肝脏特异性DEK基因敲除小鼠模型的制备及鉴定

目的　利用Cre/loxp基因敲除技术构建肝脏特异性DEK基因敲除小鼠,为研究DEK基因在肝脏中的生物学功能提供重要动物模型。 方法　将DEKflox/flox小鼠与肝脏特异性表达Alb-Cre重组酶的小鼠进行交配和鉴定,筛选出子代中DEKflox/+/Alb-Cre小鼠与DEKflox/flox小鼠进行交配与鉴定,获得DEKflox/flox/Alb-Cre小鼠,将DEKflox/flox/Alb-Cre小鼠与DEKflox/flox小鼠进行交配,其子代基因型为DEKflox/flox/Alb-Cre的小鼠即为本实验所构建的肝脏特异性DEK基因敲除小鼠,DEKflox/flox小鼠即为对照小鼠。提取小鼠尾基因组DNA,通过PCR鉴定子代小鼠的基因型;提取小鼠肝脏RNA和总蛋白,利用Real-Time PCR和Western Blotting技术检验DEK基因在小鼠肝脏中的mRNA水平和蛋白质水平的表达情况,使用激光共聚焦检测DEK蛋白在小鼠肝脏的表达情况;对小鼠肝脏行苏木精-伊红染色观察小鼠肝组织的形态学变化。 结果　PCR结果表明子代小鼠基因型符合DEKflox/flox/Alb-Cre;肝脏特异性DEK基因敲除小鼠肝组织中DEK基因的mRNA水平及蛋白质水平显著低于DEKflox/flox型小鼠;肝脏特异性DEK基因敲除小鼠肝组织的形态学特征与对照组小鼠相比无明显差异。 结论　本研究利用Cre/Loxp技术成功构建了肝脏特异性DEK基因敲除小鼠,为在动物水平进一步研究DEK基因的作用提供了重要动物模型。     

人肝再生增强因子真核表达及其对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的：构建人肝再生增强因子（human augmenter of liver regeneration,hALR）15kD亚型的真核表达系统,并探索ALR对顺铂（Cisplatin,DDP）诱导的人肝癌细胞株QGY凋亡的影响。方法：用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）方法和基因重组技术,从重组质粒pPIC9K-rhALR中扩增出编码rhALR基因片段,将其克隆入pPICZαA质粒中构建重组质粒pPICZα－A-rhALR。重组质粒SacⅠ酶切线性化后电转入酵母GS115中,并在1%的甲醇诱导下表达。表达上清蛋白经Western blot（ALR多克隆抗体和His-tag标签抗体）鉴定和镍柱亲和层析纯化。MTS试剂检测rhALR体外对人肝癌细胞（HepG2、QGY）的促增殖活性,及流式细胞仪检测rhALR在顺铂诱导QGY细胞凋亡中的抗凋亡作用。结果：PCR、双酶切、DNA测序均鉴定重组质粒构建与预期一致。分泌表达的rhALR约占上清总蛋白的70%,目的分子量约17 kD,Western blot均可见单一条带。纯化后的rhALR对HepG2和QGY的体外促增殖作用呈浓度依赖性增强（HepG2组：F=246.729,P=0.000;QGY组：F=246.004,P=0.000）,且在QGY细胞顺铂诱导凋亡时也发挥着浓度梯度式抗凋亡作用（F=101.061,P=0.000）。结论：成功构建高效分泌表达rhALR的pPICZα－A-rhALR GS115真核表达系统;体外实验证实rhALR对顺铂诱导人肝癌细胞有呈浓度依赖性的抗凋亡作用。     

乌司他丁治疗严重脓毒症性ARDS患者PCT、CRP和乳酸水平的变化和意义

目的:分析乌司他丁干预前后严重脓毒症性ARDS患者血乳酸和炎性因子水平的变化和意义.方法:2018-03～2020-03选取我院严重脓毒症性ARDS患者86例,采用常规治疗38例为对照组,常规治疗+乌司他丁干预治疗48例为试验组.采用酶联免疫吸附试验法检查两组治疗前后血浆乳酸、CRP及PCT水平,用胸阻抗法检测PaO2/FiO2,统计患者治疗前后APACHE Ⅱ评分和SOFA评分及28 d死亡情况.结果:试验组、对照组治疗后7d的血乳酸、CRP和PCT浓度分别低于与治疗前(P＜0.05).试验组治疗后3d的血乳酸及CRP浓度低于治疗前(P＜0.05).试验组治疗后PaO2/FiO2较对照组显著升高(P＜0.05).试验组治疗后APACHE Ⅱ和SOFA评分低于对照组(P＜0.05).试验组28 d内死亡率为18.75％,低于对照组42.11％(P＜0.05).结论:在常规治疗的同时,对严重脓毒症性ARDS患者加以乌司他丁注射液治疗可有效降低炎性因子水平,改善机体乳酸水平.     

复方薤白胶囊治疗慢性支气管炎急性发作期痰热郁肺证的临床观察

目的验证复方薤白胶囊对慢性支气管炎急性发作期痰热郁肺证的疗效，并对其安全性作出客观评价。方法采用随机、双盲双模拟、平行对照试验，观察慢性支气管炎（痰湿阻肺证）患者共64例，其中试验组48例，对照组16例；试验组服用复方薤白胶囊2粒／次，同时服用空白模拟剂2粒／次，每日3次；对照组口服芩暴红止咳胶囊2粒／次，每日3次，同时服用空白模拟剂2粒／次，每日3次，疗程均为10天。结果临床总体疗效：试验组临床控制率25．O％，显效率41．7％，有效率25．O％，愈显率91．7％；对照组临床控制率6．2％，显效率62．5％，有效率18．8％，愈显率87．5％。两组临床总体疗效比较差异无显著性差异（P〉0．05）。中医证候疗效：试验组临床控制率8．3％，显效率50．0％，有效率37．5％，愈显率95．8％，对照组临床控制率6．2％，显效率50．0％，有效率37．5％，愈显率93．8％。两组中医证候疗效比较亦无显著性差异（P〉0．05）。两组在改善单项咳嗽、咳痰、喘息均有明显疗效，但比较无统计学差异。未发生药物不良反应。结论复方薤白胶囊疗效确切，未发现明显毒副反应，与芩暴红止咳胶囊相仿。     

新型冠状病毒特点及临床诊治进展

自2019年12月以来,新型冠状病毒（2019 novel coronavirus,2019-nCoV）引起的新型冠状病毒肺炎（coronavirus disease 2019,COVID-19）暴发流行,且快速向全国各地范围内传播。世界卫生组织及党中央和国务院高度重视此次事关人民群众生命安全及社会经济发展的重大疫情。2019-nCoV是β属的一种新型冠状病毒,该病毒潜伏期长且传染力强。我国已将COVID-19定义为乙类传染病,但是采取甲类传染病的预防和控制措施。本文聚焦2019-nCoV及疫情的发展,将对2019-nCoV特点、COVID-19的临床特征、2019-nCoV与孕妇、新生儿、儿童及药物治疗等方面进行阐述。     

LYSO闪烁晶体PET探测器设计及位置映射算法研究

目的分析LYSO闪烁晶体内光子的输运特性及正电子发射计算机断层扫描装置（positron emission tomography,PET）位置映射表的建立方法。方法在Linux fedora操作系统之上成功构建了GATE（geant4 application for tomographic emission）核医学仿真平台,模拟了LYSO闪烁晶体PET探测器内光子输运过程。并且基于仿真数据,分析了位置映射表。结果成功研制了8×8探测器模块,得到位置映射对照表。结论基于GATE进行探测器模块设计切实可行,得到的位置映射表对后期实际散点图的建立过程具有重要指导作用。     

肝再生增强因子,细胞色素P450与人肝癌细胞在体外耐药的关系

目的:研究肝癌顺铂耐药细胞HepG2/cDDP中人肝再生增强因子(Human augmenter of liver regeneration,hALR)对细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)表达的影响,观察ALR是否通过作用CYP450与肝癌细胞耐药的形成有关.方法:建立体外肝癌顺铂耐药细胞...     

IL-10、TNF-α对慢性乙型肝炎患者树突状细胞的影响

目的 研究IL-10和TNF-α对慢性乙型肝炎患者树突状细胞的分化与功能的影响.方法 健康志愿者和慢性乙型肝炎患者各15例,取外周静脉血,分离获得外周血单个核细胞(PBMC),常规培养获得DC组.培养期间用IL-10刺激的为imDC组;TNF-α刺激的为mDC组;先后用IL-10、TNF-α刺激的为imDC+TNF-α组.各组收获细胞后分别检测反映DC成熟度的各种分子及其体外诱导的自体淋巴细胞增殖效应.结果 源于慢性乙型肝炎患者的常规培养的Dc在数量,HLA-DR、HLA-A、B、C和CD86表达,IL-12p70分泌及其诱导的淋巴细胞增殖效应,均低于健康者组(P＜0.01).源于慢性乙型肝炎患者的mDC与健康者mDC表达的HLA-DR、HLA-A、B、C和CD86比较无显著性差异;2组mDC诱导自体淋巴细胞增殖效应和分泌的IL12p70均明显增加,比较有显著性差异(P＜0.01);2组imDC的HLA-DR、HLA-A、B、C和CD86低表达,分泌的IL-12p70极低,不能强烈激活诱导淋巴细胞增殖效应,与DC组比较有显著性差异(P＜0.01).加入TNF-α刺激后HLA-A、B、C,HLA-DR,CD86仍低表达,分泌的IL-12pT0和淋巴细胞增殖效应仍较低.健康对照组、慢性乙型肝炎组的上清夜中IL-21的ELISA检测值均较低,无显著性差异.结论慢性乙型肝炎患者常规培养的DC在数量和功能上低于健康者.TNF-α可促进常规培养的DC成熟为mDC、IL-10可抑制DC成熟.慢性乙型肝炎患者的DC同健康者一样可进行有效的调控,分化成熟后功能强于健康者常规培养的DC,或可提高自体DC治疗性疫苗在不同免疫状态下的治疗效果.     

卵巢过度刺激综合征的治疗

卵巢过度刺激综合征的治疗济南铁路中心医院（２５０００１）孙航克１９８８～１９９６年，我们对５００例排卵障碍患者采用药物诱导排卵，共并发卵巢过度刺激综合征（ＯＨＳＳ）１９例。现将治疗体会介绍如下。１临床资料本组年龄２４～２８岁，均排卵异常，ＣＴ排除垂体...     

清肺活血方对AECOPD患者凝血、纤溶活性影响

目的观察慢性阻塞性肺病急性加重期(AECOPD)患者应用清肺活血方对其凝血和纤溶活性的干预作用。方法将48例AECOPD患者随机分成治疗组和对照组,两组均给予常规治疗,治疗组(24例)在常规治疗基础上加用清肺活血中药,治疗10 d,治疗前后均检测凝血和纤溶活性指标。结果对照组治疗前后凝血功能指标略有改善,但无显著性差异(P0.05),显示常规治疗虽能使患者病情得到改善,但无法有效改善患者血液的高粘、高凝状态;治疗组治疗前后凝血和纤溶活性改善明显(P0.01或P0.05),显示其可有效改善患者血液的高粘、高凝状态。结论对AECOPD患者常规治疗同时配合清肺活血治疗,效果肯定,防止血栓形成起着重要的作用。