Effect of low magnesium on the expression and release of high mobility group box-1 in macrophages induced by lipopolysaccharide

目的 探讨低镁对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7表达和释放高迁移率族蛋白1(HMGB1)的促进作用.方法 传代培养的小鼠RAW 264.7细胞分为4组,接种于6孔板,每组为3孔,4组分别为含1 mmol/L硫酸镁的RPMI1640培养基组(C1组)、含0.1 mmol/L硫酸镁的RPMI1640培养基组(C0.1组)、含1 mmol/L硫酸镁的RPMI1640培养基加500 ng/mL LPS的刺激组(L1组)和含0.1 mmol/L硫酸镁的RPMI1640培养基加500 ng/mL LPS的刺激组(L0.1组).孵育24 h后,收集细胞及细胞培养上清液,用反转录-聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验分别检测各组细胞内HMGB1 mRNA表达水平和细胞培养上清液中HMGB1蛋白含量的变化.结果 C0.1组与C1组间HMGB1 mRNA及蛋白表达的差异均无统计学意义(P值均＞0.05),L1组和L0.1组HMGB1 mRNA及蛋白的表达均显著高于C0.1组和C1组(P值均＜0.05),L0.1组又显著高于L1组(P值均＜0.05).结论 低镁促进LPS诱导的RAW264.7细胞表达和释放HMGBI,可能对脓毒症患者的预后有一定损害作用.     

硫酸镁对脂多糖诱导巨噬细胞表达和释放高迁移率族蛋白1的影响

目的 探讨硫酸镁对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7表达和释放高迁移率族蛋白1( HMGB1)的抑制作用.方法 传代培养的小鼠RAW264.7细胞分5组接种于6孔板,每组为3孔.C组为仅加RPMI 1640培养液的对照组,LPS组为在RPMI 1640培养液的基础上加500 ng/mL LPS的诱导组,M1组为在LPS组基础上加1 mmol/L硫酸镁的干预组,M5组为在LPS组的基础上加5 mmol/L硫酸镁的干预组,M10组为在LPS组基础上加10 mmol/L硫酸镁的干预组.孵育24 h后,收集细胞及细胞培养上清液,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测各组细胞内HMGB1 mRNA表达水平和细胞培养上清液中HMGB1蛋白含量的变化.结果 M1、M5、M10组的RAW264.7细胞活性分别为1.35±0.10、1.34±0.11、1.31±0.08,差异均无统计学意义(P值均＞0.05).LPS、M1、M5、M10组细胞上清液中HMGB1蛋白的含量分别为(82.80±9.15)、(81.26±8.47)、(56.69±6.21)、(50.71±6.62)ng/mL,均显著高于C组(C组为0,P值均＜0.05);M5、M10组细胞上清液中HMGB1蛋白的含量均显著低于LPS及M1组(P值分别＜0.05或0.01).LPS、M1、M5、M10组细胞中HMGB1 mRNA的相对表达量分别为1.435±0.161、1.416±0.124、0.873±0.093、0.774±0.067,均显著高于C组的0.195±0.020(P值均＜0.05);M5、M10组细胞中HMGB1 mRNA的相对表达量均显著低于LPS及M1组(P值分别＜0.05或0.01).结论 硫酸镁抑制LPS诱导的RAW264.7细胞表达和释放HMGB1,通过抑制与脓毒症致死性密切相关的关键炎性因子,可能对脓毒症患者具有一定保护作用.     

丹参提取液对HMGB1胞外释放的抑制作用

目的: 研究丹参对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激活后巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1, HMGB1)释放和内毒素血症小鼠血清HMGB1水平的影响.方法: 使用不同浓度的丹参提取液处理100 ng/ml LPS激活的培养巨噬细胞株RAW 264.7,观察培养上清液中HMGB1水平和细胞HMGB1 mRNA表达的变化,并通过腹腔内注射LPS建立的内毒素血症小鼠模型,观察丹参提取液对内毒素血症小鼠血清HMGB1水平和存活率的影响.细胞培养上清液和血清HMGB1含量采用酶联免疫分析方法检测,细胞HMGB1 mRNA表达采用RT-PCR方法检测.结果: 丹参提取液明显抑制LPS激活后的巨噬细胞HMGB1释放和HMGB1 mRNA表达,降低内毒素血症小鼠血清HMGB1水平并提高存活率.结论: 丹参有抑制巨噬细胞HMGB1释放和保护内毒素血症小鼠的作用.     

异功散调节巨噬细胞铁代谢的机制研究

目的:研究异功散调节慢性病贫血(ACD)铁代谢的作用机制。方法:①体外培养小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞,分为空白组和异功散干预组(0.01、0.1、1、1.25、2、2.5、3.75 mg/ml),各组给予相应浓度干预,孵育24 h、48 h和72 h后CCK8检测细胞活性,筛选有效浓度。②取RAW 264.7细胞分为空白组、脂多糖(LPS)组、异功散低剂量(0.1 mg/ml)组、异功散高剂量(1.0 mg/ml)组、LPS+异功散低剂量(0.1 mg/ml)组和LPS+异功散高剂量(1.0 mg/ml)组。预先配置含不同浓度异功散的DMEM培养基,对应加入各药物干预组。预处理1 h后再加入0.1μg/ml LPS刺激。细胞培养24 h、48 h后,比色法检测细胞内外铁含量,PCR检测细胞HAMP和膜铁转运蛋白(FPN)的基因表达水平,Western blot检测细胞信号转导转录激活因子3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3)的蛋白表达水平。③取人肝癌HepG2细胞,在上述分组基础上增加抑制剂+LPS组、LPS+抑制剂+异功散低剂量(0.1 mg/ml)组和LPS+抑制剂+异功散高剂量(1.0 mg/ml)组。预先配置含不同浓度异功散的DMEM培养基,对应加入各药物干预组。预处理1 h后,各抑制剂干预组加入STAT3阻断剂(10μmol)处理10 min,再加入0.1μg/ml LPS刺激。细胞培养48 h后,PCR检测细胞HAMP基因表达水平。结果:①0.01～3.75 mg/ml异功散干预RAW 264.7细胞48 h内无细胞毒性作用,且能促进细胞增殖。选取0.1 mg/ml和1.0 mg/ml为有效浓度。②无LPS刺激状态下,细胞培养24 h、48 h后,异功散低、高剂量组的细胞外铁含量较空白组显著降低(P0.05),但细胞内铁含量无明显变化。LPS刺激状态下,细胞培养24 h、48 h后,LPS组细胞外铁含量较空白组显著降低(P0.05),而细胞内铁含量明显升高(P0.05);与LPS组比较,LPS+异功散低剂量组细胞外铁含量无明显变化,细胞内铁含量降低(P0.05),LPS+异功散高剂量组细胞外铁含量升高(P0.05),细胞内含量铁降低(P0.05)。③无LPS刺激状态下,与空白组相比,异功散低、高剂量组细胞培养24 h、48 h后HAMP mRNA表达无明显变化,异功散高剂量组细胞培养48 h后FPN mRNA表达量显著升高(P0.01),且高剂量组细胞FPN mRNA表达水平较低剂量组显著升高(P0.01)。LPS刺激状态下,细胞培养24 h、48 h后,与空白组相比,LPS组细胞HAMP mRNA表达显著增多(P0.05),FPN mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01);与LPS组相比,LPS+异功散高剂量组细胞HAMP mRNA表达显著降低(P0.05),FPN mRNA表达显著升高(P0.05,P0.01);且LPS+异功散高剂量组细胞FPN mRNA表达水平较LPS+异功散低剂量组显著升高(P0.05,P0.01)。④无LPS刺激状态下,细胞培养24 h、48 h后,与空白组相比,异功散低、高剂量组细胞STAT3和p-STAT3蛋白表达无明显变化。LPS刺激状态下,细胞培养24 h、48 h后,与空白组相比,LPS组细胞STAT3蛋白表达无明显变化,p-STAT3蛋白表达有上调趋势;与LPS组相比,LPS+异功散低剂量组和LPS+异功散高剂量组细胞p-STAT3蛋白表达有降低趋势,STAT3蛋白表达无明显变化。⑤LPS刺激状态下,细胞培养48 h后,与LPS组相比,LPS+抑制剂组细胞HAMP mRNA表达显著降低(P0.01);与LPS+抑制剂组比较,LPS+抑制剂+异功散高剂量组细胞HAMP mRNA表达显著下调(P0.05)。结论:异功散可通过降低STAT3磷酸化水平,抑制HAMP mRNA过表达,上调FPN mRNA水平,从而促进巨噬细胞内铁的外流,改善LPS诱导的RAW 264.7细胞铁代谢异常,且异功散与STAT3阻断剂在调控HAMP表达方面具有协同作用。     

Notch1信号参与脂多糖诱导的巨噬细胞活化

[目的]探讨Notch1对脂多糖(LPS)介导巨噬细胞活化的影响.[方法]体外培养RAW264.7细胞,给予LPS 100μg/L处理8h后利用RT-PCR方法检测RAW264.7细胞Notch1和Hes1 mRNA表达水平;给予Notch1信号抑制剂DAPT10μmol/L预处理1 h后利用ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素(IL)-6水平,采用Western blot法检测细胞TNF-α和IL-6蛋白表达水平.[结果]给予LPS刺激RAW264.7细胞后可明显提高Notch1和Hes1 mRNA表达(P<0.05),LPS提高RAW264.7细胞TNF-α和IL-6的表达和释放作用可明显被DAPT抑制(P<0.05),但TNF-α和IL-6表达水平仍显著高于对照组(P<0.05).[结论]巨噬细胞中Notch1信号参与LPS诱导细胞因子TNF-α和IL-6的表达和释放过程.     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的：观察氧化苦参碱（OMT））对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮（NO）释放量及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组：空白对照组、LPS组（1μg/mL）、OMT组（100μmol/L）、LPS＋OMT小剂量组（20μmol/L）、LPS＋OMT中剂量组（50μmol/L）、LPS＋OMT大剂量组（100μmol/L）。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果：OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）;同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

p38 MAPK信号通路在LPS诱导RAW264.7细胞表达sTREM-1中的作用

目的探讨p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞表达可溶性髓样细胞触发受体1(s TREM-1)中的作用。方法培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,采用相同浓度的LPS在不同时间诱导RAW264.7细胞,应用Western blot法分别检测p38MAPK与磷酸化p38 MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达水平,RT-PCR法检测p38 MAPK mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养上清液中s TREM-1表达水平。用不同浓度p38 MAPK特异性抑制剂SB203580处理细胞,观察上述指标的变化。结果 LPS可呈时间依赖性诱导RAW264.7细胞p-p38 MAPK和p38 MAPK mRNA的表达;SB203580可呈浓度依赖性抑制p-p38 MAPK和p38 MAPK mRNA的表达;SB203580阻断p38 MAPK信号转导通路后,LPS对s TREM-1表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性。结论 LPS通过p38 MAPK信号通路诱导RAW264.7细胞表达s TREM-1。     

肾小管上皮细胞中可溶性表氧化物水解酶对小鼠巨噬细胞极化的调控作用

目的探讨肾小管上皮细胞中可溶性表氧化物水解酶(sEH)在小鼠巨噬细胞极化中的作用。方法以人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞及小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞为研究对象。将HK-2细胞分为正常对照组、sEH抑制剂组、尿蛋白组及sEH抑制剂联合尿蛋白组;正常对照组细胞不给予任何干预处理;sEH抑制剂组细胞给予1μmol·L~(-1)sEH抑制剂;尿蛋白组细胞给予10 g·L~(-1)尿蛋白;sEH抑制剂联合尿蛋白组细胞给予10 g·L~(-1)尿蛋白和1μmol·L~(-1)sEH抑制剂;各组细胞均培养24 h。将RAW264.7细胞分为A、B、C、D组及干扰素-γ(IFN-γ)阳性对照组、白细胞介素(IL)-4阳性对照组。A、B、C、D组细胞分别加入正常对照组、sEH抑制剂组、尿蛋白组、sEH抑制剂联合尿蛋白组培养24 h的HK-2细胞培养基孵育24 h;IFN-γ阳性对照组和IL-4阳性对照组细胞分别加入M1型巨噬细胞诱导剂IFN-γ及M2型巨噬细胞诱导剂IL-4。采用Western blot法检测HK-2细胞中sEH蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测HK-2细胞中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-6、集落刺激因子-1(CSF-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达及RAW264.7细胞中诱导型氮氧化物合酶(iNOS)、IL-6、精氨酸酶-1(Arg~(-1))及IL-10 mRNA表达。酶联免疫吸附试验检测各组HK-2细胞培养上清液中14,15-环氧二十碳三烯酸(14,15-EET)和14,15-脱氧二十碳三烯酸(14,15-DHET)水平,计算14,15-EET/14,15-DHET比值。结果正常对照组和sEH抑制剂组HK-2细胞中sEH蛋白表达及MCP-1、IL-6、CSF-1、TNF-αmRNA表达、细胞培养上清液中14,15-EET/14,15-DHET比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,蛋白尿组HK-2细胞中sEH蛋白及MCP-1、IL-6、CSF-1、TNF-αmRNA表达均显著增加(P<0.05),细胞培养上清液中14,15-EET/14,15-DHET显著降低(P<0.05)。与尿蛋白组比较,sEH抑制剂联合尿蛋白组HK-2细胞中MCP-1、IL-6、CSF-1及TNF-αmRNA表达显著下降(P<0.05),培养上清液中14,15-EET/14,15-DHET显著升高(P<0.05)。sEH抑制剂联合尿蛋白组与尿蛋白组HK-2细胞中sEH蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组与B组RAW264.7细胞中IL-6、iNOS、Arg~(-1)及IL-10 mRNA表达比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与A组比较,C组、IFN-γ阳性对照组RAW264.7细胞中iNOS、IL-6 mRNA表达显著增加(P<0.05,P<0.01);IL-4阳性对照组RAW264.7细胞中Arg~(-1)、IL-10 mRNA表达显著增加(P<0.05)。与C组比较,D组RAW264.7细胞中iNOS、IL-6 mRNA表达显著降低(P<0.05),Arg~(-1)、IL-10 mRNA表达显著增加(P<0.05)。结论肾小管上皮细胞中的sEH可上调诱导M1型巨噬细胞极化的细胞因子表达。     

硫氧环蛋白相互作用蛋白与糖尿病关系的研究

目的 研究高糖环境下INS-1细胞中硫氧环蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)的表达对胰岛素分泌的影响以及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)、艾塞那肽(Exenatide,Ex-4)的保护作用.方法 以含11.1 mmol/L葡萄糖的RPMI 1640培养液培养INS-1细胞,当细胞生长至80%融合时,分别转入含有4.0 mmol/L葡萄糖(NG组)、16.7 mmol/L葡萄糖(HG组)及16.7 mmol/L葡萄糖+10 mmol/L NAC(HG+N组)、16.7 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L Ex-4(HG+E组)的RPMI 1640培养液中继续培养48 h;采用real-time PCR法检测TXNIP、胰岛素基因及胰岛素转录因子MafA的mRNA水平.结果 HG组与NG组比较,TXNIP mRNA的表达明显上升,胰岛素mRNA、MafA mRNA的表达均明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01).HG+N组、HG+E组与HG组比较,TXNIP mRNA的表达均明显下降,胰岛素mRNA、MafA mRNA的表达均明显提高,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 高浓度葡萄糖可通过介导TXNIP的过度表达而导致胰岛素基因及MafA表达下降;特异性地抑制高糖下TXNIP的过度表达可以恢复胰岛素基因及MafA的表达.     

胍丁胺对脂多糖诱导RAW264.7细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7氧化应激的抑制作用及其机制.方法 RAW264.7细胞经LPS(10 μg/mL)刺激发生氧化应激,同时AGM(1 mmol/L)对其进行干预.分为对照组、LPS组、LPS+AGM组、AGM组.药物作用24 h,以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯(2 ',7'-dichlorofluoresce in diacetate,DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Griess法检测细胞内一氧化氮(NO)水平;Western blot检测细胞内的iNOS蛋白及细胞质细胞核内Nrf2蛋白表达;RT-PCR检测Nrf2下游抗氧化酶血红素氧合酶(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA的表达.结果 与对照组相比,LPS可显著增加RAW264.7细胞中ROS、NO以及iNOS蛋白水平,而AGM干预后上述指标含量均明显降低(P＜0.05).AGM干预组中细胞核的Nrf2表达及其下游分子HO-1 mRNA表达水平较LPS单独刺激组显著升高,表明Nrf2信号通路在AGM的作用下被活化.结论 AGM可通过活化转录因子Nrf2促进抗氧化酶HO-1的表达,进而减轻细胞内的氧化应激损伤.     

毛樱桃总黄酮对RAW264.7细胞中炎症因子水平的影响及其机制

目的：探讨毛樱桃总黄酮（PTTTF）对脂多糖（LPS）诱导的细胞炎症模型中炎症因子的影响,阐明其作用机制。方法：通过LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7和人中性粒细胞（PMN）建立细胞炎症模型,将细胞分为对照组、模型组、地塞米松（DXM）组和不同剂量（0.4、4.0和40.0 mg·L^-1）PTTTF组。采用RT-PCR法检测RAW264.7细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、诱导性一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子（TNF-α）和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）mRNA表达水平;采用Western blotting法检测RAW264.7细胞中核转录因子κB（NF-κB）及信号通路关键分子细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、C-Jun氨基末端激酶1/2（JNK）和磷酸化JNK（p-JNK）蛋白表达水平;采用流式细胞术检测RAW264.7细胞S期细胞百分率和PMN细胞凋亡率。结果：与对照组比较,模型组RAW264.7细胞中IL-1β、IL-6、iNOS、TNF-α和HMGB1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,NF-κB、ERK1/2和p-JNK蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,S期细胞百分率明显升高（P<0.05）,PMN细胞凋亡百分率明显降低（P<0.05）。与模型组比较,4.0及40.0 mg·L^-1PTTTF组和DXM组RAW264.7细胞中IL-1β、iNOS、TNF-α和HMGB1 mRNA表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,NF-κB、ERK1/2和p-JNK蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,S期细胞百分率明显降低（P<0.05或P<0.01）,PMN细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：PTTTF能够下调LPS诱导的细胞炎症模型中炎症因子表达水平,该作用可能与其降低S期细胞百分率,促进其凋亡,并下调NF-κB、ERK1/2和p-JNK蛋白表达有关。     

丙酮酸乙酯抑制脓毒症时HMGB1释放的分子机制

【目的】 探讨丙酮酸乙酯(EP)抑制脓毒症巨噬细胞表达和释放HMGB1的相关分子机制?【方法】将小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7分为LPS和LPS+ EP组,分别采用100 ng/mL LPS和100 ng/mL LPS+ 5 mmol/L EP刺激,于刺激后不同的时间点,Western blot检测细胞总蛋白内p-p38MAPK?CBP的含量变化以及胞质和胞核内NF-κB的含量;用免疫细胞化学?激光共聚焦显微镜观察培养细胞内p-p38MAPK?NF-κB和CBP的变化;Real-time PCR检测培养细胞HMGB1的mRNA水平,ELISA检测培养上清HMGB1的蛋白含量?【结果】 LPS和LPS+ EP刺激后2~6 h,细胞内p-p38MAPK蛋白含量逐渐增加,但LPS+ EP组p-p38MAPK蛋白含量明显低于LPS组;NF-κB在细胞质内的含量逐渐减少,而在细胞核内的含量逐渐增多,而LPS+ EP组NF-κB从胞质到胞核的移位明显弱于LPS组;细胞内CBP的蛋白含量逐渐增加,但LPS+ EP组明显低于LPS组?随着p-p38MAPK?NF-κB和CBP等蛋白的变化,LPS和LPS+ EP刺激后24?36和48 h,LPS+ EP组细胞内HMGB1 mRNA表达比LPS组明显减少;在LPS和LPS+ EP刺激后18~48h,LPS+ EP组培养上清中HMGB1蛋白含量明显低于LPS组?【结论】 EP通过抑制单核-巨噬细胞内的信号分子p-p38MAPK?NF-κB?和 CBP的表达,从而抑制LPS诱导单核-巨噬细胞表达和释放HMGB1?     

重组HMGB1 A-box蛋白对HMGB1抗炎作用的观察

目的：观察重组HMGB1 A-box蛋白对HMGB1的特异性拮抗作用。方法：复苏的RAW264.7细胞培养至对数生长期,用于以下实验：实验分为六组,r HMGB1组：加500 ng/mL r H-MGB1;LPS组：加100 ng/mL LPS;A-box干预1组：加500 ng/mL r HMGB1和100 ng/mL A-box;A-box干预2组：加500 ng/mL r HMGB1和200 ng/mL A-box;A-box干预3组：加500 ng/mL r HMGB1和500 ng/mL A-box;A-box干预4组：加100 ng/mL LPS和500 ng/mL A-box。培养6 h后,收集上清液,待测。各组上清液采用ELISA盒检测TNF-α的含量。结果：200 ng/mL、500 ng/mL重组A-box蛋白能明显抑制HMGB1诱导培养细胞释放TNF-α的水平（P〈0.05）,但对LPS的无明显作用。结论：r HMGB1 A-box蛋白可能有特异性拮抗HMGB1的致炎作用。     

青藤碱对细菌内毒素刺激的小鼠及巨噬细胞嘌呤受体A2A、P2X_7表达的影响

【目的】探讨青藤碱(sinomenine,SIN)对细菌内毒素(LPS)刺激的小鼠内毒素血症模型及巨噬细胞RAW264.7细胞炎症模型嘌呤受体A2A、P2X7表达的影响。【方法】选用BALB/c小鼠设空白对照组,模型组,青藤碱组(剂量分别为40、80、160 mg/kg),青藤碱组给予腹腔注射青藤碱30 min后,模型组和青藤碱组给予腹腔注射LPS(剂量为15 mg/kg)建立内毒素血症小鼠模型,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏、脾脏嘌呤受体A2A、P2X7的表达。RAW264.7细胞设空白组、LPS组、青藤碱组,青藤碱组给予青藤碱(300μmol/L)干预2 h后,LPS组和青藤碱组均给予LPS(剂量为100 ng/m L),继续培养8 h后,采用ELISA法检测上清TNF-α分泌量,RT-PCR法检测细胞P2X7、A2A m RNA表达。【结果】在LPS刺激下,小鼠血清TNF-α和IL-6水平显著上升,肝脏、脾脏组织中嘌呤受体A2A、P2X7的表达显著升高,青藤碱能下调TNF-α和IL-6水平,并抑制A2A、P2X7的表达(均P0.05);体外LPS刺激下,RAW264.7细胞分泌TNF-α增加,A2A、P2X7的表达增加,青藤碱可抑制TNF-α的分泌,并下调P2X7的表达(均P0.05),但对A2A的表达有促进作用。【结论】青藤碱对LPS刺激的小鼠肝脏、脾脏及体外巨噬细胞中嘌呤受体P2X7的表达增加均表现抑制作用,而对不同组织细胞中A2A表达的影响不同,相关机制有待深入。     

清火败毒饮对巨噬细胞高迁移率族蛋白1表达的影响

目的：观察中药清火败毒饮方（qinghuobaiduyin,QHBDY）对晚期炎症因子高迁移率族蛋白1（high mobility group box chromosomal protein 1,HMGB1）在RAW264.7巨噬细胞中表达的影响,以了解其抗炎症反应的细胞内源性保护机制。方法：以RAW264.7巨噬细胞为研究对象,通过正常SD大鼠血清、烧伤SD大鼠血清和中药QHBDY治疗后SD大鼠血清干预细胞,应用RT-PCR技术检测细胞中HMGB1表达。结果：正常SD大鼠血清干预RAW264.7巨噬细胞后,HMGB1 mRNA的表达量与正常RAW264.7巨噬细胞中HMGB1表达量差异无统计学意义（P＞0.05）;应用烧伤SD大鼠血清干预RAW264.7巨噬细胞,HMGB1的表达量在干预3 h增高后又降为低水平表达,至18 h后急剧增加,于36 h达到高峰,至48 h仍维持高水平表达;应用中药QHBDY治疗后SD大鼠血清干预RAW264.7巨噬细胞,HMGB1的表达量在干预3 h增高后又降为低水平表达,于24 h出现缓慢增加,但较烧伤SD大鼠血清干预组低,两组差别具有统计学意义（P＜0.05）。结论：烧伤血清能引起HMGB1在RAW264.7中的高表达;中药QHBDY治疗后SD大鼠血清能降低RAW264.7中HMGB1的表达     

Effect of Jianpi Huoxue decoction (健脾活血方)-containing serum on tumor necrosis factor-α secretion and gene Expression of endotoxin receptors in RAW264.7 cells induced by lipopolysaccharide

Objective:To evaluate the effect of Jianpi Huoxue decoction(健脾活血方,JHD)-containing serum on tumor necrosis factor-α(TNF-α) secretion and endotoxin receptor gene expression in RAW264.7 cells induced by lipopolysaccharide(LPS).Methods:The cytotoxicity of blank-control serum and JHD-containing serum at different concentrations were evaluated through the lactate dehydrogenase(LDH) assay in RAW264.7 cells.RAW264.7 cells were divided into six groups:5%blank-control serum group(C1,n=3),5%blank-control serum plus...     

脂氧素对脂多糖诱导巨噬细胞炎症相关因子的影响及机制

目的：研究脂氧素（1ipoxin A4）对脂多糖（1ipopo-lysaccharide,LPS）诱导的小鼠巨噬细胞株RAW264.7中相关炎症因子如肿瘤坏死因子（TNF-α）、环加氧酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）、血红素氧化酶-1（HO-1）和白介素-10（IL-10）的影响,并进一步探讨其内在分子机制。方法：以1mg／L LPS刺激体外培养的RAW264.7细胞作为炎症模型,分别用脂氧素A4或脂氧素A4和ZnPPIX干预LPS刺激的RAW264.7细胞24h后,收集培养上清并提取细胞总蛋白,酶联免疫法测定上清中TNF-α,IL-10和PGE2浓度,免疫印迹法检测细胞COX-2和HO-1的蛋白表达量,分光光度计分析HO-1的活性。结果：1mg／L LPS明显诱导TNF-α,COX-2和PGE,的生成,也适度增加IL-10及HO-1的产生;脂氧素A4可抑制LPS诱导的TNF-α（P〈0.01雠LPS组）,COX-2和PGE2（P〈0.01伽LPS组）的生成,却进一步增加IL-10（P〈0.01 vs LPS组）和HO-1表达量和活性（P〈0.01 vs LPS组）;ZnPPIX可减弱脂氧素A。对LPS诱导TNF-α（P〈0.05 vs LPS＋脂氧素A4组）,COX-2和PGE2（P〈0.05 vs LPS＋脂氧素A4组）的生成抑制作用,同时也下调IL-10的生成量。结论：脂氧素A4可抑制LPS诱导的巨噬细胞中致炎介质TNF-α,COX-2及PGE2的生成,同时也促进IL-10的产生,这种效应在一定程度上是通过上调HO-1表达和活性实现。     

伊马替尼抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症表型

【目的】探讨伊马替尼（Ima）在体外对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症表型的影响。【方法】RAW264.7细胞在LPS（0.1μg/mL）或/和Ima（1μmol/L,5μmol/L）处理后,通过Q-PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-10、CCL2、iNOS、TNF-α和Arg1的mRNA表达变化;采用Western Blot检测iNOS蛋白表达变化以及NF-κB和MAPK信号通路活化情况;利用ELISA法检测细胞上清IL-1β、CCL2、IL-10和TNFα的蛋白表达情况。【结果】与对照组相比较,LPS刺激8h后,RAW264.7细胞内的炎症指标IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA水平显著升高（P<0.001）以及抗炎指标IL-10的mRNA水平也明显升高（P<0.001）;LPS刺激24h后,细胞上清中IL-1β、IL-10、CCL2和TNF-α的蛋白水平显著上升（P<0.001）,细胞内iNOS蛋白表达以及p65,p38,ERK和AKT的磷酸化水平显著增加。和LPS组相比,Ima提前处理后,IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA及蛋白水平显著下降（P<0.01,P<0.001）而IL-10的mRNA及蛋白水平显著升高（P<0.001）,这种抑制作用具有剂量依赖性。Ima的预处理抑制了LPS诱导的p65,p38,ERK和AKT磷酸化。单独用Ima处理RAW264.7细胞后,细胞的功能状态未见明显的改变。【结论】伊马替尼可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症表型,这种作用与抑制NF-κB和MAPK信号通路的过度激活有关。