胰岛素样生长因子-1受体在实验性肝纤维化中的表达及IL-10的干预作用

目的 观察胰岛素样生长因子－1受体（IGF－1R）在实验性大鼠肝纤维化过程中的表达情况及白细胞介素－10（IL－10）对肝纤维化大鼠IGF－1R表达的影响。方法 建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型并行IL－10干预实验。取对照组、模型组及IL－10干预组大鼠肝脏组织，采用SP免疫组织化学方法检测分析在肝纤维化进程不同阶段大鼠肝组织IGF－1R4的表达情况。结果 经CCl4诱导成功建立大鼠肝纤维化模型。随着肝纤维化程度的加重，IGF－1R在肝组织中阳性表达明显增强；经Ridit分析，对照组与模型组IGF－1R阳性表达差异有显著性（P＜0．01）；IL－10干预组IGF－1R阳性表达较模型组明显减弱，差异有显著性（P＜0．05），且随IL－10干预时间的延长，IGF－1R在肝组织中阳性表达逐渐减弱。结论 随着肝纤维化程度的进展IGF－1R阳性表达增强，外源性IL－10可降低CCl4诱导大鼠肝纤维化中IGF－1R的表达。     

白细胞介素10对大鼠肝星形细胞表达α-平滑肌肌动蛋白和核因子-κB的影响

目的　研究外源性白细胞介素 10 (IL - 10 )干预对实验性大鼠肝纤维化肝星形细胞表达α-平滑肌肌动蛋白 (α- SMA)和核因子 -κB(NF-κB)的影响。　方法　 6 0只清洁级 SD大鼠 ,随机分为正常对照 (N组 )、肝纤维化 (C组 )和 IL - 10干预 (I组 )。以 CCl4 腹腔内注射构建肝纤维化模型 ,并予 IL - 10腹腔内注射干预造模。于第 7周和第 11周分别随机选取一批大鼠 ,分离肝星形细胞 (HSC) ,以免疫细胞化学法检测各组 HSC中α- SMA和 NF-κB表达情况。　结果　 N组α- SMA和 NF-κB仅少量表达且着色浅 (阳性率分别为 36 .5 %和 2 8.5 % ) ,免疫化学评分分别为0 .6 6± 0 .0 7和 0 .4 2± 0 .0 5 ;C组所有细胞均表达α- SMA和 NF-κB且表达明显增强 ,第 7周二者评分分别为 2 .4 3± 0 .0 3和 1.73± 0 .0 9,第 11周为 2 .4 7± 0 .14和 2 .4 8± 0 .70 (与 N组比较 ,P<0 .0 1) ;I组二者表达较 C组明显减弱 ,第 7周时评分分别为 2 .14± 0 .11和 1.6 2± 0 .1(P<0 .0 5 ) ,第 11周为 2 .0 9± 0 .0 6和 1.92± 0 .4 2。随肝纤维化进展 ,C组中第 11周 NF-κB的表达较第 7周有增加趋势 (P<0 .0 1) ,而α- SMA的表达不随纤维化的进展而变化 (P>0 .0 5 )。　结论　外源性 IL - 10可以抑制肝纤维化时大鼠肝星形细胞内     

白细胞介素-10对实验性肝纤维化大鼠Bax/Bcl-2表达的影响

目的探讨白细胞介素-10（IL-10）对实验性肝纤维化大鼠Bax／Bcl-2表达的影响及外源性IL-10对肝纤维化的治疗及可能机制。方法47只SD大鼠随机分为生理盐水对照组（N组，6只）和CCl4组（Z组，41只）。至造模第9周，Z组随机分为模型组（M组，9只），自然恢复组（R组，9只）和IL-10治疗组（T组，9只）；于12周末处死各组动物。免疫组织化学法和RT—PCR法检测各组大鼠肝脏Bax／Bcl-2的表达。结果成功建立肝纤维化模型。T组肝细胞变性及坏死程度较M组减轻；R组肝脏炎症活动度较M组有所缓解，但肝纤维化程度未见明显改善。免疫组织化学提示，Bax主要表达在肝细胞质内，Bcl-2主要表达在汇管区及纤维间隔区。组织蛋白及mRNA表达检测均显示，M组Bax较N组增高（P〈0．01），Bcl-2表达亦显著增高；R组Bax表达较M组降低（P〈0．01），但Bcl-2表达则较M组显著升高；T组Bax／Bcl-2均较R组显著降低。结论肝纤维化过程肝脏Bax／Bcl-2表达增强．外源性IL-10可以减轻CCl4诱导的肝脏纤维化，IL-10抗纤维化作用可能是通过减少肝细胞表达Bax、抑制肌成纤维细胞样细胞表达Bcl-2实现的。     

反义TIMP-1对实验性肝纤维化中TIMP-1及MMP-13表达的影响

目的探讨反义TIMP-1对实验性肝纤维化中TIMP-1及MMP-13表达的影响。方法抽提TIMP-1/PCDNA3.1( )重组质粒、PCDNA3.1( )表达质粒,以脂质体Lipofectmine2000包埋;以复合因素复制肝纤维化大鼠模型,分为正常对照组(12只N)、肝纤维化组(19只C)、空质粒对照组(19只P)、反义TIMP-1组(11只AT),P组、AT组定期给予腹腔注射脂质体包埋好的PCDNA3.1( )、TIMP-1/PCDNA3.1( )质粒50μg,实验周期满时,取剩余N组(12只)、AT组(11只)、C(11只)、P(10只)肝组织;应用HE染色、VG染色观察肝组织病理形态学变化,进行肝纤维化分级,应用SABC法行切片染色,并采用图像分析系统对阳性部位行灰度值测定;采用SPSS软件做方差分析(多个样本均数的两两比较),P<0.05表示差异有显著性,病理学形态分级采用Ridit检验。结果反义TIMP-1质粒组与肝纤维化组、空质粒组相比TIMP-1、MMP-13表达明显减少(P<0.05),空质粒组与肝纤维化组无显著性差异(P>0.05);正常对照组与各实验组之间的病理学分级有显著性差异(P<0.05);反义TIMP-1质粒组病理学分级较空质粒组及有明显改善(P<0.05);空质粒组与肝纤维化组无显著性差异(P>0.05)。结论反义TIMP-1/PCDNA3.1( )真核细胞表达质粒使TIMP-1、MMP-13的表达受到抑制。     

丹芍化纤胶囊治疗大鼠肝纤维化对金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响

目的：探讨丹芍化纤胶囊对大鼠实验性肝纤维化TIMP-1表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠80只分为正常组、肝纤维化模型组、自然恢复组、低剂量治疗组、高剂量治疗组,除正常组外,其余采用CCl4、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周,然后两治疗组分别予以低剂量(0．5g／kg)、高剂量(1g／kg)丹芍化纤胶囊灌胃治疗8周。实验结束后测定肝脏指数、血清透明质酸(HA)及谷丙转氨酶(ALT),光镜下观察肝组织纤维化程度,检测尿羟脯氨酸(Hyp)排出量,同时用免疫组化SABC法检测肝组织中TIMP-1的表达。结果：治疗组与肝纤维化模型组、自然恢复组比较：肝脏指数、血清HA及ALT显著下降;肝纤维化程度显著减轻;尿Hyp排出明显增加;治疗组肝组织中TIMP-1的表达与肝纤维化模型组和自然恢复组相比则显著降低。结论：丹芍化纤胶囊能够抑制肝纤维化组织中TIMP-1的表达,从而提高MMP-1的活性,促进细胞外基质的降解,这可能是丹芍化纤胶囊抗肝纤维化作用的机制之一。     

两种不同病毒载体携带靶向大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)－1小干扰RNA抗肝纤维化作用的比较

目的观察以腺相关病毒(AAV)及慢病毒(Lentivirus)为载体含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1具有较强抑制作用的小干扰RNA(siRNA)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型的干预作用。方法挑选针对大鼠TIMP-1基因具有较强抑制作用的siRNA序列,在体外构建为短发夹表达载体后,将其包装为重组AAV/siRNA-TIMP-1和Lenti/siRNA-TIMP-1,同时包装对照病毒AAV/EGFP和Lenti/EGFP。将Wistar大鼠分为对照组、CCl4模型组、AAV/EGFP组、Lenti/EGFP组、AAV/siRNA-TIMP-1和Lenti/siRNA-TIMP-1组,观察CCl4造模4周后,经H&E及Masson染色评价各组动物的肝纤维化状况,经荧光定量RCR及Western blot方法检测TIMP-1的表达抑制情况。结果 H&E及Masson染色证实,与对照组相比,CCl4模型组、AAV/EGFP组、Lenti/EGFP组肝脏胶原纤维明显增加,纤维化评分多为3-4级,同时肝脏TIMP-1的转录与蛋白表达水平均明显上升;而AAV/siRNA-TIMP-1和Lenti/siRNA-TIMP-1组肝纤维化程度明显减轻,纤维化评分多为2-3级,伴随肝脏TIMP-1的转录与蛋白表达水平均显著抑制。AAV/siRNA-TIMP-1和Lenti/siRNA-TIMP-1组在组织学表现及TIMP-1基因的转录与表达水平上无统计学差异。结论 AAV/siRNA-TIMP-1和Lenti/siRNA-TIMP-1均可有效抑制大鼠肝脏TIMP-1基因表达,进而发挥抗肝纤维化作用。     

大鼠肝纤维化过程星形细胞MMP-2的表达及白细胞介素10的影响

目的　探讨基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )表达在实验性大鼠肝纤维化发病中的意义及外源性白细胞介素 10 (IL 10 )抗肝纤维化作用的机制。　方法　 6 0只SD雄性大鼠随机分为生理盐水对照组 (N组 ) 8只、四氯化碳(CCl4)组 2 8只和IL 10干预组 2 4只 ,建立正常对照、CCl4诱导肝纤维化模型及IL 10干预模型。造模第 7周和第11周 ,采用链霉蛋白酶E、Ⅳ型胶原酶经门静脉体外灌流消化 ,11%Nycodenz密度梯度离心分离肝星形细胞(HSC)。半定量RT PCR法检测各组HSC的MMP 2mRNA表达水平 ;免疫细胞化学法检测培养 72h时HSC的MMP 2蛋白表达情况。　结果　各组均检出MMP 2的mRNA表达 ;造模第 7周 ,CCl4组与IL 10组的MMP 2mRNA表达均高于N组 (P <0 0 1) ,IL 10组低于CCl4组 (P <0 0 1) ;造模第 11周 ,CCl4组与IL 10组的表达水平较第 7周均有下降 (P <0 0 1) ,IL 10组低于CCl4组 (P <0 0 1)。SP免疫细胞化学法检测各组MMP 2的蛋白表达情况与mRNA一致。　结论　MMP 2在实验性大鼠肝纤维化早期表达升高 ,后期下降是肝纤维化发生发展的重要机制之一 ;外源性IL 10可能通过抑制早期MMP 2的表达发挥抗肝纤维化作用。     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1 mRNA、MMP-1mRNA表达的影响

目的观察银杏叶提取物对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1 mRNA、MMP-1 mRNA表达的影响,并探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法 30只大鼠随机分为3组(对照组,模型组和治疗组),每组各10只。A组为正常对照组,不做特殊处理,B、C两组制备大鼠肝纤维化模型,同时C组给予银杏叶提取物治疗;采用免疫组化和RT-PCR方法分别检测3组大鼠肝脏组织Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1 mRNA、MMP-1 mRNA的表达情况。结果模型组及治疗组肝脏组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平明显高于对照组(P<0.01),经银杏叶提取物(GbE)灌胃处理后,治疗组肝脏组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平明显低于模型组(P<0.01);模型组及治疗组肝脏组织TIMP-1 mRNA、MMP-1 mRNA表达水平较对照组均显著增高(P<0.01),且治疗组TIMP-1mRNA表达水平明显低于模型组(P<0.01),治疗组MMP-1 mRNA表达水平明显高于模型组(P<0.01)。结论银杏叶提取物可能通过抑制TIMP-1表达和提高MMP-1 表达而促进Ⅰ、Ⅲ型胶原降解并发挥抗肝纤维化的作用。     

转化生长因子β1在白细胞介素10干预肝纤维化大鼠肝星形细胞的表达

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在白细胞介索10(IL-10)干预肝纤维化大鼠星形细胞中的表达,阐明外源性IL-10的抗纤维化作用及可能机制.方法60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组,8只)、肝纤维化模型组(C组,28只)和IL-10干预组(Ⅰ组,24只),分别于CCl4造模第7周及11周采用链霉蛋白酶E、Ⅳ型胶原酶经门静脉灌注分离肝星形细胞.半定量RT-PCR法检测各组新分离肝星形细胞中TGF-β1mRNA的表达水平;SP免疫细胞化学法检测各组原代培养72 h后肝星形细胞TGF-β1蛋白的表达水平.并于上述两个时间段分别将各组肝组织行苏木精-伊红染色判断炎症和肝纤维化程度.结果成功建立大鼠肝纤维化模型及IL-10干预模型,并对大鼠肝星形细胞进行分离及原代培养.与正常组相比,纤维化模型组TGF-β1的mRNA水平显著升高(P＜0.01),经IL-10干预后则明显降低(P＜0.01).纤维化模型组星形细胞TGF-β1mRNA水平在第11周时低于第7周(P＜0.05).SP免疫细胞化学法检测各组TGF-β1的蛋白表达情况与mRNA结果相平行.结论IL-10可抑制肝纤维化大鼠星形细胞中TGF-β1表达,具有抗纤维化作用.     

前列腺素E1对实验性肝纤维化大鼠TIMP-1表达的影响

目的：通过研究前列腺素E1（prostaglandin E1 ，PGE1）对实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）的影响，探讨PGE1抗肝纤维化的另一可能机制。方法：采用四氯化碳诱导建立大鼠肝纤维化模型，将动物分为对照组和PGE1治疗组，治疗结束后从对照组及PGE1治疗组中取肝脏组织，比较分析两组肝组织病理学改变，对HE染色的肝组织切片进行肝炎活动度分级；对肝组织纤维、TIMP-1免疫组化阳性表达及胶原含量进行病理图像定量分析研究。结果：与对照组比较，治疗组肝炎炎症活动度减轻，统计学分析差异有统计学意义（P〈0．05）；治疗组肝组织中纤维化程度、胶原纤维、TIMP-1阳性细胞均下降，与对照组比较差异有统计学意义（均P〈0．05）。结论：PGE-具有抗肝纤维化的作用，能减轻肝脏的炎症反应，抑制胶原纤维的形成，其机制可能与PGE1抑制TIMP-1的表达有关。     

免疫印迹法检测肝纤维化组织基质金属蛋白酶抑制因子-1表达水平

目的 观察实验性肝纤维化过程中金属蛋白酶组织抑制因子－1（TIMP－1）蛋白表达水平的动态变化。方法 建立四氯化碳中毒性大鼠肝纤维化模型,采用免疫印迹方法（Western blot法）,测定肝纤维化不同阶段TIMP－1的蛋白表达水平。结果 正常大鼠肝组织可见TIMP－1的蛋白表达。在肝纤维化的发生、发展过程中,TIMP－1蛋白表达逐渐增强,到肝硬化阶段达到高峰。结论 TIMP－1可能是促进和影响肝纤维化、肝硬化形成的重要因素。     

还原型谷胱甘肽对大鼠肝星状细胞TIMP—1表达的影响

目的 研究还原型谷胱甘肽对大鼠肝星状细胞（hepatic stellate,cells,HSC)中金属蛋白酶1组织抑制因子（TIMP－2）表达的影响。从分子和蛋白水平探讨还原型谷胱甘肽对大鼠肝纤维化的作用和可能机制。方法 采用50％CCl4制备大鼠肝纤维化模型，在造模过程中给予还原型谷胱甘肽进行干预。应用RT－PCR才Western Blot技术，在分子和蛋白水平检测体外分离大鼠HSC中的TIMP－1的表达情况。结果 还原型谷胱甘肽干预组与模型组和正常对照组相比，HSC中TIMP的表达降低（P＜0．05）。结论 还原型谷胱甘肽的干预可下调大鼠HSC中TIMP－1的表达，对实验性肝纤维化起到减轻作用。     

实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2和组织型金属蛋白酶抑制剂-1mRNA表达及姜黄素的作用

目的探讨大鼠肝纤维化过程中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、组织型金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）mRNA表达及姜黄素汤对其的影响。方法复制大鼠四氯化碳（CCl4）肝纤维化模型,分别以高、中、低剂量姜黄素处理,检测血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、三型前胶原（PCⅢ）和四型胶原（IVC）水平,检测肝组织纤维化程度和MMP-2及其抑制因子TIMP-1mRNA表达。结果CCl4成功诱导肝纤维化大鼠模型,姜黄素治疗能够降低血清肝纤维化指标及肝组织纤维化程度,姜黄素可以抑制CCl4诱导的MMP-2和TIMP-1mRNA表达,并能恢复MMP-2／TIMP-1的动态平衡。结论姜黄素可以通过减少MMP-2及其TIMP-1表达抑制肝纤维化。     

结直肠癌组织趋化因子IL-8的表达

目的：研究结直肠癌组织趋化因子IL－8的表达与结直肠 生物学行为的关系。方法：采用RT－PCR方法检测临床收集的新鲜结直肠癌组织标本中趋化因子IL－8mRNA的表达;采用免疫组织化学方法检测结果直肠癌组织中趋化因子IL－8蛋白的表达。结果：12例结直肠癌组织经RT－PCR检测均可出现趋化因子IL－8mRNA的表达。40例结肠癌组织IL－8蛋白表达的阳性率为87．5％;结直肠癌组织IL－8蛋白的表达与结直肠癌的转移及Dukes分期有关,表达强者,转移发生率高,Dukes分期晚。结论：结直肠癌组织中趋化因子IL-8的表达与结直肠癌的生物学行为有关。     

翼状胬肉形成与MMP及TIMP基因表达的关系

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)及组织金属蛋白酶抑制物(TIMP)在翼状胬肉发生过程中的作用。方法 获取25份翼状胬肉标本(病例组)及20份非翼状胬肉眼部疾病患者的球结膜(对照组)，抽提组织总RNA。以Primer 5．0软件设计MMP—1、MMP—2、MMP—3、MMP—9、TIMP—1、TIMP—2特异性引物并对标本RNA进行RT—PCR扩增，以GAPDH为内参照，通过DNA扩增带扫描密度比较各基因表达的相对强度。结果 翼状胬肉组织中MMP—1、MMP—3的基因表达明显高于对照组织，而MMP—2、MMP—9、TIMP—1、TIMP—2基因表达在翼状胬肉及对照组织中表达无明显差别。结论 MMP—1、MMP—3高表达导致MMP与TIMP比例的失衡可能与翼状胬肉形成有关。     

保肝复功水煎剂对大鼠肝纤维化TGFβ1、TIMP1、MMP1表达的影响

目的:为了探讨保肝复功水煎剂抗肝纤维化的作用机理。方法:通过四氯化碳致小鼠肝损伤模型,利用基因芯片技术研究TGFβ1、MMP1及TIMP1在肝组织中的表达情况。结果:保肝复功水煎剂干预性治疗使实验组大鼠肝组织MMP1表达上调,TIMP1、TGFβ表达下调。结论:保肝复功水煎剂在肝组织中具有明显使MMP1表达上调,TIMP1、TGFβ表达下调的作用,从而促进了胞外基质的降解,抑制发挥肝纤维化的作用。     

幽门螺杆菌CagA蛋白肽段的基因克隆、表达及抗原性检测

目的 克隆幽门螺杆菌CagA蛋白肽段的基因，确定CagA蛋白与相应抗体亲和力最强的肽段。方法 根据幽门螺杆菌cagA全基因序列以DNAMAN软件设计5对引物，采用PCR方法扩增出5条门螺杆菌cagA基因片段。将PCR扩增产物插入原核表达载体pGEX－3X并转化至大脉杆菌Top10中，形成5种重组质粒。经PCR、双酶切和测序鉴定后，以异丙硫半乳糖苷（IPTG）诱导其表达CagA蛋白肽段。包涵体经8mol/L尿素初步纯化后，运用ELISA方法检测其抗原性并确定相应抗体亲和力量强的CagA蛋白肽段。结果 5条cagA基因片段在大肠杆菌中都得到了表达，表达的蛋白均具有强弱不等的抗原性，其中66kD的蛋白肽段与抗CagA抗体亲和力最强。结论 66kD的蛋白肽段与抗CagA抗体亲和力最强。     

体外循环心脏停跳或不停跳对血清IL-6、IL-8的影响

目的：探讨体外循环手术中心脏停跳或不停跳对血清IL－6、IL－8的影响。方法：20例先天性心脏间隔缺损病人,随机分成两组（n＝10）：A组在常规体外循环和心脏停跳情况下施行心脏间隔缺损修补手术,B组在体外循环心脏不停跳的情况下进行手术。每位病人在术前、体外循环开始、体外循环结束、术后第6,24和48h,桡动脉采血测定IL－6和IL－8。结果：（1）A组IL－6平均水平在体外循环开始后逐渐上升,在体外循环结束、术后第6,24及48h,均比体外循环开始前明显升高,术后6h达到高峰。与B组相比,A组患者在术后第6,24,48h的IL－6水平显著高于B组（P＜0．05,P＜0．01,P＜0．05）。A组患者IL－8在体外循环结束后迅速达到高峰（P＜0．01）,术后24h恢复正常。与B组相比,体外循环结束及术后6hIL－8水平均显著增高（P＜0．01）。结论：在心外科手术中,体外循环引起病人血清IL－6和IL－8水平升高 ,心脏停跳方法将加重这种改变。建议尽可能地采用心脏不停跳和尽力缩短手术操作时间,减少术后的炎症反应和组织损伤。     

胞间粘附分子1对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用

目的 观察大鼠脑缺血再灌注不同时相不同脑区胞间粘附分子1（ICAM－1）的方法。方法 采用双侧颈总动脉阻断＋全身低血压法建立SD大鼠脑缺血模型，随机分为假手术组、缺血再灌注（24，48，72，96，168h）组，于规定时间取脑组织石蜡包埋切片，常规苏木精－伊红染色、亚甲蓝染色及ICAM－1免疫组织化学染色对标本进行检测。结果 与假手术组相比，缺血组海马CA1区神经元尼氏体缺失明显，缺血脑区微血管肿胀变形，白细胞粘附、浸润；缺血再灌注后24h皮质及海马ICAM－1表达均显著升高，48h达高峰。可维持7d。结论 ICAM－1在脑缺血再灌注时表达明显上调，介导白细胞和脑血管内皮细胞粘附，参与缺血再灌注损伤。