小鼠髓母细胞瘤细胞系的建立与鉴定

目的 建立表达PARP-1和P53基因双缺失的小鼠髓母细胞瘤细胞系,为研究髓母细胞瘤（medulloblastoma,MB）发生机制提供细胞模型。方法 对小鼠髓母细胞瘤细胞进行原代培养,体外传代观察,传代30次以上对培养细胞进行形态学观察、细胞标志性蛋白的免疫荧光分析、用Western blot法检测PARP-1蛋白的表达、用含有PARP-1蛋白功能区域的重组质粒pEGFP-C1-Hparp-1和绿色荧光蛋白空质粒pEGFP-C1转染细胞进行检测。结果 新建立的小鼠髓母细胞瘤细胞系,呈多角形、短梭形,免疫荧光分析可见未成熟神经元标志性蛋白Vimentin、Dcx、 III-Tubulin等表达阳性,Western blot检测PARP-1蛋白阴性,导入外源PAPR-1基因后呈阳性。结论 成功的建立了DNA损伤修复蛋白功能缺陷的小脑神经源性髓母细胞瘤细胞系,有助于深入研究髓母细胞瘤的病因及发病机制。     

兔网织红细胞胞质因子对小鼠骨髓瘤细胞恶性调控的研究

以无细胞核的兔网织红细胞与小鼠骨髓瘤细胞BW(胸腺淋巴肉瘤)及SP2/0(浆细胞瘤)分别进行异种杂交。实验结果表明杂交后形成的二种胞质杂交细胞(BW-RR及SP 2/0-RR)均呈现下列去恶性分化特征;①细胞分裂指数、~3H-TdR标记指数及生长曲线明显下降。其中SP2/0-RR的核分裂活动受到明显的抑制;②在软琼脂培养中不形成集落;③异种移植至裸鼠不长瘤;④染色体数量减少,众数及畸变率下降;⑤出现正常分化的珠蛋白基因产物血红蛋白和HGPRT基因的酶产物,珠蛋白探针分子杂交实验证明有珠蛋白基因的表达。为不同种属红细胞胞质因子调控肿瘤细胞恶性提供了证据。论文对胞质因子调控基因表达、恶性逆转及其在红细胞发生过程中自然去核的物质基础等问题进行了讨论。     

β-地中海贫血基因治疗研究——Ⅰ.以逆转录病毒作载体将人β-珠蛋白基因转移至Friend细胞

用重组人β-珠蛋白基因的逆转录病毒载体转染单向性的ψ-2包装细胞系,继而感染双向性的PA317包装细胞系,分离到能产生重组逆转录病毒载体的细胞系PIWβ,其分泌的重组载体滴度达1.1×10~5CFU/ml。利用这种缺失性病毒粒子,将人β-珠蛋白基因高效地转移到Friend细胞,Southern印迹杂交结果证实,人β-珠蛋白基因可以完整、稳定地整合到靶细胞的基因组上。以上结果为人β-地中海贫血的基因治疗研究提供了有用的参考途径。     

人浆细胞瘤与小鼠网织红细胞异种杂交的恶性调控研究

用人浆细胞瘤细胞与小鼠网织红细胞异种杂交获得成功。杂交细胞可以传代,出现下列明显的肿瘤细胞去恶性化特征:①生长速度及~H-TdR并合率明显下降;②出现红细胞特异的遗传标记——血红蛋白;③出现慢型迁移率的葡萄糖-6-磷酸异构酶Gpi;④在软琼脂培养基中不形成细胞集落;⑤异种移植至裸鼠后丧失发生肿瘤的能力。表明红细胞胞质体杂交模型可以用作研究细胞恶性调控的实验系统。对调控肿瘤细胞恶性表型的可能机理进行了讨论。     

癌基因与生长因子受体相关

癌基因来自调节细胞分裂和分化的正常细胞基因的理论最近又获新进展。研究者们现已发现,迄今鲜为人知的病毒癌基因之一erbB可能来自于编码表皮生长因子(EGF)受体的基因,至少来自与这受体基因密切相关的基因。erbB是第二个与生长因子功能有关的病毒癌基因。去年夏天,两个研究小组发现     

MHC抗原与癌

迅速积累的实验证据表明,主要组织相容性抗原在宿主抵御肿瘤的发生和扩散中起重要作用。各种自发和实验诱发的动物肿瘤细胞表现出由主要组织相容性复合物(Major HistocompatibilityComplex,MHC)编码的Ⅰ、Ⅱ类抗原量和质的差别。尽管在某些实验模型中选择性地缺少MHCⅠ类分子与肿瘤的生长和转移能力有关,但在另外的实验里却得到了明显矛盾的结果,但其机制所知甚少。我们对人类肿瘤的MHC抗原表达的改变知道的更     

网织红细胞胞质因子调控肿瘤细胞基因表达的核酸杂交分析 Ⅰ.β-珠蛋白基因的表达

本实验采用核酸杂交技术,以小鼠和人β-珠蛋白基因为探针,分析了同种和异种细胞的胞质体杂交细胞中β-珠蛋白基因的表达状态。结果发现小鼠β-珠蛋白基因转录物不但在同种杂交(小鼠网织红细胞RM×小鼠骨髓瘤BW)的胞质体杂交细胞(BW-RM)中出现,而且在兔网织红细胞与小鼠骨髓瘤的异种杂交细胞(Bw-RR)中亦有表达。同样在小鼠网织红细胞与人浆细胞瘤(HMy)的异种胞质杂交细胞(HMy-RM)中出现人β-珠蛋白基因产物。说明网织红细胞胞质因子可激活原来处于不活动状态的肿瘤细胞β-珠蛋白基因并使之表达.兔和小鼠的胞质因子有同样的调节基因表达的作用而似无种属特异性。对网织红细胞胞质因子调控基因表达和肿瘤细胞恶性逆转的机理和分子生物学基础进行了讨论。     

转基因小鼠的研究及其遗传学意义

转基因小鼠(transgenic mice)是细胞工程在医学生物学研究中突出的范例之一。在转基因小鼠诞生至今的短短五年里,它已经为研究分子遗传学,发育生物学,肿瘤学提供很多宝贵资料。特别是对近两年来在遗传模型的建立,肿瘤学研究,及转基因家畜的问世作出了巨大贡献。这些惊人的成果以及转基因动物的迅速发展为世人所嘱目。因此,本文将转基因小鼠的建立及其发展状况介绍于下。     

哺乳类细胞的基因转移技术

哺乳类细胞的基因转移技术是生物医学研究领域中使用的一种重要的、强有力的研究手段。许多生命科学中的重大成就以及目前所进行的研究项目中,都已经或正在从这类技术中得到裨益。本文较系统地综述了哺乳类细胞的基因转移技术的发展和应用,扼要地描述了目前常用的几种转移基因的方法,并比较各种方法的适用性和局限性。同时,亦讨论了基因转移技术的发展对生物医学研究的巨大潜在影响。     

显微注射及其在肿瘤研究中的应用

经过半个多世纪的发展,动物细胞的显微注射技术已经在生物医学研究领域取得了光辉成就,尤其是近二十年来经过众多科学家的努力,使得这一技术日臻完善,已成为一项为其它技术所不能替代,而独具特色的细胞工程手段。人们用此研究细胞的分化、基因调控、核