运用学会平台服务科技工作者的实践与思考

为科技工作者服务是学会的主要职责之一。学会可以通过举办学术会议、开展科普活动、提高学术任职、评优推优、设奖报奖、加强组织建设、营造学习范围、坚持民主办会、发挥集体智慧等多种方式服务科技工作者。     

抗汉坦病毒单链抗体基因向拟南芥遗传转化的初步研究

目的构建抗汉坦病毒mAb 1A8 scFv的转基因拟南芥植株。方法从含有1A8 scFv基因的重组质粒中酶切获得携带Nos终止子的抗体基因片段，将其与CaMV 35S启动子相连克隆入载体pCAMBIA2301，构建1A8 scFv基因的植物表达载体1A8scFv—pCAMBIA2301。通过农杆菌介导的花粉管法将其转入拟南芥，PCR及Dotblot检测是否获得转基因植株，ELISA和固相酶联斑点实验检测表达产物的生物学活性。结果酶切鉴定结果证明1A8scFv基因被成功克隆入植物表达载体pCAMBIA2301，构建获得1A8scFv—pCAMBIA2301重组质粒。PCR及Dotblot检测证明获得抗汉坦病毒mAb 1A8scFv的转基因拟南芥植株。ELISA和固相酶联斑点实验结果证明在转基因拟南芥中成功表达了具有生物学活性的抗汉坦病毒mAb1A8scFv片段。结论成功地将外源基因转入拟南芥中并表达，为进一步研究利用植物表达医用抗体奠定了基础。     

结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B-ESAT6的融合表达及纯化

目的　融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B ESAT6 ,为结核病的预防提供有效亚单位疫苗。方法　设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)的方法从结核分枝杆菌毒株H3 7Rv DNA中分别扩增出相应大小的DNA片段 ,将片段分别与PGEM T easy载体连接测序。将测序正确的Ag85B和ESAT6按照不同的酶切位点克隆入PPROEXHT表达载体 ,挑选出阳性克隆 ,将诱导的表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析 ,同时与含6个组氨酸 (histidine 6×his)的单克隆抗体 (monoclonalantibody ,mAb)进行固定化蛋白质免疫学测定(Western blot) ,将用含Ni 鳌合剂的Ni NTA亲合柱纯化的表达产物免疫小鼠 ,用结核分枝杆菌培养上清滤液蛋白 (culturefiltrateproteins ,CFP)作为抗原 ,酶联免疫吸附试验 (enzyme linkedimmunosorbentassay ,ELISA)测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。结果　PCR获得的Ag85B和ESAT6序列与基因文库 (GenBank)报道的完全一致。两者在大肠杆菌DH5α株中融合表达的产物约为 370 0 0 ,与预计大小相吻合。Western blot结果显示 ,在相对分子量约 370 0 0处有表达产物与 6×hismAb特异性结合带。表达产物为包涵体 ,通过Ni NTA纯化系统 ,可得到纯化的目的蛋白。Ag8     

汉滩病毒核蛋白部分片段与囊膜糖蛋白G1在昆虫细胞中的融合表达

目的　应用Bac -to -Bac杆状病毒表达系统融合表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白部分片段。方法　构建含有汉滩病毒G1S0 7嵌合基因的杆状病毒表达载体 pFBD -G1S0 7,转化DH10Bac致敏菌 ,利用其含有的细菌Tn7转座系统将嵌合基因重组至穿梭质粒Bacmid上 ,快速筛选出含有G1S0 7嵌合基因的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中表达该融合蛋白 ,利用间接免疫荧光、ELISA和免疫印迹对表达产物进行检测。结果　构建的含G1S0 7嵌合基因之重组杆状病毒可在昆虫细胞中表达出融合蛋白 ,该蛋白可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1特异性单抗所识别 ,表达产物主要集中在细胞内。结论　在昆虫细胞中表达出具有生物学活性的G1S0 7融合蛋白 ,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础     

小鼠结核分枝杆菌耐药模型的建立与评价

目的建立小鼠结核分枝杆菌耐利福平株静脉感染小鼠模型。方法 30只BALB/c雌性小鼠经尾静脉感染结核分枝杆菌耐利福平株每只106CFU,观察小鼠一般状况,并分别在感染后6周、10周、14周处死小鼠,进行脾、肺组织病理切片、抗酸染色、计脏器荷菌数。结果感染后小鼠体重呈逐渐上升趋势,脏器病理变化随时间推移由急性炎症逐渐转为慢性炎症反应,抗酸染色均为阳性,脏器荷菌数与感染剂量相对应,并至少可持续14周。结论成功建立了小鼠结核分枝杆菌耐利福平株静脉感染动物模型,为其进一步用于结核病防治研究奠定了一定的基础。     

三级生物安全实验室操作病原微生物的体会

根据生物安全的的分级,结合我国病原生物学实验室的现状,阐述如何在三级生物安全实验室操作病原微生物,实验室出现问题应如何处理,对今后明确操作各种病原微生物的生物安全等级、掌握实验安全技术提供借鉴作用.     

重视单克隆抗体在病毒性疾病治疗中的研究与应用

病毒性疾病对人类健康危害极大,易引发严重的公共卫生问题,其中绝大多数目前尚无特效治疗药物。纵观病毒性疾病的治疗历史与现状,一些特异性免疫球蛋白发挥了重要作用,例如麻疹、甲型肝炎、狂犬病、呼吸道合胞病毒感染、巨细胞病毒感染以及水痘—带状疱疹病毒感染等[1]。免疫球蛋白是由免疫血清中提取的多克隆抗体,优点是其组成中的多个中     

登革病毒复制分子机制的研究进展

登革病毒(dengue virus,DV)是登革热(dengue fever,DF)、登革出血热/登革休克综合征(DHF/DSS)的病原体,按血清型分为四型(DV1～4)。DV以埃及伊蚊和白纹伊蚊为传播媒介,广泛流行于全球热带及亚热带的60多个国家和地区[1]。我     

分枝杆菌胞壁融合表达Ag85B-ESAT-6穿梭质粒的构建

目的　构建E coli BCG(BacilleCalmette Guerin)穿梭载体 ,在母牛分枝杆菌细胞壁融合表达结核分枝杆菌 (MTB)的分泌蛋白Ag85B ESAT 6。方法　用聚合酶链反应 (PCR)从MTB毒株H3 7Rv基因中扩增出结核分枝杆菌 190 0 0抗原 ( 19 ss)胞壁区及其上游调控元件基因 ,克隆入E coli BCG穿梭载体 pOLYG中 ,构建表达蛋白能嵌入细胞壁中的E coli BCG穿梭载体。用间接免疫荧光染色法观察该载体携带所构建的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B和ESAT 6基因在母牛分枝杆菌宿主中的融合表达。结果　经测序证实所克隆的 19 ss基因序列正确 ,所构建的E coli BCG穿梭载体 (pCW )能完成在大肠杆菌和母牛分枝杆菌细胞之间的穿梭 ,经免疫荧光检查外源基因Ag85B ESAT 6可融合表达于分枝杆菌宿主表面。 结论　本方法可成功构建能够在分枝杆菌胞壁融合表达MTB分泌蛋白Ag85B ESAT 6的E coli BCG穿梭质粒     

结核分枝杆菌mpt64基因重组穿梭表达载体的构建与鉴定

目的在分枝杆菌系统中表达结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64。方法用PCR法扩增mpt64基因,构建表达载体穿梭质粒pDE22-mpt64。在母牛分枝杆菌中表达MPT64蛋白,间接免疫荧光和Western-blot鉴定、离子亲和层析法纯化目的蛋白。结果大肠—分枝杆菌穿梭质粒pDE22-mpt64可以在母牛分枝杆菌中复制并表达26kDa蛋白。蛋白印迹实验证实可与抗His单克隆抗体特异结合。结论成功构建了结核分枝杆菌mpt64基因重组穿梭表达质粒,为进一步研究该蛋白奠定了的基础。