麝香乌龙丸对兔膝骨关节炎软骨组织形态及p38MAPK,Caspase-3表达的影响

目的: 观察兔膝骨关节炎(KOA)软骨组织形态及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的表达,探讨麝香乌龙丸治疗兔KOA的作用机制。 方法: 将40只成年雄性大耳白兔,随机分为正常组(A)10只,造模组30只。采用关节腔内注射1.6%木瓜蛋白酶方法建立兔KOA模型,造模成功后随机分为模型组(B)、麝香乌龙丸低、高剂量组(C,D,n=10),ig给予麝香乌龙丸0.6,1.2 g·kg^-1·d^-1,灌胃4周后处死动物切取软骨组织,观察软骨组织形态变化,免疫组化染色检测关节软骨细胞中p38MAPK,Caspase-3的表达。 结果: 麝香乌龙丸低、高剂量组均能减轻兔软骨的病理损害,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);麝香乌龙丸低、高剂量组均能降低软骨中p38MAPK及Caspase-3表达,与模型组比较具有显著差异(P<0.01)。 结论: 麝香乌龙丸能够减轻兔骨关节炎软骨病理损害;麝香乌龙丸治疗骨关节炎的机制,与其能降低p38MAPK,Caspase-3的表达,抑制软骨细胞过度凋亡有关。     

脑脉通对脑缺血大鼠骨髓间充质干细胞移植脑内 向血管内皮细胞分化的影响

目的: 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植大鼠脑内的存活和向血管内皮细胞的分化,以及脑脉通颗粒对其存活和分化的影响。方法: 大鼠体外全骨髓贴壁筛选培养和扩增BMSCs;大鼠随机分为假手术组、模型组、移植组、联合组;线栓法制备(MCAO)模型;术后24 h将BMSCs由同侧颈内动脉移植脑内;电镜下观察BMSCs移植后脑组织微血管内皮细胞超微结构变化;检测脑组织中CD31⁺表达;免疫组化双标法观察Brdu/FⅧ双标细胞变化。结果: 与假手术组比较(49.23±6.17),各模型组大鼠脑组织CD31⁺表达显著减弱(25.14±5.47,15.25±4.50,18.91±3.25)(P<0.01);与模型组比较,移植组14,28 d的CD31⁺表达增强(30.36±5.74,41.12±6.71)(P<0.01);与移植组比较,各联合组CD31⁺表达显著增强,以28 d尤为显著(56.42±7.16)(P<0.01)。移植组和联合组大鼠脑内有Brdu标记细胞存活;联合组14,28 d脑内Brdu标记细胞较移植组显著增多(P<0.05,P<0.01)。各移植组与联合组大鼠脑内可见Brdu/Ⅷ双标细胞存活;各联合组大鼠Brdu/Ⅷ双标细胞均较移植组增多(P<0.05,P<0.01)。结论: BMSCs存活的数量随移植脑内时间的延长而呈增加趋势;脑脉通可使移植脑内的BMSCs成活增多。BMSCs在脑内向血管内皮细胞的分化比率随移植后时间的延长呈先增强再减弱的变化趋势;脑脉通可使BMSCs向血管内皮细胞分化和成血管样作用增强。     

醒脑益智胶囊不同配比 对阿尔茨海默病大鼠行为学的影响

目的: 观察醒脑益智胶囊各组成药物有效部位不同配比对阿尔茨海默病大鼠(AD)行为学的影响,寻找药物最佳配伍比例。方法: 雄性Wistar大鼠随机分为假模型组、模型组、阳性药对照组(石杉碱甲0.05 mg·kg^-1)、醒脑益智胶囊全方组及8种不同配比药物组。大鼠常规饲养3 d后,Morris水迷宫训练7 d,进行1.25% D-半乳糖腹腔注射(4 mL·kg^-1),连续6周,联合Aβ_1-40海马内注射2 μL(5 g·L^-1)复合造模,造模1周后,连续ig给药30 d,采用Morris水迷宫实验观察不同配比药物改善学习记忆的作用。结果: 与模型组比较,各给药组大鼠空间学习能力显著提高,定向航行试验中搜索平台潜伏期缩短,空间探索实验中跨台次数增加,与模型组比较均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。其中4组即冰片:淫羊藿苷:远志总皂苷:三七总皂苷45:6.8:32.6:0(mg·kg^-1)影响较为明显。结论: 醒脑益智胶囊各组成药物有效部位不同配比均具有改善大鼠空间学习记忆的能力,但作用效果存在差异。     

回族药扎里奴思方联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经元及P-糖蛋白的影响

目的: 观察扎里奴思方联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑缺血再灌注(MCAO)模型大鼠神经元及P-糖 蛋白(P-gp)表达的影响。方法: 250只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组(扎里奴思方组)、移植组和联合组(扎里奴思方和移植组),除假手术组10只外,其余各组再分为1,3,7,14 d组,分别为15只。大鼠术前4 d 开始ig给药(14.6 g·kg^-1·d^-1, 假手术组、模型组和移植组给予等体积的生理盐水),线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs,术后24 h,BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑(2×10⁶个/200 μL);移植后1,3,7,14 d取材,观察海马CA1区神经元密度(ND)和脑组织病理损伤、免疫组化法测P-gp表达变化。结果: 模型大鼠海马CA1区ND较假手术组明显降低(P<0.01),病理损伤明显(P<0.01,P<0.05),P-gp表达明显增高(P<0.01);与模型组比较,扎方、移植组3,7,14 d及联合各组ND增加(P<0.01,P<0.05),各组病理损伤减轻,以扎方、移植、联合组7,14 d明显(P<0.01,P<0.05),扎方、移植、联合各组P-gp表达降低(P<0.01);与移植组比较,扎方组1 d ND增高(P<0.01),14 d降低(P<0.05),联合各组ND均增高(P<0.01),联合组7,14 d病理损伤减轻(P<0.05),扎方组1,3,7 d P-gp表达降低,以1 d降低明显(P<0.05),14 d P-gp表达增高(P<0.05),联合各组P-gp表达均降低(P<0.01);扎方与联合组比较,联合各组上述指标均改善(P<0.01,P<0.05);同组间比较,均以7 d变化显著,14 d有明显改善(P<0.01)。结论: 脑缺血后脑组织海马CA1区神经元密度及组织病理学均出现不同程度损伤;扎里奴思方和BMSCs移植均可不同程度改善脑缺血后脑组织神经元存活数量及状态,以二者联合作用显著,其机制可能与干预P-gp动态表达有关。     

山药多糖关节腔注射对兔膝关节骨性关节炎炎症因子及关节软骨代谢的影响

目的 探讨山药多糖关节腔注射对兔膝关节骨性关节炎模型软骨退变的保护机制及抑制炎症因子表达水平的影响,为山药多糖的开发及研究提供相关证据,同时为进一步研究奠定基础。方法 将55只新西兰白兔,用随机数字表法分为5组,每组11只,采用改良Hulth法制备膝关节骨性关节炎兔模型,分别为模型组、山药多糖低、中、高剂量（0.7,1.43,2.15 mg·kg^-1）组、玻璃酸钠（1.00 mg·kg^-1）组。造模成功1周后模型组不干预治疗,各组使用相应药物干预5周,1次/周。5周后通过肉眼观察关节大体标本,光镜下观察关节软骨组织苏木素-伊红（HE）染色和甲苯胺蓝（TB）染色病理切片及评分,使用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测兔膝关节液白细胞介素-6（IL-6）,白细胞介素-1β（IL-1β）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平,采用免疫组化法检测关节软骨基质金属蛋白酶-13（MMP-13）,转化生长因子-β₁（TGF-β₁）,Ⅱ型胶原（Col-Ⅱ）的表达。结果 山药多糖干预5周后,与模型组比较,山药多糖各组关节液中IL-6,IL-1β,TNF-α的含量均明显降低（P<0.05）,关节软骨中MMP-13的表达水平均也明显低于模型组（P<0.05）,而TGF-β₁和Col-Ⅱ的含量明显升高（P<0.05）;与山药多糖低、高剂量组比较,山药多糖中剂量组兔膝关节炎症因子IL-6,IL-1β,TNF-α含量明显降低（P<0.05）,软骨组织中TGF-β₁和Col-Ⅱ的含量明显升高（P<0.05）,MMP-13的含量明显降低（P<0.05）。与玻璃酸钠组比较,山药多糖中剂量组兔膝关节炎症因子IL-6,IL-1β,TNF-α含量,软骨组织中TGF-β₁,Col-Ⅱ和MMP-13含量差异无统计学意义。结论 山药多糖关节腔注射可明显降低兔膝关节液中IL-6,IL-1β,TNF-α的表达,并能有效抑制关节软骨中MMP-13表达,使关节软骨胶原的降解得到抑制,促进TGF-β₁,Col-Ⅱ的合成,对关节软骨起到保护及修复作用,从而延缓关节软骨的退变。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨通络蠲痹颗粒对骨关节炎炎症损伤和细胞凋亡的影响

目的 观察通络蠲痹颗粒对膝骨关节炎（KOA）兔软骨细胞凋亡及Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响,研究其防治KOA的作用机制。方法 30只新西兰兔按随机数字表法分为假手术组、模型组、通络蠲痹颗粒低、高剂量组（4.1、8.2 g·kg^-1·d^-1）、塞来昔布组（10.9 mg·kg^-1·d^-1）,每组6只。采用内侧半月板失稳法（DMM）建立兔KOA模型,造模6周后给药,干预8周,每日1次。用苏木素-伊红（HE）染色和番红O-固绿染色观察关节软骨病理改变;原位末端标记法（TUNEL）荧光染色检测关节软骨细胞凋亡;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测关节液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组关节软骨退变严重,Mankin评分升高（P<0.01）,关节液IL-1β、TNF-α含量升高（P<0.01）,软骨细胞凋亡数量增加（P<0.01）,软骨组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达上调（P<0.01）,而Bcl-2的mRNA及蛋白表达下调（P<0.01）;与模型组比较,通络蠲痹颗粒低、高剂量组软骨退变得到改善,Mankin评分降低（P<0.01）,IL-1β、TNF-α含量降低（P<0.01）,软骨细胞凋亡数量减少（P<0.01）,软骨组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达下调（P<0.01）,Bcl-2的mRNA及蛋白表达上调（P<0.01）,且在上述观察指标中通络蠲痹颗粒高剂量组均明显优于低剂量组。结论 通络蠲痹颗粒可抑制KOA兔关节软骨细胞凋亡,改善软骨退变,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导的炎症反应有关。     

补肾活血方对兔膝骨性关节炎的治疗作用研究

目的：通过观察补肾活血方对 Hulth法复制兔膝骨性关节炎模型中软骨组织结构的改变及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子（TNF-α）浓度的影响,探讨其对关节炎的治疗作用及机制。方法：48只新西兰兔,6只为正常对照,42只用Hulth法复制骨关节炎模型,4周后在模型中随机处死6只动物取材光镜下观察,造模成功后将其余36只随机分为治疗组和模型组,治疗组以补肾活血方15 g·kg^-1·d^-1ig,模型组予同体积生理盐水。给药后的第4,6,8周分别在2组随机处死6只动物,取48只动物股骨髁软骨做石蜡切片行 HE染色、观察软骨细胞形态,用ELISA试剂盒检测血清中IL-1β,TNF-α及关节液中MMP-2。结果：与正常组比较,模型组IL-1在第4,6,8周显著升高（P<0.01）,MMP-2,TNF-α在第4,6周显著升高（P<0.01）。与模型组相比,Mankin's分数在第8周治疗组显著降低（P<0.001）;IL-1β在第8周治疗组血清中显著降低（P<0.05）;MMP-2在第6周关节液中显著降低（P<0.01）;TNF-α在第6周血清中显著降低（P<0.05）。结论：补肾活血方可降低IL-1β含量,在关节炎早期可降低MMP-2和TNF-α,并可改善软骨组织形态从而保护关节软骨。     

琪笋·德密格-4胶囊的主要药效学研究

目的: 探讨蒙药验方制剂琪笋·德密格-4胶囊(QD-4)的药理作用。方法: 采用高脂饲料诱发新西兰兔高脂血症动脉硬化模型;高营养饲料诱发SD大鼠单纯性肥胖模型,受试药分3个剂量组,分别预防性给予QD-4(兔:0.75,0.37,0.19 g·kg^-1;大鼠:3.24,1.62,0.81 g·kg^-1)与模型对照组、阳性药(兔:辛伐他汀0.5 mg·kg^-1;大鼠:亚油酸0.39 g·kg^-1)对照组和空白组,ig给药,连续8周。检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量和肥胖指标,观察分析主动脉粥样硬化斑块,以评价QD-4调脂、减肥作用。结果: QD-4显著降低单纯性肥胖模型SD大鼠血清TG(P<0.01),升高HDL-C(P<0.05),抑制实验鼠体重(P<0.01),缩小鼠体长,增加尾长(P<0.05),抑制脂肪细胞增长(P<0.01),作用强度优于亚油酸,但实验鼠摄食量无差别,对TC和LDL-C的影响不及亚油酸;能降低高脂动脉粥样硬化症模型新西兰兔血清TC、LDL-C(P<0.01~0.05),不同程度地减轻、减少实验兔主动脉粥样硬化程度,影响程度与辛伐他汀组相当,其他指标未显统计意义。实验显示量效关系明显,低剂量组作用不理想。结论: 蒙药琪笋·德密格-4胶囊具有调脂、减肥及抗动脉粥样硬化作用,符合蒙医升清降浊,消减"巴达干"理论。     

针刀松解“三合阳”对KOA模型兔膝关节IL-1β、IL-10、TNF-α的影响＊

目的 从抗炎方面探讨针刀松解膝骨关节炎模型兔“三合阳”保护关节软骨，改善膝关节功能的相关机制。方法 36只健康新西兰兔取12只作为空白组，其余24只采用碘乙酸钠（sodium iodoacetate， MIA）建立兔膝骨关节炎（knee osteoarthritis， KOA）模型，2周后，造模成功的新西兰兔随机分为模型组、针刀组，每组12只。针刀组松解“三合阳”进行治疗，每3天1次。分别于治疗2周、4周后对各组行骨关节炎严重程度指数（Lequesne MG）评分，依据X线结果行K-L（Kellgren-Lawrence）评分，取材后观察膝关节大体情况，苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin staining， HE）染色后对关节软骨进行Mankin’s评分，酶联免疫吸附法（ELISA）检测关节液中白介素-10（interleukin-10， IL-10）的水平，免疫印迹法（Western Blot， WB）和实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR， RT-PCR）法检测软骨组织中白介素-1β（interleukin-1β， IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α， TNF-α）的蛋白和mRNA表达。结果 造模第4周、第6周后，模型组较空白组Lequesne MG评分、K-L评分、Mankin’s评分、关节软骨中IL-1β和TNF-α的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P < 0.01），关节液IL-10蛋白表达水平显著降低（P < 0.01）；针刀组较模型组Lequesne MG评分、K-L评分、Mankin’s评分、关节软骨中IL-1β和TNF-α的mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P < 0.05， P < 0.01），关节液中IL-10蛋白表达水平显著升高（P < 0.05， P < 0.01）。结论 针刀松解“三合阳”可纠正KOA模型兔膝关节力学失衡，下调关节软骨中IL-1β、TNF-α的表达以减轻炎症反应，上调关节液中IL-10的表达以抑制炎症相关因子释放，保护关节软骨，改善膝关节功能。     

蓝萼香茶菜总二萜预处理对兔心肌缺血/再灌注时 心肌细胞凋亡的影响

目的: 探讨蓝萼香茶菜总二萜预处理对兔心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。方法: 健康日本大耳白兔24只,分4组,A:假手术组;B:缺血/再灌注(I/R)组;C:复方丹参滴丸(DS)对照组;D:蓝萼香茶菜总二萜(TD)组。术前7 d A,B组灌胃蒸馏水5 mL·kg^-1·d^-1,C组灌胃DS 37.8 mg·kg^-1·d^-1,D组灌胃TD 4.76 mg·kg^-1·d^-1。末次给药1 h后,结扎左冠状动脉前降支(LAD)制作兔在体心肌I/R模型。光镜和电镜观察各组心肌细胞结构变化。原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,免疫组化法测定心肌组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关x蛋白(Bax)的表达。结果: C组和D组心肌细胞凋亡指数(AI)分别为10.93%和9.87%,与B组(18.40%)相比,AI均明显下降(P<0.05),但C组和D组无明显差异。免疫组化分析Bcl-2的吸光度(A),C组为41.03,D组为52.09,均明显高于B组(29.47),有显著性差异(P<0.05)。而与B组相比,C组和D组Bax的A明显下降(P<0.05),且C组和D组Bcl-2和Bax无明显差异。与假手术组相比,B组光镜和电镜下结构损伤程度明显高于C组和D组。结论: TD能减轻兔心肌缺血/再灌注损伤时心肌细胞凋亡,提示该药对心肌有保护作用。     

富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞对兔股骨头坏死的影响

目的:研究富血小板血浆(PRP)联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)对兔股骨头坏死的治疗效果.方法:随机将50只新西兰兔随机分为空白对照组、模型组、PRP(3％)组、BMSCs(1×106/mL)组、PRP与BMSCs联合组.无菌环境下,建立兔股骨头坏死模型,术后4周PRP组1次性注射植入RPR 12 mg,BMSCs组单纯1次性注射植入BMSCs 1 mL,PRP与BMSCs联合组股骨头内髓芯减压后1次性注射植入BMSCs 1 mL与PRP12 mg复合物,空白对照组与模型组不植入任何物质作为对照.造模后第12周,取材.采用HE染色,光镜下观察骨髓腔内骨小梁结构和骨细胞、脂肪细胞的变化情况;蛋白质印迹法(Western blot法)检测损伤的兔股骨髓中血小板衍生因子(PDGF)蛋白的表达水平.结果:与空白对照组比较,模型组骨髓腔内骨小梁变细或坏死,骨细胞减少,骨头疏松,脂肪细胞增多.骨陷窝空缺率高(P＜0.05).与模型组比较,各治疗组骨髓腔内骨小梁变粗,排列整齐,骨细胞增多,脂肪细胞减少.骨陷窝空缺率降低,差异有显著性意义(P＜0.05).PRP组、BMSCs 组、PRP与BMSCs联合组骨髓组织PDGF蛋白表达水平与模型组相比均有明显的提高,其中PRP与BMSCs联合组PDGF蛋白表达水平最高(P＜0.05).结论:PRP,BMSCs在一定程度上可使骨细胞增殖,减少骨陷窝空缺率,抑制骨髓腔内脂肪细胞,增加损伤股骨头中骨髓组织PDGF蛋白表达,促进股骨头再生.     

柚皮苷联合骨髓间充质干细胞结合脱细胞真皮基质对软骨损伤的修复作用及机制

目的探讨柚皮苷联合骨髓间充质干细胞结合脱细胞真皮基质对兔膝关节软骨损伤的修复作用及其机制。方法将12只新西兰大耳白兔随机分为模型组、细胞组、柚皮苷联合细胞组,每组4只。关节软骨缺损造模后,模型组给予去离子水灌胃;细胞组在关节缺损处植入骨髓间充质干细胞结合脱细胞真皮基质,给予去离子水灌胃;柚皮苷联合细胞组在关节缺损处植入骨髓间充质干细胞结合脱细胞真皮基质,给予柚皮苷汤灌胃。连续灌胃12周后处死各组白兔,采用O’Driscoll评分系统、Mankin’s评分系统评估软骨修复和缺损情况,并对关节软骨缺损区域行病理学染色及免疫组化染色观察。结果细胞组和柚皮苷联合细胞组O’Driscoll评分均明显高于模型组(P均<0.05),且柚皮苷联合细胞组明显高于细胞组(P<0.05);细胞组和柚皮苷联合细胞组Mankin’s评分均明显低于模型组(P均<0.05),且柚皮苷联合细胞组明显低于细胞组(P<0.05)。苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色、番红-O染色显示,细胞组和柚皮苷联合细胞组可见明显软骨修复改变,柚皮苷联合细胞组改善更明显;细胞组在关节缺损修复处稍有转化生长因子-β2(TGF-β2)、转化生长因子-β3(TGF-β3)分泌;柚皮苷联合细胞组可见明显分泌的TGF-β2、TGF-β3,存在很少量的X型胶原染色。结论柚皮苷联合骨髓间充质干细胞结合脱细胞真皮基质对于兔膝关节软骨损伤有修复作用,该修复效果的获得可能与柚皮苷加速骨髓间充质干细胞软骨方向分化及刺激TGF-β2、TGF-β3分泌有关。     

复方扶芳藤合剂口服结合BMSCs复合FG移植对兔膝关节软骨组织形态学的影响

目的:通过检测模型兔膝骨性关节炎的软骨组织的病理改变,观察复方扶芳藤合剂口服结合骨髓基质干细胞复合纤维蛋白凝胶(fibrin glue,FG)移植治疗骨性关节炎的疗效,并探讨其作用机理。方法:本实验将80只新西兰大白兔随机分为生理盐水灌胃组(A组),百年乐灌胃组(B组),注射BMSCs+FG复合物组(C组),百年乐灌胃+注射BMSCs+FG复合物组(D组),每组20膝。采用管型石膏固定膝关节的方式造模,造模6周后采用各组对应的方法处理或治疗,治疗结束1周后,空气栓塞处死试验兔,解剖膝关节,肉眼观察兔关节软骨表面情况;切取部分内侧胫骨平台软骨按照标本制备方法制定后,进行光镜观察。结果:A组关节软骨层变薄、粗糙,部分区域软骨细胞核固缩、坏死。浅表层软骨细胞消失,过渡层细胞外露,辐射层细胞增生呈簇状、染色质粗、不均匀,甚至软骨下骨囊性变。D组软骨表面基本完整,软骨细胞数量增多,4层结构基本清晰,潮线结构基本完整。关节软骨Mankin评分为A组7.50±0.64,B组5.33±0.46,C组5.64±0.58,D组5.00±0.47,B、C、D组与A组比较差异有统计学意义(P0.05),D组与B、C组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:利用复方扶芳藤合剂口服,配合可注射支架(FG)复合BMSCs局部治疗KOA,对KOA关节软骨剥脱有一定的修复作用,从而延缓KOA的病变发展。     

伸筋易骨法调控家兔软骨细胞增殖减轻软骨变性的实验研究

[目的]研究伸筋易骨法影响调控甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)促进兔软骨细胞增殖减轻软骨变性的作用。[方法]新西兰大耳白兔编号后随机分为正常组、假手术组、模型组、推拿组、玻璃酸钠组,每组各10只,改良Hulth法制备膝骨性关节炎(KOA)兔模型,推拿组采用伸筋易骨法治疗21 d,玻璃酸钠组采用关节腔玻璃酸钠注射治疗,每周1次,共治疗3周,取材后透射电镜观察细胞器情况,扫描电镜观察软骨组织表面的变性和修复情况,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTHrP mRNA的表达。[结果]RT-PCR法检测各组软骨组织PTHrP mRNA的表达,假手术组与正常组PTHrP mRNA的表达经统计学比较,无统计学意义(P>0.05),模型组与正常组比较,具有统计学意义(P<0.05),推拿组、玻璃酸钠组与模型组比较,具有统计学意义(P<0.05),推拿组与玻璃酸钠组相比,无统计学意义(P>0.05),推拿组、玻璃酸钠组与正常组相比,具有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜检查显示,模型组软骨表面垄沟样明暗带明显紊乱,胶原纤维裸露;推拿组和玻璃酸钠组软骨表面有纤维爬过,提示软骨修复。透射电镜观察显示,模型组软骨细胞形态肥大,粗面内质网形态异常,核膜上多个膜孔,线粒体消失,胶原纤维断裂;推拿组和玻璃酸钠组软骨细胞细胞形态结构基本正常,细胞内可见多个自噬小体。[结论]伸筋易骨法能够调控软骨合成代谢关键蛋白PTHrP的表达,减缓软骨变性,促进软骨修复,减轻KOA症状。     

针刀、电针和圆利针对实验性膝骨关节炎兔关节软骨病理和超微结构的影响

目的从形态学角度探讨不同干预方法对制动致关节损伤的治疗机理,观察针刀、电针和圆利针干预对关节软骨形态学的影响。方法 6月龄新西兰兔随机分为正常组、模型组、针刀组、电针组和圆利针组,每组9只,用改良的Videman法左后肢伸直位固定制动法建立兔膝关节损伤模型。电针组电针KOA兔左侧"阳陵泉—阴陵泉""内膝眼—外膝眼",疏密波,连续波,频率2/100 Hz,强度3 mA,每次20 min,隔日1次,1周3次,共6周;针刀组KOA兔左侧内、外侧副韧带及髌韧带的中点前缘、起、止点进入,刀口线与韧带方向平行,分别松解5次,每周1次,共6次;圆利针进针点与针刀组一致,分别松解5次,每周1次,共6次。通过HE染色在普通光学显微镜下观察实验性KOA兔关节软骨潮线及间隙、钙化层及深层软骨改变情况;并于扫描电镜下观察关节软骨表面超微结构变化。结果关节软骨HE染色切片显示,针刀、电针和圆利针有效抑制了软骨基质的退变,促进了软骨的再生修复,且针刀组效果优于电针组和圆利针组,圆利针组优于电针组;扫描电镜下,可见三种疗法均有效改善了软骨表面结构的破坏,且针刀组优于电针组和圆利针组,圆利针组优于电针组。结论针刀、电针和圆利针均能有效改善实验性KOA模型兔软骨组织的损伤情况,并促进软骨细胞的再生修复,进而恢复组织的正常结构和功能,以松解法为主的针刀和圆利针的疗效优于电针。     

接骨创伤膏联合中药离子导入对创伤性骨折愈合的影响

目的:探讨接骨创伤膏联合中药离子导入对骨折愈合的影响,明确该项联用技术是否有加强骨折愈合的作用及可能的机制。方法:将雄性健康新西兰兔160只随机等分为正常组,接骨创伤膏联合中药离子导入给药组(简称联合治疗组),接骨创伤膏组(仅给予接骨创伤膏,简称对照组),模型组4组,每组40只,除正常组外,均建立右侧桡骨骨折模型,以第2,4,6,8周4个时间点将每组动物随机等分成4小组,每组10只,联合治疗组所有动物右侧骨折部位给予接骨创伤膏联合中药离子导入治疗,接骨创伤膏组右侧骨折部位单纯给予接骨创伤膏治疗,正常组和模型组不予治疗。术后治疗的第2,4,6,8周4个时间组进行血清碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性及骨钙素(bone gla protein,BGP)含量测定,骨密度,X射线影像学检查,组织切片和形态学检测。结果:与正常组比较,模型组血清AKP活性水平,BGP含量,断段骨密度,X射线片影像学积分明显降低(P0.01),病理学和形态学检测显示骨折较明显;与模型组比较,联合治疗组治疗的第2,4,6,8周,血清AKP活性水平及BGP含量较对照组显著升高(P0.05,P0.01),骨密度,X射线片影像学积分明显显高(P0.05,P0.01),病理学和形态学检测亦显示联合治疗组骨折愈合明显提前,各时间点两组间比较差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:接骨创伤膏联合中药离子导入通过对骨折愈合的整个过程施加影响从而加速了骨折的愈合。     

筋针结合关节松动术对兔膝骨关节炎受体Notch2、配体Jagged-1影响的研究

目的观察筋针结合关节松动术对膝骨关节炎兔膝关节软骨中Notch信号通路Notch2、Jagged-1表达的影响,探讨筋针结合关节松动术治疗膝骨关节炎的可行性和相关作用机制。方法选取26只大耳白兔,随机取6只作为空白组,其余兔采用改良Hulth手术法建立左膝膝骨关节炎模型。将建模成功的18只兔随机分为模型组、氨糖组和筋针结合松动术组各6只,氨糖组给予盐酸氨基葡萄糖灌胃6周,筋针结合松动术组给予筋针结合关节松动术治疗6周,空白组和模型组不予任何干预。干预结束后取各组兔的左膝软骨,分别采用Western blot法和荧光PCR法检测软骨细胞中Notch2、Jagged-1的蛋白和mRNA表达量。结果模型组软骨细胞中Notch2、Jagged-1蛋白和mRNA表达量均明显高于空白组(P均<0.05),氨糖组和筋针结合松动术组均明显低于模型组(P均<0.05),且筋针结合松动术组均明显低于氨糖组(P均<0.05)。结论筋针结合关节松动术可以有效下调膝骨关节炎兔软骨中Notch2和Jagged-1的表达,从而保护关节软骨。     

Effect of acupotomy versus electroacupuncture on ethology and morphology in a rabbit model of knee osteoarthritis

OBJECTIVE: To evaluate the treatment effect of acupotomy(Apo) in a rabbit model of knee osteoarthritis(KOA), compare the results of Apo versus electroacupuncture(E-Apu) on ethology, morphology, and structure of the articular cartilage surface in a rabbit model of KOA, and analyze the differences in the treatment effects of Apo versus E-Apu.METHODS: Twenty-eight male New Zealand white rabbits were randomized into four groups: normal control, blank model, Apo, and E-Apu(n = 7 in each group). Except for the normal control group, the left hindlegs of all rabbits were fixed in an extended position for 5 weeks to establish the KOA model.The passive range of motion(PROM) and Lequesne index were measured before and after the establishment of the KOA model to assess the ethology in all groups. Safranin O-fast green staining and the Mankin score were used to assess the morphological cartilaginous changes to compare the effect of Apo versus E-Apu on the degeneration of articular cartilage, and to identify which therapy was superior in treating KOA.RESULTS: Compared with before the establishment of the KOA model, the Lequesne index of the KOA model rabbits was significantly increased(P 0.01), while the PROM was significantly decreased(P 0.01). The articular cartilaginous tissue in the three model groups exhibited pathological variations in the form of laminar derangement of cartilage cells, and so the Mankin score was significantly increased compared with the control group(P 0.01). At 1 week after the final treatment session,compared with the blank model group, both the Apo and E-Apu groups showed a significant decrease in the Lequesne index(P 0.01), and attenuation in the degree of morphologic pathological changes(P 0.05); The Apo improved the PROM significantly compared with the blank model group(P 0.05), while the E-Apu had no effect(P 0.05).Furthermore, compared with the E-Apu group, the Apo group had a significantly lower Lequesne index(P 0.05), and a significantly greater PROM(P 0.05).CONCLUSION: In a rabbit model of KOA, both Apo and E-Apu reduce disorders of ethology and morphology, and improve the condition of the articular cartilage. The results suggest that Apo is more effective than E-Apu in improving the PROM and alleviating symptoms resulting from cartilage damage in a rabbit model of KOA.     

加味丹参饮含药血清诱导BMSCs移植IRI大鼠对心肌bFGF的影响

目的:观察加味丹参饮(JWDSY)含药血清诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs),移植于心肌缺血再灌注损伤(IRI)大鼠梗死心肌边缘后,对心肌细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达的影响.方法:全骨髓贴壁法培养BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD90,CD34,CD45.传至P3代时,用JWDSY含药血清诱导3d.建立大鼠心肌IRI造模,在心肌梗死区边缘移植血清诱导的细胞悬液.3,7,14 d后,取心肌组织用免疫组化法检测心肌细胞bFGF表达.结果:JWDSY血清组bFGF的积分吸光度(IA)在3,7,14d后分别升高至5 758.18±465.17,6 589.61±432.89,8 015.62±366.34;与模型组差异有统计学意义(P＜0.05),且随时间逐渐升高,比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:JWDSY血清诱导的BMSCs移植于IRI大鼠心梗区边缘后,可以改善心肌组织的病理学形态,增加心肌细胞bFGF蛋白表达,提示JWDSY含药血清诱导的BMSCs对IRI大鼠的心肌细胞有一定的保护作用.