石蜡组织提取DNA 4种方法的比较

目前，从石蜡包埋组织中提取DNA在数量和质量上都不能令人满意^[1]。而按常规酚一氯仿法抽提DNA，过程长，有毒性，用于PCR扩增，成功率较低。我们应用4种不同方法从石蜡包埋人胃癌组织中提取DNA，用于PCR扩增，从中摸索出一个简便，经济，实用的方法，现报道如下。     

Survivin与PLK1在T细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的 通过对T细胞淋巴瘤中Survivin、PLK1表达的研究,并结合临床病理参数,探讨Survivin、PLK1与T细胞淋巴瘤及其生物学行为的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测50例T细胞淋巴瘤及30例反应性增生淋巴组织中Survivin、PLK1的表达.结果 T细胞淋巴瘤中Survivin、PLK1蛋白表达均显著高于反应性增生淋巴组织中的表达(P＜0.05).Survivin、PLK1蛋白在不同恶性程度及临床分期组间的表达差异具有统计学意义(P＜0.05).此外,T细胞淋巴瘤中Survivin、PLK1蛋白在不同性别、年龄、发生部位中的表达差异均无统计学意义(P＞0.05).经Spearman等级相关分析发现Survivin、PLK1蛋白在T细胞淋巴瘤中的表达呈正相关(P＜0.01).结论 Survivin、PLK1在T细胞淋巴瘤中呈高表达,且与肿瘤恶性程度与临床分期相关,与性别、年龄、发生部位无关.两者在T细胞淋巴瘤中的表达呈正相关.Survivin和PLK1的高表达可能是T细胞淋巴瘤发生发展的重要生物学标志.     

LRRC4通过SDF-1α/CXCR4生物学轴抑制脑胶质瘤细胞侵袭迁移能力

目的:探讨LRRC4(leucine-rich repeats containing 4)通过SDF-1 α/CXCR4(stromal cell-derived factor-1 α/CXC receptor 4)对脑胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响.方法:将LRRC4基因转入脑胶质母细胞瘤U251细胞,分别通过RT-PCR实验、黏附实验、侵袭实验、细胞运动试验、划痕标记荧光染料示踪实验,研究SDF-1α干预前后LRRC4对U251细胞迁移能力的影响.结果:将LRRC4基因转入脑胶质瘤细胞U251,通过RT-PCR实验发现CXCR4的表达下调.用CXCR4的特异配体SDF-1α干预后,肿瘤黏附内皮实验、侵袭实验、细胞迁移实验、划痕标记染料示踪实验表明脑胶质瘤细胞迁移能力增强,LRRC4可以抑制细胞的这种侵袭迁移能力.SDF-1 α能够改善细胞间的通讯能力,LRRC4可以进一步增强这种通讯能力.结论:SDF-1 α/CXCR4的相互作用可以增强脑胶质瘤细胞U251的运动迁移能力,LRRC4基因可以通过调控SDF-1α/CXCR4生物学轴有效地抑制肿瘤细胞的侵袭迁移能力.     

肿瘤细胞中p53与PLK1相互关系的研究进展

抑癌基因p53是基因组的守护者和准确进行有丝分裂的关键,但在大部分人类肿瘤中由于TP53的突变或p53信号转导通路的失活导致p53功能丢失。PLK1,是有丝分裂和胞质分裂关键性的调控因子,在大部分肿瘤中高表达,并且它的表达常与不良预后相关,提示其可作为治疗靶点的潜能。p53和PLK1之间相互作用,呈负向调节。p53抑制PLK1启动子的转录,而PLK1通过直接结合于p53抑制其功能或通过促进其降解而灭活。PLK1抑制剂以所有迅速分裂的细胞为目标,无论是肿瘤细胞还是增殖的正常细胞。PLK1抑制剂治疗后,在具有野生型p53的肿瘤细胞中p53被激活且诱导强烈的细胞凋亡,然而p53失活的肿瘤细胞中有丝分裂阻滞仅有少量细胞凋亡。此外,具有p53活性的细胞可免受PLK1抑制的细胞毒性。因此,在p53缺失或突变的肿瘤细胞中予以PLK1抑制剂抗肿瘤治疗,并恢复p53功能,将成为有效地抗肿瘤治疗策略。     

重组人canstatin的克隆、表达及其活性鉴定

目的: 克隆并表达canstatin基因，初步检测其抑制血管生成的活性。方法: 采用RTPCR方法从人胚肝组织中钓取canstatin cDNA，克隆入pMD18T载体中，并测序鉴定。在QIA表达系统中表达，Ni柱亲和层析纯化。进行生物学活性鉴定。结果: 经序列分析所获684 bp人canstatin基因与报道一致，重组进pQE30表达载体，IPTG诱导表达并纯化成功，表达产物能明显抑制血管生成。结论: 成功构建人canstatin cDNA克隆和表达载体并在大肠杆菌M15中高效表达。纯化回收产物在鸡胚绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane,CAM）实验中具有明显抑制血管生成活性     

胃癌染色体7q31.1杂合性缺失的精细作图及其相关基因探讨

目的 显微切割胃癌细胞检测染色体7q31.1区域的杂合性缺失(LOH),绘制胃癌7q31.1区域等位基因缺失图谱,确定其常见最小缺失区域,揭示胃癌细胞的分子遗传学改变,分析7q31.1杂合性缺失与胃癌临床病理特征的关系.方法 在胃癌组织石蜡切片上行显微切割获得胃癌细胞.采用Chelex-100方法分别抽提切割的胃癌细胞和相应正常对照细胞的DNA.利用高密度微卫星标志结合PCR技术,检测胃癌染色体7q31.1杂合性缺失,绘制胃癌染色体7q31.1等位基因的缺失图谱,确定其常见最小缺失区域.结果 胃癌染色体7q31.1至少有一个位点存在杂合性缺失者21例,占70.0%(21/30);D7S2459、D7S523、D7S2502、D7S486、D7S480、D7S650、D7S2486各位点杂合性缺失频率分别为10.0%、6.7%、23.3%、43.3%、26.7%、26.7%、20.0%;缺失图谱分析显示常见最小缺失区域位于D7S2502～D7S480之间.统计学分析表明这一区带微卫星位点的等位基因缺失阳性率与患者年龄、性别、原发灶位置、病理分期、分化程度以及淋巴结转移不相关(P>0.05).结论 胃癌染色体7q31.1常见最小缺失区域在D7S2502～D7S480之间,在D7S486附近可能存在与胃癌相关的抑癌基因.     

胃癌、胃淋巴瘤与EB病毒感染的相关性研究

目的对胃癌、胃淋巴瘤中EB病毒（EBV）的感染情况进行检测和分析,探讨EBV感染可能与胃肿瘤的病因关系。方法采用原位分子杂交（ISH）技术检测109例胃癌和30例胃淋巴瘤组织中EBV编码的小RNA（EBER）,确定EBV在胃癌和胃淋巴瘤细胞中的存在。结果EBER阳性存在于胃癌细胞核和胃淋巴瘤细胞核内。胃癌组织中EBER阳性率为11.0%（12例/109例）,胃淋巴瘤组织中EBER阳性率为30.0%（9例/30例）。胃淋巴瘤EBV阳性率高于胃癌（P=0.022）。但EB病毒感染在病人不同年龄、性别、肿瘤部位、组织学类型、临床分期和淋巴结转移中的差异没有统计学意义（P〉0.05）。结论EB病毒感染可能参与某些胃癌和胃淋巴瘤的发生与进展。     

不同部位和类型恶性淋巴瘤与EBV感染相关性研究

目的：对不同部位和类型的恶性淋巴瘤中EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）的感染情况进行检测和分析，探讨EBV感染可能与恶性淋巴瘤的病因关系。方法：收集恶性淋巴瘤组织标本127例，其中鼻腔及鼻咽淋巴瘤60例，胃淋巴瘤30例，表浅淋巴结淋巴瘤37例。组织病理学诊断为非霍奇金淋巴瘤（NHL）108例，霍奇金淋巴瘤（HD）19例。采用原位分子杂交方法检测淋巴瘤组织中EBV编码的小RNA（EBER），确定EBV在恶性淋巴瘤细胞中的存在。结果：108例NHL（包括鼻腔及鼻咽、胃、表浅淋巴结部位），EBER检测46例阳性，阳性率为42.6%。鼻腔/鼻咽NHL的EBER阳性率为58.3%（35/60），其中NK/T细胞淋巴瘤29例，EBER阳性19例，阳性率为65.5%（19/29）；B细胞淋巴瘤31例，EBER阳性16例，阳性率为51.6%（16/31）。胃部NHL的EBER阳性率为30.0%（9/30），其中B细胞淋巴瘤28例，EBER阳性9例，阳性率为32.1%（9/28）；T细胞淋巴瘤2例，均为EBER阴性。表浅淋巴结NHL18例，EBER阳性2例，阳性率为11.1%（2/18）；表浅淋巴结HD19例，EBER阳性5例，阳性率为26.3%（5/19）。结论：本组资料非霍奇金淋巴瘤EBV感染阳性率（42.6%）略高于霍奇金淋巴瘤EBV感染阳性率（26.3%），差异无显著性意义（P〉0.05）。鼻腔及鼻咽NHL的EBV感染阳性率（58.3%）高于胃NHL（30.0%）和表浅淋巴结NHL（11.1%）（P〈0.05）。研究提示各类型淋巴瘤与EBV感染均有密切关系，且存在部位依赖性。     

PLK1在肿瘤发生中的研究进展

Polo样激酶1(polo-like kinase1, PLK1)属于PLKs家族成员, 是一种广泛存在于真核生物中的丝/苏氨酸蛋白激酶, 因在细胞周期中起重要作用而受到广泛关注。研究发现, PLK1在人类大多数肿瘤中高表达, 并与肿瘤细胞的增殖及患者的预后密切相关。临床前期结果表明干扰PLK1的表达能显著抑制包含非小细胞肺癌、淋巴瘤、结直肠癌在内的多种肿瘤的生长, 且对正常细胞无明显影响。因此, PLK1被认为是一个有良好应用前景的恶性肿瘤治疗新靶点。目前, 针对PLK1的一些低分子抑制剂(如BI2536)已经进入了临床试验阶段。然而, 尚未在临床水平得到证实。由于缺乏临床证据, 人们对PLK1的作用产生了质疑, 即PLK1在肿瘤细胞中的高表达是直接参与细胞的恶性转化还是仅仅作为肿瘤细胞大量增殖的一个指标。本文主要通过PLK1与细胞周期、原癌基因及肿瘤相关信号通路之间的关系来探讨PLK1在肿瘤发生、发展中的作用。     

EB病毒转化淋巴母细胞LMP-1,LMP-2A及LMP-2B的表达

目的了解EB病毒转化淋巴母细胞LMP-1,LMP-2A,LMP-2B基因的表达改变。方法采用实时定量PCR方法分别检测并比较同一献血员来源的正常人淋巴细胞与EBV转化淋巴母细胞前后LMP基因(LMP-1、LMP-2A、LMP-2B)的表达改变。采用Western bolt检测LMP-1蛋白表达。结果 LMP-1、LMP-2A、LMP-2B基因在转化淋巴母细胞比在正常人淋巴细胞的表达分别上调863倍、1 763倍、90 078倍。Western bolt检测LMP-1蛋白在转化淋巴母细胞中的表达比正常人淋巴细胞明显增强。结论在EBV转化淋巴母细胞过程中LMP-1、LMP-2A和LMP-2B表达均上调。