胞质因子对肿瘤细胞恶性的调控研究——小鼠骨髓瘤细胞与网织红细胞胞质体的胞质杂交实验

本文选用无细胞核而富含珠蛋自mRNA的正常小鼠网织红细胞与骨髓瘤细胞系中的BW胸腺淋巴肉瘤细胞系、NS-1浆细胞癌细胞系及P388淋巴瘤细胞等分别进行胞质杂交实验,以研究胞质因子调控肿瘤细胞恶性的可能性。实验结果表明3种淋巴瘤细胞在并入网织红细胞胞体后所形成的杂交细胞呈现下列去恶性化特征:1)杂交细胞出现组织化学反应及超微结构形态改变;2)细胞分裂指数及生长速度明显下降;3)作异种移植至裸鼠后丧失发生肿瘤能     

网织红细胞胞质因子调控肿瘤细胞基因表达的核酸杂交分析 Ⅰ.β-珠蛋白基因的表达

本实验采用核酸杂交技术,以小鼠和人β-珠蛋白基因为探针,分析了同种和异种细胞的胞质体杂交细胞中β-珠蛋白基因的表达状态。结果发现小鼠β-珠蛋白基因转录物不但在同种杂交(小鼠网织红细胞RM×小鼠骨髓瘤BW)的胞质体杂交细胞(BW-RM)中出现,而且在兔网织红细胞与小鼠骨髓瘤的异种杂交细胞(Bw-RR)中亦有表达。同样在小鼠网织红细胞与人浆细胞瘤(HMy)的异种胞质杂交细胞(HMy-RM)中出现人β-珠蛋白基因产物。说明网织红细胞胞质因子可激活原来处于不活动状态的肿瘤细胞β-珠蛋白基因并使之表达.兔和小鼠的胞质因子有同样的调节基因表达的作用而似无种属特异性。对网织红细胞胞质因子调控基因表达和肿瘤细胞恶性逆转的机理和分子生物学基础进行了讨论。     

兔网织红细胞胞质因子对小鼠骨髓瘤细胞恶性调控的研究

以无细胞核的兔网织红细胞与小鼠骨髓瘤细胞BW(胸腺淋巴肉瘤)及SP2/0(浆细胞瘤)分别进行异种杂交。实验结果表明杂交后形成的二种胞质杂交细胞(BW-RR及SP 2/0-RR)均呈现下列去恶性分化特征;①细胞分裂指数、~3H-TdR标记指数及生长曲线明显下降。其中SP2/0-RR的核分裂活动受到明显的抑制;②在软琼脂培养中不形成集落;③异种移植至裸鼠不长瘤;④染色体数量减少,众数及畸变率下降;⑤出现正常分化的珠蛋白基因产物血红蛋白和HGPRT基因的酶产物,珠蛋白探针分子杂交实验证明有珠蛋白基因的表达。为不同种属红细胞胞质因子调控肿瘤细胞恶性提供了证据。论文对胞质因子调控基因表达、恶性逆转及其在红细胞发生过程中自然去核的物质基础等问题进行了讨论。     

小鼠心肌组织裂解上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡

目的：研究小鼠心肌上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2／0细胞凋亡的作用．方法：在Sp2／0细胞培养孔中,分别加入不同稀释度（1：6,1：12,1：24）的小鼠心肌上清液和环磷酰胺,24h后镜下观察细胞形态,并于48h后流式细胞仪检测凋亡细胞的比率;同时,Sp2／0细胞和小鼠心肌细胞共培养,10h后观察Sp2／0细胞形态学变化;并用不同稀释度（1：5,1：10,1：20,1：40）小鼠心肌裂解上清液、肝脏裂解上清液、胸腺裂解上清液及环磷酰胺诱导Sp2／0,HeLa,Hep-2和Vero细胞凋亡,并比较其差异．结果：不同稀释度的心肌裂解上清液均可诱导Sp2／0细胞的凋亡,尤以高稀释度更明显;小鼠心肌细胞与Sp2／0细胞共培养10h后,少部分Sp2／0细胞出现凋亡;小鼠心肌裂解上清液、肝脏裂解上清液、胸腺裂解上清液均可引起Sp2／0,HeLa,Hep-2和Vero细胞发生凋亡,但小鼠心肌裂解上清液作用明显,且作用时间持久．结论：小鼠心肌组织裂解上清液具有明显诱导小鼠骨髓瘤Sp2／0细胞凋亡的作用．     

人早幼粒白血病细胞的细胞化学分析

我们近年来在进行肿瘤细胞恶性表型逆转的研究中,引进和建立了一套体内、外生长的人白血病细胞的实验模型系统(即HL-60细胞,HGPRT缺失的突变株HL-60-AR细胞,在裸鼠体内传代生长的实体瘤HL-60-AR/Nu细胞,药物诱导分化的HL-60-AR细胞以及HL-60-AR细胞与小鼠网织红细胞融合而成的胞质杂交HL-R细胞)。本文对上述前四种细胞分别进行了七种物质的细胞化学染色反应,并用MPV     

对HBsAg抗原决定簇a和d单克隆抗体性质的研究

用小鼠骨髓瘤细胞(Sp 2/0) 与HBsAg免疫过的BALB/C小鼠脾细胞融合,获得11株产生抗-HBs的杂交瘤细胞系,其中10株分泌抗-a决定簇的MCA (单克隆抗体),用ID法测得对adr、adw和ayw亚型滴度可达1/100～1/3,200。另一株分泌抗-d决定簇的MCA,对adr和adw亚型ID法滴度为1:1,6004～1:3,200,而对ayw则不起反应。对其中的5株细胞分泌的MCA免疫球蛋白进行亚类分析,证明一株为IgG2a,4株为IgG1。     

制备抗E受体单克隆抗体的初步报道

自Howard等用胸腺细胞制备抗E受体的单克隆抗体之后,国内外已报告多种其它抗E受体血清。我们制备了2株分泌高效价单克隆抗体的杂交瘤。 材料与方法 (一)小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0和自养BALB/C小鼠。     

抗人胰岛素和绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备和初步应用

中国医学科学院内分泌中心采用不同的免疫方法及用不同分子量聚乙二醇作为融合剂、将人胰岛素(hI)和人绒毛膜促性激素(hCG)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/O小鼠骨髓瘤细胞融合获得2株分泌     

分泌抗人A型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用人A型红细胞作为抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞杂交。从五批细胞融合中选取五个克隆细胞株,其中一株命名C_(11)细胞株,经七次克隆化培养,体外传代培养达八个多月,生长良好,继续分泌单克隆抗体。其单克隆抗体与不同血型红细胞(凝集法)和正常人外周血T、B淋巴细胞以及三个正常人B淋巴母细胞系补体依赖微量细胞毒方法作交叉试验,结果C_(11)细胞株产生的单克隆抗体只对A型红细胞发生反应与淋巴细胞抗原亦无交叉反应。     

小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0-Ag14)及鼠—鼠淋巴细胞杂交瘤细胞系的形态计量研究

作者采用形态计量法,对小鼠骨髓瘤细胞系(SP2/0—Ag14)及其与免疫小鼠脾淋巴细胞融合产生的杂交瘤细胞系进行了形态测量。对两种细胞的结构参数做了统计比较。结果表明杂种细胞的平均直径(?)及平均体积(?)均比亲本细胞大(P<0.001)。杂种细胞的粗面内质网明显扩张;高尔基区分泌小泡增多;线粒体明显肿大。提示:杂种细胞的分泌能力较强。     

分泌抗HBsAg单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

纯化的HBsAg免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0—Ag14用PEG进行融合。杂交瘤出现后以PHA和ID法检测其上清,阳性孔的细胞两次克隆化,筛选出两个产生抗—HBs的杂交瘤细胞系—XM—B_5、XM—C_5。染色体99～106条,均包含有SP2/0的两条标记染色体。该两个细胞系所分泌的抗体皆为小鼠IgG_1。经传代(还用体外激发法)或冷冻复苏后的,都仍保持其分泌抗体的能力。XM—B5所分泌的抗—HBs抗体,经纯化后已建立了RPHA和ELISA法,并已由省防疫站应用于临床检测。     

抗黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选和检定

用黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体免疫BALB/c/小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0融合,经克隆化获得分泌抗赖型017株钩端螺旋体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光抗体法,证实该株杂交瘤细胞所分泌的是特异性抗体,注入同系小鼠腹腔可诱生合高效价单克隆抗体的腹水,与杂交瘤细胞培养上清效价相比,增高800倍。单克隆抗体亚类检定结果为IgM及IgG_(2b)。     

沙克沙豆凝集素的分离纯化及其性质的研究

用PBS抽提、硫酸铵分段沉淀及猪甲状腺球蛋白—Sepharose 4B亲和层析可从腰点沙克沙(phaseolus vulgaris L)中分离得沙克沙凝集素,达到电泳纯。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳得出一条带,分子量为30.26×10~3u,表明该凝集素由单一亚基组成。其含糖量为5%。该凝集素能凝集兔、小鼠、鸡、人A、B、O红细胞,其凝集作用可被猪甲状腺球蛋白明显抑制。该凝集素可有效地促进淋巴细胞转化和分裂;体外实验表明,它可凝集Sp 2/0骨髓瘤细胞。     

贫铀对人肾小管上皮细胞的恶性转化及苯乙酸、亚硒酸钠的抑制作用

目的:探讨贫铀(DU)是否会引起人肾小管上皮细胞(HKC)向恶性表型转化,以及抑制物是否可有效地抑制这种恶性转化. 方法: 将HKC用可溶性DU溶液(0.063～0.500 g/L)作用24 h后,再与1.0～2.5 μmol/L的苯乙酸(PA)或亚硒酸钠(SS)孵育1 d～3 mo,观察不同代龄细胞的集落形成率、生长曲线、刀豆蛋白(ConA)凝集实验、半固体琼脂集落形成率及裸小鼠成瘤性;检测脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白在转化细胞中的表达. 结果: 传约20～30代后,HKC在半固体琼脂中形成集落,注入裸小鼠后成瘤. 部分转化细胞的FHIT蛋白表达也较正常HKC减弱. PA, SS可明显减少HKC在半固体琼脂集落形成率至(0.6±0.1)‰,裸小鼠也无皮下肿瘤形成(0/3)(P<0.05). 结论: DU可诱发HKC向恶性表型转化;用PA,SS抑制这种恶性转化的效果相似.     

分泌抗组胺单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立(简报)

本研究用1,4-对苯醌(Bq)做交联剂,制备组胺-Bq-牛血清白蛋白结合物(组胺-Bq-BSA)并免疫BALB/C小鼠,用Sp2/0.Ag14骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞融合。应用ELISA间接法检测抗体,包被抗原为组胺-Bq-卵清蛋白结合物(组胺-Bq-OA).筛选出两株抗组胺单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株.即Z255B3和Z253E2。经三次克隆后分别注入同系小鼠腹腔内,所产生的腹水经ELISA间接法测定Z255B3     

中国医学科学院学报1986年第八卷文题索引

惬学科排予l,作者后之数字为卷和页次) 签础医学细他生物学 人结肠癌(WRS)可移植性瘤株在裸小鼠体 内的建立(简报),汪俊等,幻18 一种红细胞膜表面琉基的测定方法,刘晓冰 等,s:146 自发转化的人胚鼻咽部上皮细胞株的建立, 刘育希等,B:145 肿瘤干细胞培养及其应用(评述),李申德, 8:1 63 人骨髓瘤细胞系(TMP 8310)的建立及其驯 化(简报),寸晰等,8:192 网织红细胞与骨髓瘤缺陷株细胞杂交前后 HGPRT酶基因产物的测定,徐炎等, 8:199 人胎肺克隆形成细胞在恶性转化研究中的意 义,黄明等,s:207 自发血道转移的小鼠前胃癌细胞系(MFC) 叼建立及…     

抗胰腺癌单克隆抗体的研究

用人新鲜胰腺癌组织免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Agl4融合,获得了分泌抗人胰腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本文重点报道以ABC免疫组织化学法检查YPC1单克隆抗体与人正常组织和肿瘤组织的反应性。结果表明YPC1单克隆抗体与16例被检测的胰腺癌组织发生反应。其中9例(56.3％)呈强阳性反应,与23种正常组织中的10种(43.5％)以及19种非胰腺肿瘤中的8种(42.1％)有不同程度的交叉反应,但多数反应较弱。本研究提示以新鲜人体肿瘤组织作为免疫原制备单克隆抗体是简便可行的,YPC1单克隆抗体可能有助于胰腺癌的诊断和治疗。     

小鼠骨髓来源树突细胞体外扩增和鉴定

目的　探讨从小鼠骨髓分离纯化及大量扩增树突细胞 (DC)的方法 ,并对其行免疫表型和形态鉴定。　方法　制备 Balb/ c小鼠骨髓细胞 ,利用 0 .83% NH4 Cl- Tris溶液、抗鼠 CD4 / CD8/ CD4 5R单克隆抗体和补体溶液 ,依次去除红细胞、淋巴细胞、单核 -巨噬细胞、粒细胞等混杂细胞以获得纯化的 DC,再将其培养于含有小鼠重组的粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (m GM- CSF)和白细胞介素 4 (m IL - 4 )的 RPMI 1 6 4 0营养液中 ,培养第 6～ 8天收集悬浮的细胞 ,电子显微镜观察细胞形态并用流式细胞术检测小鼠 DC细胞表面特有的 CD1 1 b抗原和 MHC- 类分子的表达量。　结果　每只小鼠可扩增到 (2～ 4 )× 1 0 6个 DC细胞 ,细胞纯度 >85 % ;细胞表面高水平表达小鼠 DC细胞特异性抗原 CD1 1 b和 MHC- 类分子 ,电镜下细胞形态符合典型的树突细胞形态。　结论　联合应用 m GM- CSF和m IL- 4刺激小鼠骨髓细胞可扩增到大量高纯度的树突细胞     

网织红细胞胞质因子调控肿瘤细胞基因表达的核酸杂交分析 Ⅱ.myc癌基因的表达状态

本实验用Northern杂交方法,以c-myc癌基因为探针,对人和小鼠骨髓瘤细胞以及杂交后的同种和异种胞质体杂交细胞和异种杂交细胞进行了癌基因表达的核酸分子杂交分析。结果表明,在小鼠-小鼠,小鼠-兔及人-小鼠的胞质体杂交细胞(BW-RM,BW-RR,HMy-RM)中均未检测到myc癌基因的表达产物。但自15代以后开始出现微弱或可测的表达活性,并随传代而有上升的趋向。同样,在小鼠浆细胞瘤(Sp2/o)与大鼠有核红细胞(ER)的异种杂交中,杂交细胞(SpER)的第4代和第7代细胞中亦未检查到myc基因转录物。表明细胞杂交后,myc基因受到了抑制。这种抑制作用似无种属特异性。这一结果提示红系细胞内“胞质因子”对肿瘤细胞原来活化的myc基因具有抑制作用,并与杂交细胞的恶性下降有关。论文对胞质因子对癌基因表达的调控作用及其分子生物学机理进行了讨论。     

肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的建立与鉴定

用HFRSV血凝素免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,共获得56株分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系。对其中10株细胞系应用血凝抑制试验证明有9株为特异性分泌抗HFRSV血凝素McAb的杂交瘤细胞系。应用微量细胞培养中和试验证明6株具有中和活性。z株(3D_8和3G_1)具有高滴度的血凝抑制活性和中和活性。10株HFRSV血凝素McAb均能与从不同疫区,不同宿主分离的HFRSV反应,说明HFRSV血凝素具有群共同性。