抗HBV Pres2单链抗体基因的构建、克隆、表达及鉴定

3B9是一株分泌HBV Pres2抗原的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞系。为了构建基因工程抗体并从分子水平分析3B9株McAb,我们用分子生物学技术提取3B9杂交瘤细胞总RNA,经反转录和聚合酶链式反应(PCR)技术分离获得了3B9McAb的轻、重链可变区基因(VL/VH),并利用PCR及双脱氧核苷酸链末     

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳鼠保护作用的研究

HFRS病毒陈株100LD_(50)腹腔感染新生乳鼠后24小时,腹腔分别接种24株抗HFRS病毒McAb,观察McAb对感染新生乳鼠的保护作用。结果发现,有5株McAb保护率为100％,1株McAb保护率为17％,另有7株McAb可使感染乳鼠的发病死亡时间推迟。取有明显保护作用的5株McAb分别接种感染后不同时间的乳鼠,结果在48小时内接种保护率均达100％;但随接种时间推后,保护率逐渐下降,感染后10天接种几乎无保护作用。此5株McAb保护作用均优于多克隆的免疫血清。应用不同稀释的McAb 3D8进行保护试验,发现保护效果与接种剂量密切相关。采用固定抗体,稀释病毒方法测得McAb 3D8对HFRS病毒陈株感染乳鼠的保护指数为5.8。     

建立斑点金免疫渗滤法检测O157：H7型肠出血性大肠杆菌

肠出血性大肠杆菌（ＥＨＥＣ）被公认为是一种最重要的人类肠道致病菌。ＥＨＥＣＯ１５７:Ｈ７ 是产生Ｖｅｒｏ细胞毒素（ＶＴ）的常见血清型 ,除引起血性腹泻外 ,还可引起溶血性尿毒综合症（ＨＵＳ）和血栓性血小板减少性紫癜而危及生命。其临床症状易与肠套叠、溃疡性结肠炎及艰难梭菌感染所致的结肠炎混淆 ,且近年来 ,由其引起的感染性腹泻有明显上升的趋势。为此 ,建立一种快速、敏感、简便检测粪便标本中ＥＨＥＣＯ１５７:Ｈ７ 的方法是当务之急。１材料和方法１．１材料ＥＨＥＣＯ１５７:Ｈ７ 标准株和分离株（日本分离株６株 ,长春牛…     

产Vero毒素大肠埃希菌感染状况的调查

为了解引起Ｖｅｒｏ细胞病变的毒素（ＶＴ）的大肠埃希菌（ＶＴＥＣ）。在我国人群中的感染状况，我们对１９９７年１５１２例急性腹泻患者进行了ＶＴＥＣ的检测及流行病学分析，现报道如下。一、材料与方法１－标本来源：我院门诊患者的急性腹泻粪便标本。２－培养基：ＳＳ琼脂本室自制，山梨醇麦康凯（ＳＭＡＣ）、伊红美蓝（ＥＭＢ）琼脂购自上海市卫生防疫站，胰酶大豆肉汤培基为法国梅里埃公司产品。３－诊断试剂：ＳＰＡ抗Ｏ１５７试剂本室制备，抗Ｏ１５７乳胶试剂Ｏｘｏｉｄ公司生产。４－Ｖｅｒｏ细胞：从我院病毒室引进。５－分…     

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳属保护作用的研究

本文进一步观察了自制的24株抗HFRS病毒血凝素McAbs对感染HFRS病毒新生乳鼠的保护作用。将HFRS病毒陈株100LD_(50)腹腔感染昆明种小鼠的新生乳鼠后24h,腹腔分别接种24株抗HFRS病毒McAb,观察McAb对感染新生乳鼠的保护作用。结果发     

McAb ELISA间接夹心法检测HFRS病人血凝抑制抗体的研究

本文介绍一种采用抗HFRSV血凝素McAb和粗制血凝素抗原的ELISA间接夹心法。该法检测了33份临床诊断为HFRS病人血清中的血凝抑制抗体,并平行地与血凝抑制试验(HIT)进行了比较。结果表明,本法特异性好,敏感性高,简便快速,判定结果客观,在临床诊断,流行病学监测中,有实用价值,并有可能取代HIT.     

单克隆抗体对HFRS病毒50K结构蛋白的分析

采用18株抗HFRS病毒McAb,以Western-blotting技术对纯化的该病毒50K结构蛋白进行了分析。结果有7株McAb可与该蛋白反应,这7株McAb的特性(包括感染细胞膜抗原免疫荧光染色模式、中和活性及HI活性等)各不相同,提示它们所针对的抗原决定簇的特性也不同。用ELISA阻断试验等证明,上述7株McAb中,有5株所针对的抗原决定簇之间有部分相同或重叠,并提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。分析结果表明,该50K结构蛋白的特性及结构均较复杂,值得进一步研究。     

肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制与鉴定

本文报道,从肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染乳鼠鼠脑中提取高滴度的血凝素(HAN),以该血凝素免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。融合率为60％和78％,阳性孔率为15％和44％。IFA筛选后共获得56株分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系。对其中1A_3,2A_(11),1B_3,3D_8,2F_7,1G_4,1G_9,3G_1,3G_(11),2H_1十株细胞系用有限稀释法进行了3～4次克隆化,阳性克隆率达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养巳6个多月,仍能稳定地分泌单克隆抗体。冻存的细胞系经复苏后仍能稳定地分泌McAb。应用血凝抑制(Hl)试验证明其中9株为特异性分泌抗HFRSVHHAN McAb 的杂交瘤细胞系,1株(2A_(11))是抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系,其中(1:81920)和3G_1(1:40960)具有高滴度的血凝抑制活性。应用微量细胞培养中和试验(NT)证明其中6抗1A_8,1B_3,3D_8,1G_4,3G_1,3G_(11))具有中和活性.尤其3D_8(1:5120)和3G_1(>1:10240)有较高的中和效价。IFA测定了10株杂交瘤细胞的McAb与HFRSV陈株抗原片反应的抗体效价,其中培养上清为1:40～1:320,杂交瘤腹水为1:1万～1:8万。10种单克隆抗体与JEV、HSV-I和正常Vero-E_6细胞抗原片均无交叉反应。但均能与不同疫区、不同宿主分离的HFRSV陈株81-14A,A9和R_(22)抗原片反应,说明HFRSV血凝素McAb具