红景天拮抗脉冲噪声所致豚鼠听力损伤的实验研究

目的　探讨红景天对噪声所致豚鼠听力损伤的拮抗作用。方法　将40只豚鼠随机分为四组，每组10只。第1组（实验对照组），噪声暴露前3天给予安慰剂淀粉片处理；第2组（实验组），噪声暴露前3天给予诺迪康胶囊处理，第1组和第2组同时暴露在相同条件的脉冲噪声中；第3组（红景天组），只给予3天诺迪康胶囊预处理，不做其他处 理；第4组（生理盐水组），只给予3天生理盐水预处理，不做其他处理。采用听性脑干反应（ABR）、扫描电镜、酶联免疫吸附测定（ELISA）法比较4个组豚鼠实验前后听阈变化、观察耳蜗毛细胞纤毛变化情况及检测耳蜗中半胱天冬酶-3（caspase-3）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia induciblefactor-1α，HIF-1α）和4-羟基壬稀酸（4-hydroxynonenal，4-HNE）表达情况。结果　实验前4个组豚鼠听阈比较差异无统计学意义（P＞0.05）。实验后24小时，第1组与第2组豚鼠听阈比较差异有统计学意义（t =21.675，P＜0.05），第3组和第4组豚鼠听阈比较差异无统计学意义（P＞0.05）。实验前后第1组和第2组听阈相差20 dB，差异有统计学意义（t 第1组=-39.000，t 第2组=-24.187，P 均＜0.05）。第1组高倍镜下见耳蜗外毛细胞纤毛大片缺失，第2组发现外毛细胞纤毛呈个别、散在缺失，第3组和第4组外毛细胞纤毛未见明显损伤；4个组豚鼠内毛细胞纤毛均未见缺失。4个组间caspase-3、HIF-1α和4-HNE表达比较，差异有统计学意义（F =24.674、90.258和51.663，P 均＜0.05)；第1组和第2组 caspase-3、HIF-1α和4-HNE表达显著高于第3组和第4组，差异有统计学意义（caspase-3：t 第1、3组=6.624，t 第1、4组=6.685，t 第2、3组=4.658，t 第2、4组=4.844；HIF-1α：t 第1、3组=14.697，t 第1、4组=11.895，t 第2、3组=7.060，t 第2、4组=4.938；4-HNE：t 第1、3组=9.188，t 第1、4组=11.261，t 第2、3组=4.974，t 第2、4组=6.484，P 均＜0.05），且第1组的caspase-3、HIF-1α和4-HNE表达较第2组升高，差异有统计学意义（t caspase-3=2.607，t HIF-1α=7.598， t 4-HNE=4.433，P 均＜0.05）。结论　红景天能显著降低脉冲噪声暴露后ABR听阈，降低耳蜗中caspase-3、HIF-1α和4-HNE浓度，减轻耳蜗外毛细胞纤毛缺失，从而减轻听力损伤。     

骨唾液酸蛋白在体外培养人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的角色

目的：骨唾液酸蛋白在骨矿化形成方面扮演重要角色，实验观察其是否能诱导体外培养的人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。方法：实验于2005—10／2006—12在解放军广州军区广州总医院医学实验科完成。①材料来源：选取在本院体检的健康志愿者2人，对本实验均知情同意。采用Ni-NTA亲和纯化技术，从本室构建的毕赤酵母GS115／pPICZaA-hbsp发酵上清中纯化重组人骨唾液酸蛋白。②实验方法：对健康志愿者进行髂骨穿刺抽取骨髓液，采用贴壁法培养得到骨髓间充质干细胞。设立4组：骨唾液酸蛋白组添加0．1nmol／L骨唾液酸蛋白；成骨诱导液组添加10nmol／L地塞米松、10mmol／L磷酸甘油、50mg／L抗坏血酸；联合组添加上述两组的所有试剂；空白对照组不添加任何处理因素；各组均处理细胞12d。⑧实验评估：光镜及电镜观察培养的细胞形态；以细胞计数法测定生长曲线，应用流式细胞仪分析细胞周期，采用免疫荧光细胞化学法和流式细胞分析检测干细胞标志物STRO-1的表达；生化试剂盒测定碱性磷酸酶活性；von Kossa染色法检测钙沉积。结果：①单个骨髓间充质干细胞为长梭形，经骨唾液酸蛋白处理后细胞大而扁平，原来密集的克隆分散开。②与空白对照组比较，骨唾液酸蛋白组引起细胞生长曲线右移，细胞Go／G，期比例平均增加12．09％（P〈0．01），S期比例减少65．92％（P〈0．01），STRO-1阳性细胞百分率下降26．54％（P〈0．01）。⑧与空白对照组比较，骨唾液酸蛋白组细胞碱性磷酸酶活性增加50．0％，成骨诱导液组增加59．5％，联合组增加71．43％，并且随着处理时间的延长，活性增加越显著。④空白对照组细胞vonKossa染色呈阴性，其余各组均呈阳性。其中联合组的黑色矿化结节体积最大、数目最多；骨唾液酸蛋白组的结节体积较小、数目较少；成骨诱导液组居中。结论：骨唾液酸蛋白对人骨髓间充质干细胞有促进成骨分化和矿化作用，且与成骨诱导液联用效果更佳。     

SPF级新西兰兔脏器参数、血液指标、颈动脉血压、心率、心室压的测定与比较

目的 准确测定SPF新西兰兔生物学特性尤其是疾病相关的指标,并进行性别间比较。 方法 取70-80日龄左右SPF新西兰兔30只,饲养一周后,精确称量体重及主要脏器重量;采集动脉血测定血液生理、生化、血气指标;颈动脉插管测定动脉压,呼吸支持情况下进行开胸测定心室压。 结果 雄性与雌性新西兰兔比较： 甲状腺、肾上腺、肝的质量差异有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）;脑、脑垂体、甲状腺的脏器系数差异有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）;甲状腺、肾上腺、肝的脏脑比系数差异有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）。红细胞平均体积、平均血红蛋白量的差异有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）;谷氨酰转肽酶、淀粉酶的差异有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）;血气分析、心率、颈动脉收缩/舒张压,左心室收缩/舒张压,右心室收缩/舒张压不存在性别间差异。 结论 性别对新西兰兔脏器重量及血液生理生化指标有一定影响,而血气、血压、心率及心室压等不存在性别间差异。     

伽玛刀照射癫痫大鼠海马神经元超微结构及线粒体计量分析

目的观察低剂量伽玛刀照射对癫大鼠海马神经元超微结构的影响。方法建立大鼠青霉素局灶性癫动物模型,将58只SD大鼠分为对照组、癫模型组和伽玛刀照射组。对大鼠行伽玛刀照射,照射中心剂量24 Gy、周边剂量12 Gy、等剂量曲线50%,术后3 h～60 d取靶区海马,透射电镜观察并采用图像分析系统对线粒体形态进行计量分析。结果对照组细胞结构基本正常;癫模型组可见神经元细胞器明显空化,线粒体体密度、数密度、比表面和嵴膜密度较对照组明显减少(均P<0.05),线粒体平均体积和平均截面积较对照组明显增大(均P<0.05)。伽玛刀照射组早期线粒体的平均体积、平均截面积、数密度、比表面与对照组相比差异显著(均P<0.05),中期和晚期线粒体各项参数与对照组相比差异不显著。结论大鼠癫发作早期线粒体形态结构变化明显,低剂量伽玛刀照射对神经元修复起重要作用。     

SPF级Balb/c小鼠脏器质量、脏器系数、血常规、血生化指标的测定与比较

背景：实验动物重要基础数据的标准化测定,是实行动物标准化监督管理的重要依据。 目的：测定SPF级Balb/c小鼠主要脏器质量、脏器系数、血常规、血生化指标,并进行比较。 方法：取18 g左右Balb/c小鼠240只,雌雄各半,饲养1周后,精确称量体质量和主要脏器质量,计算脏器系数,并检测血常规及血生化指标。 结果与结论：雌性与雄性Balb/c小鼠比较：①肺、脾、双肾、心、膀胱质量差异有显著性意义(P < 0.01或 P < 0.05)。②肺、脾、双肾、膀胱脏器系数差异有显著性意义(P < 0.01或 P < 0.05)。③白细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞百分比、红细胞、血红蛋白、红细胞平均血红蛋白浓度、红细胞分布宽度、嗜酸性粒细胞百分比差异有显著性意义(P < 0.01或 P < 0.05)。④总蛋白、白蛋白、白球比、血糖、肌酐、尿酸、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、铁、磷、尿素氮差异有显著性意义(P < 0.01或 P < 0.05)。说明性别对SPF级Balb/c小鼠主要脏器、主要脏器系数、血常规、血生化指标有影响。     

环丙氟哌酸在犬胆汁、血中药代动力学的研究

为了有效治疗胆道感染的病人，提供合理选择抗生素的理论依据，我们检测了犬经口给予环丙氟哌酸后在胆汁及血中的药代动力学变化规律。结果表明犬经口给予0．25克环丙氟哌酸后，胆汁中浓度能较快上升，0．91h达峰值时间；峰值浓度为(Cmax)为11．8μg／ml，仅略低于血中的峰值浓度(14．36μg／m1)；半衰期(T1／2β)较长为7．66h．是血中半衰期(T1／2β)3．31h的2倍；清除率(CL)是30ml／min；表观分布容积为19．88L。由于经口给予环丙氟哌酸后，药物在胆汁中含量较高，半衰期长，所以，急、慢性胆道感染时该药是较为理想的口服抗生素之一。     

安可梦口服液对慢性疲劳小鼠免疫调节功能的影响

目的:探讨中药复方制剂安可梦口服液治疗慢性疲劳综合征的作用机制。方法:选用BALB/c小鼠,应用强制冷水游泳加进食时电击复合应激因素建立慢性疲劳动物模型,除正常组(n=12)外,成模小鼠分为4组:模型组、复方阿胶浆组犤50g/(kg·d)复方阿胶浆灌胃犦、安可梦口服液小剂量组和大剂量组犤分别以25g/(kg·d)和50g/(kg·d)安可梦口服液灌胃犦,每组12只。正常及模型组灌胃生理盐水0.5mL。各组灌胃2次/d,连续14d。对各组动物白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)、干扰素、自然杀伤细胞的活性进行了检测。结果:模型组的IL-2、干扰素、自然杀伤细胞活性比正常组显著降低,差异有显著性(q=12.88,P<0.01);安可梦口服液大、小剂量组的IL-2、干扰素、自然杀伤细胞活性与模型组比较均有显著升高,差异有显著性(q=10.06,8.28;P均<0.01),且作用优于复方阿胶浆组(q=6.68,2.12;P<0.05～0.01)。结论:提高和调整机体低下的IL-2-干扰素-自然杀伤细胞免疫调节网水平,可能是安可梦口服液发挥滋补肝肾、健脾养心、安神定志功效,治疗慢性疲劳综合征的机制之一。     

缺血性老年大鼠部分脑区及小脑内源性神经生长因子的变化

背景：神经生长因子(nerve growth factor，NGF)在神经元的生长、存活、分化、保护神经元的退行性改变及神经损伤的自我保护与修复中具有重要作用，目前NGF保护神经元的分子病理学机制还有许多需要深入探讨的。目的：观察脑缺血老年大鼠部分脑区及小脑内源性神经生长因子的变化。设计：完全随机对照实验研究。地点与材料：本研究的地点为广州军区广州总医院实验科：材料为36只SD大鼠2～2．5年龄，雌雄不限。干预：用夹闭两侧颈总动脉法建立不完全性脑缺血动物模型，将SD大鼠随机分成正常对照组(A组)、假手术组(B组)、缺血30min再灌注6h(C组)、12h(D组)、24h(E组)、48h(F组)、7d(G组)和14d(H组)，用免疫组织化学ABC染色法检测部分脑区神经元及小脑NGF的表达。在透射电镜下观察各组神经元超微结构变化。主要观察指标：各组神经元NGF表达定性及定量观察。结果：除A、B组外，各组顶叶皮质神经元均有NGF表达，其中E组和G组中量表达，神经元数量分别为(58．4&;#177;9．18)mm^2和(56．2&;#177;10．87)mm^2；除A组、B组、F组和H组外各组海马均有少量表达，神经元数量C组为(28．8&;#177;6．42)mm^2、D组(30．4&;#177;12．12)mm^2、E组(24．2&;#177;5．18)mm^2、G组(15．6&;#177;4．39)mm^2；小脑均没有表达；再灌注超过48h组海马神经元和小脑蒲肯野细胞损伤较重，顶叶皮质神经元轻度水肿；结论：老年大鼠在受到缺血性脑损伤时，内源性NGF在大脑皮质和海马有部分表达，小脑始终没有表达。内源性NGF对脑组织具有一定的保护作用，早期注射外源性NGF可能对脑组织损伤后修复具有重要意义。     

GM-CSF膜修饰B16.F10黑素瘤细胞疫苗对小鼠种植肿瘤的抑制作用

目的:研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF)膜修饰小鼠黑素瘤B16.F10细胞制备的疫苗对小鼠种植肿瘤的抑制作用.方法:采用生物素-链亲合素-GM-CSF融合蛋白技术制备GM-CSF膜修饰B16.F10黑素瘤细胞疫苗,将BALB/c小鼠随机分为GM-CSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组、GM-CSF与B16.F10细胞混合疫苗组、B16.F10细胞疫苗组、GM-CSF组、生理盐水组.各组于第1天和第7天分别进行免疫接种,第14天皮下注射0.2 ml B16.F10细胞(1×106个细胞)进行攻击,观察各组小鼠无瘤率和生存期;攻击后24 d 用ELISA法检测小鼠脾细胞INF-γ分泌水平.结果:接受B16.F10细胞攻击后第60天和第90天,GM-CSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组小鼠均未成瘤,存活率为100%;GM-CSF与 B16.F10细胞混合组无瘤率分别50%和40%,存活率分别为70%和40%;B16.F10细胞疫苗组无瘤率均为20%,存活率分别为80%和20%;GM-CSF组和生理盐水组无瘤率为0,无小鼠存活.GM-CSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组的IFN-γ分泌量比其他组明显升高(P<0.01).结论:GM-CSF膜修饰B16.F10肿瘤细胞疫苗可以激发BALB/c小鼠特异性抗肿瘤免疫反应,有效防止B16.F10肿瘤细胞的攻击.     

GM-CSF膜修饰B16.F10黑素瘤细胞疫苗对小鼠种植肿瘤的抑制作用

目的: 研究粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（granulocytemacrophage colony stimulating factor, GMCSF)膜修饰小鼠黑素瘤B16.F10细胞制备的疫苗对小鼠种植肿瘤的抑制作用。方法：采用生物素链亲合素GMCSF融合蛋白技术制备GMCSF膜修饰B16.F10黑素瘤细胞疫苗，将BALB/c小鼠随机分为GMCSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组、GMCSF与B16.F10细胞混合疫苗组、B16.F10细胞疫苗组、GMCSF组、生理盐水组。各组于第1天和第7天分别进行免疫接种，第14天皮下注射0.2 ml B16.F10细胞（1×106个细胞）进行攻击，观察各组小鼠无瘤率和生存期；攻击后24 d 用ELISA法检测小鼠脾细胞INFγ分泌水平。结果：接受B16.F10细胞攻击后第60天和第90天，GMCSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组小鼠均未成瘤,存活率为100%；GMCSF与 B16.F10细胞混合组无瘤率分别50%和40%，存活率分别为70%和40%；B16.F10细胞疫苗组无瘤率均为20%，存活率分别为80%和20%；GMCSF组和生理盐水组无瘤率为0，无小鼠存活。GMCSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组的IFNγ分泌量比其他组明显升高（P<0.01）。结论：GMCSF膜修饰B16.F10肿瘤细胞疫苗可以激发BALB/c小鼠特异性抗肿瘤免疫反应，有效防止B16.F10肿瘤细胞的攻击。