电针对局灶脑缺血/再灌注模型大鼠缺血海马区血管再生的影响及其机制

目的 探讨电针促进局灶脑缺血/再灌注后缺血海马区血管再生的机制。方法 180只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、CXCR4特异性拮抗剂AMD3100药物组、AMD3100+电针组。线栓法制备右侧局灶脑缺血/再灌注模型。取大鼠“百会”穴（GV 20）及左侧“四关”穴（合谷LI 4/太冲LR 3）为电针穴位,刺激时间为30 min/d。采用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测各组缺血海马区SDF-1α、CXCR4 mRNA表达,免疫荧光双标法检测CD34⁺VEGFR2⁺ EPCs源性血管的表达。结果 与假手术组比较,模型组与电针组SDF-1α、CXCR4 mRNA表达明显增高（P<0.05）,其中电针组各时间点相对模型组增高更为显著（P<0.05）。AMD3100+电针组缺血海马SDF-1α、CXCR4 mRNA表达在再灌注后1 d时明显高于电针组（P<0.05）,但后逐渐下降,7 d时明显低于电针组（P<0.01）。与模型组比较,电针组再灌注3 d、7 d海马CD34⁺VEGFR2⁺ EPCs源性血管表达明显增多（P<0.05）。与电针组比较,AMD3100+电针组再灌注后7 d CD34⁺VEGFR2⁺EPCs源性血管表达明显下降（P<0.01）。CD34⁺VEGFR2⁺血管表达变化与SDF-1α的表达变化显著相关（R=0.784,P<0.01）。结论 电针可通过上调局灶脑缺血/再灌注大鼠缺血海马区SDF-1α/CXCR4的表达,促进血管再生。     

支气管哮喘患者外周血CD3+T细胞趋化因子受体表达的研究

目的 探讨支气管哮喘患者外周血CD3⁺T细胞趋化因子受体表达情况。方法 选取2017年1月—2017年12月山东省立第三医院就诊的40例支气管哮喘患者及同期该院体检的27例健康志愿者，采用流式细胞仪检测所有受试者外周血CD3⁺CD8⁺和CD3⁺CD8^-T细胞上趋化因子受体CXCR1、CXCR2、CXCR3、CCR3、CCR4、CCR5、CCR7、CCR8的表达。比较轻、中度支气管哮喘患者、重度支气管哮喘患者及健康志愿者，以及不同剂量糖皮质激素使用者趋化因子受体表达的差异。结果 轻、中度支气管哮喘组、重度支气管哮喘组、对照组受试者CD3⁺CD8⁺T细胞上CXCR1、CCR7阳性表达率差异有统计学意义（P <0.05）。重度支气管哮喘组CD3⁺CD8⁺T细胞上CXCR1阳性表达率低于轻、中度支气管哮喘组和对照组（P <0.05）。重度支气管哮喘组CD3⁺CD8⁺T细胞上CCR7阳性表达率低于对照组（P <0.05）。轻、中度支气管哮喘组、重度支气管哮喘组、对照组受试者CD3⁺CD8^-T细胞上CXCR1、CXCR2阳性表达率差异有统计学意义（P <0.05）。重度支气管哮喘组CD3⁺CD8^-T细胞上CXCR1、CXCR2阳性表达率低于轻、中度支气管哮喘组和对照组（P <0.05）。3组吸入不同剂量糖皮质激素患者CD3⁺CD8⁺和CD3⁺CD8^-T细胞上CXCR1的阳性表达率差异有统计学意义（P <0.05）。每天吸入>800 μg/g布地奈德组的患者CD3⁺CD8⁺和CD3⁺CD8^-T细胞上CXCR1阳性表达率低于每天吸入< 400 μg/g布地奈德组的患者（P <0.05）。结论 重度支气管哮喘组患者外周血CD3⁺T细胞部分趋化因子表达减少，轻、中度哮喘患者Th1和Th2相关的趋化因子受体参与免疫应答，而重度支气管哮喘患者Th1/Th2应答下降。     

膀胱癌细胞在不同生长环境中癌干细胞相关标志物CD44、CXCR4表达情况的初步研究

目的 观察癌干细胞相关标志物CD44、CXCR4在不同环境下膀胱癌细胞的变化情况,为人体膀胱癌干细胞的进一步研究提供前期数据与背景资料.方法 采用免疫组织化学与流式细胞术等技术,对体外培养、皮下移植瘤以及裸鼠淋巴结转移模型等不同的生长微环境的膀胱癌5637细胞系癌干细胞相关标志物CD44、CXCR4的表达进行检测.结果 在体外培养环境中,膀胱癌5637的细胞膜蛋白CD44呈阳性表达,而CXCR4呈弱阳性表达;膀胱癌裸鼠移植瘤中CD44、CXCR4均呈阳性表达.与体外培养体系比较,流式细胞术检测发现膀胱癌细胞中5637的CD44阳性表达水平无显著变化,而CXCR4阳性表达水平显著高于体外培养体系（P＆lt;0.01）;在裸鼠淋巴结转移模型中,转移淋巴结均有CD44、CXCR4阳性表达.结论 膀胱癌细胞中部分癌干细胞相关标志物的变化受体内外不同环境变化的调控,也提示膀胱癌5637细胞系存在有癌干细胞.     

神经干细胞脑出血大鼠脑内移植对T淋巴细胞亚群的影响

目的 探讨神经干细胞（neural stem cells,NSCs）移植入脑出血大鼠模型脑内后,观察脑组织内和血液中T淋巴细胞亚群的变化。方法 选择成年雄性SD大鼠作为模型动物,采用Ⅳ型胶原酶诱导法建立脑出血模型,脑出血后3h移植神经干细胞,3天进行各项指标检测。应用流式细胞仪分析脑组织与血液中的T淋巴细胞亚群变化。应用酶联免疫吸附试验检测脑组织与血液中细胞因子的变化。通过组织免疫荧光了解T淋巴细胞与NSCs在脑出血大鼠脑内的分布情况。结果 在血液中,与对照组相比较,NSCs移植组能够增加调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）与CD4⁺T细胞表达,减少γδT与CD8⁺T细胞表达。在脑组织中,NSCs移植组能够增加Treg细胞表达,减少γδT、CD4⁺T和CD8⁺T细胞表达。与对照组比较,NSCs移植组增加血液与脑组织中IL-4（interleukin-4）、IL-10（interleukin-10）和TGF-β（transforming growth factor-β）的表达,并且减少IL-6（interleukin-6）与IFN-γ（interferon-γ）的表达。结论 脑出血早期NSCs脑内移植促进保护性的T细胞亚群和抑制破坏性的T细胞亚群表达,提示移植的NSCs可能通过发挥免疫调节作用起到神经保护作用。     

Exendin-4 通过PI3K/Akt 信号通路促进脂肪干细胞旁分泌细胞因子

目的探讨Exendin-4 促进脂肪来源干细胞（ADSCs）旁分泌细胞因子的机制。方法混合酶消化法提取和培养SD大鼠
腹股沟处的脂肪干细胞,使用流式细胞学检测有或无Exendin-4 处理后的第4 代ADSCs表面标记物,MTT法绘制0、1、5、10、
20 nm/L不同浓度Exendin-4下的ADSCs生长曲线;qPCR法检测不同浓度Exendin-4处理12 h后bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的
表达变化。Western blotting和qPCR检测Exendin-4对于Akt通路的作用。同时添加通路阻断剂LY-294002,使用ELISA检测
Akt 通路阻断后Exendin-4 对于旁分泌蛋白的影响。结果分离培养的ADSCs 高表达CD29、CD90、CD105,低表达CD34、
CD45,并且能够多向分化为脂肪细胞、骨细胞,符合间充质干细胞的表型特点。Exendin-4处理后,不仅不会改变ADSCs的表
型,还能以浓度依赖方式促进ADSCs 在体外增殖（P<0.05）。不同浓度Exendin-4 处理ADSCs 12 h 后,旁分泌蛋白bFGF、
VEGF、HGF、IGF-1的表达量逐渐提高,其中10 nm/L Ex-4处理12 h可能为最佳处理浓度（P<0.05）。Western blotting和qPCR
提示Exendin-4 能够显著提高胞内Akt 的磷酸化水平,而给予LY-294002 后,磷酸化Akt 表达减弱,同时ADSCs培养液上清中
bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的含量也明显降低（P<0.05）。结论短暂Exendin-4处理不会改变ADSCs表型,但能加强细胞的增殖
能力,且以剂量依赖方式促进干细胞旁分泌细胞因子bFGF、VEGF、HGF、IGF-1。10 nm/L可能为Exendin-4 最适促旁分泌浓
度,其扩大干细胞旁分泌的机制部分是通过激活PI3K/Akt信号通路来介导。
     

复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠BMECs的影响及miRNA-320的调控机制研究

[目的]在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞（BMECs）的影响,从微小RNA-320（miRNA-320）调控途径探讨复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的作用机制。[方法]进行复元醒脑汤大鼠灌胃,制备含药血清和对照血清。对糖尿病脑梗死大鼠的缺血脑组织进行BMECs的分离培养,分别加入对照血清、含药血清、转染miRNA-320 inhibitor、中药血清混合转染miRNA-320 inhibitor;实时荧光定量PCR（qPCR）法检测各组BMECs的miRNA-320、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和胰岛素样生长因子受体-1（IGF-1R）基因表达水平,通过甲臜化合物（MTS）检测复元醒脑汤对BMECs增殖能力的影响;通过Transwell实验观察复元醒脑汤对BMECs迁移能力的影响;观察复元醒脑汤对BMECs小管形成能力的影响。[结果]与对照血清组相比,含药血清组、miRNA-320 inhibitor组、含药血清混合miRNA-320 inhibitor组均能使BMECs的增殖、迁移以及小管形成能力显著提高（P<0.01）,同时显著降低了miRNA-320的表达水平,显著提高了IGF-1的表达水平。[结论]复元醒脑汤能够抑制糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织中miRNA-320表达,增加IGF-1的表达,进而促进BMECs的增殖、迁移及成管能力。     

小鼠c-Kit和Sca-1阳性干细胞的多器官年龄分布特征

目的 本研究旨在研究c-Kit和Sca-1两种干细胞亚型在小鼠多脏器的年龄分布规律,为后续进行相关组织的干细胞抗损伤研究奠定基础。方法 选取C57/BL6雄性成年小鼠（3月龄、6月龄、9月龄）,分离其骨髓、肝脏、肾脏、肺及胰腺组织,采用组织块酶解法分选各脏器中直径小于30μm的细胞,用CD45、c-Kit及Sca-1荧光抗体标记细胞,流式细胞仪记录CD45^-c-Kit⁺以及CD45^- Sca-1⁺细胞百分比。结果 在小鼠骨髓中,CD45^-c-Kit⁺细胞数显著多于CD45^- Sca-1⁺（P<0.05）;而在肝、肾、肺和胰腺组织中,CD45^- Sca-1⁺的细胞数量远多于CD45^-c-Kit⁺干细胞（P<0.05）。除胰腺组织,9月龄CD45^- Sca-1⁺的细胞数目较3、6月龄有所升高外,其他组织中干细胞的年龄分布趋势差异不显著（P>0.05）。结论 CD45^-c-Kit⁺和CD45^- Sca-1⁺两种干细胞亚型在小鼠多脏器中均有存在,尤其是数量上占据优势的CD45^- Sca-1⁺干细胞可能在多数器官的发育及修复中发挥重要作用。     

补肾活血汤含药血清对骨髓间充质干细胞迁移及CXCR4表达的影响

【目的】探讨补肾活血汤对骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移及趋化因子受体CXCR4表达的影响。【方法】以大鼠BMSCs为研究对象,采用全骨髓贴壁法培养BMSCs。采用流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD90、CD34、CD11b;采用Transwell试验检测不同剂量组补肾活血汤含药血清对BMSCs迁移的影响;采用Western blot法检测细胞CXCR4的蛋白表达水平。【结果】细胞表面抗原标记结果显示所得细胞为高纯度BMSCs。Transwell结果显示,补肾活血汤含药血清可显著增强大鼠BMSCs的迁移能力;Western blot结果显示,高、中、低剂量组补肾活血汤含药血清呈浓度依赖性上调大鼠BMSCs的CXCR4蛋白表达,与空白血清组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。【结论】补肾活血汤含药血清可促进BMSCs的体外迁移,并影响CXCR4蛋白的表达,其机制可能与上调CXCR4的表达、激活SDF-1/CXCR4轴有关。     

初发Graves病患者外周血调节性T细胞及滤泡调节性T细胞检测的临床研究

目的：　检测Graves病（Graves'' disease,GD）患者外周血调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）、滤泡调节性T细胞（follicular regulatory T cells,Tfrs）、滤泡辅助性T细胞（follicular helper T cells,Tfhs）数量及其表面分子肿瘤坏死因子受体超家族成员4（tumor necrosis factor receptor superfamily member 4,OX40）、程序性死亡因子1（programmed-death 1,PD-1）的表达。方法：　纳入初发GD患者23例（GD组）和健康对照者22例（NC组）,通过流式细胞术检测2组外周血Tregs（CD3⁺CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺）、Tfrs（CD4⁺Foxp3⁺PD-1⁺CXCR5⁺）及Tfhs（CD4⁺Foxp3^-PD-1⁺CXCR5⁺）细胞比例及其表面分子OX40、PD-1表达,分析GD发病与Tregs、Tfrs、Tfhs及其OX40、PD-1表达的关系,同时分析各检测指标与临床指标的相关性,初步探讨其临床意义。结果：　与NC组相比,GD组Tregs数量明显升高,Tregs上PD-1表达降低,Tregs上PD-1表达与TRAb水平呈显著负相关;初发GD患者Tfrs数量明显降低,且Tfrs上OX40表达上调,Tfrs数量与TRAb呈显著负相关。结论：　PD-1在Tregs上的低表达可能通过影响Tregs功能参与GD发病,GD患者体内Tfrs数量明显减少,且其OX40表达明显升高,OX40可能通过影响Tfrs与Tfhs稳态参与GD发病,这为临床上关于GD的治疗提供了新思路。     

脂肪间充质干细胞复合人工真皮修复大鼠深度烧伤创面的研究

目的探讨脂肪间充质干细胞（ADSCs）复合人工真皮（皮耐克）修复大鼠深度烧伤创面的作用。方法用胶原酶法消化SPF级绿色荧光蛋白转基因大鼠腹股沟脂肪,获得ADSCs,用流式细胞仪分析鉴定其表面特异性标志物,并观察ADSCs向成骨细胞、成脂细胞分化的潜能。建立大鼠深度烧伤模型,将大鼠对称的左、右创面分为实验组和对照组。实验组采用人工真皮+ADSCs治疗,对照组采用人工真皮+0.9%氯化钠注射液治疗。分别于术后7、14、21d观察创面最大直径以评估创面愈合情况,术后21d时荧光显微镜下观察创面冷冻切片评估实验组与对照组创面情况。结果成功获得大鼠ADSCs,具有较强的增殖能力及多向分化能力。ADSCs对间充质干细胞标志物CD29、CD90、CD44呈现高表达;对造血干细胞表面标志物CD34、白细胞共同抗原CD45则呈低表达。治疗后14d时,实验组创面最大直径明显小于对照组（P＜0.05）,即实验组创面愈合速度比对照组明显增快。治疗后21d,实验组创面可见散在点状绿色荧光,而对照组未观察到明显荧光。结论ADSCs联合人工真皮作用于深度烧伤创面可显著促进创面愈合,是一种有效的治疗深度烧伤的方法。     

人大网膜间充质干细胞的体外培养、鉴定及诱导化分方法

目的建立人大网膜脂肪问充质干细胞（adiposederivedIIlesechymalSteITIcells,ADSCs）的原代培养及诱导分化为脂肪细胞的方法．方法术中取人大网膜脂肪组织,采用胶原酶消化法原代培养,经流式细胞仪鉴定细胞CD44、CD34、CD90和CD45分子、MTTr法测定细胞生长曲线,取P3细胞以3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素、地塞米松及吲哚美辛诱导该细胞向脂肪细胞分化,油红O脂肪染色法进行脂肪细胞鉴定．结果培养卅的细胞形态均-呈梭形或漩涡状生长,经流式细胞仪鉴定为ADSCs,细胞生长曲线表明P3细胞增值旺盛,用分化培养基诱导后,细胞形态由梭形变为圆形,细胞体积增大,胞浆内聚集脂肪颗粒,油红0染色鉴定为成熟的脂肪细胞．结论该方法能培养出形态均一的人大网膜ADSCs,经诱导后可向成熟脂肪细胞分化．     

脂肪干细胞原代培养及诱导成肌细胞的实验研究

目的 探讨大鼠脂肪干细胞(ADSC)的培养及诱导分化为成肌细胞的方法 .方法 取SD大鼠脂肪组织,酶消化法分离、培养ADSC,免疫荧光和流式细胞仪检测相关表面抗原CD90、CD105和CD34的表达.取培养至第2代处于对数生长期细胞,分别用含5-氮杂胞苷(5-aza)的诱导培养液(诱导组)和基础培养液(对照组)进行培养.诱导时间为7、14、21、28和35 d,倒置相差显微镜观察细胞的生长情况和形态变化,免疫荧光和流式细胞仪检测成肌细胞特异性抗原desmin和myosin的表达.结果 成功从大鼠脂肪组织分离、培养出ADSC,相关表面抗原表达检测证实其干细胞特性.诱导组细胞诱导28 d后呈现成肌细胞特有的"漩涡"样生长形态,单个细胞表现出多核化;免疫荧光和流式细胞仪检测显示,desmin和myosin的表达率在诱导28 d时达最高,分别为52.57%和50.04%,而诱导前和对照组细胞均呈阴性表达.结论 成功从大鼠脂肪组织分离、培养ADSC,含5-aza的诱导培养液可将其诱导分化为成肌细胞,诱导 28 d成肌细胞特异性抗原表达率最高.     

大鼠脂肪源性干细胞定向分化为施万细胞样细胞的实验研究

目的 研究体外培养成年大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)并诱导分化为施万细胞样细胞的潜能.方法 分离、培养成年SD大鼠ADSCs,免疫细胞化学法鉴定细胞表面抗原CD44,CD49d和CDl06.传6～8代的ADSCs接种在多聚赖氨酸铺板的培养板内.用含5 ng/nd血小板源性生长因子,10 ng/ml牛碱性成纤维细胞生长因子,14 μmol/L Forskolin,200ng/ml Heregnlin及10%FBS的DMEM/F12培养基诱导分化12 d,免疫细胞化学法鉴定细胞表面标记物GFAP,S-100和P75.结果 分离纯化的ADSCs呈CD44和CD49d阳性,而CD106表达为阴性;诱导后的细胞呈梭形,并表达施万细胞特异性标志蛋白-GFAP,S-100和P75.结论 从大鼠脂肪组织能获得具有增殖和分化潜能的干细胞,这些细胞在特定条件下可定向诱导分化为施万细胞样细胞.     

脑心通胶囊提取物通过增强CXCR4表达促进心脏干细胞迁移

[目的]探讨脑心通(NXT)对小鼠心脏干细胞(CSCs)CXCR4表达的影响。[方法]应用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)芯片技术研究脑心通对心脏干细胞功能基因表达的影响。采用流式细胞术检测脑心通对心脏干细胞CXCR4表达的影响。应用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测脑心通对心脏干细胞CXCR4蛋白表达的影响。应用Transwell法测定脑心通对SDF-1诱导的心脏干细胞迁移能力的影响。[结果]芯片结果发现脑心通促进心脏干细胞CXCR4基因的表达;流式细胞技术结果显示,脑心通促进心脏干细胞APC-CXCR4阳性细胞率;Western Blot结果表明,脑心通促进心脏干细胞CXCR4蛋白表达;Transwell迁移实验结果显示,脑心通促进SDF-1诱导的心脏干细胞的迁移作用。[结论]脑心通可以促进心脏干细胞CXCR4的表达。     

Induced differentiation of adipose-derived stromal cells into myoblasts

This study aimed to induce the differentiation of isolated and purified adipose-derived stromal cells(ADSCs) into myoblasts,which may provide a new strategy for tissue engineering in patients with stress urinary incontinence(SUI).ADSCs,isolated and cultured ex vivo,were identified by flow cytometry and induced to differentiate into myoblasts in the presence of an induction solution consisting of DMEM supplemented with 5-azacytidine(5-aza),5% FBS,and 5% horse serum.Cellular morphology was observed under an i...     

Study on the Expression Levels of CXCR4, CXCL12, CD44, and CD147 and Their Potential Correlation with Invasive Behaviors of Pituitary Adenomas

Objective To evaluate the factors of CXCR4, CXCL12, CD44, and CD147 as early potential diagnostic biomarkers by determining their expression levels in invasive and non-invasive pituitary adenomas. Methods Fresh pituitary adenoma specimens were collected from 35 pituitary adenoma (21 invasive and 14 non-invasive) patients who underwent surgical treatment in our Neurosurgery Department between January and April of 2009. The expression levels of CXCR4, CXCL12, CD44, and CD147 were evaluated firstly by flow cytometry, fluorescence microscopy in single cell suspensions, and then by immunohistochemical staining of paraffin tissue sections. Results Flow cytometric analyses showed that the percentage of CXCR4-and CXCL12-positive cells from invasive pituitary adenomas (IPA) was significantly higher in the single cell suspensions than that from non-invasive pituitary adenomas (nIPA) (P<0.05). Immunohistochemical staining revealed that CXCR4 and CXCL12 staining index scores of the invasive pituitary adenomas were significantly higher than those of the non-invasive pituitary adenomas (P<0.05). In contrast, neither flow cytometry nor immunohistochemical staining demonstrated significant difference between CD44 and CD147 expression levels, respectively. Conclusion Expression levels of CXCR4 and CXCL12 are correlated with the invasiveness of pituitary adenomas. Therefore, rather than CD44 and CD147, CXCR4 and CXCL12 may potentially serve as biomarkers for early detection of pituitary adenomas.     

小鼠脂肪源性干细胞的成骨分化研究

目的 体外分离培养和鉴定小鼠脂肪源性干细胞,向成骨方向分化,为后续的实验选取合适的种子细胞奠定基础.方法 从白色脂肪组织中分离培养脂肪源性干细胞,应用流式细胞仪分析其表面的标记.分别通过碱性磷酸酶、茜素红和油红-O染色方法染色方法鉴定向成骨和成脂方向分化.结果 脂肪源性干细胞高表达表面标记CD29、CD44,并且能够向成骨和成脂方向分化.结论 利用胶原酶消化法,在小鼠脂肪组织中成功分离、培养出脂肪源性干细胞,获得的细胞具有多向分化潜能,为后期组织工程技术修复骨组织,提供了坚实的实验基础.     

大鼠脂肪干细胞冷冻复苏后的生物学特性及成骨细胞分化潜能的研究

目的 研究冻存复苏后大鼠脂肪干细胞（ADSCs）的生物学特性及其体外诱导成骨细胞分化的潜能。方法 冷冻保存6 个月的大鼠ADSCs 复苏后传代培养,显微镜下观察细胞形态;CCK8 检测细胞增殖,流式细胞仪检测CD44,CD105。第3 代细胞诱导成骨培养2 ～ 3 周后碱性磷酸酶（ALP）和茜素红染色,观察成骨情况。结果 复苏后ADSCs 形态类似成纤维细胞,增殖迅速。成骨诱导培养后表现出成骨细胞特性,ALP 染色活性增加,茜素红染色出现矿化结节。结论 冷冻保存复苏后的ADSCs 细胞生物性能稳定,定向诱导后可分化为 成骨细胞,可作为骨组织工程的种子细胞。     

基质金属蛋白酶9在粒细胞集落刺激因子诱导的造血干/祖细胞动员中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)在粒细胞集落刺激因子(G-CSF)诱导的造血干/祖细胞(HSPC)动员中的作用。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法测定了健康供者稳态及G-CSF动员第5天骨髓、外周血MMP-9蛋白及mRNA水平的变化,比较富含MMP-9的细胞系HT1080无血清培养上清孵育前后CD34+细胞表面CXCR4表达及对基质细胞衍生因子1(SDF-1)的迁移能力的变化,将rhMMP-9与rhSDF-1孵育后应用Western印迹检测MMP-9对SDF-1的降解作用,观察注射MMP-9化学抑制剂(MPI)ο-邻二氮杂菲对G-CSF动员BALB/c小鼠外周血成熟白细胞计数(WBC)和干/祖细胞的数量的影响。结果G-CSF动员第5天,骨髓上清MMP-9浓度增加了6.6倍(P<0.01),骨髓组织表达MMP-9的中性粒细胞明显增多。动员后骨髓单个核细胞MMP-9mRNA表达水平上调(P<0.05)。rhSDF-1与rhMMP-9短期孵育后可被后者降解。HT1080无血清培养上清液能够上调脐血和动员外周血富集的CD34+细胞的CXCR4表达水平(均P<0.05)及增强CD34+细胞向SDF-1浓度梯度迁移能力(均P<0.05),该效应可被MPI阻断(P<0.05)。与G-CSF共注射MPI后BALB/c小鼠外周血成熟WBC(12.3×106/L±1.2×106/L)和造血祖细胞集落形成单位(69U/2×105MNC±3U/2×105MNC)数量显著低于对照组(P<0.05)。结论MMP-9可能通过裂解SDF-1、上调CD34+细胞表面SDF-1特异性受体CXCR4的表达及增强CD34+细胞迁移能力在G-CSF介导的HSPC动员中发挥重要作用。     

Conditioned Medium from Human Umbilical Vein Endothelial Cells Promotes Proliferation,Migration, Invasion and Angiogenesis of Adipose Derived Stem Cells

Preeclampsia (PE) is a pregnancy-specific hypertensive complication, closely related to endothelial dysfunction. Adipose derived stem cells (ADSCs) have the capacity to differentiate into endothelial cells for vascular repair. Therefore, we hypothesized that induced endothelial differentiation of ADSCs might hold great potential for the treatment of PE. In this study, the primary ADSCs and human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were isolated by the collagenase digestion method. The supernatant of HUVECs was collected from the first generation of cells. Then, ADSCs were divided into two groups: ADSCs alone group and induced ADSCs (iADSCs) group. In iADSCs group, ADSCs were induced by HUVECs conditioned medium and ADSCs special culture medium at a ratio of 1:1 over a two-week period. In order to identify the endothelial characteristics of iADSCs, CD31 and CD34 were examined by flow cytometry. The proliferation, migration, invasion and angiogenesis assays were employed to compare the bioactivity of iADSCs and ADSCs. Furthermore, The levels of angiogenic related factors including vascular endothelial growth factor (VEGF) and placenta growth factor (P1GF) were detected by RT-PCR and Western blotting. Results showed conditioned medium from HUVECs promoted ADSCs proliferation, migration, invasion and angiogenesis. In addition, the levels of VEGF and P1GF were significantly enhanced in iADSCs group. This study uncovered the iADSCs application potential in the therapy and intervention of PE.