抗尖吻蝮蛇蛇毒金属酶类共同基序IgY抗体的制备与研究

[目的]制备针对尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶类共同基序的IgY抗体,并对其中和蛇毒活性的作用进行研究.[方法]通过分析尖吻蝮蛇蛇毒各类金属蛋白酶类共有序列,设计合成与其酶活性密切相关且高度保守的抗原肽PT1和PT2;偶联复合物KLH-PT1、KLH-PT2免疫母鸡获得IgY抗体.采用ELISA和Western blot等方法对IgY效价及与尖吻蝮蛇蛇毒和短尾蝮蛇蛇毒的交叉反应特性进行初步研究;最后通过抗小鼠皮下出血实验对IgY中和活性进行评价.[结果]ELISA、Western blot结果表明,抗KLH-PT1、抗尖吻蝮蛇蛇毒IgY均可与尖吻蝮蛇蛇毒、短尾蝮蛇蛇毒发生交叉反应且后者显著强于前者;抗KLH-PT2 IgY在体外与尖吻蝮蛇蛇毒、短尾蝮蛇蛇毒无明显交叉反应,在体内抗出血实验中却表现出很强的中和毒性作用,并且显著优于前两者.[结论]通过设计金属蛋白酶共有序列抗原肽,制备了能与多种血循型蛇毒交叉反应的IgY抗体,这为制备特异、高效、低毒性且广谱的抗出血型蛇毒抗体奠定了基础.     

尖吻蝮蛇血凝酶在肾移植手术中的应用

<正>注射用尖吻蝮蛇血凝酶(HCA)是从尖吻蝮蛇蛇毒中提取的一种凝血酶。该酶有较好的止血作用,而且不影响血液中的凝血酶原和血小板数量,在正常血管内没有血小板凝聚作用,无血栓形成危险[1]。我院2010年1月至2012年1月对22例肾移植手术患者应用尖吻蝮蛇血凝酶治疗,取得了良好的疗效。现报道如下。临床资料1一般资料随机选取肾移植手术患者22例为HCA组,其中男14例,女8例,年龄28⁵8岁,平均43岁。另选取     

尖吻蝮蛇类凝血酶的研究现状

尖吻蝮蛇类凝血酶是我国正在研究的一种新止血药,其结构与以往的类凝血酶完全不同。目前的研究表明,该凝血酶具有良好的止血效果及广阔的临床应用前景。     

尖吻蝮蛇毒素组双向电泳和二维液相色谱研究

目的：初步研究尖吻蝮蛇蛇毒的蛋白质组分及其活性。方法：利用双向电泳和二维色谱（IEX＋HPLC）分析尖吻蝮蛇蛇毒蛋白质组，并制备分离样品研究蛇毒中酶和毒素活性。结果：双向电泳分离检测得到128种蛋白质，其中24种蛋白质丰度较高，73种为酸性蛋白质，加种为碱性蛋白质。二维色谱展现58种蛋白质，其中26种蛋白质丰度较高。初步活性研究表明，尖吻蝮蛇蛇毒蛋白质多数属于丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和磷脂酶A2家族，部分蛋白质可能属于去整合素家族。结论：双向电泳和二维色谱相互结合．有效分析了尖吻蝮蛇毒的蛋白盾组成和生物活性．     

注射用尖吻蝮蛇血凝酶不良反应1例

注射用尖吻蝮蛇血凝酶（HCA）是从尖吻蝮蛇中提取的蛇毒凝血酶,主要作用于纤维蛋白原促进凝血,常规用于外科手术浅表创面止血、消化道出血及胃肠息肉切除术后止血,具有止血效果好、不良反应轻、耐受好等特点.2013年12月11日收治HCA注射后过敏反应患者1例,患者经积极抢救无生命危险,现报告如下.     

尖吻蝮蛇毒类凝血酶抗实验动物血栓的效应

欧阳等对台湾尖吻蝮蛇毒进行分离纯化,并对类凝血酶组分进行系统研究后指出,类凝血酶具有去纤维蛋白原作用,能使血液产生低凝状态. 张洪基以及李麟仙等对大陆尖吻蝮蛇毒进行分离纯化,研究了“去纤酶”的体内抗凝血作用,对大鼠动静脉实验性血栓的形成有预防效应. 本文报导家兔静注尖吻蝮(Agkistrodn acutus)类凝血酶对体外血栓形成的影响进行研究,认为药效满意.     

尖吻蝮蛇毒去纤酶治疗视网膜静脉阻塞(附60例报告)

尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒纤维蛋白原酶是中国科学院昆明动物研究所从尖吻蝮蛇的毒液中提出的一种蛇毒酶新制剂,命名为尖吻蝮蛇毒去纤维蛋白酶,简称去纤酶。它有使纤维蛋白原下降的独特作用,产生非常显著的抗凝血效应。我们自1981年3月起至1984年7月的三年中用去纤酶对视网膜静脉阻塞患者60例61只眼进行治疗,现报告如下:     

尖吻蝮蛇毒去纤酶治疗视网膜静脉阻塞初步报告

视网膜静脉阻塞多发生于高血压、动脉硬化的老年患者。对本病的治疗至今方法不多,效果不理想,是眼科临床上有待进一步研究解决的课题。尖吻蝮蛇毒去纤酶是中国科学院昆明动物研究所,从尖吻蝮蛇的毒液中提纯出的一种蛇毒酶新制剂,命名为尖吻蝮蛇毒去纤维蛋白酶(以下简称去纤酶)。经药理实验证明去纤酶     

尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入Hela细胞的影响

目的：观察刚地弓形虫速殖子在来源于安徽省南部地区的尖吻蝮蛇蛇毒的作用下侵入Hela细胞的数量，探讨尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入Hela细胞的作用。方法：以不同浓度尖吻蝮蛇毒加入分孔培养的细胞中，于不同时间观察感染弓形虫速殖子细胞的数量。结果：尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞有明显的促进作用，弓形虫速殖子在蛇毒的作用下在同一时间内对宿主细胞侵入的数量均高于对照组(P＜0．05——P＜0．01)，但不同剂量的尖吻蝮蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞的作用差异无显著性(P＞0．05)。5．0μg/ml和0．25μg/ml的剂量分别比对照组平均提高了125．49％和81．37％。结论：尖吻蝮蛇毒可以明显增加弓形虫速殖子对宿主细胞的感染率。     

浙江尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶纯化及促凝活性

采用柱色谱等纯化方法从浙江尖吻蝮蛇凝血酶中提取获得一种类凝血酶（TQ-1）,采用RP-HPLC、MALDI-TOF、SDS-PAGE、等电聚焦电泳、Edman降解法对其进行了结构确证,并对其体内、外凝血活性进行测定。纯化所得TQ-1纯度98.5%,相对分子质量为30 522.95,SDS-PAGE分析其为一种单链蛋白,等电点为4.5,N末端氨基酸序列为VIGGNECDTNEHRFL。体外凝血活性为900U/mg,小鼠体内凝血试验结果表明：TQ-1凝血活性与阳性对照药巴曲亭相似。TQ-1为一种未见报道的尖吻蝮蛇类凝血酶,具有较高的开发价值。     

注射用尖吻蝮蛇凝血酶Ⅱa期临床应用研究

目的 评估注射用尖吻蝮蛇凝血酶的疗效和安全性,探索并确定注射用尖吻蝮蛇凝血酶的有效剂量.方法 腹部中等手术病例45例随机分为1 U剂量组、2 U剂量组和空白对照组,两试验组分别于手术前30 min缓慢静脉给予1 U和2 U尖吻蝮蛇凝血酶,空白对照组不作任何处理,评价注射用尖吻蝮蛇凝血酶疗效并观察其不良反应.结果 1 U和2U两试验组切口出血量、切口单位面积出血量均较空白对照组小,差异有统计学意义(P＜0.05);切口出血时间两试验组较空白对照组小,但差异无统计学意义(P＞0.05);2 U剂量组切口单位面积出血量较1 U剂量组小,差异有统计学意义(P＜0.05);不良反应3组无统计学意义.结论 1 U和2 U剂量的尖吻蝮蛇凝血酶对腹部手术切口均有一定止血作用,且2U剂量较1 U剂量明显.两试验剂量用药均安全.     

尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA序列抗原位点分析及免疫保护效果观察

目的采用生物信息学方法分析尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA序列的关键抗原位点,并观察根据这些位点设计合成的新型免疫原的免疫保护效果。方法扩增尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA序列,采用Jameson-Wolf方法和ClustalX软件结合的生物信息学方法分析其抗原位点,人工合成筛选的抗原位点序列,并连接到pIRESneo表达载体,3次(0、2、4周)对BALB/c小鼠进行核酸免疫,ELISA法测定免疫后机体抗体水平,出血中和实验和攻毒实验初步观察其免疫保护效果。结果生物信息学方法分析得到6个关键抗原位点(MPA-1～MPA-6);ELISA法检测抗血清结果表明,抗原位点序列诱导小鼠产生的抗血清相对未免疫的小鼠血清稀释100倍后仍能表现出阳性结果;出血中和实验和攻毒实验表明,将抗原位点序列免疫小鼠可以诱导机体产生免疫反应,使体内产生抗体,能有效中和蛇毒,从而对尖吻蝮蛇蛇毒引起的出血有防护作用。结论用生物信息学方法成功获得尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA序列的6个关键抗原位点,针对这些位点设计合成的新型免疫原展示出初步免疫保护效果。     

压电免疫传感器阵列检测尖吻蝮蛇毒的初步研究

目的 探讨以压电传感阵列技术榆测尖吻蝮蛇毒的可行性.方法 构建2×5的AT切向、基频10 MHz的石英晶体微阵列,将尖吻蝮蛇毒抗体巯基化,通过自组装技术固定在石英晶体金膜电极表面,检测不同浓度的尖吻蝮蛇毒标准液.结果 尖吻蝮蛇毒压电免疫传感器阵列上,最适抗体固定浓度为3 μg/ml,尖吻蝮蛇毒与相应抗体反应时间为40 min,检测尖吻蝮蛇毒最低浓度为0.1μg/ml,蛇毒浓度在0.1～4.0μg/ml范围时,与晶体频率变化之间呈良好的线性关系.结论 采用压电免疫传感器阵列检测尖吻蝮蛇毒响应特性良好,具有灵敏度高、操作简单、不需标记等优点,是实现快速仪器化检测蛇伤的可能途径.     

蛇毒类凝血酶的研究进展

自1936年Klobusitzki和Konig首次从美洲矛头蝮蛇(Bothrops jararaca)蛇毒中获得部分纯化的类凝血酶以来,迄今已发现三十余种蛇毒中含有类凝血酶组份,并有二十余种先后得到分离和纯化。尤其是近年来,有关蛇毒类凝血酶分子结构及酶学性质的研究取得了很大进展,部分已作为诊断试剂及治疗药物广泛地应用于临床。兹就近年来蛇毒类凝血酶的研究进展作一简要综述。     

尖吻蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化及氨基酸序列测定

目的:从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化出高纯度的纤溶酶并对其进行初步性质研究和氨基酸序列分析。方法:采用DEAE-Sepharose FF离子交换和两次Superdex75PG凝胶过滤,从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出可直接溶解纤维蛋白原的蛋白酶。结果:分离到的纤溶酶相对分子质量为25kD,HPLC分析纯度在97%以上,氨基酸序列分析其N末端为MSTEF QRYME IVVNHS MVKKY NGDSD KIKAW。结论:采用此工艺可从尖吻蛇毒中分离出高比活的纤溶酶,为进一步研究其药理作用奠定了基础。     

蕲蛇酶注射液临床应用进展

蕲蛇酶注射液是以武夷山脉尖吻蝮蛇的蛇毒为原料,经过用高科技生物工程技术,从蕲蛇毒中分离、纯化、精制而得的最新一代的凝血酶样酶,具有抑制血栓、溶栓、改善微循环等作用,临床主要用于急性脑梗死及周围血管疾病的治疗.近年来,临床应用证实蕲蛇酶注射液疗效确切、不良反应少等,因而得到广大医务工作者的认可,在临床上得到广泛的推广和应用.     

中国福建尖吻蝮蛇蛇毒类凝酶止血作用的实验研究

目的：研究中国福建尖吻蝮蛇蛇毒类凝酶止血作用及其作用机制。方法：用断尾法测小鼠出血时间,观察止血剂量对家兔全血凝固时间及纤维蛋白原含量的影响。结果：蛇毒类凝酶在0．0001－0．0100kU/kg可使小鼠出血时间明显缩短,而当剂量增大到3．0000kU/kg时,则显著延长小鼠出血时间。其0．0004－0．0036kU/kg剂量能使家兔全血凝固时间明显缩短,降低纤维蛋白原的含量。结论：中国福建尖吻蝮蛇蛇毒类凝酶在小剂量时可作为止血药,它可能通过适度降低纤维蛋白原的含量,缩短出凝血时间而发挥其止血作用。     

长白山白眉蝮蛇毒类凝血酶的分离纯化

目的 建立一种分离纯化长白山白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的方法.方法 将长白山白眉蝮蛇蛇毒溶解后离心,取上清进行阴离子交换层析,所得蛋白进行分子筛层析.提纯的蛋白用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定及相对分子量测定.测定酶的N-末端氨基酸序列.结果 经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈单一区带,相对分子量为35.5kDa.N-末端氨基酸序列分析表明其N-末端氨基酸序列与立止血中巴曲酶N-末端氨基酸序列基本一致.提取率约为5mg类凝血酶/g蛇毒.结论 用上述方法可制得高纯度的类凝血酶.     

尖吻蝮蛇血凝酶临床止血作用及安全性研究进展

尖吻蝮蛇血凝酶( hemocoagulase agkistrodon, HCA)(商品名：苏灵)是从我国华南尖吻蝮蛇(俗称五步蛇)体内的毒液提炼和研制而成,所提取的单一组分血凝酶纯度高达99%,是国际上第一个达到如此高纯度的蛇毒血凝酶产品。2002年8月获得国家食品药品监督管理局( SFDA )颁发的药物临床研究批件并进入临床试验研究阶段,现将近年对尖吻蝮蛇血凝酶止血作用及用药安全性的研究进展综述如下。     

尖吻蝮蛇凝血酶对胸部手术切口止血有效性及凝血安全性的临床研究

目的:评价尖吻蝮蛇凝血酶在胸部手术切口的止血作用,及其对机体凝血功能的影响和安全性。方法:采用双盲单模拟、安慰剂平行对照和多中心的研究方法,将入选研究的120例随机分为研究组(60例。术前15 min静注尖吻蝮蛇凝血酶2 U)和对照组(60例。术前15 min静注模拟尖吻蝮蛇凝血酶2 U),并对手术切口、止血时间、出血量、单位面积出血量,以及机体凝血功能和安全性指标等进行观察。结果:研究组平均止血时间[(97±16.5)s]、切口平均出血量[(1.89±0.25)g]及平均单位面积出血量[(0.48±0.16)g/cm2]较对照组[(185.0±27.5)s、(2.67±0.59)g、(0.57±0.26)g/cm2]明显减少(P<0.05)。在凝血功能及安全性指标等方面,两组结果相似(P>0.05),整个试验过程无不良事件。结论:尖吻蝮蛇凝血酶对胸部切口有较好的止血作用和安全性。