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1.
2.
3.
G3是由基因工程技术构建、在大肠杆菌中高效表达获得的由GM-CSF和IL-3组成的融合蛋白,能刺激造血细胞的增殖、分化和调节免疫应答。G3的生物学活性与GM-CSF和IL-3相比有明显提高[1]。本文用抗G3单抗(MG31)分别与CN-Br-Sepharose4B和rProteinA-SepharoseFF偶联制备免疫亲和色谱(IAC)柱,对G3进行纯化,取得了满意的结果。1 材料和方法1.1 MG31单抗[2]的纯化 饱和硫酸铵溶液沉淀法。1.2 MG31-CNBr-Sepharose4B柱(… 相似文献
4.
茅莓总皂苷对局灶性脑缺血/再灌注大鼠的比较蛋白质组学研究 总被引:3,自引:2,他引:1
目的采用蛋白质组学技术研究茅莓总皂苷对脑缺血/再灌注大鼠脑组织差异蛋白的影响,进一步揭示茅莓总皂苷的脑保护作用及抗损伤修复机制。方法建立脑缺血/再灌注大鼠动物模型,分别提取蛋白质后进行2-DE电泳分离,应用相关软件比较分析,找出差异蛋白,酶切消化后进行肽指纹图谱分析,通过数据检索,初步鉴定差异蛋白质。结果与模型组比较,茅莓总皂苷组找到29个差异点,其中18个蛋白点表达上调,11个蛋白点表达下调,鉴定了其中7个蛋白。结论茅莓总皂苷对脑保护作用及抗损伤修复机制的机制是多个蛋白质共同参与的结果。 相似文献
5.
大鼠局灶性脑缺血脑组织的比较蛋白质组学研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的建立局灶性脑缺血模型,从蛋白质整体水平探讨脑缺血/再灌注的损伤机制。方法建立大鼠脑缺血2 h再灌注24 h的模型;提取脑组织总蛋白质,以双向电泳技术进行蛋白质分离,考马斯亮蓝染色,获得双向电泳图谱,利用专门的软件筛选出差异蛋白质,用MALDI-TOF-MS获得肽指纹图谱,MS-Fit数据库进行搜索,获得有关的蛋白质信息。结果局灶性脑缺血模型组与正常组脑组织的比较蛋白质组学研究。与模型组比较筛选出23个差异表达蛋白斑点,其中13个低表达,10个高表达,鉴定其中6个蛋白质,发现白细胞三烯A-4水解酶、促甲状腺激素释放激素降解胞外酶等与脑缺血相关的蛋白质。结论从蛋白质组学角度发现了一些与脑缺血相关的蛋白,有助于今后进一步研究脑缺血性损伤的保护机制。 相似文献
6.
目的:建立全反式维甲酸(All trans-retinoic acid,ATRA)诱导HL60细胞向粒系分化的模型,研究采用改良双向电泳条件对分化前后的细胞全蛋白进行分离分析,寻找差异表达蛋白.方法:采用全反式维甲酸对HL60细胞进行诱导分化.通过MTT、流式细胞技术分析细胞增殖情况和CD11b细胞表面分化抗原的表达,选择最适的药物浓度和诱导时间;再通过细胞化学染色对分化结果进行验证,构建分化模型.采用改良双向电泳分离技术对细胞全蛋白进行分离,运用PDQuest软件分析HL60细胞分化前后蛋白表达差异,并用基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(MALDI-TOF)对差异蛋白点进行分析.结果:ATRA明显抑制HL60细胞增殖,并随药物浓度的增加,抑制效果也越显著;2 μmol/L的ATRA连续作用HL60细胞5 d即有90%以上的细胞有粒系分化标志抗原CD11b的表达.细胞化学染色结果亦表明诱导后的HL60细胞向粒系分化.将分化前后的HL60细胞全蛋白经过改良双向电泳技术分离,PDQuest软件比对,MAIDI-TOF分析,发现有25个蛋白点仅在未分化凝胶谱中找到,有15个蛋白点仅在分化细胞蛋白表达谱中找到.其中有的是癌基因表达蛋白,有的是抑癌基因表达蛋白,还有的则参与凋亡过程等.结论:在选定的药物浓度和作用时间下,ATRA可以诱导HL60细胞向粒系分化.改良双向电泳技术对药物作用前后细胞蛋白的分离,可发现不同于传统双向电泳分离所得的蛋白结果. 相似文献
7.
目的:比较重庆垫江药用牡丹根不同取材部位高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的异同,为科学评价与有效控制牡丹皮质量提供新的依据和技术手段。方法:利用HPLC法(梯度洗脱)测定重庆垫江产牡丹根加工成的原丹皮、刮丹皮样品,并与全根和加工产生的木心、栓皮进行比较;采用国家药典委员会制定的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004A版)专用软件进行自动匹配、相似度计算和色谱数据分析。结果:同株牡丹根各取材部位样品指纹图谱共有峰达15个,总峰面积、共有峰面积之和均为栓皮>全根>原丹皮>木心>刮丹皮。不同部位各色谱峰的相对峰面积差异较大,除原丹皮与刮丹皮外各样品间的相似度均<0.9。结论:牡丹根不同部位的指纹图谱存在显著差异,通过指纹图谱可以区别原丹皮和刮丹皮,并可以鉴别木心是否抽出,从而判断牡丹皮样品的纯度。加工过程对牡丹皮质量影响很大,采挖牡丹根后应及时抽去木心加工成牡丹皮,建议保留栓皮,加工成原丹皮。加工过程中产生的木心含有牡丹皮的主要有效成分丹皮酚、芍药苷及其它多种化学成分,应进行综合利用。 相似文献
8.
目的:建立金属β-内酰胺酶IMP-1的表达,纯化和鉴定方法,并探讨实验条件对分离纯化的影响.方法:pET9a/d-IMP-1质粒转化至E.coli Competent BL21(DE3)Cell并在LB培养基中表达后,通过SP Sepharose离子交换柱,得到粗提物,浓缩后用Sephadex G-75凝胶柱进一步纯化,得到IMP-1的精提物,对纯化产物用SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS进行鉴定,同时用Nitrocefin作底物,测定纯化的金属β-内酰胺酶IMP-1的活性.结果:纯化的IMP-1具有较高的活性,能水解大多数抗生素.其米氏常数Km=9.28μmol/L;用MALDI-TOF-MS法测得的分子量为Mr=25111.9.结论:本文建立了金属β-内酰胺酶IMP-1的表达、纯化、鉴定方法,该法可用于其它的金属β-内酰胺酶的表达和纯化. 相似文献
9.
目的:建立茅莓总皂苷的含量测定方法.方法:通过对样品采用不同溶剂及不同提取方法所得的提取液显色后,以分光光度法测定总皂苷的含量.结果:本法测定的线性范围为22~176μg(r=0.9997);平均回收率为102.1%,RSD=2.82%(n=6);样品以70%乙醇回流提取所得的总皂苷含量最高.结论:该方法灵敏、可靠,显色后的样品比较稳定,可用于茅莓药材的质量控制及品质评价. 相似文献
10.
羟基喜树碱诱导SMMC-7721细胞凋亡时线粒体凋亡诱导因子的转位研究 总被引:4,自引:2,他引:2
目的研究羟基喜树碱诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡时线粒体凋亡相关蛋白凋亡诱导因子表达及从线粒体发生核转位的变化.方法用80 μg/ml羟基喜树碱作用于肝癌细胞株SMMC-7721后,用吖啶橙/溴化乙啶染色法观察细胞凋亡现象;用电子显微镜观察线粒体超微结构;分别用逆转录聚合酶链反应、Western blot检测凋亡诱导因子在mRNA与蛋白质水平表达的变化;用激光共聚焦显微镜观察凋亡诱导因子在细胞凋亡时从线粒体到核的迁移变化.结果 80μg/ml羟基喜树碱作用SMMC-7721细胞后,吖啶橙/溴化乙啶荧光双重染色可见细胞体积缩小、细胞皱缩、核碎裂等典型细胞凋亡形态学改变;超微结构观察发现线粒体肿胀;细胞凋亡时凋亡诱导因子在mRNA与蛋白质水平上的表达与对照组细胞相比没有明显变化,但凋亡诱导因子发生了从线粒体到核的迁移. 结论羟基喜树碱可以通过线粒体途径诱导人肝癌细胞发生凋亡;在线粒体凋亡途径中,线粒体凋亡相关蛋白凋亡诱导因子从线粒体释放并发生核转位可能与羟基喜树碱诱导细胞凋亡密切相关. 相似文献