红景天拮抗脉冲噪声所致豚鼠听力损伤的实验研究

目的　探讨红景天对噪声所致豚鼠听力损伤的拮抗作用。方法　将40只豚鼠随机分为四组，每组10只。第1组（实验对照组），噪声暴露前3天给予安慰剂淀粉片处理；第2组（实验组），噪声暴露前3天给予诺迪康胶囊处理，第1组和第2组同时暴露在相同条件的脉冲噪声中；第3组（红景天组），只给予3天诺迪康胶囊预处理，不做其他处 理；第4组（生理盐水组），只给予3天生理盐水预处理，不做其他处理。采用听性脑干反应（ABR）、扫描电镜、酶联免疫吸附测定（ELISA）法比较4个组豚鼠实验前后听阈变化、观察耳蜗毛细胞纤毛变化情况及检测耳蜗中半胱天冬酶-3（caspase-3）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia induciblefactor-1α，HIF-1α）和4-羟基壬稀酸（4-hydroxynonenal，4-HNE）表达情况。结果　实验前4个组豚鼠听阈比较差异无统计学意义（P＞0.05）。实验后24小时，第1组与第2组豚鼠听阈比较差异有统计学意义（t =21.675，P＜0.05），第3组和第4组豚鼠听阈比较差异无统计学意义（P＞0.05）。实验前后第1组和第2组听阈相差20 dB，差异有统计学意义（t 第1组=-39.000，t 第2组=-24.187，P 均＜0.05）。第1组高倍镜下见耳蜗外毛细胞纤毛大片缺失，第2组发现外毛细胞纤毛呈个别、散在缺失，第3组和第4组外毛细胞纤毛未见明显损伤；4个组豚鼠内毛细胞纤毛均未见缺失。4个组间caspase-3、HIF-1α和4-HNE表达比较，差异有统计学意义（F =24.674、90.258和51.663，P 均＜0.05)；第1组和第2组 caspase-3、HIF-1α和4-HNE表达显著高于第3组和第4组，差异有统计学意义（caspase-3：t 第1、3组=6.624，t 第1、4组=6.685，t 第2、3组=4.658，t 第2、4组=4.844；HIF-1α：t 第1、3组=14.697，t 第1、4组=11.895，t 第2、3组=7.060，t 第2、4组=4.938；4-HNE：t 第1、3组=9.188，t 第1、4组=11.261，t 第2、3组=4.974，t 第2、4组=6.484，P 均＜0.05），且第1组的caspase-3、HIF-1α和4-HNE表达较第2组升高，差异有统计学意义（t caspase-3=2.607，t HIF-1α=7.598， t 4-HNE=4.433，P 均＜0.05）。结论　红景天能显著降低脉冲噪声暴露后ABR听阈，降低耳蜗中caspase-3、HIF-1α和4-HNE浓度，减轻耳蜗外毛细胞纤毛缺失，从而减轻听力损伤。     

扫描电镜观察修复物与牙齿间密合度的复型技术

本文介绍制备扫描电镜复型样品的技术。采用硅橡胶印膜材料,涂盖于牙齿的剖面,取得阴模,将环氧树脂灌注于阴模中,待树脂聚合后,揭下即得复型样品。复型样品可避免牙齿样品的干燥龟裂的弊端,得到更接近真实情况的样品,使扫描电镜观察更精确,是检测修复物和牙齿密合度的良好方法。     

骨唾液酸蛋白在体外培养人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的角色

目的：骨唾液酸蛋白在骨矿化形成方面扮演重要角色，实验观察其是否能诱导体外培养的人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。方法：实验于2005—10／2006—12在解放军广州军区广州总医院医学实验科完成。①材料来源：选取在本院体检的健康志愿者2人，对本实验均知情同意。采用Ni-NTA亲和纯化技术，从本室构建的毕赤酵母GS115／pPICZaA-hbsp发酵上清中纯化重组人骨唾液酸蛋白。②实验方法：对健康志愿者进行髂骨穿刺抽取骨髓液，采用贴壁法培养得到骨髓间充质干细胞。设立4组：骨唾液酸蛋白组添加0．1nmol／L骨唾液酸蛋白；成骨诱导液组添加10nmol／L地塞米松、10mmol／L磷酸甘油、50mg／L抗坏血酸；联合组添加上述两组的所有试剂；空白对照组不添加任何处理因素；各组均处理细胞12d。⑧实验评估：光镜及电镜观察培养的细胞形态；以细胞计数法测定生长曲线，应用流式细胞仪分析细胞周期，采用免疫荧光细胞化学法和流式细胞分析检测干细胞标志物STRO-1的表达；生化试剂盒测定碱性磷酸酶活性；von Kossa染色法检测钙沉积。结果：①单个骨髓间充质干细胞为长梭形，经骨唾液酸蛋白处理后细胞大而扁平，原来密集的克隆分散开。②与空白对照组比较，骨唾液酸蛋白组引起细胞生长曲线右移，细胞Go／G，期比例平均增加12．09％（P〈0．01），S期比例减少65．92％（P〈0．01），STRO-1阳性细胞百分率下降26．54％（P〈0．01）。⑧与空白对照组比较，骨唾液酸蛋白组细胞碱性磷酸酶活性增加50．0％，成骨诱导液组增加59．5％，联合组增加71．43％，并且随着处理时间的延长，活性增加越显著。④空白对照组细胞vonKossa染色呈阴性，其余各组均呈阳性。其中联合组的黑色矿化结节体积最大、数目最多；骨唾液酸蛋白组的结节体积较小、数目较少；成骨诱导液组居中。结论：骨唾液酸蛋白对人骨髓间充质干细胞有促进成骨分化和矿化作用，且与成骨诱导液联用效果更佳。     

伽玛刀照射癫痫大鼠海马神经元超微结构及线粒体计量分析

目的观察低剂量伽玛刀照射对癫大鼠海马神经元超微结构的影响。方法建立大鼠青霉素局灶性癫动物模型,将58只SD大鼠分为对照组、癫模型组和伽玛刀照射组。对大鼠行伽玛刀照射,照射中心剂量24 Gy、周边剂量12 Gy、等剂量曲线50%,术后3 h～60 d取靶区海马,透射电镜观察并采用图像分析系统对线粒体形态进行计量分析。结果对照组细胞结构基本正常;癫模型组可见神经元细胞器明显空化,线粒体体密度、数密度、比表面和嵴膜密度较对照组明显减少(均P<0.05),线粒体平均体积和平均截面积较对照组明显增大(均P<0.05)。伽玛刀照射组早期线粒体的平均体积、平均截面积、数密度、比表面与对照组相比差异显著(均P<0.05),中期和晚期线粒体各项参数与对照组相比差异不显著。结论大鼠癫发作早期线粒体形态结构变化明显,低剂量伽玛刀照射对神经元修复起重要作用。     

基因枪介导单纯疱疹病毒DNA疫苗的免疫效果研究

目的：研究单纯疱疹病毒DNA疫苗经基因枪免疫小鼠的效果。方法：基因枪免疫小鼠腹部，免疫组化法检测gD抗原在接种部位的表达；ELISA检测血清中抗gD抗体；病毒攻击检测经基因枪免疫的DNA疫苗对动物的保护效果。结果：基因枪可有效将DNA质粒运送至小鼠真皮内，单纯疱疹病毒Ⅱ型gD2糖蛋白基因在真皮和肌肉组织中高效表达，免疫小鼠体内产生高滴度的中和抗体，能有效抵抗HSV-2病毒的攻击。结论：疱疹病毒gD DNA疫苗通过基因枪接种方式，可在小鼠体内产生特异性保护作用。     

缺血性老年大鼠部分脑区及小脑内源性神经生长因子的变化

背景：神经生长因子(nerve growth factor，NGF)在神经元的生长、存活、分化、保护神经元的退行性改变及神经损伤的自我保护与修复中具有重要作用，目前NGF保护神经元的分子病理学机制还有许多需要深入探讨的。目的：观察脑缺血老年大鼠部分脑区及小脑内源性神经生长因子的变化。设计：完全随机对照实验研究。地点与材料：本研究的地点为广州军区广州总医院实验科：材料为36只SD大鼠2～2．5年龄，雌雄不限。干预：用夹闭两侧颈总动脉法建立不完全性脑缺血动物模型，将SD大鼠随机分成正常对照组(A组)、假手术组(B组)、缺血30min再灌注6h(C组)、12h(D组)、24h(E组)、48h(F组)、7d(G组)和14d(H组)，用免疫组织化学ABC染色法检测部分脑区神经元及小脑NGF的表达。在透射电镜下观察各组神经元超微结构变化。主要观察指标：各组神经元NGF表达定性及定量观察。结果：除A、B组外，各组顶叶皮质神经元均有NGF表达，其中E组和G组中量表达，神经元数量分别为(58．4&;#177;9．18)mm^2和(56．2&;#177;10．87)mm^2；除A组、B组、F组和H组外各组海马均有少量表达，神经元数量C组为(28．8&;#177;6．42)mm^2、D组(30．4&;#177;12．12)mm^2、E组(24．2&;#177;5．18)mm^2、G组(15．6&;#177;4．39)mm^2；小脑均没有表达；再灌注超过48h组海马神经元和小脑蒲肯野细胞损伤较重，顶叶皮质神经元轻度水肿；结论：老年大鼠在受到缺血性脑损伤时，内源性NGF在大脑皮质和海马有部分表达，小脑始终没有表达。内源性NGF对脑组织具有一定的保护作用，早期注射外源性NGF可能对脑组织损伤后修复具有重要意义。     

Dynamic changes in type Ⅰ collagen,MMP-1 and TIMP-1 after angioplasty

Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓａｆｔｅｒｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｔｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌｃｏｒｏｎａｒｙａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙｉｓｓｔｉｌｌａｓｅｒｉｏｕｓｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｏｂｌｅｍｆａｃｅｄｂｙｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌｃａｒｄｉｏｌｏｇｉｓｔｓ Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎａｎｄｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘｍｉｇｈｔｂｅｔｈｅｐｒｉｍａｒｙｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ 1,2 　ＴｙｐｅⅠａｎｄｔｙｐｅⅢｃｏｌｌａｇｅｎｓ ,ｗｈｉｃｈａｒｅ…     

低剂量伽玛刀照射对致(癎)大鼠皮质及海马神经元c-fos和nNOS表达的影响

目的 通过观察低剂量伽玛刀照射对致(癎)大鼠大脑皮质及海马神经元c-fos和脑型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响,探讨伽玛刀治疗癫(癎)的作用机制.方法 将44只青霉素致(癎)大鼠模型等分为实验组和实验对照组大鼠各22只,另取4只正常大鼠作为正常对照组.实验组行伽玛刀照射(周边剂量12 Gy)后,应用免疫组化方法,观察大脑皮质及海马神经元c-fos和nNOS表达的变化.结果 无论是皮质还是海马,c-fos和nNOS在实验组与实验对照组动物之间,表达均有明显的差别,实验组表达明显少于实验对照组,而后者呈现双高峰现象.结论 c-fos和nNOS在伽玛刀治疗癫(癎)的机制中发挥了重要作用.     

老年大鼠不完全性脑缺血小鼠iNOS,nNOS的表达

目的：探讨诱导型一氧化氮合酶（induced nitric oxide synthase,iNOS),神经型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,nNOS)对老年大鼠不完全性脑缺血小鼠的影响。方法：建立老年大鼠不完全性脑缺血动物模型,应用免疫组织化学染色方法检测iNOS,nNOS在小脑的表达,用透射电镜观察小脑的超微结构变化。结果：缺血30min后再灌注6,12,24,48h组浦肯野细胞nNOS活性显著升高（P＜0．001）,假手术组,缺血30min立刻取材、缺血30min后灌注1h和96h组nNOS微量表达;而iNOS在小脑皮质不表达,髓质中有少量神经细胞中度表达。电镜下48h和96h组浦肯野细胞损伤较重。结论：由nNOS诱导的一氧化氮（nitric oxide,NO)是脑缺血后神经元迟发性损伤的重要因素之一。