多重耐药因子3与胆囊胆固醇结石形成关系的研究

目的:探讨多重耐药因子3(MDR3与胆囊胆固醇结石形成的关系.方法:胆囊胆固醇结石病人的肝组织标本20例,正常肝组织标本10例,应用RT-PCR技术检测MDR3mRNA.结果:实验组MDR3mRNA的光密度值为1.02±0.24,对照组光密度值为1.94±0.80,两组之间存在显著差异(P＜0.01).结论:MDR3与胆囊胆固醇结石的形成可能存在一定关系.     

固醇携带蛋白2与胆囊胆固醇结石形成关系的研究

目的:探讨固醇携带蛋白2(SCP2)与胆囊固醇结石形成的关系.方法:胆囊胆固醇结石病人的肝组织标本20例,正常肝组织标本10例.应用逆转录聚合酶链反应技术检测SCP2 mRNA.结果:实验组的SCP2 mRNA的光密度值为0.90±0.34,对照组的光密度值为0.56±0.19,两组间存在显著性差异(P＜0.05).结论:SCP2与胆囊胆固醇结石的形成可能存在一定关系.     

新疆维吾尔族胆固醇结石患者肝组织SCP_2蛋白的表达

目的 研究新疆维吾尔族(维族)与汉族胆囊胆固醇结石患者及维族非结石患者肝组织固醇携带蛋白2(SCP2)表达和血脂变化情况.方法 应用Western blot技术,研究新疆维族胆囊胆固醇结石患者、汉族胆固醇结石患者和维族非结石患者各20例肝组织SCP2的蛋白表达水平差异;并采用生物化学技术检测其血脂改变.结果 维族与汉族胆囊胆固醇结石患者肝组织SCP2蛋白表达水平差异无统计学意义,维族胆囊胆固醇结石患者肝组织SCP2蛋白表达水平较维族非结石患者升高,差异有统计学意义;各组患者血脂差异无统计学意义.结论 新疆维族胆囊胆固醇结石患者肝组织SCP2蛋白水平升高,SCP2表达上调可能是通过影响血脂代谢参与胆囊胆固醇结石的形成.     

胆固醇结石与肝脏SRBI基因表达关系的探讨

目的探讨胆固醇结石与肝脏SRBI基因表达关系。方法选取20例胆囊胆固醇结石患者和20例健康者作为试验组和对照组,分别测定血清HDL,胆汁总脂,胆汁总脂中各成分含量以及胆汁胆固醇饱和指数。对测量结果进行对比分析。结果实验组患者血清HDL和胆汁总脂显著低于对照组（P〈0.05）,其它各项测量指标值则均显著高于对照组（P〈0.05）。结论肝脏SRBI过表达,可能与胆汁胆固醇过饱和有关,是胆固醇结石病的重要遗传因素。     

HCN4基因在风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴心房颤动心房组织中蛋白表达的研究

目的：通过检测风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴心房颤动（房颤）患者心房肌细胞内HCN4蛋白表达量,探讨风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴房颤的发生机制。方法：选取风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴房颤患者30例为实验组,同期取风湿性心脏病二尖瓣狭窄非房颤19例为对照组,通过Westernblot检测心房肌细胞内HCN4蛋白表达量。结果：实验组和对照组中HCN4基因在心房肌组织中的蛋白表达分别是0．29±0．03和0．13±0．03,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴房颤患者心房肌组织中确实存在HCN4基因的表达上调,提示HCN4基因的过度转录表达可能参与了调控风湿性心脏病房颤的发生过程。     

胆汁及胆囊黏膜中骨桥蛋白、瘦素、内脂素 及脂联素的表达及意义

目的 通过检测胆固醇结石患者胆汁成分和胆囊黏膜基因的表达以探索胆固醇结石的成因。 方法 采用酶联免疫吸附总试验、氧化酶法和咖啡因法检测胆固醇结石患者胆汁中胆固醇、瘦素、内脂素、 脂联素、磷脂、总胆汁酸、胆固醇饱和指数（CSI）水平;免疫组织化学、Western blotting 检测胆囊黏膜组 织中骨桥蛋白（OPN）的表达。结果 观察组患者胆汁CSI、胆固醇、胆固醇百分比、总脂、瘦素及内脂素 浓度较对照组升高（P <0.05）,总胆汁酸、磷脂和脂联素较对照组下降（P <0.05）;观察组胆囊黏膜中OPN 的平均光密度值和蛋白相对表达量较对照组高（P <0.05）。结论 OPN、内脂素、脂联素可能是胆固醇结石 形成的共同因素。     

慢性结石性胆囊炎胆汁胆固醇浓度与胆囊收缩素受体的特点及关系

目的 通过检测慢性结石性胆囊炎患者胆囊胆汁胆固醇浓度(biliary cholesterol concentration,BCC)及胆囊黏膜上皮A型胆固醇受体(cholecystokinin-A receptor,CCK-AR)蛋白表达强度,明确BCC与CCK-AR的特点及关系.方法 通过免疫组化的方法检测34例行腹腔镜手术的慢性结石性胆囊炎胆囊黏膜上皮CCK-AR蛋白表达强度,同时用生化方法检测胆囊内胆汁胆固醇浓度,观察结果特点并分析相关性.结果 所有标本胆囊黏膜上皮CCK-AR呈阳性表达,其中13例呈弱阳性表达,9例呈中阳性表达,12例呈强阳性表达.胆囊内胆汁胆固醇浓度在CCK-AR弱阳性组,CCK-AR中阳性组,CCK-AR强阳性组分别为(14.44±5.51) mmol/L,(11.68±3.41) mmol/L和(6.96±1.19) mmol/L,与CCK-AR表达强度呈负相关(r=-0.702,P=0.000).结论 胆汁胆固醇浓度可作为评估胆囊黏膜上皮CCK-AR分子蛋白表达的潜在指标.     

急性肝功能衰竭大鼠肝组织iNOS的表达及其意义

目的检测急性肝功能衰竭（ALF）大鼠肝组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达,探讨其在ALF中的意义。方法 SD大鼠随机分为3组：对照组给予生理盐水（NS）1ml腹腔注射;实验组予D-氨基半乳糖联合内毒素腹腔注射,复制ALF大鼠模型,分别在6、12h处死大鼠即为ALF6h组（D-6组）和ALF12h组（D-12组）,门静脉采血检测肝功能;留取肝组织标本,免疫组织化学方法检测iNOS,阳性产物灰度值应用图像分析软件半定量分析。结果对照组肝组织iNOS无表达;实验组6、12h肝脏病理呈进展性,肝组织iNOS沿中央静脉及残存小血管高表达,其平均灰度值在D-6组为81.02±5.86,D-12组为130.71±7.16,两组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ALF大鼠肝组织iNOS高表达;缺氧、微循环障碍可能是诱导iNOS表达的重要因素。     

胆固醇代谢相关蛋白及相关特异microRNAs在胆固醇型胆囊结石患者血清中的表达及意义

目的  探讨胆固醇型胆囊结石患者和健康对照人群血清中胆固醇代谢相关蛋白,以及可能靶向ABCA1的相关microRNAs（miRNAs）表达差异及意义。方法  选取60例胆固醇型胆囊结石患者（结石组）和60例健康对照人群（非结石组）的血清样本,采用Western blot检测胆固醇代谢相关蛋白（SREBP-2、FXR、LXR、ABCA1、ABCB11）的表达,利用生物信息学软件预测可能靶向调控ABCA1的相关miRNAs,采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）对相关miRNAs的表达进行检测。结果  结石组血清中SREBP-2、FXR、LXR、ABCA1、ABCB11蛋白的表达量较非结石组降低（P <0.05）,结石组血清中miRNA-26a、miRNA-144、miRNA-758表达较非结石组升高（P <0.05）。结论  胆固醇代谢相关蛋白差异性表达及可能靶向ABCA1的相关miRNA在胆固醇型胆囊结石的发病过程中可能发挥极为重要的作用。

     

骨桥蛋白在胆固醇结石患者胆汁中的表达及其意义

目的：研究骨桥蛋白（osteopontin,OPN）在胆固醇结石患者胆汁中的表达及其意义。方法：分别检测OPN及胆固醇在25例胆囊胆固醇结石患者（结石组）和10例非胆囊结石患者（非结石组）胆囊胆汁中的含量。结果：结石组患者胆汁中OPN含量明显低于非结石组（P〈0.05）,胆固醇含量显著高于非结石组（P〈0.05）。胆固醇结石患者胆汁中的OPN含量与胆固醇含量呈负相关。结论：胆固醇结石患者胆汁中OPN的低表达,且与胆汁中胆固醇含量成负相关,提示OPN可能与胆固醇结石的形成有关。     

Notch1、Jagged1在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Notch1、Jagged1在肝细胞癌组织中的表达及临床意义。方法选择2010年3月～2012年6月手术治疗并经病理证实为肝细胞癌的患者35例,每例患者均取癌组织及癌旁组织（距癌组织2～3 cm处）,其中肝细胞癌组织35例,癌旁肝硬化组织13例,癌旁正常肝组织22例。采用实时荧光定量PCR法检测Notch1mRNA、Jagged1 mRNA在肝细胞癌组织、癌旁肝硬化组织及癌旁正常肝组织中的表达;免疫组织化学染色法检测Notch1、Jagged1蛋白的表达,并分析两种蛋白的表达与肝细胞癌临床病理特征的关系。结果①肝细胞癌组织中Notch1 mRNA、Jagged1 mRNA的表达分别为（4.58±0.77）、（4.96±0.87）,显著高于癌旁正常肝组织,差异有统计学意义（P〈0.05）;与癌旁肝硬化组织[（1.16±0.37）、（1.42±0.58）]比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;而癌旁正常肝组织与癌旁肝硬化组织比较差异无统计学意义（P〉0.05）。②肝细胞癌组织中,Notch1、Jagged1的阳性表达率分别为71.4%（25/35）、68.6%（24/35）;癌旁正常肝组织中,Notch1、Jagged1的阳性表达率分别为36.4%（8/22）、40.9%（9/22）;癌旁肝硬化组织中,Notch1、Jagged1的阳性表达率分别为30.8%（4/13）、30.8%（4/13）。Notch1、Jagged1的阳性表达率在肝细胞癌组织中明显高于癌旁正常肝组织（χ^2otch1=6.81,χ^2agged1=4.24,P〈0.05）及肝硬化组织（χ^2otch1=6.55,χ^2agged1=5.57,P〈0.05）。Notch1、Jagged1的阳性表达率在癌旁正常肝组织与肝硬化组织间差异无统计学意义（P〉0.05）。Spearman相关分析显示,肝细胞癌组织中Notch1的表达与Jagged1的表达呈正相关（r=0.38,P〈0.05）。③Notch1、Jagged1蛋白的阳性表达率与患者的年龄、性别、肿瘤直径、数目、有无癌栓形成无关（P〉0.05）;与有无淋巴结转移、病理分级密切相关。有淋巴结转移者Notch1、Jagged1阳性表达率高于无淋巴结转移者;低分化癌组织Notch1、Jagged1的阳性表达率明显高于中高分化癌组织,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 Notch信号通路中Notch1、Jagged1对肝细胞癌的发生发展起促进作用,可为判断临床预后提供参考价值。     

LncRNA HOTAIR、HOTTIP及其下游HOXD10、HOXA13基因在肺癌中的表达研究

目的探讨HOTAIR和HOTTIP及其下游HOXD10和HOXA13基因在肺癌中的表达特征以及相互调控的关系.方法选择47例肺癌患者并收集癌组织和癌旁正常组织,利用TRIzol提取总RNA,实时荧光定量PCR检测基因相对表达量.结果 HOTAIR在癌组织中的相对表达量（4.12±4.58）,显著低于癌旁正常组织（7.43±4.20）,（P〈0.01）,HOXA13在癌组织中的相对表达量（8.64±1.21）,显著降低低于癌旁正常组织（9.43±1.58）,（P〈0.01）,其他两个基因表达无显著变化.在有淋巴转移的个体中,癌组织中HOXD10 mRNA表达为（9.01±1.22）,显著高于无转移的患者（7.81±2.15）,（P=0.02）.HOTTIP与下游HOXA13基因RNA在癌组织（r=0.78,P=0.00）和癌旁正常组织（r=0.70,P〈0.01）中均存在正相关关系;HOTAIR与下游HOXD10基因mRNA在癌旁正常组织中成正相关（r=0.37,P〈0.01）,在癌组织中却不存在相关关系（r=0.12,P=0.47）.结论提示在肺癌中HOTTIP与HOXA13调控关系正常;HOTAIR在癌组织中表达降低,且可能丧失对下游基因HOXD10的正常调控.     

HDAC1基因小干扰RNA对人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞放射敏感性影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)抑制组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)表达对人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞放射治疗敏感性的作用及可能机制。方法体外合成针对HDAC1基因的siRNA,脂质体法转染人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞,应用蛋白印迹法检测细胞HDAC1蛋白和乙酰化组蛋白H4的表达,应用实时定量聚合酶链反应方法检测HDAC1基因、核因子-κB(NF-κB)基因和p53蛋白调控的凋亡调控因子(PUMA)基因mRNA表达。应用6 MV直线加速器,以0、2、4、6、8 Gy不同剂量X线照射细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及克隆形成实验检测细胞放射敏感性。结果人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞经转染HDAC1基因siRNA后,正常对照组、阴性对照组和siRNA干扰组HDAC1基因mRNA表达分别为10.21±0.42、9.48±0.41和4.92±0.41;蛋白表达分别为0.81±0.14、0.79±0.16和0.42±0.18,与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞HDAC1基因mRNA和蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05);正常对照组、阴性对照组和siRNA干扰组乙酰化组蛋白H4表达分别为0.76±0.21、0.75±0.20和0.30±0.19,与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组乙酰化组蛋白H4表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组、阴性对照组和siRNA干扰组细胞NF-κB基因mRNA表达分别为6.24±0.52、6.31±0.61和4.22±0.56,PUMA基因mRNA表达分别为3.84±0.26、3.69±0.29和5.42±0.31,与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞NF-κB基因mRNA降低,PUMA基因mRNA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。经X线照射后,正常对照组、阴性对照组和siRNA干扰组凋亡率分别为(16.25±2.64)%、(15.41±2.97)%和(29.62±3.11)%,存活分数(SF2)值分别为0.576±0.149、0.564±0.142和0.226±0.151,与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞凋亡率增加,SF2值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 HDAC1基因siRNA能够增强人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞对放射线损伤的敏感性。抑制人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞HDAC1基因表达,增加乙酰化组蛋白H4表达,下调NF-κB基因表达和上调PUMA基因表达可能是其作用机制。     

纺锤体检查点蛋白Cenp-E在肝癌组织的表达及临床意义

目的观察纺锤体检查点蛋白（Cenp-E）在肝癌组织和人类正常肝组织表达水平的差异,以探讨Cenp—E蛋白在肝癌细胞中的表达反临床意义。方法用荧光定量PCR和Westernblot分别检测Cenp．E基因和蛋白在肝癌组织和正常肝组织的表达水平。结果正常肝组织中Cenp-E基因mRNA水平（0．02378±0．00973）明显高于肝癌组织（0．01458±0．00873）;Cenp—E蛋白表达量在正常肝组织中（0．656±0．012）明显高于在肝癌组织中的表达（0．301±0．009）,且二者有显著性差异。结论Cenp—E低表达在肝癌的发生过程中起重要作用。     

宫颈癌组织中DNA甲基转移酶1、3A和3B mRNA的表达

目的探讨DNA甲基转移酶1、3A和3B在宫颈癌发生发展中的作用。方法应用real-time PCR技术检测10例宫颈癌、10例宫颈上皮内瘤变和10例正常宫颈组织DNMT1、3A和3BmRNA的表达。结果宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT 1mRNA对GAPDH mRNA的相对丰度值分别是0.30±0.1、0.26±0.12和0.10±0.04,宫颈癌组织组织中与正常宫颈中DNMT 1表达有显著差异（P〈0.05）;宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT3A mRNA对GAPDH mRNA的相对丰度值分别是0.94±0.27、0.51±0.24和0.13±0.04,三组相比较有显著性差异（P〈0.05）;宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT 3B mRNA对GAPDH mR-NA的相对丰度值分别是0.30±0.09、0.28±0.11和0.11±0.04,宫颈癌组织组织中与正常宫颈中DNMT 3B表达有显著差异（P〈0.05）。结论 DNMT1、3A和3B参与了宫颈癌的发生,并在宫颈上皮内瘤变时就已经起了一定作用。     

哮喘小鼠肺组织和肺T细胞β1,3-N-乙酰糖基转移酶的表达

目的研究支气管哮喘模型小鼠肺组织及肺T细胞中三种β1,3-N-乙酰糖基转移酶（Fringe）RFNG、LFNG、MFNG的基因和蛋白表达的特点,探讨Fringe是否与哮喘发病有关。方法使用卵白蛋白腹腔注射后雾化吸入法制备BALB/c小鼠哮喘模型,并设置生理盐水对照组。经Perco1及尼龙毛法分离获取肺T细胞。采用半定量RT-PCR检测两组小鼠肺组织及肺T细胞中RFNG、LFNG、MFNGmRNA表达;Westernblot检测两组小鼠肺组织中RFNG、LFNG、MFNG蛋白表达。结果两组小鼠肺组织及肺T细胞中均存在三种Fringe表达。哮喘组肺组织及肺T细胞的RFNGmRNA表达较对照组增加（肺组织：0.92±0.35比0.51±0.13,P〈0.01;肺T细胞：0.33±0.06比0.18±0.07,P〈0.01）;LFNGmRNA表达较对照组减少（肺组织：0.77±0.32比1.61±0.31,P〈0.01;肺T细胞：0.49±0.19比0.71±0.03,P〈0.01）。MFNG在肺组织中的表达无明显差异（肺组织：1.44±0.29比1.70±0.44,P〉0.05）,但MFNG在肺T细胞中的表达明显减少（0.11±0.03比0.52±0.18,P〈0.01）。肺组织中三种Fringe蛋白表达与肺组织的mRNA结果相似。哮喘组的RFNG蛋白表达高于对照组（1.17±0.04比0.68±0.07,P〈0.05）,MFNG蛋白表达在两者之间没有明显的差异（8.10±0.60比9.12±0.07,P〉0.05）,而LFNG的蛋白表达则低于对照组（4.11±0.38比6.41±0.11,P〈0.05）。结论三种Fringe的异常表达可能与支气管哮喘的发病有关。     

伴发不同合并症的Graves病甲亢患者T淋巴细胞亚群的研究

目的 了解Graves病（GD）甲亢患者尤其合并有突眼、肝损害、WBC减少、低血钾的GD患者的外周血T淋巴细胞亚群状态,探讨GD及其合并症的免疫损伤机制.方法 选取47例GD甲亢患者和46例健康对照者,测定其游离甲功、甲状腺特异性抗体、血常规、肝功能、电解质及T淋巴细胞亚群（CD3＋、CD4＋、CD8）,比较各组间相关指标的差异.结果 GD组CD4＋/CD8＋高于对照组（1.40±0.06 vs 1.32±0.07）（P＜0.05）.GD甲亢WBC减少组CD3＋低于WBC正常组（50.82±10.16 vs 58.42±10.48）（P＜0.05）.GD甲亢低血钾组CD4＋低于血钾正常组（44.70±8.34 vs 54.14±8.81）（P＜0.05）.结论 GD患者体内存在细胞免疫的异常,合并有突眼、WBC减少、低血钾和（或）肝损害的GD患者,体内细胞和体液免疫损伤更加严重.GD甲亢是全身性自身免疫性疾病,早期激素的应用,可以避免严重的白细胞减少、严重肝损害和突眼.     

载脂蛋白E基因多态性与2型糖尿病患者血脂的关系

目的 研究中国北方汉族群体载脂蛋白E（ApoE）基因多态性与2型糖尿病患者血脂水平的关联.方法 选择2型糖尿病患者200例作为病例组,健康个体210例作为对照组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测ApoE基因型,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平.结果 病例组ε3/4基因型分布频率显著高于对照组（36.50％比22.38％,x2=9.864,P＜0.05）;病例组携带ε3/4基因型的患者血清TC、TG和LDL-C水平高于对照组携带ε3/4基因型者[TC：（6.02±0.98） mmol/L比（4.87±0.97） mmol/L,t=6.301,P＜0.05;TG：（2.04±0.42） mmol/L比（1.55 ±0.54） mmol/L,t=5.568,P＜0.05;LDL-C：（2.81±0.53）mmol/L比（2.36±0.58） mmol/L,t =4.500,P＜0.05）,HDL-C水平低于对照组[（1.16±0.47） mmol/L比（1.69±0.56）,t=5.579,P＜0.05];病例组中携带ε3/4基因型患者脂代谢异常程度高于其他基因型,差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 ApoEε3/4基因型与2型糖尿病血脂水平升高及发病有关.     

原发性肝癌组织中LASP-1 mRNA和HPA-1 mRNA表达水平及其临床意义

目的定量检测LIM和SH3蛋白1（LASP-1）mRNA和乙酰肝素酶-1（HPA-1）mRNA在原发性肝癌组织中的表达水平,探讨二者与肝癌发生、侵袭和转移的关系。方法利用实时荧光定量PCR检测法分别检测62例原发性肝癌癌组织、配对癌旁组织（距癌2cm）和正常肝脏组织（距癌大于5cm）中LASP-1mRNA和HPA．1mRNA的表达水平,并分析二者与肝癌临床病理特征的关系。结果肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织中HPA-1mRNA表达水平分别为47．25±16．65、23．15±14．89、7．56±5．15,LASP-1mRNA的表达水平分别为51．66±20．12、35．73±15．07、10．17±8．29。HPA-1mRNA及LASP-1mRNA在癌组织中的表达高于癌旁组织和正常组织（P均〈0．05）。HPA-1及LASP-1的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期密切相关（P〈0．05,P〈0．01）,与患者年龄、性别及肿瘤大小无关（P均〉0．05）。Spearman等级相关分析显示LASP-1mRNA和HPA-1mRNA的表达呈正相关（OR=0．421,P〈0．05）。结论肝癌组织中LASP-1mRNA与HPA-1mRNA的表达与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移及TNM分期等密切相关。二者联合表达水平的增加可能促进肝癌的侵袭转移。