阳和汤对兔骨关节炎软骨细胞中结缔组织生长因子表达的影响

目的:观察阳和汤对兔骨关节炎软骨细胞中结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响.探讨阳和汤延缓骨关节炎中软骨退变的机制.方法:新西兰大白兔20只随机分为正常组、模型组、氨糖美辛组和阳和汤组.按照Hulth法建立膝骨关节炎模型,术后第5周起至第7周末,阳和汤组予混有阳和汤的颗粒饲料,氨糖美辛组给予混有氨糖美辛的兔饲料,正常组及模型组均给予普通饲料;术后第8周分别取各组胫骨平台关节软骨,采用TUNEL染色法检测细胞凋亡指数.免疫组织化学染色测定软骨细胞中CTGF表达的阳性指数,实时荧光定量PCR检测CTGFmRNA在各组的表达.结果:阳和汤组软骨细胞凋亡指数小于模型组,差异有统计学意义(P<0.05).阳和汤组CTGF阳性指数、CTGF mRNA表达水平明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05).结论::阳和汤可减少骨关节炎软骨细胞凋亡;阳和汤可能是通过调控软骨细胞中CTGF而影响骨赘形成,维持软骨的动态平衡,延缓骨关节炎中软骨退变.     

电针联合关节松动术对家兔膝关节炎模型Notch信号通路及软骨细胞中Notch3和Dll1蛋白表达的研究

目的：通过电针联合关节松动术对家兔的干预方式,观察家兔治疗结束后膝关节软骨细胞中Notch3、Dll1、Bax蛋白的表达情况,以探讨电针联合关节松动术对膝关节炎家兔的作用机制及对疾病的改善程度。方法：选取32只日本大耳白兔,雌雄各半,随机抽取10只正常饲养,余下24只采用切断右膝前后交叉韧带及外侧副韧带方法制造兔膝关节炎模型。3周后随机抽取模型组和空白组各3只处死,对比处死前关节活动度和病理学及形态学变化提示造模成功,将造模成功的家兔随机分为模型组、电针松动术组、西药组,6只/组,并分别于干预5周后处死取样。取关节软骨标本并观测其形态学改变,并采用免疫组化染色测定Bax蛋白表达及Western Blot 法检测Notch3、Dll1蛋白表达量。结果：治疗结束后,电针松动术组和西药组的标本中Notch3、Dll1及Bax蛋白的阳性表达率均低于模型组,但略高于空白组(P＜0.01)。     

益肾为主对兔膝骨关节炎模型软骨细胞凋亡的影响

目的:观察益肾为主治法对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法:取新西兰白兔20只,随机分为三组,模型组、中药组用石膏外固定兔右后肢膝关节造模,造模后同空白组分别灌服生理盐水、益肾方和生理盐水,6周后取兔膝关节软骨,肉眼、光镜观察形态学变化,用原位末端标记法观察软骨细胞凋亡。结果:中药组软骨细胞凋亡指数明显低于模型组(P<0.01)。结论:益肾为主能减少兔膝实验性膝骨关节炎软骨细胞的凋亡,具有关节软骨保护作用。     

骨舒汤对实验性膝骨关节炎家兔软骨细胞凋亡的影响

目的观察骨舒汤对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡的影响,探讨其治疗膝骨关节炎的机制。方法将48只家兔随机分为4组,每组12只,分别为空白组、模型组、壮骨关节丸组、骨舒汤组,造模成功后,术后第4、6、8 W每组各处死4只兔,进行关节软骨细胞凋亡率观察。结果骨舒汤组软骨细胞凋亡指数明显低于OA模型组。结论骨舒汤可以明显抑制骨关节炎中软骨细胞的凋亡率,达到保护软骨细胞,延缓发病的目的。     

阳和汤干预兔骨关节炎软骨中金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶抑制剂-1变化

目的:观察阳和汤对兔骨关节炎软骨中基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-l,MMP-1)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloprotease-1,TI MP-1)表达的影响。方法:新西兰大白兔20只随机分为正常组、模型组、氨糖美辛组和阳和汤组。按照Hulth法建立膝骨关节炎模型,术后第5周起至第7周末,阳和汤组予混有阳和汤的颗粒饲料,氨糖美辛组给予混有氨糖美辛的兔饲料,正常组及模型组均给予普通饲料;术后第8周分别取各组胫骨平台关节软骨,采用免疫组织化学染色测定软骨中MMP-1及TI MP-1表达的阳性指数。结果:模型组MMP-1及TI MP-1表达的阳性指数水平明显高于正常组,差异有统计学意义(P0.01),阳和汤组MMP-1及TI MP-1表达阳性指数低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。阳和汤组和氨糖美辛组MMP-1及TI MP-1表达阳性指数比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:阳和汤可能是通过调控软骨细胞外基质中MMP-1及TI MP-1表达变化而维持软骨的动态平衡,延缓骨关节炎中软骨退变。     

骨炎定对兔实验性膝骨关节炎关节软骨的组织病理学影响

目的 :探讨骨炎定对兔实验性膝骨关节炎关节软骨的组织病理学影响。方法 :新西兰兔 36只 ,建立Hulth膝骨关节炎模型 ,术后随机分成 3组 :骨炎定组、醋氨酚组和模型组。各组采取相应的处理方法 ,术后 4、 8和 12周取材 ,进行组织病理学评估。结果 :骨炎定组的关节软骨病理变化总积分、软骨细胞病理改变积分和软骨表层病理改变积分均明显低于醋氨酚组和模型组 (P <0 0 5和P <0 0 1)。结论 :骨炎定能延缓膝骨关节炎的病理过程 ,达到防治膝骨关节炎的作用     

膝地荣筋疗骨饮对兔骨关节炎软骨干预实验研究

目的：探讨膝地荣筋疗骨饮对实验性兔膝骨关节炎的影响。方法：采用Hulth法造成实验性兔右侧膝骨关节炎模型。结果：在光镜和电镜下,膝地荣筋疗骨饮能显著抑制软骨、滑膜的炎症,减轻软骨病理改变;降低软骨细胞的凋亡指数（AI）。结论：膝地荣筋疗骨饮能显著改善动物实验性关节炎关节软骨的病理积分,抑制膝骨关节炎软骨细胞的凋亡,改善软骨病变。     

伸筋易骨矫形手法对兔膝关节软骨细胞代谢及Sox9表达的影响

[目的]探讨伸筋易骨矫形手法对兔膝关节软骨细胞代谢及Sox9表达的影响。[方法]将膝骨关节炎(KOA)模型兔随机分为3组,治疗组采用伸筋易骨矫形手法治疗,对照组采用关节腔注射玻璃酸钠治疗,模型组不做干预,同条件饲养,取材后分离膝骨关节软骨细胞体外培养,镜下观察并通过四甲基偶氮唑盐比色法(MMT)对比3组软骨细胞增殖情况;通过蛋白免疫印迹分析3组软骨细胞Sox9的表达变化。[结果]镜下观察治疗组、对照组关节软骨的增殖速度均快于空白组,其中治疗组增殖速度最快,MMT法检测治疗组软骨细胞增殖能力高于对照组(P0.05),蛋白免疫印迹分析显示治疗组Sox9表达高于对照组(P0.05)。[结论]伸筋易骨矫形手法具有提高软骨细胞增殖速度,增强软骨细胞增殖能力,同时该手法可以提高损伤软骨组织Sox9的表达水平,从而促进软骨细胞的合成代谢。     

针砂马准灸对兔膝骨性关节炎软骨uPA、uPAR、PAI-1的影响

目的观察针砂马准灸对兔KOA模型软骨细胞中uPA、uPAR、PAI-1表达水平的影响,探究回医针砂马准灸治疗KOA的作用机理。方法 6月龄新西兰大耳兔40只,随机分为针砂马准灸组、艾灸组、模型组、空白组,每组10只。采取右后肢伸直位石膏管型固定法制备兔KOA模型,针砂马准灸组给予针砂马准灸治疗,艾灸组给予膝关节局部艾灸治疗,模型组每日在兔固定器上固定15分钟,空白组不予任何处理,6天为1疗程,共治疗2个疗程。治疗结束后采用HE染色法观察各组软骨的病理改变,并进行C.Colombo评分;RT-PCR及Western blot法检测各组关节软骨中uPA、uPAR、PAI-1 mRNA及蛋白的表达。结果 HE染色显示模型组兔KOA软骨表面大量细胞崩解、潮线不完整缺损、软骨下血管增生明显;与空白组比较,模型组C.Colombo评分升高,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,针砂马准灸组及艾灸组C.Colombo评分降低,差异有统计学意义(P0.05)。与空白组比较,模型组KOA软骨细胞中uPA、uPAR蛋白及mRNA的表达升高,PAI-1蛋白及mRNA的表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,针砂马准灸组及艾灸组兔KOA软骨细胞中uPA、uPAR蛋白及mRNA的表达降低,PAI-1蛋白及mRNA的表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论针砂马准灸治疗膝骨性关节炎的机制可能为通过激活uPA系统,提高PAI-1的表达,进一步抑制uPA、uPAR的表达,达到治疗作用。     

不同针刺方式对早期膝骨关节炎兔模型软骨细胞及Ⅱ型胶原蛋白代谢的影响

目的:探索针刀、电针治疗对早期膝骨关节炎(KOA)兔模型关节软骨细胞结构及Ⅱ型胶原的表达情况.方法:30只新西兰兔按体质量随机分为空白组(6只)及KOA造模组(24只),KOA造模组应用改良Videman法制动4周建立早期KOA兔模型.干预结束后,对兔股骨内侧髁软骨进行免疫荧光双标染色(激光共聚焦显微镜观察),应用EL...     

南星骨痛凝胶贴膏对兔膝骨关节炎关节形态及血清IL-1、TNF-α、MMP-13、TIMP-1表达的影响

目的观察南星骨痛凝胶贴膏对兔膝骨关节炎关节形态及血清IL-1、TNF-α、MMP-13、TIMP-1表达的影响,探讨南星骨痛凝胶贴膏治疗兔膝骨关节炎可能的作用机制。方法 18只健康6月龄新西兰兔随机分成3组:空白组(A组)、模型组(B组)、骨痛膏治疗组(C组). BC组用3%木瓜蛋白酶关节腔内注射造模后C组给予南星骨痛凝胶贴膏外敷,给药4周后,用Aloka Latheta LCT-200观察兔膝骨关节影像学改变、用ELISA法检测血清IL-1、TNF-α、MMP-13、TIMP-1含量。结果 C组兔膝关节病变程度较B组轻,C组兔血清中IL-1、TNF-α、MMP-13含量较B组降低(P<0. 05),TIMP-1含量较B组升高(P <0. 05)。结论南星骨痛凝胶贴膏能减轻兔膝关节骨关节炎病变程度,对关节软骨有保护作用,其作用机制可能与抑制炎症因子IL-1、TNF-α及MMP-13表达,增加TIMP-1表达有关。     

基于纤溶酶途径介导的软骨细胞外基质损伤机制研究温针灸治疗膝骨性关节炎的作用机理

目的通过观察温针灸干预后膝骨性关节炎(KOA)兔关节软骨尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)因子表达的变化,探索温针灸治疗KOA的作用机制。方法将40只新西兰兔随机分为空白组、模型组、温针灸组、u PA抑制剂组,每组10只,采用右后肢石膏管型固定法制备KOA模型,空白组不予处理,模型组每天于兔架上固定15 min,温针灸组予以温针灸治疗,u PA抑制组每两日于关节腔注射u PA抑制剂稀释液1 m L/kg,干预结束后取兔关节软骨行TUNEL、RT-PCR、Western blot检测。结果 TUNEL细胞凋亡检测发现:较空白组,模型组软骨细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组及u PA抑制剂组软骨细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。RT-PCR检测结果发现:较空白组,模型组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);u PA抑制剂组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);Western blot检测发现:较空白组,模型组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05) u PA抑制剂组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);相关性分析显示u PA与MMP-1、MMP-13均由相关关系。结论 (1)温针灸可抑制软骨细胞的过度凋亡;(2)温针灸可有效抑制软骨细胞中u PA、MMP-1、MMP-13的表达,且可通过抑制u PA的生成进而阻断MMP-1、MMP-13的活化,发挥保护关节软骨最终达到治疗KOA的作用。     

火针膝周密刺对膝关节骨性关节炎鼠关节形态及软骨LOXL2的影响

目的:探讨火针膝周密刺对膝关节骨性关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)大鼠行为学、关节形态及软骨中赖氨酰氧化酶相关蛋白2(LOXL2)影响性。方法:选择30只健康雄性大鼠,10只作为对照不作任何处理。20只大鼠建立KOA模型,成模后随机分成2组,分别予普通针刺和火针膝周密刺,1次/3 d,连续6次。观察各组大鼠Leauesne MG评分、关节软骨细胞情况,外周血及关节软骨转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、LOXL2水平变化。结果:治疗后火针组Leauesne MG评分中的局部疼痛刺激反应、步态、关节活动范围、关节肿胀度较对照组、模型组差异有统计学意义(P<0.05)。血清及关节软骨MMP-3、TGF-β1、TNF-α含量水平显著低于模型组(P<0.05),LOXL2显著高于模型组(P<0.05)。火针组电镜下软骨细胞形状规则、细胞核完整且饱满,微绒毛少量存在,内质网丰富,有散在的染色质。结论:火针膝周密刺能减轻K0A关节软骨损伤,降低炎性反应,改善软骨LOXL2水平,这可能是火针治疗KOA一个作用机制。     

化痰软坚片治疗骨性关节炎的实验研究

为探讨经验方化痰软坚片治疗骨性关节炎的作用机理 ,为临床用药提供实验依据。将 4 8只家兔随机分成空白对照组、模型对照组、壮骨关节丸治疗组、化痰软坚片不同 (低、中、高 )剂量治疗组等 6组。除空白对照组动物外 ,其余动物均按 Hulth法复制骨性关节炎模型。灌胃给药 4周 ,观察药物对家兔骨性关节炎的影响。参照 Goldbrg VM法对膝关节活动进行临床评分 ;同时进行关节液量的测定、软骨羟脯氨酸及含水量的测定和血清碱性磷酸酶及酸性磷酸酶含量的测定。结果显示 ,化痰软坚片各剂量组对动物的局部疼痛刺激反应、步态、畸形改变等均有显著影响 ,有促进动物关节活动好转的趋势 ,能改善动物骨性关节炎症的各项生理生化指标。实验表明化痰软坚片对骨性关节炎具有较好的治疗作用。     

“双固一通”温针灸对实验性兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的:研究"双固一通"温针灸在预防兔膝关节骨性关节炎过程中对兔膝关节软骨细胞凋亡的影响。方法:24只日本大耳白兔随机分为"双固一通"温针灸组、模型组和正常组,每组8只。采用结扎股静脉法建立兔膝骨性关节炎模型,"双固一通"温针灸组在造模开始时采用"双固一通"温针灸法,对关元(CV 4)、足三里(ST 36)、内膝眼(EX-LE4)、犊鼻(ST 35)和阳陵泉(GB 34)等穴进行预防性治疗;正常组不做任何处理,正常喂养。在造模8周后,各组分别通过透射电镜观察兔膝关节软骨细胞的超微结构,TUNEL染色光镜下观察软骨细胞凋亡情况。结果:"双固一通"温针灸组兔膝关节软骨细胞超微结构接近正常组,模型组软骨细胞轮廓不清楚,胞膜坏死崩解,胞浆内细胞器消失,细胞裂解为致密颗粒样物质,细胞固缩、变形,甚至出现核分裂,染色质浓聚;"双固一通"温针灸组和模型组软骨细胞凋亡指数高于正常组(P<0.01),"双固一通"温针灸组软骨细胞凋亡指数低于模型组(P<0.01)。结论:"双固一通"温针灸可抑制实验性兔膝骨性关节炎软骨细胞过度凋亡,从而对兔膝骨性关节炎起防治作用。     

超短波联合电针疗法对家兔膝关节骨性关节炎自由基代谢的影响

目的观察超短波联合电针对家兔实验性膝关节骨性关节炎的治疗作用并探讨其机制。方法将55只日本大耳白兔随机分出10只为空白对照组,余45只采用右后肢膝关节伸直位固定6周的方法建立膝关节骨性关节炎模型。将造模成功的40只家兔随机分为模型对照组、电针治疗组、超短波治疗组、联合治疗组,每组10只。电针治疗组选取家兔右后肢血海、梁丘、阳陵泉和足三里穴,毫针针刺后接电针治疗仪治疗25min,超短波治疗组使用超短波机治疗20min,联合治疗组联合采用电针和超短波治疗,各组均每日治疗1次,在治疗30天后测定兔血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量以及测量家兔右后肢膝关节活动度。结果电针治疗组、超短波治疗组、联合治疗组同模型对照组比较血清中SOD显著升高,NO、MDA显著降低,关节活动度改善(P0.01);并且联合治疗组优于超短波治疗组和电针治疗组(P0.01)。结论超短波联合电针治疗家兔膝关节骨性关节炎疗效肯定并优于单纯的超短波疗法和电针疗法,其作用机制可能与改善自由基代谢有关。     

消痹灵胶囊对骨性关节炎家兔血清及关节液中IL-1、TNF-α和NO的影响

目的探讨消痹灵胶囊对家兔血清及关节液中白细胞介素-1（IL-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和一氧化氮（NO）的影响。方法将32只健康雄性新西兰长耳大白兔随机分为消痹灵胶囊组、壮骨关节丸组、模型对照组、空白对照组。将家兔右腿膝关节伸直,用石膏外周管形固定1圈,使其右侧膝关节不能活动,制造家兔膝关节骨性关节炎模型。从关节固定第2周开始给药,直至第9周后停止石膏固定及给药。在造模第3、6、9周分别测定家兔血清及关节液中IL-1、TNF-α及NO含量变化。结果消痹灵胶囊能减轻实验家兔血清和关节液中IL-1、TNF-α和NO的含量,较壮骨关节丸组及模型对照组的差异均有统计学意义。结论消痹灵胶囊有助于改善骨内微循环,降低骨内压;抑制免疫因子反应,减轻软骨基质的降解;抑制关节软骨降解酶,延缓软骨退变。     

针刀“解结法”对膝骨关节炎兔软骨形态学及影像学的影响

目的:观察针刀"解结法"对膝骨关节炎(KOA)兔软骨形态学及影像学的影响,为临床针刀治疗KOA提供实验依据。方法:健康雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组,每组8只。采用改良Videman法左后肢伸直位石膏固定制动6周复制KOA模型。针刀组采用针刀"解结法"治疗,治疗点包括"鹤顶次""髌内下""髌外下""成腓间""委阳次""阴陵次",每7 d干预1次,共干预4次。干预结束后1周,用Lequesne膝关节级别评估法评价兔左膝关节Lequesne评分;用X线和MRI影像学观察兔左膝关节间隙、积液、软骨光滑度,并进行MOAKS评分;肉眼观察左膝关节软骨表面光滑度并进行软骨肉眼观评分;用HE染色及Mankin评分评价软骨病理改变。结果:与空白组比较,模型组左膝关节Lequesne评分明显增高(P<0.05),关节间隙变窄,关节腔内积液增多、软骨面欠光滑,MOAKS评分、软骨肉眼观评分、Mankin评分均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,针刀组Lequesne评分明显降低(P<0.05),关节间隙增宽(P<0.05),关节腔积液减少,软骨面变光滑,MOAKS评分、软骨肉眼观评分、Mankin评分均明显降低(P<0.05)。结论:基于经筋理论针刀"解结法"能有效提高KOA兔模型膝关节行为能力,并修复软骨病理形态,其作用机制可能与调整关节间隙、减少关节腔积液有关。     

消定膏对兔骨性关节炎关节液中TNF-α的影响

目的:探讨消定膏对兔骨性关节炎关节液中TNF-α的影响。方法:新西兰大白兔40只,雌雄不限,体重(2.50±0.10)kg,随机分成4组,空白组、模型组、对照组、治疗组4组,每组10只。适应性喂养7d后,模型组、对照组、治疗组按照日本鬼头康彦等的兔膝关节腔内注入木瓜蛋白酶造成OA及滑膜炎病变模型方法造模。获得稳定的骨关节炎性滑膜炎模型。术中注意不刺激关节软骨及滑膜。造模成功后空白组不做处理。对照组外涂扶他林软膏,治疗组外敷消定膏,模型组外敷凡士林,空白组亦于右膝关节表面外敷凡士林。结果:模型组、对照组、治疗组与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05),对照组、治疗组与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05),对照组和治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05);结果说明消定膏与西药扶他林乳胶剂均可降低兔炎关节液中TNF-α的含量。结论:1.消定膏外敷与扶他林乳胶剂外擦对兔膝骨性关节炎均有治疗作用。2.中药消定膏外敷,可对兔膝骨关节炎软骨退变起明显缓解作用;能显著降低家兔关节液中TNF-α的含量,从而发挥对膝骨性关节炎的防治作用。     

艾灸对膝骨关节炎模型兔软骨病理学改变及行为学改变的影响

目的:观察艾灸"犊鼻""足三里"穴对膝骨关节炎(KOA)模型兔膝关节软骨病理学及行为学的影响,为艾灸的局部抗炎、镇痛作用提供依据。方法:将40只健康新西兰大耳白兔按随机数字表法分为对照组、模型组、艾灸组、抑制剂组,每组10只。模型组、艾灸组、抑制剂组兔采用注射木瓜蛋白酶法造模,造模成功后,艾灸组、抑制剂组实施干预治疗。治疗结束后,比较各组KOA模型兔HE染色后软骨病理学改变和Lequesne评分。结果:与模型组比较,艾灸组、抑制剂组炎症细胞聚集现象明显减轻,艾灸组与抑制剂组炎症细胞聚集现象差异不明显;艾灸组、抑制剂组治疗1周、2周、3周后Lequesne评分均明显低于模型组(P<0.01);艾灸组与抑制剂组Lequesne评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);艾灸组、抑制剂组治疗1周、2周、3周后Lequesne评分均明显低于治疗前(P<0.01),模型组仅于治疗第3周后Lequesne评分低于治疗前(P<0.01)。结论:艾灸与p38抑制剂SB203580均能降低KOA兔膝关节软骨细胞炎症聚集,减轻膝关节局部肿胀、疼痛,改善其活动步态与关节活动度,提示p38MAPK信号通路可能参与了艾灸治疗膝骨关节炎的过程。