纳升电喷雾质谱鉴定维甲酸诱导HL60细胞分化相关蛋白质

目的鉴定维甲酸诱导肿瘤细胞分化有关蛋白质.方法双向电泳分离维甲酸诱导分化前后HL660细胞蛋白,PDQuest软件分析筛选分化肿瘤细胞特异表达的蛋白点,用纳升电喷雾质谱对酶解消化样品进行部分氨基酸的序列测定,数据库比较即可得知是已知或未知蛋白.结果PDQuest分析全反式维甲酸(atRA)诱导分化前后HL60细胞蛋白双向电泳图谱,有许多蛋白表达水平有变化,我们对两个在分化细胞中明显表达的两个蛋白点进行了鉴定,质谱测序结合数据库检索表明两个蛋白点为同一种蛋白,即S100钙结合蛋白A9.结论S100A9蛋白在atRA诱导的HL-60细胞表达.     

全反式维甲酸对儿童卵黄囊瘤细胞增殖及维甲酸β受体表达的影响

目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对儿童卵黄囊瘤细胞诱导分化过程中细胞形态及维甲酸β受体表达的影响.方法:在体外细胞培养的基础上,观察细胞形态学的变化、细胞增殖动力学的变化,采用MTT比色法测定细胞细胞增殖活性,以半定量RT-PCR方法检测维甲酸β受体(RAR-β)mRNA的表达.结果:全反式维甲酸能使卵黄囊瘤细胞形态趋向良性分化,有效地抑制了肿瘤细胞增殖;半定量RT-PCR结果显示,经不同浓度的ATRA处理后的卵黄囊瘤细胞的RAR-β mRNA表达水平均上调.结论:ATRA对卵黄囊瘤细胞有诱导分化作用,ATRA通过上调维甲酸β受体基因表达实现其诱导分化作用.     

全反式维甲酸诱导HL-60细胞粒系分化中miRNA-26的表达变化

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对HL-60细胞诱导分化的miRNA-26表达变化.方法 采用全反式维甲酸(1μM)影响下不同时间的HL-60细胞为检测对象,显微镜下观察细胞形态学改变;流式细胞仪检测细胞表面分化标志CD15;Real-time PCR检测不同时段miRNA的表达变化.结果 ①随着药物诱导时间的延长,被诱导的HL-60细胞向粒系分化,并出现细胞核型的改变;②与对照组相比,ATRA作用3、4、5和6 d后,流式细胞仪检测HL-60细胞的分化率分别为(52.39±3.56)%,(77.65±0.24)%,(83.90±1.30)%及(68.13±1.67)%,(P＜0.001);③Real-time PCR检测miR-26A、miR-26B的表达水平显示,5 d时miRNA表达水平显著上升,miR-26A、miR-26B的表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-26A、miR-26B在ATRA诱导HL-60细胞粒系分化中表达显著升高,提示miR-26可能参与急性髓系白血病粒系分化调控的过程.     

NB4细胞和HL60细胞向粒细胞分化过程中细胞表面CD11b和CD18表达的比较

目的:比较髓系白血病细胞株NB4细胞和HL60细胞向粒细胞分化过程中细胞表面抗原CD11b和CD18的表达。方法:用全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞和HL60细胞向粒细胞定向分化,用MGG染色法进行初步鉴定,用FACS检测并比较两株细胞在分化前后细胞表面CD11b和CD18的变化,用Western blot检测两株细胞分化前后CD18的蛋白表达。结果:与分化前相比,两株细胞分化后细胞表面CD11b和CD18的表达均明显升高,并且这样的变化在NB4细胞中较HL60细胞更加显著。结论:分化NB4细胞可能较分化HL60细胞是更方便的粒细胞模型。     

全反式维甲酸诱导HL60细胞分化的细胞周期时相性研究

目的　探讨全反式维甲酸诱导分化的HL6 0细胞周期变化 ,进一步揭示细胞分化在细胞周期中的时相特异性。方法　以分化诱导剂全反式维甲酸 (终浓度为 10 μmol/L)影响下不同时间点的HL6 0细胞为检测对象 ,应用流式细胞术分析细胞的大小及细胞表面的分化标志 ;碘化丙啶 (PI)染色后用激光共聚焦显微镜观察细胞形态从而对已分化细胞进行确认 ;应用流式细胞术分析药物诱导的细胞周期变化 ,检测G1期的Ki6 7表达水平 ;再应用流式分选术结合激光共聚焦显微镜观察各期细胞形态。结果　①随着药物诱导时间的延长 ,细胞的体积逐渐增大 ,被诱导的细胞出现髓系细胞表面的分化标志物CD11b。②全反式维甲酸导致HL6 0细胞周期的G0 /G1峰升高 ,S期水平下降。③随着药物诱导时间的延长 ,G1期的Ki6 7的表达水平逐渐下降。④只在G1期细胞中可见到已分化细胞。结论　全反式维甲酸可以诱导HL6 0细胞周期的G1早期→G1晚期阻滞 ,并诱导HL6 0沿着粒系方向分化 ,细胞分化完成于细胞周期中的G1早期。     

HL-60细胞端粒酶活性的调控因素

目的 探讨HL－60细胞端粒酶活性的调控因素。方法 用脂质体介导法将LXSN－wt-p53逆转录病毒质粒导入人髓性白血病细胞系HL-60中,用c-myc,bcl-2基因反义脱氧寡核苷酸作用HL－60细胞,用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL－60细胞分化后,采用TRAP－ELISA－PAGE法测定端粒酶活性,观察野生型p53基因、c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）对HL－60细胞端粒酶活性的影响。结果 野生型p53基因不影响HL－60细胞的端粒酶活性;bcl-2及c-myc反义寡核苷酸可下调HL－60细胞的端粒酶活性;ATRA在诱导HL－60细胞分化的同时,可使HL－60细胞的端粒酶活性降低。结论 HL－60细胞端粒酶活性受到c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）的调节。     

双向电泳分析比较维甲酸诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异

目的：以维甲酸诱导急性早幼粒白血病细胞HL60分化为模型，用双向电泳技术分析比较维甲酸诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异。方法：用细胞生物学的方法分析分化细胞形态上的差异，NBT实验检测细胞NBT阳性率。用双向电泳技术分析分化肿瘤细胞蛋白表达差异。结果：分化后细胞形态发生明显变化，细胞表面出现突起，细胞核变小。分化后细胞NBT阳性率达90％以上，而未分化细胞NBT阳性率低于5％。双向电泳技术分析发现有7个蛋白点只未分化细胞检测到表达，而分化细胞未检测到；有14个蛋白点只在分化细胞检测到。结论：双向电泳技术可直接反映细胞蛋白表达变化。     

维甲酸对多种肿瘤细胞生长影响的实验研究

目的 应用全反式维甲酸(ATRA)作用前列腺癌DU—145细胞、早幼粒白血病HL—60细胞和乳腺腺癌MCF—7细胞，观察维甲酸对多种肿瘤细胞生长的影响。方法 应用全反式维甲酸作用HL—60细胞、DU—145细胞和MCF—7细胞，分别以光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态及超微结构的改变，并用流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果 全反式维甲酸作用前列腺癌DU—145细胞、早幼粒白血病HL—60细胞和乳腺腺癌MCF—7细胞后，导致肿瘤细胞生长减缓，肿瘤细胞超微结构出现细胞核固缩、核碎裂、染色质凝集于核膜周边等细胞凋亡的典型形态学改变，流式细胞仪检测肿瘤细胞出现亚二倍体“凋亡小峰”。结论 全反式维甲酸可以诱导多种肿瘤细胞产生凋亡，凋亡的产生与药物的浓度及作用时间密切相关。     

全反式维甲酸诱导对乳腺癌细胞放射敏感性影响的研究

目的 探讨不同浓度全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,ATRA)分化诱导对乳腺癌细胞的放射敏感性影响.方法 MTT法检测细胞体外增殖能力,电镜形态学的观察,流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 全反式维甲酸分化诱导乳腺癌A431细胞株,细胞增殖能力下降,凋亡增加,更多的细胞被阻止于G1/G0期,放射敏感性增强.结论 全反式维甲酸分化诱导能增强乳腺癌A431细胞株放射治疗敏感性,并与浓度成量效关系.     

ICAT蛋白在心细胞向单核系分化前后表达差异的验证及其功能研究

目的：对HL60细胞在NSC67657作用下向单核系分化前后,双向电泳分离的表达差异蛋白β-catenin相关蛋白1（Beta—catenin—interacting protein1,ICAT）进行验证,并对ICAT在细胞分化中的功能进行研究．方法：通过RT—PCR和Western blot方法验证药物作用细胞前后ICAT基因和蛋白的表达差异;通过免疫荧光协同分析目的蛋白的表达水平,并对其进行初步定位．构建pDsRed—ICAT真核表达载体,转染HL60细胞,筛选阳性克隆．对ICAT基因重组质粒转染细胞作细胞形态学、细胞增殖改变的观察和细胞周期检测以及超微结构观察．结果：NSC67657诱导HL60细胞向单核系分化,ICAT蛋白表达上调,其主要定位于细胞核和胞质．真核表达载体构建成功,电转后G418筛选可得90％以上阳性克隆．转染重组质粒的HL60细胞增殖受抑,电镜下胞核异染色质密集,核质比减小,表面抗原CD14表达和对照组无差异,但在药物处理后24h即可表达71．3％,明显高于对照组,瑞氏染色可见明显分化细胞．结论：ICAT蛋白在NSC67657诱导HL60细胞分化中表达上调,但仅是过表达的ICAT基因并不能诱导HL60细胞向单核系分化,却能提高HL60细胞对NSC67657诱导作用的敏感性．     

ATRA对人骨髓间充质干细胞成脂肪细胞分化及瘦素生成的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对人骨髓间充质干细胞(BMSC)成脂肪细胞分化及瘦素(Lp)生成的影响.方法 体外分离、培养和鉴定BMSC.在诱导培养液中加入不同浓度的ATRA进行成脂肪分化诱导,光学显微镜下油红O染色观察BMSC分化情况;RT-PCR和Western blotting测定细胞过氧化物酶体增殖激活性受体γ(PPARγ)和脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因及相应蛋白表达;RT-PCR和ELISA法检测分化过程中细胞Lp基因表达及蛋白分泌水平的变化.结果 ATRA(0.1～1.0μmol/L)作用后,BMSC向脂肪细胞分化呈现浓度依赖性抑制,PPARγ、FABP4 mRNA和蛋白表达均呈现一致性下降;诱导后细胞Lp mRNA表达和蛋白分泌显著减少.结论 0.1～1.0μmol/L ATRA可抑制BMSC向脂肪细胞分化及其Lp生成,其机制可能与下调PPARγ和FABP4表达有关.     

HL-60细胞内一种新的全反式维甲酸应答基因的克隆

利用差示PCR 技术从HL60 细胞内克隆出一个新的、差异表达的cDNA 片段,并将其命名为W1 基因。Northern 印迹杂交证实,用全反式维甲酸(ATRA) 诱导HL60 细胞分化时,W1 基因的转录水平在诱导早期增加而在诱导24 h 后关闭。推测W1 基因可能在HL60 细胞早期分化中有一定作用     

期刊文摘

Mcl-1基因在HL-60细胞对全反式维甲酸耐药机制中的作用[付劲蓉,刘文励,周剑锋等.中华血液学杂志,2005,26(6):352～354]探讨髓系白血病-1(Mcl-1)基因在HL-60细胞对全反式维甲酸(ATRA)耐药中的作用。采用少量、递增、反复AT-RA诱导HL-60细胞,建立ATRA耐药细胞系HL-60/ATRA;利用鸡尾酒法制备Mcl-1基因的小片段干扰RNA(smallinterference RNA,si RNA),并通过脂质体介导将其导入HL-60/ATRA细胞;Western blot检测Mcl-1蛋白在细胞中的表达;MTF实验、NBT还原反应实验、TUNEL免疫组化染色法分别检测细胞的增殖、分化和凋亡情况…     

全反式维甲酸对C6胶质瘤细胞增殖分化的影响

目的:研究全反式维甲酸对C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响.方法:用5 mg/L全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)诱导C6胶质瘤细胞,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验绘制细胞生长曲线以考察ATRA对细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞仪、光镜、透射电镜和免疫组织化学染色鉴定细胞的分化状况.结果:C6胶质瘤细胞经全反式维甲酸诱导后,细胞增殖受到明显抑制,并且密度明显减少(P<0.01).细胞周期受阻,G0/G1期延长,S期细胞比例明显减少(P<0.01).光镜观察到诱导前的C6胶质瘤细胞呈正常的成纤维细胞形态,而诱导后的C6胶质瘤细胞变细长,中间呈圆形或卵圆形,两端形成长尖突起.流式细胞仪的凋亡率检测显示,未见明显的凋亡;透射电镜观察显示,细胞有早期凋亡改变,且胞浆内空泡增多,线粒体和内质网丰富,细胞结构基本趋向正常.C6胶质纤维酸性蛋白表达明显增强.结论:全反式维甲酸能抑制胶质瘤细胞的增殖,并能诱导C6细胞分化.     

全反式维甲酸对恶性黑素瘤A375细胞增殖及Fas蛋白表达的影响

目的 观察全反式维甲酸(ATRA)对体外培养恶性黑素瘤A375细胞增殖的抑制作用并探讨其作用机制.方法 设置溶剂对照及ATRA不同浓度组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ATRA不同浓度、作用不同时间各组细胞存活和生长情况,分析量效、时效关系;Western blot检测10 μmol/L ATRA作用不同时间Fas蛋白的表达.结果 ATRA在0.01～0.1 μmol/L浓度对A375细胞增殖抑制作用不明显;在1～100 μmol/L浓度有抑制作用;药物作用72 h时各浓度组的细胞抑制率均达到高峰,以100 μmol/L浓度组抑制率最高;10 μmol/L ATRA可上调A375细胞Fas蛋白的表达.结论 ATRA对A375细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖关系.ATRA可能通过Fas信号转导途径诱导A375细胞凋亡.     

维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞增殖的影响

目的 观察全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对甲状腺鳞癌细胞株SW579诱导分化作用中细胞增殖的影响.方法 以终浓度为10-7、5×10-7、10-6、5×10-6、10-5 mol/L的全反式维甲酸作用SW579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;采用MTT比色法测定细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期.结果 全反式维甲酸能使细胞趋向良性分化,抑制了肿瘤细胞增殖,使细胞滞留在S期.结论 全反式维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579有剂量依赖性的增殖抑制作用,并且在低浓度时(10-7、5×10-7、10-6 mol/L)可能对细胞具有诱导分化作用.     

全反式维甲酸诱导HL60细胞凋亡及相关信号途径的改变

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)诱导早幼粒细胞白血病细胞株(HL60细胞)凋亡及其分子机制。方法 HL60细胞经ATRA诱导不同时间，用活细胞记数法检测细胞增殖情况；用流式细胞术(FCS)检测HL60细胞凋亡及细胞周期的改变；用核酸提取及电泳技术检测细胞DNA分子的变化；用透射电镜技术观察了凋亡细胞的结构改变；用Western blot技术检测了ATRA诱导HL60细胞与凋亡有关的分子改变。结果 ATRA诱导HL60细胞第3天出现细胞增殖抑制且FCS发现细胞出现S期阻滞，开始出现凋亡，第5天出现明显的细胞增殖抑制及更高的凋亡比例，核酸电泳发现DNA“梯带”现象；对照组细胞在透射电镜下核大而圆，折光性低，染色质均匀；而ATRA处理5d的细胞出现核固缩、染色质浓缩边集及出现凋亡小体。同时细胞内ATRA核受体在诱导第3天开始表达增加，相应地与细胞凋亡相关的酶——半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)也表达增加，而磷酸化的Erk／STAT水平明显下调。结论 ATRA可以诱导HL60细胞发生凋亡，其机制可能为：ATRA诱导细胞后，RAR信号途径被激活，导致与凋亡相关的信号途径被激活(Caspase3表达上调)，而与细胞增殖相关的信号途径被阻断(p-Erk／p-STAT水平下降)，引起细胞增殖阻滞，发生凋亡。     

全反式维甲酸诱导K562细胞分化过程中线粒体铁蛋白表达的研究

目的 研究K562白血病细胞在全反式维甲酸(ATRA)诱导分化过程中线粒体铁蛋白(MtF)、运铁蛋白受体1(TfR1)和铁蛋白(Fn)mRNA表达水平的变化情况,探讨MtF在白血病细胞增殖和铁代谢方面的作用.方法 K562细胞加入ATRA(终浓度1 μmol/L)中诱导培养,分别于第1、3、5 d收集细胞,分别进行:①瑞士染色观察各时间点的细胞形态;流式细胞学检测细胞表面分化抗原CD13的表达;②Trizol法提取各时间点细胞的RNA,通过半定量RT-PCR方法 检测各时点MtF、TfR1和Fn基因的表达水平.同时设未用ATRA诱导培养的K562细胞为对照组.结果 1 μmol/L的ATRA可诱导K562细胞向粒系细胞分化,诱导培养第5 d,细胞表面CD13的表达水平增加,诱导分化率为21.2%,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).诱导分化前K562细胞即有MtF mRNA表达,但随细胞诱导时间的延长,MtF和TfR1 mRNA表达呈下降趋势,诱导分化第5 d的表达水平分别为诱导分化前的86.5%和79.2%;而Fn mRNA的表达呈上调趋势,诱导分化第5 d表达水平为诱导分化前的1.21倍.结论 ATRA诱导K562细胞向粒系细胞分化过程中,MtF和TfR1 mRNA表达下调,而Fn mRNA表达上调,这种协调变化有助于降低细胞通过TfR1介导的铁摄取,从而抑制或影响细胞增殖潜能.     

人白血病细胞 HL-60凋亡启动时相的亚细胞蛋白质组学研究

目的：建立全反式维甲酸（ ATRA）诱导HL-60细胞凋亡启动模型,分析凋亡启动时细胞总蛋白和亚细胞组分蛋白的表达情况。方法：体外培养HL-60细胞,氮唑蓝（ MTT）比色法检HL-60细胞测增殖活性,流式细胞术（ FCM）检HL-60细胞测细胞凋亡和细胞周期分布;高速离心法分离对照组与凋亡启动时相的HL-60细胞核、膜和细胞器以及细胞质等组分蛋白;双向电泳（2-DE）HL-60细胞总蛋白和亚细胞组分蛋白,图像分析软件分析2-DE图谱,筛选差异表达蛋白,并进行液相色谱串联质谱（ LC- MS/MS）鉴定。结果：ATRA明显抑制HL-60细胞增殖,并随浓度、时间的增加,抑制作用也越显著;以1μmol/L的ATRA诱导HL-60细胞48 h早期凋亡比例为13.21％,细胞形态也存在明显变化;筛选出22个差异表达蛋白点,其中5个蛋白在凋亡启动时表达上调,15个蛋白表达下调,2个蛋白只在凋亡启动时表达;它们的功能主要涉及与细胞凋亡相关的蛋白,与细胞分化、增殖相关的蛋白和其它蛋白。结论：1μmol/L的ATRA诱导HL-60细胞生长48 h,成功建立细胞凋亡启动模型;凋亡启动时相的HL-60细胞质、膜和细胞器以及细胞总蛋白的表达都存在差异,这些差异表达蛋白可能在细胞凋亡启动时起重要作用。     

诱导分化药物对肺癌细胞肿瘤相关基因的影响

目的 通过观察诱导分化浓度的全反式维甲酸、亚硒酸钠、三氧化二砷对肺腺癌细胞A549的肿瘤相关基因的影响,探讨诱导分化药物对肺癌细胞的作用机制.方法 体外培养肺癌A549细胞,设全反式维甲酸、亚硒酸钠和三氧化二砷处理组及对照组,药物处理24 h后以Westem Blot和Rt-PCR检测基因caspase3、p21、RARα、bcl-2、cyclinD3和nm23的表达.结果 caspase3、RARα和nm23在亚硒酸钠、三氧化二砷组中表达上调;p21在全反式维甲酸、三氧化二砷组中表达上调.bcl-2和cyclinD3在3个处理组中表达下调.结论 全反式维甲酸、亚硒酸钠和三氧化二砷能引起A549肿瘤相关基因表达的改变,诱导分化药物对肺癌的作用机制表现为增殖抑制、促进凋亡、周期阻滞、转移抑制、诱导分化敏感度增加等多方面的改变.