色等检测指标来反映缺血缺氧对神经元的损伤作用,同时观察黄芪对抗损伤的机制．结果：适宜剂量黄芪可提高体外培养的海马神经元的存活率,其最适宜浓度为300g／L;大剂量的黄芪（超过800g／L）可对体外培养的海马神经元造成毒副作用,使得神经元存活率下降;缺血缺氧可导致海马神经元胞膜发生脂质过氧化损伤,导致LDH外漏增加;缺血缺氧损伤可导致大量神经元死亡,这其中包括坏死和凋亡,在BDNF,NGF及NT-3三种神经营养因子中,BDNF受缺血缺氧的影响最大,表现为其表达明显下调．黄芪可对抗缺血缺氧损伤而保护神经元,它可减轻神经元脂质过氧化,并抑制缺血缺氧引发的BDNF表达下调．结论：适宜剂量的黄芪可提高体外培养的海马神经元的存活率,并且可以对抗缺血缺氧损伤而保护神经元．     

红景天苷对大鼠体外培养海马神经元物理缺氧损伤钙离子含量、钙激活中性蛋白酶及钙通道蛋白表达的影响

目的研究红景天苷对大鼠海马神经元物理缺氧损伤的保护作用及机制。方法体外原代培养新生SD大鼠海马神经元并鉴定。以尼莫地平为阳性对照药,通过苏木素-伊红染色、激光共聚焦显微镜技术观察各实验组神经元形态,通过荧光分光光度法检测各实验组神经元细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i),实时定量聚合酶链反应检测各实验组钙通道蛋白NMDAR1、Cav1.3 mRNA的表达差异,免疫细胞化学染色法检测各实验组钙激活中性蛋白酶Calpain 1蛋白质的表达差异,分析红景天苷对大鼠海马神经元物理缺氧损伤的保护作用。结果红景天苷各剂量组均可提高缺氧神经元存活率。与模型组比较,红景天苷各剂量组神经元[Ca2+]i显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05);NMDAR1和Cav1.3 mRNA的表达率均显著降低(P<0.05或P<0.01);Calpain 1阳性细胞百分率均显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论红景天苷通过下调物理缺氧神经元L-型钙通道和NMDAR亚基的表达抑制钙超载,对神经元起保护作用。     

脑神康胶囊对高糖环境下氧化损伤大鼠海马神经元HIF-1α表达的影响

目的 研究高糖环境下体外培养大鼠海马神经元氧化损伤时乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的变化以及脑神康胶囊对神经元的保护作用.方法 原代培养大鼠海马神经元,将细胞随机分成8组:对照组、高糖组、黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶组(X/XO组)、川芎嗪组、生理盐水组、脑神康低(5mL/kg)、中(10mL/kg)、高浓度组(20mL/kg),对照组用低糖型DMEM培养基培养,其余7组用葡萄糖浓度为25 mmol/L的DMEM培养基培养.除对照组及高糖组正常培养,其余各组均用黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶处理建立氧化损伤模型,其中中药各浓度组及川芎嗪组分别于加入黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶之前换以不同浓度含药血清和川芎嗪的DMEM培养液,采用Real-Time PCR法检测各组海马神经元HIF-1αmRNA的表达.结果 与对照组相比,高糖组及X/XO组HIF-1αmRNA表达均明显上升(P均<0.01);与高糖组相比,X/XO组HIF-1α mRNA的表达量升高(P<0.05);与X/XO组比较,川芎嗪组及中药各浓度组HIF-1α mR-NA的表达量均降低,其中中浓度组最低,具有明显的统计学意义(P均<0.01),川芎嗪组与低浓度组接近,无统计学差异(P>0.05).结论 脑神康胶囊对高糖环境下培养的大鼠海马神经元氧化损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其抑制HIF-1α的表达、改善组织缺氧密切相关.     

Effects of nerve growth factor on nitric oxide-mediated neurotoxicity in primary cortical cultures

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＮＧＦ）ｏｎｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ（ＮＯ）ｒｅｌｅａｓｅａｎｄｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ（ｃＮＯＳ）ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓ...     

内源性NGF在缺血性老年大鼠部分脑区及小脑中的表达

目的 探讨缺血性老年大鼠部分脑区及小脑与神经生长因子（neve growth factor,NGF)之间的关系。方法 用夹闭两侧颈总动脉法建立不完全性脑缺血动物模型，将SD大鼠随机分成正常对照组（A组）、假手术组（B组）、缺血30min，再灌注6h（C组）、12h（D组）、24h（E组）、48h（F组）、7d(G组）和14d（H组），用免疫组织化学SLAB染色法检测部分脑区神经元及小脑NGF的表达。在透射电镜下观察各组神经元超微结构变化。结果 除A，B组外，各组顶叶皮质神经元均有NGF表达，其中E组和G组中量表达，各组海马均有少量表达，各组额叶少量表达，小脑均没有表达；再灌注超过48h组海马神经元和小脑蒲肯野细胞损伤较重，顶叶皮质神经元轻度水肿。结论 老年大鼠在受到缺血性脑损伤时，内源性NGF对脑组织具有一定的保护作用。     

人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的：研究人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的影响,为其临床应用提供理论依据。方法：体外原代培养的SD大鼠海马神经元经Aβ淀粉样蛋白损伤建立细胞模型,实验分为正常对照组、Aβ淀粉样蛋白诱导损伤对照组(损伤对照组)、Rb1低剂量组（10 mg/L）、Rb1中剂量组（50 mg/L）及Rb1高剂量组（100 mg/L）,应用MTT法检测海马神经元生长增殖活力,TUNEL法检测神经元凋亡情况,化学发光法检测海马神经元内caspase-3活性。结果：MTT法检测结果显示,与正常对照组比较,损伤对照组和Rb1低、中及高剂量组神经元生存率均有不同程度的下降(P<0.05),损伤对照组下降最明显;与损伤对照组比较,Rb1中、高剂量组神经元生存率明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。TUNEL法检测结果显示,与正常对照组比较,损伤对照组、Rb1低、中剂量组的阳性神经元数量明显增加,其中损伤对照组增加最明显;损伤对照组与Rb1高剂量组比较差异有统计学意义（P<0.05）。损伤对照组caspase-3活性与Rb1高剂量组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导性神经元损伤具有保护作用,并通过调控细胞凋亡实现。     

星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的影响

目的分析星形胶质细胞(Ast)与腺苷对缺氧/复氧损伤神经元的保护作用,揭示腺苷对神经系统的保护机制。方法体外培养SD大鼠大脑皮层Ast和海马神经元及大脑皮层神经元,纯化后给予神经元缺氧/复氧处理,收集复氧18 h后的Ast条件培养液(ACM)和腺苷预处理的Ast条件培养液(ACMa),然后用ACM、ACMa及ACM+腺苷(ACM+含100μmol·L-1腺苷的DMEM液)以15的浓度培养缺氧损伤神经元;光镜观察神经元形态学变化,二甲氧唑黄比色法测定细胞活性。结果 ACMa组、ACM+腺苷组及ACM组的神经元缺氧损伤后的细胞形态较模型组得到明显改善,细胞活性较模型组也得到显著提高。不同条件培养液对缺氧/复氧后神经元活性的作用:ACMa>ACM+腺苷>ACM。结论 Ast条件培养液对缺氧/复氧损伤的神经元有重要的保护、修复作用,腺苷可通过Ast间接地保护和修复受损神经元。     

Caspase-1活化在胆红素诱导的大鼠海马神经元损伤中的作用

目的研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（caspase-1）活化及VX-765在胆红素诱导大鼠海马神经元损伤中的作用。方法原 代培养大鼠海马神经元分为胆红素组、对照组、VX-765组;胆红素组给予胆红素（50 μmol/L）,对照组给予同体积药物溶剂二甲 基亚砜（DMSO）,VX-765组在胆红素干预前1 h给予VX-765（50 μmol/L）;Western blot检测NLRP3、活化caspase-1表达,改良 MTT、乳酸脱氢酶（LDH）释放率及台盼蓝染色检测细胞相对存活率及死亡率,ELISA法检测原代培养上清IL-18 水平。结果 胆红素诱导原代培养大鼠海马神经元3、6 h,NLRP3、活化caspase-1蛋白表达明显高于对照组（P<0.05）。VX-765干预后,活化 caspase-1表达与胆红素组相比明显降低（P<0.05）。分组干预细胞24 h,VX-765组的相对存活率为（84.020±2.311）%,明显高于 胆红素组（P<0.05）,低于对照组（P<0.05）;VX-765组LDH释放率为（10.780±1.577）%,明显低于胆红素组（P<0.05）,高于对照组 （P<0.05）;VX-765组台盼蓝染色阳性率为（5.580±1.234）%,明显低于胆红素组（P<0.05）,高于对照组（P<0.05）。结论在原代 培养的大鼠海马神经元中,caspase-1活化参与胆红素神经毒性的发生,VX-765抑制其活化发挥神经保护作用。     

3'-大豆苷元磺酸钠对去血清所致海马神经元损伤的保护作用

目的：探讨3'-大豆苷元磺酸钠对去血清所致海马神经元损伤的保护作用的影响。方法：取新生SD大鼠（0~24 h）海马区制成单细胞悬液进行体外培养,待细胞发育成熟后,用去血清的培养基制作海马神经元损伤模型,造模同时给予3'-大豆苷元磺酸钠(3.0,10.0,30.0 µmol•L-1)处理,继续培养24 h,采用MTT法检测细胞活性;并观察细胞形态的改变;取培养上清,测定去血清海马神经元中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性。结果：形态学观察模型组海马神经元细胞膜边界相对模糊,细胞皱缩,神经突触回缩,少量细胞贴壁不牢;其上清液中去血清海马神经元中LDH活性升高;MTT法检测结果显示去血清海马神经元活性降低;给予3'-大豆苷元磺酸钠处理后,镜下观察可见细胞膜边界清楚,胞体饱满,神经突触回缩不明显,细胞贴壁良好;去血清海马神经元细胞活性升高,去血清海马神经元LDH活性降低。结论：3′-大豆苷元磺酸钠对去血清所致海马神经元损伤具有显著的保护作用。     

NGF对缺血性脑损伤引起的大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的作用

目的　研究神经生长因子 (NGF)对缺血性脑损伤引起的大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的形态学影响。方法　采用Pulsinelli闭塞大鼠四动脉全脑缺血模型 ,应用光镜、透射电子显微镜及原位末端标记法 (TUNEL染色法 )观察模型组和NGF治疗组动物脑缺血 30min再灌注 7d海马神经细胞凋亡的情况。所得数据应用SPSS软件包进行统计学分析。结果　TUNEL染色法显示模型组有大量凋亡细胞 ;给药B、C组的神经细胞凋亡数目接近正常组 ,明显少于模型对照组 ,其差异具有高度显著性P <0 0 1。结论　给予外源性神经生长因子能明显抑制海马神经细胞的凋亡 ,减少缺血再灌注对神经细胞的损害     

脑溢安颗粒对脑出血大鼠脑内IL—6表达的影响

目的：研究脑出血大鼠脑内IL－6表达的细胞定位及脑溢安颗粒（简称脑溢安）对IL－6表达的影响，探讨脑溢安治疗脑出血的作用机制。方法：采用胶原酶注射建立大鼠脑出血模型，以免疫组织化学方法检测脑出血后大鼠脑内白介素6（interleukin-6,IL-6)的蛋白表达及胶质细胞反应。结果：脑出血后6h-4d血肿区域可以检测到小胶质细胞活性，6h-7d血肿外周可以见到星形胶质细胞反应；脑出血后6h血肿区域即有IL－6表达，于72h达高峰，7d时消失。结论：脑出血后大鼠脑内IL－6阳性细胞主要为血肿区域的神经元和激活的小胶质细胞，脑溢安可能通过维持IL－6的上增性表达在脑出血损伤中发挥神经保护和神经营养作用。     

脑溢安颗粒对脑出血大鼠脑内IL-6mRNA及蛋白表达的影响

目的：探讨脑溢安颗粒 (简称脑溢安)对脑出血的保护作用机制。方法：采用胶原酶注射建立大鼠脑出血模型，以原位杂交及Western blotting方法检测实验性脑出血大鼠脑内白介素6（interleukin-6，IL-6）mRNA与蛋白的表达及脑溢安的影响。结果：脑溢安治疗组脑内IL-6 mRNA表达信号在术后4~7 d较模型组增强，且IL-6蛋白表达在术后6 h~7 d均明显高于模型组(P<0.01)。 结论：上调IL-6蛋白的表达、维持IL-6 mRNA及蛋白的高水平表达可能是脑溢安保护脑出血损伤的作用机制之一。