AMPK激活对大鼠心肌细胞蛋白降解的影响

目的探讨单磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)对体外培养心肌细胞蛋白降解的影响。方法分离培养新生Spra-gue-Dawley大鼠心肌细胞,用AMPK特异性激动剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷(AICAR)(2.0mmol/L)、抑制剂Compound C(0.5mmol/L)干预,按干预方式分为:对照组、AICAR组、Compound C组及AICAR+Compound C组。Westernblot检测心肌细胞AMPK、p-AMPK蛋白的表达水平;高效液相色谱法检测细胞培养基中3-甲基组氨酸(3-MH)的浓度。结果各组心肌细胞总AMPK蛋白水平没有明显变化,AICAR可上调心肌细胞p-AMPK蛋白水平,Compound C下调心肌细胞p-AMPK蛋白水平,并抑制AICAR对p-AMPK蛋白的上调作用。AMPK激活后心肌细胞3-MH释放增加,而AMPK活性受到抑制后,3-MH释放减少。结论 AMPK激活能促进心肌细胞的蛋白降解。     

荧光检测法测定人体尿液中3-甲基组氨酸

目的　研究建立人体尿液中 3-甲基组氨酸 (3-MH)分离检测方法。方法　邻苯二甲醛衍生剂与 3-MH形成荧光衍生物 ,用高效液相色谱与荧光检测器系统分析测定尿液 3-MH的含量。结果　3-MH与尿液中其它杂质得到完全分离 ,并有良好的线性关系和回收率。结论　该方法特异性高 ,为临床手术后病人的康复治疗提供了有价值诊断方法。     

成年大鼠心肌细胞分离培养及兴奋-收缩耦联表征

目的比较两种细胞分离液分离成年大鼠心肌细胞,进一步表征成年大鼠心室肌细胞兴奋-收缩耦联。方法 Langendorff装置进行主动脉逆流灌流,分别用两种细胞分离液分离成年大鼠心肌细胞,无血清培养并进行腺病毒感染。显微镜下观察单个心肌细胞的形态学特点,荧光显微镜下检测病毒感染。采用IonOptix仪器检测心肌细胞肌节收缩-舒张指标以及心肌细胞钙离子摄入-排出指标。结果两种分离液均可获得70%横纹清晰的长杆状心肌细胞,培养可存活7 d以上。腺病毒感染48 h,绿色荧光蛋白持续表达7 d以上。分离液一获得的心肌细胞不能很好地随电场刺激产生收缩,分离液二获得的细胞可用于检测兴奋-收缩耦联特性,心肌细胞肌节缩短分数为11.61%±2.15%,舒张时间为(0.177±0.031)s,钙瞬变幅度为30.79%±9.74%,钙瞬变衰减时间为(0.300±0.074)s。结论两种分离液均可用于分离和培养成年大鼠心肌细胞,并用于腺病毒转染等长时程研究。分离液二更适用于检测成年大鼠心肌细胞的兴奋-收缩耦联特性。     

COX-2基因通过Notch信号通路介导心肌细胞过度凋亡的机制研究

目的探讨环氧化酶(cycloxygenase,COX)-2(COX-2)基因通过Notch信号通路介导心肌细胞的过度凋亡的作用机制。方法将15只SD大鼠按随机数字表法分成假手术组(暴露心脏后未做任何处理)、模型组(构建心肌缺血再灌注损伤的SD大鼠模型)和抑制剂组(制备心肌缺血再灌注损伤的SD大鼠模型后,用COX-2的抑制剂NS398预处理),每组5只。利用TUNEL染色检测心肌细胞的凋亡率,分别采用RT-PCR和Western-blot方法检测心肌COX-2、Notch信号通路分子Notch-1以及凋亡分子Caspase-3和Caspase-9的mRNA和蛋白的表达量。结果3组心肌细胞的凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.01),模型组明显高于假手术组和抑制剂组,抑制剂组明显高于假手术组(均P<0.01)。3组COX-2、Notch-1、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量比较差异有统计学意义(均P<0.05),抑制剂组明显低于模型组(均P<0.05)。结论 COX-2基因与心肌细胞的过度凋亡有关,而COX-2基因是通过Notch信号通路起促凋亡作用的。     

氯沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨氯沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的影响。方法:选24只雄性8周龄SD大鼠,分为对照组、心衰组和氯沙坦干预组各8只。采用阿霉素腹腔注射造模,氯沙坦干预组同时灌胃给氯沙坦连续给药6周。用原位脱氧核糖核酸酶未端标记法(TUNEL法)检测大鼠心肌细胞凋亡,用免疫组化法检测大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:与对照组比较,心衰组心肌细胞凋亡指数升高,提示心衰组存在明显心肌细胞膜损伤。与心衰组比较,氯沙坦干预组心肌细胞凋亡指数降低。心衰组和氯沙坦干预组心肌细胞Bax和Bc1-2基因蛋白表达显著高于对照组,与心衰组相比,氯沙坦干预组明显下调Bax基因表达,上调Bc1-2基因表达。结论:氯沙坦可明显提高抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达,降低促凋亡蛋白Bax蛋白表达,提示氯沙坦具有有效抑制心肌细胞凋亡,改善心衰作用。     

抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的:探讨抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响。方法:大鼠随机分为四组,各组8只,A组为假手术组,B组为抑郁大鼠假手术组,C组为心肌梗死组,D组为抑郁大鼠心肌梗死组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因表达。结果:各组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达的差异有统计学意义(P<0.01),C、D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达均高于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.01),D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bax、Caspase-3 mRNA表达高于C组,而心肌细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达低于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑郁可以加重心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调促凋亡基因Bax及Caspase3表达、下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

肝细胞生长因子对辐射后心肌细胞蛋白合成的保护作用

目的 研究肝细胞生长因子(HGF)对60Coγ射线照射体外培养的大鼠心肌细胞蛋白表达的影响.方法 体外培养新生大鼠心肌细胞,分为未照射组、单纯照射组、HGF处理照射组,照射组细胞分别用60Coγ射线20Gy单剂量照射心肌细胞,HGF处理的照射组在照射前3 h用终浓度为40ng/ml的HGF孵育.在照射后48 h:(1)用蛋白检测试剂盒检测各组心肌细胞中的总蛋白含量;(2)流式细胞仪检测各组的细胞周期变化;(3)带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(AdGFP)感染各组心肌细胞,感染后48 h用流式细胞仪检测各组心肌细胞中所含的绿色荧光蛋白的荧光强度,间接比较各组心肌细胞中绿色荧光蛋白的生成量.结果 照射后48h,照射组心肌细胞中总蛋白含量较未照射组减低(P＜0.01),HGF处理的照射组心肌细胞中总蛋白含量较单纯照射组增高(P＜0.05).照射后96 h、感染AdGFP后48 h,照射组心肌细胞的绿色荧光强度明显弱于未照射组(P＜0.01),HGF处理的照射组心肌细胞的绿色荧光强度较单纯照射组增强(P＜0.01).结论 60Coγ射线单剂量照射抑制体外培养的心肌细胞蛋白合成,HGF可部分逆转60Coγ射线对心肌细胞蛋白生成的抑制作用.     

转化生长因子-β1在多柔比星致大鼠心肌细胞凋亡中的促进作用

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在多柔比星诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:取出生1～2d的SD大鼠心肌细胞进行体外分离及纯化,用α-横纹肌肌动蛋白(α-SA)免疫化学染色法鉴定细胞纯度。将培养第3天的心肌细胞随机分为对照组和不同浓度(0.5,1,2μmol/L)多柔比星处理组,同时对各浓度组的不同时间点(4,12,24,48,72 h)进行检测。用MTT法检测心肌细胞存活率,流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测心肌细胞凋亡率,ELISA法检测心肌细胞上清TGF-β1蛋白浓度。结果:原代分离培养第3天的心肌细胞纯度可达90%。多柔比星在0.5～2μmol/L浓度范围内,随着处理时间延长,心肌细胞存活率下降,呈剂量和时间依赖性;2μmol/L多柔比星可诱导心肌细胞凋亡,在4～48 h内细胞凋亡率不断增加,且心肌细胞TGF-β1蛋白表达量也逐渐增加,与凋亡率呈正相关。结论:TGF-β1可能在多柔比星诱导的大鼠心肌细胞凋亡中起促进作用。     

Effect of Depression on Cardiac Myocyte Apoptosis and the Expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3 in Rats with Myocardial Infarction

目的:探讨抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响.方法:大鼠随机分为四组,各组8只,A组为假手术组,B组为抑郁大鼠假手术组,C组为心肌梗死组,D组为抑郁大鼠心肌梗死组.用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因表达.结果:各组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达的差异有统计学意义(P＜0.01),C、D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达均高于A组和B组,差异有统计学意义(P＜0.01),D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bax、Caspase-3mRNA表达高于C组,而心肌细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达低于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:抑郁可以加重心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调促凋亡基因Bax及Caspase3表达、下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关.     

甲状腺素致心肌细胞肥大的机制探讨

目的:探讨甲状腺素致心肌细胞肥大的相关机制。方法:取分离培养的乳鼠心肌细胞,用L-甲状腺素(T3)诱导心肌细胞肥大,然后再加入磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3-K)抑制剂LY294002和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)特异性抑制剂雷帕霉素进行干预;采用测量心肌细胞表面积及3H-亮氨酸掺入、Western blot等检测方法。结果:甲状腺素诱导的心肌细胞肥大能被LY294002或雷帕霉素抑制,LY294002能抑制甲状腺素激活丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)和mTOR,雷帕霉素能特异性阻断mTOR的活化。结论:甲状腺素能通过PI3-K/Akt-mTOR信号通路促进心肌细胞肥大。     

感染大鼠全肠外营养时阿斯匹林的代谢调理作用

目的；观察环氧化酶抑制阿斯匹林对全肠外营养（ＴＰＮ）时蛋白南代谢的影响。方法；采用２８只腹腔感染大鼠，随机分成对照（ＴＰＮ组）和实验组（Ａｓｐ）。每鼠每日均输注相同的全营养混合液（ＴＮＡ），Ａｓｐ级在ＴＮＡ中加入注射用赖氨匹林１５ｍｇ．ｋｇ＾－１．ｄ＾－１，实验持续４ｄ。实验前后测定体重、血清总蛋白、白蛋白、尿素氮和肌酐，每日测定氮平衡和尿３－甲基组氨酸（３－ＭＨ）的排出量，纱积氮平衡和累积尿３－     

严重烧伤脓毒症患者骨骼肌蛋白分解代谢的临床研究

目的分析严重烧伤脓毒症患者骨骼肌蛋白降解变化及其生物学机制。方法收集同期收治的20例严重烧伤脓毒症患者(烧伤脓毒症组)和12例整形患者(对照组)的血、24h尿和股四头肌标本,通过放免法测定血浆皮质醇和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,高效液相-色谱分析法检测股四头肌内3-甲基组氨酸(3-MH)含量以及尿中3-MH排出量,核糖核酸印迹法检测股四头肌内编码泛素、E2-14k和蛋白酶体C2亚基的mRNA表达变化。蛋白免疫印迹法检测股四头肌内蛋白酶体C2亚基的蛋白表达变化。结果烧伤脓毒症组血浆内皮质醇含量(478±56)μg/L和TNF-α含量(22·4±3·8)μg/L均显著高于对照组血内皮质醇含量(72±12)μg/L和TNF-α含量(0·5±0·1)μg/L(均P<0·01)。烧伤脓毒症组股四头肌内3-MH含量(4·3±0·6)μmol/g及24h尿内3-MH排出量(456±25)μmol均显著高于对照组股四头肌内3-MH含量(2·5±0·4)μmol/g和24h尿内3-MH排出量(202±29)μmol(均P<0·01)。烧伤脓毒症组股四头肌泛素mRNA2·4kb条带和1·2kb条带的表达分别较对照组增强51%和32%,差异有统计学意义(P<0·01);E2-14k mRNA1·2kb条带的表达较对照组增强75%,差异有统计学意义(P<0·01);蛋白酶体C2亚基mRNA和蛋白表达分别较对照组增强39%和130%,差异有统计学意义(P<0·01)。结论重症烧伤脓毒症时骨胳肌蛋白降解显著增强,体内糖皮质激素及TNF-α含量增加,从基因水平激活细胞内蛋白降解途径-泛素系统是重症烧伤脓毒症患者骨胳肌蛋白降解增强的原因之一。     

严重烧伤脓毒症患者骨骼肌蛋白降解变化机制研究

目的研究严重烧伤脓毒症患者骨骼肌蛋白降解变化及机制。方法 2012年1～6月收集严重烧伤伴脓毒症患者8例为脓毒症组。同时选择整形患者10例作为对照。检测对照组及脓毒症组伤后3、5、7、14、21d血清中肿瘤坏死因子-α、皮质醇、尿液中3-甲基组氨酸的含量,以及股四头肌中泛素基因表达和蛋白表达。结果脓毒症组烧伤后3、5、7、14、21d各指标均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。脓毒症组皮质醇、TNF-α、3-MH在烧伤后逐渐升高,7d时达到高峰,后逐渐下降,但在21d时仍然高于对照组。尿内3-MH的排泄量与血TNF-α和皮质素水平的变化呈正相关,r=0.89、0.91,P<0.01。脓毒症组股四头肌组织内泛素mRNA、E2-14k mRNA、C2亚基的mRNA、蛋白酶体C2亚基蛋白的表达较对照组均显著增加。结论严重烧伤脓毒症患者出现骨骼肌降解,与皮质醇、TNF-α升高有一定的关系。     

饲料蛋白质质量对幼年大鼠骨骼肌蛋白代谢的影响

本文通过对幼年大鼠骨骼肌细胞RNA相对含量的显微分光测定和尿中3-甲基组氨酸的分析,观察了不同质量饲料蛋白质对大鼠骨骼肌蛋白质代谢的影响。结果显示,不同质量的蛋白质喂养动物,动物骨骼肌细胞RNA含量存在显著差异,RNA含量与饲料蛋白质的氨基酸分之间呈高度正相关(r=0.958);尿中3-甲基组氨酸排出量也随饲料蛋白质质量提高而增大。据此认为,优质蛋白质促进动物生长发育,主要是加强了机体蛋白质的合成代谢,而不是降低了分解代谢。     

胡芦巴碱对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞的保护作用

目的：探究胡芦巴碱（T RG ）对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制。方法原代培养SD乳鼠心肌细胞,随机分成3组：正常对照（Control组）、缺氧／复氧组（H／R组）和TRG加缺氧／复氧组（TRG＋ H／R组）;采用流式细胞术分别检测TRG对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞凋亡和线粒体膜电位的影响;采用超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）试剂盒检测SOD活性和MDA水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测procaspase‐9、cleaved caspase‐9、procaspase‐3和cleaved caspase‐3蛋白水平。结果 TRG能够显著降低缺氧／复氧乳鼠心肌细胞凋亡率（P＜0．05）,增强SOD活性（P＜0．05）,减少MDA的生成（P＜0．05）,稳定线粒体膜电位（ P＜0．05）,促进caspase‐9和caspase‐3的活化。结论 T RG可减轻缺氧／复氧对乳鼠心肌细胞的损伤,其机制可能与抗脂质过氧化和稳定线粒体膜电位有关。     

CT-1mRNA和gp130在高血压大鼠心肌中的表达变化及意义

目的观察CT-1mRNA和gp130在高血压大鼠心肌中的表达变化、意义,以及替米沙坦对心肌营养素-1(CT-1)和糖蛋白130(gp130)表达的影响。方法 20只雄性SD大鼠行腹主动脉缩窄术后2周造成压力负荷性心肌肥厚模型,随机分为心肌肥厚组和替米沙坦组,另设10只作为假手术组。替米沙坦组灌胃给药3 mg/(kg.d),连续4周。原位杂交法检测心肌的CT-1mRNA表达水平;免疫组化法检测心肌中gp130表达水平。结果与假手术组比较,心肌肥厚组心肌组织CT-1mRNA和gp130表达水平明显增加。与心肌肥厚组比较,替米沙坦组CT-1mRNA和gp130含量显著降低(P<0.01)。结论压力超负荷性大鼠心肌中CT-1mRNA及其受体gp130的过度表达与心室重构的发生密切相关;替米沙坦逆转心室重构的机制可能与抑制CT-1及受体gp130的过度表达相关。     

BALB/c小鼠乳鼠心肌细胞的原代培养

目的：建立分离、纯化和培养BALB/c小鼠乳鼠心肌细胞的方法。方法：取出生1～3天以内的BALB/c小鼠乳鼠心肌组织,用0.125%胰蛋白酶和0.1%Ⅰ型胶原酶消化,将心肌细胞收集到含15%胎牛血清的DMEM培养基中,用差速贴壁分离法和5-溴脱氧尿苷相结合分离、纯化心肌细胞。采用α-actin抗体进行免疫组化染色鉴定心肌细胞,用台盼蓝染色检查心肌细胞成活率。结果：24小时后可见部分单个心肌细胞搏动,48小时后可见心肌细胞相互连接同步搏动;免疫组化染色后可见培养的细胞是心肌细胞,心肌细胞成活率达95%。结论：本研究应用的方法可获得状态好、高成活率的BALB/c小鼠心肌细胞,是一种可靠的心肌细胞培养方法。     

严重烫伤早期外源性β—羟丁酸钠,胰岛素对大鼠骨骼肌蛋白质代谢的影响

本文就外源性β-羟丁酸钠(β-HOBNa)、胰岛素(Ⅰ)对37％体表严重烫伤大鼠骨骼肌蛋白质代谢的影响进行了研究。结果为伤后第4天血清乙酰乙酸(AcAc)无明显变化,游离脂肪酸(FFA)下降,尿3-甲基组氨酸(3-MH)和伤肢比目鱼肌蛋白质分解率明显增加。伤后连续三天注入β-HOBNa可降低尿3-MH和比目鱼肌蛋白质的分解率,但对其合成无明显影响。联合注入β-HOBNa和Ⅰ未见二者有明显的协同抗蛋白质分解的效应。