基于蛋白质组学大黄异病同治急性中风大鼠脑物质的基础及相关机制

目的:基于定量蛋白质组学和生物信息学分析,探索大黄异病同治急性中风的物质基础及机制。方法:采用线栓法制备缺血再灌注的缺血性中风(IS)大鼠模型和胶原酶来诱导的出血性中风(ICH)模型。将60只SD大鼠随机分为缺血性中风假手术组(Sham1),缺血性中风组(IS),出血性中风+大黄治疗组(DH1),出血性中风假手术组(Sham2),出血性中风(ICH)组和出血性中风+大黄治疗组(DH2),每组10只。IS,Sham1和DH1组在24 h后,ICH,Sham2和DH2组在48 h后,生理盐水灌注后取脑组织行定量蛋白质组学分析,鉴定差异表达蛋白(DEPs)。对共性DEPs进行生物信息学分析,并对相关的DEPs进行蛋白免疫印迹验证。结果:大黄调节急性中风疾病相关共性DEPs 21个(上调12个,下调9个)。京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析显示,富集了肌萎缩侧索硬化症(ALS)通路,通路中包含神经丝蛋白轻链多肽(Nefl),神经丝蛋白中链多肽(Nefm),神经丝蛋白重链多肽(Nefh)。大黄异病同治急性中风共性机制主要包括能量代谢、离子稳态、突触相关蛋白的调节、细胞周期及神经形成。共性DEPs验证,大黄治疗后,GTP结合蛋白REM2(Rem2),酪氨酸3-单加氧酶(Th),Nefl和神经调制蛋白(Gap43)表达量与相应模型组比较差异均有统计学意义(P0.05)。其中,治疗后Nefl表达为下调,而Rem2,Th和Gap43表达为上调,此结果与蛋白质组学检测结果一致。结论:该研究建立了大黄-异病同治-差异蛋白质表达谱,能量代谢、离子稳态、突触相关蛋白调节、细胞周期及神经形成是其共性机制。     

羟甲基壳聚糖对牙周炎优势厌氧菌抑菌性能评价

多项研究证实壳聚糖具有广谱抗菌、增强免疫、促进组织修复等独特功效。龈下菌斑中的厌氧菌与牙周病的发生密切相关。本研究通过评价羧甲基壳聚糖对牙周炎重要相关细菌的抑菌性能，为其在牙周炎治疗中的应用提供基础资料。     

慢性牙周炎活动期龈下菌斑胰蛋白酶样酶活性与龈沟出血指数的关系

目的：初步探讨慢性牙周炎活动期龈下菌斑胰蛋白酶样酶活性与龈沟出血指数之间的关系，为临床牙周病活动期的诊断提供依据。方法：记录慢性牙周炎活动期牙周袋龈沟出血指数，并采集龈下菌斑标本进行胰蛋白酶样酶检测试验。结果：不同分值的龈沟出血指数所对应的胰蛋白酶样酶检测试验A600nm检测值的差异有统计学意义，经Spearman秩相关检验r=0．718，P＜0．05。结论：龈沟出血指数与牙周袋内胰蛋白酶样酶的水平呈正相关。胰蛋白酶样酶检测试验为临床牙周病活动期的诊断提供更直观的客观参考指标。     

羧甲基壳聚糖复合奥硝唑后对口腔重要厌氧菌增效抑菌作用的评价

壳聚糖由甲壳类生物的外壳经加工提取而成。羧甲基壳聚糖是壳聚糖的衍生物,是一种良好的药物载体[1]。本试验选择口腔4种重要厌氧菌进行抑菌浓度(MIC)测定,评价羧甲基壳聚糖复合奥硝唑后对口腔厌氧菌的抑菌性能1材料与方法1.1试验菌株牙龈卟啉菌(P.g)ATCC33277、放线共生放线菌     

脑出血大鼠脑组织膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达及益气活血中药的干预效应

目的:观察益气活血中药对脑出血大鼠脑组织中膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达量的影响,从脑出血损伤区微血管系统重建的角度,探讨益气活血中药治疗脑出血的作用机制。方法:实验于2006-03/10在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室完成。实验材料:补阳还五汤全方(黄芪,当归,赤芍,红花,川芎,地龙,桃仁按20∶3∶3∶3∶2∶3∶3的比例);补阳还五汤益气成分(黄芪按上述比例);补阳还五汤活血成分(当归,赤芍,地龙,川芎,桃仁,红花按3∶3∶3∶2∶3∶3的比例)。用蒸馏水两次水煎,分别浓缩为1.54,0.81和0.73g/mL。实验分组:155只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、益气活血组、益气组、活血组。正常对照组5只大鼠,其余每组30只,再随机分为术后灌胃2,4,7,14,21,28d6个观察时间点,各个时间点5只大鼠。实验干预:造模:采用立体定位技术将胶原酶Ⅶ注入大鼠大脑右苍白球制成脑出血大鼠模型。假手术组大鼠仅注入2μL生理盐水,其余手术过程相同。给药:正常对照组:普通饲养,自由饮水;假手术组和模型组术后予蒸馏水灌胃2次/d,2mL/次;益气活血组、益气组、活血组分别给予补阳还五汤全方、补阳还五汤益气成分、补阳还五汤活血成分30.80,16.20,14.60g/(kg·d)(按体表面积计算为临床70kg成人剂量的3倍)灌胃,2次/d,2mL/次。各组大鼠分别于灌胃2,4,7,14,21,28d麻醉下取脑,制备切片;正常组动物于28d处死。实验评估:免疫组织化学染色方法检测各组灌胃不同时间脑组织基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9和膜型基质金属蛋白酶的阳性微血管数。结果:155只大鼠均进入结果分析。①正常组、假手术组皮质偶见膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达。②模型组膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2呈双峰表达,4d为最高峰,至14～21d再有小高峰出现。③益气活血组给药4d时,膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2为表达低谷,低于模型组(P<0.01)、益气组和活血组(P<0.05);在中后期,益气活血组膜型基质金属蛋白酶表达高峰为7～14d,较模型组提前出现,21d后与模型组比,各治疗组膜型基质金属蛋白酶已表达极少(P<0.01);益气活血组基质金属蛋白酶2在7d后一直呈高水平维持,高于其他各组(P<0.05),28d后开始逐渐下降。④模型组基质金属蛋白酶9在造模后4d达最高峰(P<0.01),两周后几乎无表达。益气活血组基质金属蛋白酶9高峰推迟至7d出现(P<0.05),之后逐渐下降。结论:益气活血中药可通过调节脑出血后膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达,改善出血后脑组织的微环境,有利于微血管系统重建,促进组织修复。     

益气活血法对脑出血大鼠血肿区血管新生的形态学影响

目的：观察益气活血法对脑出血大鼠脑内损伤区血管新生和血肿吸收的影响及作用机制。方法：180只SD大鼠分为正常组5只,假手术组35只,另140只利用胶原酶诱导建立大鼠脑出血模型后分为模型组、益气组（益气方灌胃）、活血组（活血方灌胃）及益气活血组各35只,不同时间点灌注取脑。采用脑微血管银染法观察各组血管新生情况、测量血肿面积。结果：与正常组及假手术组比较,第1天时,造模的4组大鼠血肿内可见大量结构不清的液化坏死脑组织、炎性细胞浸润,内皮细胞肿胀,血肿周围少量呈毛细血管扩张,中线移位。与造模后的其它3组比较,造模后第7天益气活血组血肿开始明显吸收,35d时部分切片完全吸收（P〈0.01）。第14-28天时血肿周围及内部新生血管增多。第28天后各组新生血管开始消退。结论：益气活血法可能通过提高血肿区巨噬细胞吞噬功能,增强血管新生和血肿吸收,以促进脑组织修复。     

免疫组织化学在卵巢肿瘤及瘤样病变的应用价值

按WHO(1999)卵巢肿瘤及瘤样病变组织分型 ,系统介绍各种类型肿瘤具有代表性的免疫组化抗体的表达性及其应用价值 ,特别着重介绍近年新涌现抗体的应用。     

离心判读仪的研制

微柱凝胶免疫检测技术目前已逐渐成为血液相容性检查的常规技术。当前微柱凝胶试验主要依靠单独的孵育器和离心机来进行,其试验结果多通过肉眼来判读,这不仅需要耗费大量人力,且检测标准化程度也较低。本文阐述了一种基于可编程逻辑控制器技术的离心判读仪的研制和应用过程。该判读仪主要由卡盒系统、抓取系统、照相系统和离心系统组成,集微柱凝胶卡孵育、装夹、离心和离心结果判读等功能于一体,可在减少人力资源浪费的同时大大提高判读准确性。     

穿心莲内酯油水分布系数和溶解度的测定

目的:测定穿心莲内酯的油水分布系数(P)和溶解度,为体内吸收及新剂型研究提供参考。方法:采用高压液相色谱法测定穿心莲内酯的浓度,以饱和法测定穿心莲内酯的溶解度,采用摇瓶法测定穿心莲内酯的油水分布数。结果:穿心莲内酯溶解度较大的乳化剂为Labrasol、吐温80、RH40,助乳化剂为Transcutol HP、1,2-丙二醇、乙醇,油相为Maisine 35-1;穿心莲内酯油水分布系数为(35.6399±0.2953),lgP为(1.5520±0.0036)。结论:穿心莲内酯为亲脂性化合物,该实验结果可为穿心莲内酯进一步的研究提供依据。