雌激素受体β亚型的表达和定位对性功能的调节作用

目的为进一步研究雌激素受体β亚型( ERβ)对小鼠睾丸发育及性功能调节的作用,观察了出生后 1,2,3,4周的小鼠睾丸和成年小鼠睾丸中 ERβ的表达和分布情况.方法采用出生 1,2,3,4周雄性昆明小鼠的发育过程以及成年雄性昆明小鼠各 2只 ,分成 2组 ,第 1组 4只 ,第 2组 4只.采用免疫组织化学染色和免疫荧光组织化学染色方法检测小鼠睾丸中 ERβ.结果小鼠睾丸中 ERβ的表达随出生时间增长而呈逐渐上升的趋势,在出生后 1,2周的小鼠睾丸中 ERβ主要分布于睾丸间质细胞,在出生后 3,4周小鼠睾丸中 ERβ分布于睾丸间质细胞胞质和细胞核,核仁呈阴性,成年小鼠睾丸间质细胞中 ERβ分布较幼年小鼠密度增加.结论 ERβ在小鼠睾丸发育过程中可能作为一种特异性受体通过睾丸间质细胞影响和调节雄性激素的分泌进而对生精过程和精子的成熟有重要的调节作用.     

羟基喜树碱对异基因大鼠心脏移植物中细胞因子mRNA的影响

为探讨异基因大鼠心脏移植物内细胞因子的动态变化，并了解羟基喜树碱（HCPT）对细胞因子表达的影响。建立大鼠腹部心脏移植模型，分为同基因移植组（SD-SD）、异基因移植组（Wistar-SD)、异基因移植Wistar-SD加HCPT治疗组，移植后1、3、5、7、14天处死受者，切取脾脏及移植的心脏，应用RT-PCR法检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10mRNA表达。结果显示，同基因移植组术后1天可测到细胞因子表达，表达量低，术后5天不能测到上述细胞因子表达；IL-2、IFN-γ在异基因移植组术后7天达高峰，HCPT治疗组术后3天达高峰，峰值显著低于单纯异基因移植组，IL-4、IL-10在异基因移植组术后5天达高峰，HCPT治疗组术后7天达高峰，峰值显著高于单纯异基因移植组，提示HCPT治疗可使移植物存活时间延长，IL-2、IFN-γ表达量降低、IL-4、IL-10表达量升高。     

粒细胞弹性蛋白酶表达与肾癌预后的关系

目的: 探讨肾癌多型核粒细胞弹性蛋白酶的表达与肾癌预后的关系.方法: 应用酶联免疫吸附实验研究肾癌组织中多型核粒细胞弹性蛋白酶的表达;病理切片CD34染色,检测肾癌细胞对微血管的侵袭;检测肾癌多型核粒细胞弹性蛋白酶(polymorphonuclear leukocyte elastase ,PMNE)启动子基因重复序列突变,应用pGL-3 Basic载体分别构建突变型及野生型PMNE荧光素酶真核表达载体(pGL/PMNE), 分别测定荧光素酶活性,探讨多型核粒细胞弹性蛋白酶启动子重复序列突变的意义.结果: 59例肾癌组织中多型核粒细胞弹性蛋白酶的表达明显高于22例正常肾组织(P<0.01);肾癌组织中多型核粒细胞弹性蛋白酶的表达与肿瘤Fuhrmans分期密切相关(P<0.01);肾癌组织中癌细胞对微血管的侵袭与多型核粒细胞弹性蛋白酶的表达关系密切(P<0.01);59例肾癌组织中发现1例多型核粒细胞弹性蛋白酶启动子重复序列突变:-879/-716TCCA,荧光素酶活性试验显示该突变对其下游基因表达有明显增强作用.结论: 多型核粒细胞弹性蛋白酶的表达与肾癌的临床病理学表现关系密切,多型核粒细胞弹性蛋白酶启动子重复序列-879/-716TCCA突变可能与肾癌PMNE的表达及侵袭能力有关.多型核粒细胞弹性蛋白酶在肾癌的发展过程中具有重要的作用.     

Caspase—6诱导肾癌细胞株GRC—1细胞凋亡的研究

目的 探讨Caspase-6在肾癌细胞株GRC－1中的表达及其对肾癌细胞的凋亡诱导作用。方法 应用RT－PCR方法检测了肾癌细胞株GRC－1中Caspase-6基因的表达水平；以腺病毒adv5作载体，构建了含Caspase-6基因的转基因载体，用脂质体包裹法转染GRC－1细胞株，用RT－PCR方法检测转染后GRC－1细胞中Caspase-6基因的表达。MTT法检测转染Caspase-6对GRC－1细胞株生长的影响。结果 肾癌细胞株GRC－1中未检出Caspase-6表达。RT－PCR法证实转染Caspase-6后GRC－1中Caspase-6表达明显，MTT检测显示对GRC－1细胞的生长有抑制作用，通过形态学观察及DNA电泳证实这种作用主要是通过促进细胞凋亡而实现的。结论 Caspase-6对肾癌细胞的生长有抑制作用，并可诱导肾癌细胞凋亡。     

抑癌基因PTEN对人前列腺癌细胞系PC-3的作用

目的：研究抑癌基因PTEN对人前列腺癌细胞系PC—3细胞生长、粘附、细胞周期、超微结构的影响．方法：利用阳离子脂质体LipofectAmine2000介导，分别将含PTEN的逆转录病毒载体PBabe—PTEN—puro及空载体PBabe-puro转入PC—3细胞，观察转染前后细胞的生长、粘附、超微结构、细胞周期改变情况．结果：将PTEN转入后，细胞生长明显受到抑制，生长抑制率为83％；同质型粘附率下降；细胞超微结构失去部分恶性表型特征；细胞周期由G1→S0期受抑制，并且出现一个小的凋亡峰．结论：PTEN可以明显的抑制PC—3生长、粘附．因而PTEN可能会在前列腺癌基因治疗上起一定的作用．     

羟基喜树碱诱导大鼠肾脏移植免疫耐受机制的探讨

目的 :以羟基喜树碱 (HCPT)和环孢素A(CsA)诱导异基因大鼠肾脏移植免疫耐受 ,并探讨免疫耐受的形成机制 .方法 :以近交系DA大鼠为供者 ,近交系Lewis大鼠为受者行同种异体原位肾脏移植 .移植后受者大鼠接受不同剂量HCPT ,CsA治疗或二者联合应用 .应用RT PCR方法检测移植物内及受者脾内细胞因子mRNA表达情况 .结果 :各组移植后存活时间显著长于对照组 .C组 (HCPT 2mg-1·kg·d-1)中 4 /10和E组 (HCPT 1 0mg·kg-1·d-1+CsA 10mg·kg-1·d-1)中 5 /10受者大鼠形成特异性免疫耐受 .耐受组IL4 ,IL10mRNA表达明显高于排斥组 ,而IL2 ,IFNγ明显低于排斥组 .受者脾内细胞因子表达量近似于移植物内 .结论 :大剂量HCPT或小剂量HCPT与CsA合用可诱导异基因大鼠肾脏移植免疫耐受 .细胞因子偏向Th2亚类是免疫耐受形成机制之一 .受者脾内细胞因子mR NA表达与移植物内表达近似     

PR-AⅡ、PGI_2-TXA_2在ESWL后高血压中的作用

通过对60例患者血液标本的检测,发现体外震波碎石术(ESWL)后出现高血压的患者其血浆肾素(PR)—血管肾张素Ⅱ(AⅡ)系统活性及血栓素A_2(TXA_2)浓度明显高于ESWL后血压正常者,而血浆前列腺素(PGI_2)浓度则正好相反。认为PGI_2合成减少和TXA_2合成相对增多,PGI_2/TXA_2比率下降,导致PR—AⅡ系统活性升高,血管壁对PR—AⅡ系统的敏感性增加,是ESWL后患者出现高血压的主要原因。     

非休眠期成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞用于核移植构建重组胚

目的研究非休眠期成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞作为供体,以体外成熟去核兔卵母细胞作为受体进行核移植构建重组胚胎的可行性及囊胚形成率. 方法首先利用新西兰兔骨髓和脂肪为来源分别培养骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞,然后用他们作为核供体,采用卵细胞胞质内直接注射法构建重组胚胎,7 d后比较囊胚形成率. 结果核移植操作后卵细胞存活率达80.0%,骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞作为供体重组胚胎囊胚形成率分别为88/522 (16.9%)和73/464 (15.7%), (P>0.05, Yates corrected). 结论处于非休眠期的成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞移植到去核卵母细胞后能够进行早期胚胎发育,两者囊胚形成率无明显差别.     

转染的FasL基因诱导GRC-1细胞凋亡的形态学观察

目的：构建含FasL基因的腺病毒载体，转染肾癌GRC－1细胞株的影响，方法：以腺病毒作载体，把FasL基因克隆入腺病毒载体，构建成含FasL基因的转基因载体并酶切鉴定，用脂质体包裹法把含FasL基因的腺病毒载体转染GRC－1细胞株，用RT－PCR方法证实转染后有无FasL基因表达，采用电镜观察GRC－1细胞形态学变化。结果：酶切鉴定证实含FasL基因的转基因载体构建成功；RT－PCR显示转染后GRC－1细胞株FasL基因表达水平显著高地未转染细胞株（P＜0．01）；肾癌细胞株GRC－1细胞FasL基因72h后，在光镜下可见细胞体积缩小，生长不良，染色质浓缩，密度增高，胞核中出现颗粒样物质，生长不良，染色质浓缩，密度增高，胞核中出现颗粒样物质，电镜下可见凋亡小体。结论：成功构建了FasL基因的转基因载体，转染FasL基因可诱导肾病GRC－1细胞凋亡。