腺相关病毒介导的小干扰RNA对大鼠肝星状细胞金属蛋白酶组织抑制因子-1及基质金属蛋白酶13表达的影响

目的 观察以腺相关病毒(AAV)为载体含有针对金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1具有较强抑制作用的小干扰RNA(siRNA)感染大鼠星状细胞系HSC-T6后TIMP-1及基质金属蛋白酶13(MMP13)的表达情况.方法 将对大鼠TIMP-1基因具有最强抑制作用的一对siRNA,在体外构建为短发夹siRNA表达载体后,将其包装为重组AAV-rAAV/siRNA-TIMP-1/neo并感染HSC-T6,于感染后4周及12周应用荧光定量PCR方法及Western blot方法分别检测TIMP-1及MMP13 mRNA及蛋白质表达情况.结果 经PCR、酶切及序列测定证实抑制作用最强的1对siRNA在体外构建的shRNA表达载体成功克隆.将重组质粒包装成病毒后感染HSC-T6细胞,与对照组细胞相比,rAAV/siRNA-TIMP-1/neo感染组在感染后4周及12周细胞TIMP-1 mRNA及蛋白质表达水平明显降低(P＜0.01),而MMP13 mRNA及蛋白质表达水平明显增高(P＜0.01).结论 化学合成的siRNA在短时期内可有效地抑制TIMP-1基因的表达,重组病毒rAAV/siRNA-TIMP-1/neo可长期有效地抑制TIMP-1基因表达.     

不同无菌技术操作方法效果的比较研究

目的 探讨不同无菌技术操作方法的效果。方法①选择进行头皮静脉穿刺患儿61例,随机分为实验组33例用0.1％安多福消毒皮肤,对照组28例用75％酒精消毒皮肤,分别做局部皮肤细菌培养;②将配药瓶口分别用0.5％安多福与2％碘酒、75％酒精消毒,比较其效果;③比较无菌持物镊和无菌罐开启2、4、6、8h的细菌培养结果,并对监测结果进行统计学处理。结果①0.1％安多福与75％酒精消毒效果比较,P<0.05,差异有显著性;②0.5％安多福与2％碘酒、75％酒精消毒瓶口无论何种情况,P>0.05,差异无显著性;③无菌持物镊和无菌罐保存时间6h仍可无菌生长。结论 0.1％安多福皮肤消毒效果好;使用1根棉签消毒无论用0.5％安多福或2％碘酒、75％酒精消毒1个药瓶口均是安全的;无菌持物镊和无菌罐有效保存时间最长6h。     

Lipidoid作为新型脂质载体对肝脏非实质细胞的靶向作用实验研究

目的探讨新型脂质载体Lipidoid对肝脏的细胞靶向效率,为抗肝纤维化治疗提供一定实验室依据。方法C57BL/6小鼠分别给予CCl_4灌胃建立肝纤维化模型,同时给予Lipidoid、Lipidoid/siRNA-TIMP-1尾静脉注射,通过Masson染色观察各组小鼠肝脏纤维化情况,并通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测Lipidoid/siRNA-TIMP-1对TIMP-1表达水平的影响;通过对小鼠尾静脉注射绿色荧光(GFP)标记的Lipidoid-GFP,取其肝组织进行冰冻切片分别进行Desmin及F4/80染色,评价Lipidoid-GFP对肝脏非实质细胞的靶向作用;通过对小鼠分离的原代肝星状细胞SW-HSC、小鼠巨噬细胞系(RAW264.7)转染Lipidoid-GFP,流式细胞仪分别检测上述两种细胞中GFP荧光强度。结果通过对肝组织进行Masson染色发现,在CCl_4诱导的肝纤维化小鼠模型中,给予Lipidoid/siRNA-TIMP-1治疗可显著降低胶原纤维的沉积;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果显示Lipidoid/siRNA-TIMP-1可以显著抑制TIMP-1基因的表达;肝组织冰冻切片Desmin及F4/80染色结果显示,Lipidoid-GFP主要被肝脏肝星状细胞和Kuffer所捕获,肝星状细胞、Kuffer细胞捕获Lipidoid-GFP的阳性率分别为13.4%、43.8%;原代肝星状细胞SW-HSC、小鼠巨噬细胞系(RAW264.7)转染Lipidoid-GFP后经流式细胞仪检测,结果显示转染Lipidoid-GFP的SW-HSC及RAW264.7GFP阳性率分别为66.9%、75.8%,均显著高于对照组。结论小鼠实验结果表明,Lipidoid/siRNA-TIMP-1可有效降低肝脏TIMP-1水平,发挥抗肝纤维化作用。Lipidoid作为一种新型脂质载体可有效感染肝脏非实质细胞(肝星状细胞和Kuffer细胞)。     

临床医学院研究生科研兴趣的建立与科研能力的培养

如何培养既有高超的临床诊治水平,又具有较高的探索创新能力,能通过基础科研处理临床上遇到的关键问题,从而回过头来指导临床实践的复合型高级医学人才非常重要。作为潜在的培养对象,临床医学院研究生科研能力的培养显得尤为重要。     

强化副导师责任提高医学研究生的科研能力

研究生教育不同于本科教育,学生要从本科阶段的教师课堂讲解的教学实验转变为研究生阶段的导师指导下的独立从事探索性的科研实验,这是学生走向独立科研工作的关键性过渡阶段,对于临床科研双向型人才的培养起着至关重要的作用.尽管研究生阶段,开设了类似《医学科研方法》、《医学科学研究导论》等科研入门课程,但这种普遍意义上的教学只能使学生对医学科研建立起宏观的、系统的和全面的认识,而学生真正的科学研究能力的获得与其硕士、博士阶段导师以及前辈的指导与培养密切相关,研究生阶段科研工作的优劣直接决定了学生未来的科研建树.     

黄芪刺激体外培养的大鼠肝卵圆细胞生长的作用

目的探讨黄芪对体外培养的大鼠肝卵圆细胞生长的影响。方法从喂饲含0．1%乙硫氨酸的胆碱缺乏性饮食4～6周的大鼠肝脏中分离出肝卵圆细胞,用RT-PCR、免疫组化、Westem blot等方法对培养的细胞进行鉴定。MIT法观察不同浓度黄芪对肝卵圆细胞生长的影响；Giemsa染色法观察细胞表型的改变情况；碘化丙啶染色流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果所分出的细胞既表达干细胞标志物c-kit,也表达胚胎肝细胞标志物甲胎蛋白、胆管细胞标志物OV6和CK19,此外还表达成熟肝细胞标志物白蛋白,认为它们是大鼠肝卵圆细胞。从0．125mg/ml～4mg/ml黄芪处理肝卵圆细胞48h后都有促进其生长的作用,其中2mg/ml黄芪刺激生长作用最明显(P＜0．05)。2 mg/ml黄芪处理肝卵圆细胞48h后既出现了一些增殖能力强的细胞,也出现了一些核质比低的细胞,此时细胞周期测定结果显示处G_2-S和M期的细胞比未用黄芪处理的对照细胞增多。结论黄芪具有明显的刺激体外培养的肝卵圆细胞生长的作用。     

外泌体在肝脏纤维化中的研究进展

正外泌体是由多种细胞通过胞吐作用分泌到体液中的膜包被小泡,介导细胞间信息交流以及调节细胞微环境,参与细胞生长、增殖、分化、凋亡,肿瘤生长、侵袭等多种生理病理活动。肝脏纤维化是细胞坏死以及炎症刺激等引起肝脏细胞外基质(extracellular matrices,ECMs)过量产生并沉积的病理过程。肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)受多种信号通路调     

锲而不舍、力克肝疾——贾继东教授

贾继东，医学博士，主任医师、教授、博士生导师，现任首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心主任、国家消化系统疾病临床研究中心副主任，并兼任多个国内外肝病学术团体及杂志的重要职务。其主要科研方向为慢性肝病肝纤维化发生机制，以及自身免疫性、胆汁淤积性及遗传代谢性肝病的临床诊疗。     

铁调素在小鼠急性肝损伤过程中的保护作用研究

目的明确铁调素(hepcidin)在小鼠急性肝损伤过程中对于肝细胞的保护作用。方法首先在野生型C57BL/6小鼠(WT小鼠)与hepcidin敲除小鼠(HAMP~(-/-)小鼠)分别建立四氯化碳(CCl_4)诱导的急性肝损伤模型,分别以橄榄油处理组作为对照组。然后检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的差异;通过苏木精-伊红染色法检测2种小鼠肝组织形态的变化;采用免疫组化的方法检测2种小鼠肝组织内肿瘤抑制基因P53与凋亡抑制基因Bcl-xl表达的差异;采用Real-time PCR(qPCR)检测2种小鼠肝组织内Fasl及Bcl-xl基因的表达情况;最后,采用流式细胞术检测hepcidin蛋白对于肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与放线菌素D(Act D)诱导的肝细胞系NCTC 1469凋亡的抑制作用。结果 CCl_4暴露的HAMP~(-/-)小鼠血清中AST和ALT含量较CCl_4暴露的WT小鼠更高(升高倍数分别为2. 7倍和3. 7倍),并且两组差异具有统计学意义(分别为P 0. 05和P 0. 01);苏木精-伊红染色结果显示,在CCl_4暴露的HAMP~(-/-)小鼠中炎症细胞浸润较WT小鼠严重;免疫组化显示,肿瘤抑制基因P53含量在CCl_4暴露的HAMP~(-/-)小鼠较WT小鼠升高,而凋亡抑制基因Bcl-xl含量在CCl_4暴露的HAMP~(-/-)小鼠较WT小鼠降低; q PCR结果显示,Fasl在WT小鼠和HAMP~(-/-)小鼠的CCl_4组较其对照组(Olive组)升高,但HAMP~(-/-)小鼠经CCl_4刺激后,Fasl表达量较WT小鼠CCl_4组升高了1. 2倍,而凋亡抑制基因Bcl-xl的表达量在HAMP~(-/-)小鼠的CCl_4组为WT小鼠的CCl_4组的0. 9倍;体外实验中流式细胞术结果显示,hepcidin蛋白可以有效抑制TNF-α与Act D诱导的肝细胞凋亡。结论Hepcidin可以通过调控凋亡相关基因的表达,抑制肝细胞凋亡,进而发挥对急性肝损伤的保护作用。