美洛昔康对Aβ诱导阿尔茨海默病大鼠脑内一氧化氮的作用

目的：研究美洛昔康对β-淀粉样蛋白（Aβ）诱导的阿尔茨海默病（AD）模型大鼠脑内一氧化氮（NO）的作用,并探讨其抑制炎症作用的机制。方法：采用Aβ1-40海马注射建立AD大鼠模型。术后第2天各组大鼠灌胃给药,连续30d。美洛昔康小、中、大剂量分别为：1、2、4mg/（kg·d）。生理盐水（NS）对照组及模型对照组分别给予等容量NS及0.5%羧甲基纤维素钠溶液。电迷宫刺激器检测大鼠学习记忆能力;生化法检测脑组织中NO的含量变化。结果：美洛昔康能提高AD大鼠的学习记忆能力;抑制AD大鼠脑内的表达。结论：美洛昔康可能通过抑制NO的分泌,改善大鼠的学习记忆能力。     

海马神经元Toll样受体4的髓样细胞分化因子非依赖途径在神经炎症中的作用

目的探讨海马神经元Toll样受体4(TLR4)介导的髓样细胞分化因子88(My D88)非依赖途径在神经炎症中的作用。方法构建3对针对My D88基因的特异siRNA序列,经脂质体途径转染入体外培养的海马神经元,通过免疫荧光检测转染效率和RT-q PCR选择最佳siRNA序列,并优化转染条件,达到沉默My D88基因而保留My D88非依赖途径的目的;将体外培养海马神经元随机分成4组:空白对照组(Control)、阴性对照组(NC)、LPS组和siRNA组。采用RT-q PCR分别测定TLR相关分子(TRAM)、TLR4相关的干扰素活化子(TRIF)mRNA的表达;Western印迹检测TRIF蛋白水平;ELISA技术测量培养上清中TRAM、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)和白细胞介素-1β(IL-1β)浓度。结果 siRNA转染成功,siRNA2的沉默效果最佳,效率达94.3%,且最适转染浓度和时长分别为30 nmol/L和48 h。空白对照组和阴性对照组可观察到TRAM、TRIF mRNA以及TRIF蛋白的表达,同时上清液中也可以检测到TRAM、IP-10和IL-1β;LPS刺激组,上述检测指标的表达量均明显增高;siRNA组,在阻断My D88基因的前提下加LPS刺激,与空白对照组和阴性对照组相比,上述检测指标的水平均显著增高,但在上清液中,IL-1β的浓度低于LPS组。结论 siRNA序列能够成功转染入体外培养的海马神经元,发挥很强的沉默效率,达到理想的阻断My D88依赖型途径的作用;海马神经元有TLR4的My D88非依赖途径的存在的证据,当激动该途径时,相应炎症因子的表达上调;TLR4激活所致的My D88非依赖途径活化可能是神经退行性疾病的发病机制之一。     

肾动脉CT成像在肾段动脉阻断肾部分切除术中的应用研究

目的为临床开展肾段动脉阻断的肾部分切除术提供影像解剖学指导。方法对390侧肾动脉CT成像（CTA）资料进行研究,分析肾动脉一级和二级分支处与肾门上下缘连线（A线）的关系,观察副肾动脉及支配情况。结果390侧肾动脉CTA资料研究结果显示：肾动脉第一级分支处在A线之内者为122例,占31．28％（122／390）,在A线外侧者268例,占68．72％（268／390）。二级分支处在A线之外者187例,占47．95％（187／390）。副肾动脉共出现120侧128支,占30．77％（120／390）,其中支配肾上极的副肾动脉共95支,占74．22％（95／128）,支配肾下极者33支,占25．78％（33／128）。结论①肾动脉是呈节段性分布的,肾段动脉与肾门之间存在一定的空间,为肾段动脉阻断的肾部分切除术提供了安全保障;②副肾动脉出现机率较高,大部分支配肾上极,术中需注意保护副肾动脉,避免不必要的肾单位损伤;③CTA能够提供肾段动脉和副肾动脉的分布特点和个体变异情况,是选择性肾段动脉阻断。肾部分切除术前手术评估的重要手段。     

中药复方脑益康干预阿尔茨海默病模型小鼠脑组织神经生长因子及脑源性神经营养因子mRNA的表达

目的：观察中药复方脑益康对阿尔茨海默病模型小鼠脑组织脑神经生长因子、脑源性神经营养因子mRNA表达的影响。方法：①实验于2004—10／2005—03在南通大学基础医学院病理生理学实验室完成。②采用D-半乳糖和亚硝酸钠腹腔注射建立阿尔茨海默病小鼠模型，ICR小鼠120只，采用随机数字法分为6组，正常对照组，模型对照组，脑复康对照组[0．4g/（kg&;#183;d）]，脑益康小、中、大剂量组[（2．4，7．2，24g／（kg&;#183;d）]。脑益康由制首乌、巴戟天等组成（南通市中医院制剂室制成颗粒剂，每克颗粒剂含生药1．98g）。模型对照组、各给药组腹腔注射10g/L D-半乳糖120mg／（kg&;#183;d）和10g几亚硝酸钠90mg／（kg&;#183;d），连续60d，正常对照组腹腔注射等容量的生理盐水。脑益康和脑复康均以5g／L羧甲基纤维素钠配制灌胃，连续60d。③每组随机取6只小鼠，取脑组织，采用反转录-聚合酶链反应方法检测脑组织中脑神经生长因子、脑源性神经营养因子mRNA的表达。结果：①脑益康小、中、大剂量组脑神经生长因子mRNA的表达与正常对照组比较差异无显著性（1．05&;#177;0．25，0．83&;#177;0．46，0．99&;#177;0．46，1．12&;#177;0．22．P〉0．05）；脑益康小、中、大剂量组脑源性神经营养因子mRNA的表达与正常对照组比较差异无显著性（0．73&;#177;0．20，0．49&;#177;0．12，0．63&;#177;0．15，0．32&;#177;0．22，P〉0．05）。②模型对照组脑神经生长因子mRNA、脑源性神经营养因子mRNA显著高于正常对照组（1．98&;#177;0．60比1．12&;#177;0．22，1．32&;#177;0．37比0．32&;#177;0．22，P〈0．05）。⑧与模型对照组脑神经生长因子mRNA和脑源性神经营养因子mRNA比较，阳性药脑复康对照组、脑益康小、中、大剂量组表达明显减少沪〈0．05）。结论：脑益康提高阿尔茨海默病小鼠学习记忆作用的部分机制与其保护胆碱能神经元、改善神经生长因子、脑源性神经营养因子的逆行运输有关。     

N-糖基化对KCNE1功能的影响

目的:探究N-糖基化在KCNE1功能中的作用.方法:根据N-糖基化序列特征"Asn-X-Ser/Thr"分析和N-糖基化特异消化酶实验检测KCNE1是否存在N-糖基化,通过点突变构建N-糖基化位点突变体并通过蛋白质印迹法检测其蛋白表达,细胞免疫荧光染色检测突变体亚细胞定位;免疫共沉淀检测突变体与KCNQ1的相互作用.结果:KCNE1存在N-糖基化,N5和N26是其可能位点;点突变获得KCNE1-N5Q、KCNE1-N26Q和KCNE1-N5,26Q 3个突变体.蛋白质印迹法确定N5和N26为KCNE1的两个糖基化位点;与野生型相比,突变体在细胞内呈现不同程度的蛋白囤积现象,KCNE1-N26Q表现尤为显著,KCNE1-N5,26Q和KCNE1-N5Q则表现略轻;KCNE1 N-糖基化突变体仍能与KCNQ1结合.结论:N-糖基化在KCNE1转运中发挥重要作用,其中N26较为关键;N-糖基化在KCNE1与KCNQ1之间的相互作用中不起重要作用.     

脑益康对高胆固醇血症致Aβ增高大鼠的作用研究

目的观察脑益康对高胆固醇血症致Aβ增高大鼠的作用并分析其作用机制。方法高胆固醇饲料喂饲大鼠建立高胆固醇血症模型,脑益康灌胃,Y电迷宫测试,测定血脂、血流变及脑海马区Aβ表达。结果与模型对照组相比,脑益康高剂量组大鼠电刺激尝试次数显著减少(P<0.01),血清总胆固醇显著降低(P<0.01),大鼠脑海马区Aβ表达积分光密度显著降低(P<0.01)。结论脑益康可改善大鼠学习、记忆,其机制与降低血脂水平、改善血液流变学、减少脑Aβ生成有关。     

苦参素穴位注射对大鼠肝癌及PCNA蛋白表达的影响

目的:研究苦参素足三里注射对大鼠实验性肝癌的作用,并探讨其机制。方法:以2-乙酰氨基芴(2-AAF)喂饲SD大鼠制备肝癌模型。随机分为正常对照组、模型对照组、苦参素腹腔注射(OM ip)对照组和苦参素足三里(OM ZSL)小剂量治疗组。实验至12周末,肝组织匀浆检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST);肝组织电镜检查;检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达。结果:OM ZSL小剂量治疗组、OM ip对照组肝组织中MDA含量明显低于模型对照组,GST活力显著高于模型对照组;肝组织病理变化明显减轻;肝癌组织中PCNA蛋白的表达显著低于模型组。结论:OM ZSL小剂量给药能治疗或延缓2-AAF诱发大鼠肝癌的发生,其部分机制可能通过减少MDA的生成、增加GST活力,减轻肝细胞损伤而产生间接治疗作用;通过抑制肝癌大鼠肝组织中PCNA蛋白的表达,抑制肝癌细胞过度增殖,从而阻止或延缓大鼠肝癌的发生和发展。     

复方脑益康对AD大鼠脑组织ChAT表达的影响

目的:观察中药复方脑益康对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠脑组织胆碱乙酰基转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)表达的影响。方法:采用大鼠双侧Meynert核(nucleus basalis of Meynert,NBM)注射鹅膏蕈氨酸(ibotenic acid,IBO)建立AD动物模型,灌胃给药28 d后,应用免疫组织化学染色和Western-blot印迹分析观察ChAT在AD大鼠额叶皮层的表达。结果:脑益康改善脑组织ChAT阳性神经元的形态及数量、增加ChAT蛋白的表达。结论:脑益康通过促进ChAT蛋白合成,增加乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)的合成,从而保护中枢胆碱能神经元。     

美洛昔康对Aβ诱导的阿尔茨海默病模型大鼠脑内环氧合酶-2的作用

目的研究美洛昔康对β-淀粉样蛋白（Aβ）诱导的阿尔茨海默病（AD）模型大鼠脑内环氧合酶-2（COX-2）的作用,并探讨其抑制炎症作用的机制。方法采用Aβ_（1-40）海马注射建立AD大鼠模型。术后第2天各组大鼠灌胃给药,连续30 d。美洛昔康小、中、大剂量分别为1、2、4 mg·kg^-1·d^-1。生理盐水对照组及模型对照组分别给予等容量生理盐水及0.5%羧甲基纤维素钠溶液。电迷宫刺激器检测大鼠学习记忆能力;尼氏染色观察大鼠海马形态结构变化;RT-PCR方法检测大鼠海马组织COX-2 mRNA的表达情况。结果美洛昔康能提高AD大鼠的学习记忆能力,改善AD大鼠脑组织的病理变化,抑制AD大鼠海马COX-2 mRNA的表达。结论美洛昔康可能通过抑制COX-2 mRNA的表达,减少前列腺素（PG）、活性氧（ROS）的生成,从而改善脑组织的病理变化,保护神经细胞,提高AD模型大鼠的学习记忆能力。     

华蟾素对小鼠H_(22)肝癌移植瘤作用的研究

目的 :观察华蟾素对小鼠移植肝肿瘤H2 2 生长的影响 ,初步探讨华蟾素对肝肿瘤细胞的作用机制。方法 :以瘤株 (H2 2 )接种于小鼠 ,制备肝癌模型 ,设正常对照组、荷瘤模型组、5 -FU组、华蟾素组。各组小鼠采血计白细胞数 ,切除肿瘤、胸腺及脾脏 ,称取重量 ,计算肿瘤抑制率 ;光、电镜下观察肿瘤组织结构。结果 :华蟾素和 5 -FU组小鼠肿瘤抑制率分别为 3 0 .99%和 74.2 8% ,均明显高于荷瘤模型组 (P <0 .0 1)。华蟾素组白细胞数与正常组比较无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,显著高于 5 -FU组 (P <0 .0 1)。电镜观察华蟾素组有典型的细胞凋亡形态学特征。结论 :华蟾素通过提高机体免疫功能 ,以及诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制移植性肝肿瘤的生长