木果楝种子中一个新柠檬苦素类化合物

目的 研究红树林植物木果楝Xylocarpus granatum种子的化学成分。 方法 采用多种色谱方法分离纯化，依据理化性质、波谱数据分析进行结构鉴定。 结果 从木果楝种子的95%乙醇提取物中分离鉴定了一个墨西哥交酯型柠檬 苦素类化合物xylogranatin S，并利用MTT法研究了这个化合物对人子宫颈癌细胞HeLa、肝 癌细胞HLE、乳腺癌细胞MDA-MB-231和结肠癌细胞SW-620的生长抑制作用。 结论 该化合物为新的化合物，命名为木果楝亭S(xylogranatin S)，药 理活性实验结果未发现其对上述肿瘤细胞有显著的抑制作用。     

红树林植物木果楝化学成分的研究

目的 研究红树林植物木果楝Xylocarpus granatum的化学成分。方法 采用色谱法分离,用波谱方法进行结构鉴定。结果 从木果楝种子中分离鉴定了10个化合物,分别为过氧化麦角甾醇(Ⅰ)、木果楝素G(xylocarpin G,Ⅱ)、木果楝素H(xylocarpin H,又名granaxylocarpin B,Ⅲ)、xylogranatin C(Ⅳ)、3β-detigloyoxy-2′-methylbutanoyloxy xylogranatin B(Ⅴ)、木果楝亭D(xylogranatin D,Ⅵ)、硬毛鸕鸪花醇(hispidol B,Ⅶ)、东莨菪亭(Ⅷ)、β-谷甾醇(Ⅸ)和胡萝卜苷(Ⅹ)。结论 化合物Ⅰ、Ⅶ和Ⅷ为首次从木果楝属植物中分离得到。     

RNAi抑制Survivin基因的表达对乳腺癌SKBr-3细胞的影响

目的 应用RNA干扰技术抑制人Survivin基因表达,观察其对乳腺癌SKBr-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成靶向Survivin基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染乳腺癌SKBr-3细胞,采用MTT比色法检测细胞增殖率、RT-PCR和Western blot法观察乳腺癌细胞Survivin mRNA和蛋白质的表达、流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 MTt检测显示Survivin-siRNA组对细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05),其细胞最高抑制率为(43.1±O.3)%;RT-PCR检测显示Survivin-siRNA组mRNA表达明显下调(P<0.01),其相对表达量分别为0.203 ±0.018、0.229±0.019,抑制率分别为55.2%、49.4%;Western blot检测显示Survivin-siRNA组蛋白表达下调(P<0.01),其蛋白相对表达量分别为0.702±0.007、0.684±0.016,抑制率分别为34.8%、36.4%;流式细胞仪检测显示Survivin-siRNA组细胞凋亡率明显增高(P<0.01),分别为(14.2±1.4)%、(16.8±0.6)%.结论 Survivin-siRNA能有效封闭Survivin的表达,抑制SKBr-3细胞增殖并诱导细胞凋亡,推测Sur-vivin基因可能成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点.     

苦参碱对人乳腺癌Bcap-37细胞增殖的影响 及其作用机制探讨

目的:观察苦参碱对人乳腺癌Bcap-37细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:用MTT法检测苦参碱对Bcap-37细胞的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:苦参碱对Bcap-37细胞增殖具有明显抑制作用,且具有剂量和时间依赖性。与对照组比较,药物作用24、48、72h后,苦参碱组的凋亡率均明显增高(P<0.01),并以作用48h最明显。Caspase-3、Bax蛋白表达增高,Bcl-2蛋白降低。结论:苦参碱对Bcap-37细胞生长具有明显抑制作用,其作用机制可能与上调Caspase-3、Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡有关。     

南瓜蛋白与STI571体外联合抗K562细胞的作用

目的 探讨南瓜蛋白与ST1571对K562细胞增殖的抑制作用及其机制. 方法 用MTT检测南瓜蛋白与ST1571单用或联合作用对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞的凋亡率;Western blot检测药物对p210Bcr-Abl 蛋白的影响. 结果 南瓜蛋白与STI571联合作用协同抑制K562细胞增殖(q>1.15);协同诱导K562细胞凋亡;协同抑制p210Bcr-Abl蛋白表达. 结论 南瓜蛋白与STI571联合作用体外协同抗K562细胞的增殖.     

Kayadiol对子宫内膜癌细胞株HEC-1的影响

目的探讨二萜类化合物kayadiol抑制子宫内膜癌细胞HEC-1增殖作用的机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测kayadiol对子宫内膜癌HEC-1细胞增殖的抑制作用;采用DNA断裂原位末端标记(TUNEL)法和Western blot法检测kayadiol诱导子宫内膜癌HEC-1细胞凋亡。结果 kayadiol对HEC-1细胞增殖显示较强的抑制活性,呈量效关系;其中以10μmol/L的kayadiol处理HEC-1细胞后,发现凋亡率变化与时间呈依赖关系,HEC-1细胞内的Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达显著上调。结论 Kayadiol可通过诱导细胞凋亡抑制HEC-1细胞增殖。     

靶向沉默p65基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响

目的利用miRNA靶向沉默p65基因,观察其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响。方法以脂质体LipofectamineTM2000为载体,将针对特异靶点p65基因的miRNA转染入MDA-MB-231细胞。RT-PCR和Western blot法检测p65 mRNA和蛋白表达的变化;MTT法检测细胞增殖;流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关因子表达的变化。结果 RT-PCR和Western blot检测结果显示,p65miRNA转染组p65 mRNA及蛋白表达量较对照组显著下降(P<0.05);MTT检测结果显示,沉默p65基因后,细胞出现了生长抑制现象;FCM检测结果发现,p65miRNA转染组细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。Western blot进一步检测发现,转染组细胞中caspase-3的前体蛋白条带变细,裂解片段条带加深;PARP蛋白出现裂解片段。结论 miRNA靶向沉默p65基因可抑制人乳腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,推测p65基因可能成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点。     

异黄酮改构化合物F11对人乳腺癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究异黄酮改构化合物F11对人乳腺癌细胞凋亡的影响及其机制.方法 采用DNA Ladder、DAPI细胞核染色检测F11对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP、p53的表达.结果 异黄酮改构化合物F11可诱导人乳腺癌细胞发生凋亡,增加Caspase-3和PARP蛋白的表达(P<0.01),抑制p53蛋白的表达(P<0.05,P<0.01).结论 异黄酮改构化合物F11诱导MCF-7发生凋亡,可能是通过诱导Caspase-3和PARP蛋白表达的增加,抑制p53蛋白的表达实现的.     

5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素抑制肝癌细胞NF-κB表达的研究

目的：研究5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素（ADFMChR）抑制体外培养人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导凋亡作用及机制。方法：体外培养SMMC-7721细胞,MTT比色法测定ADFMChR对SMMC-7721细胞增殖活性的影响;Western Blotting法分析ADFMChR对SMMC-7721细胞NF-kB蛋白表达活性的影响。结果：MTT比色法结果显示ADFMChR有效抑制SMMC-7721细胞增殖活性,呈剂量依赖性,其IC50值为3.56μM;Western Blot分析证实ADFMChR下调NF-κB蛋白表达,呈浓度和时间依赖性。结论：ADFMChR具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导细胞凋亡作用,其机制与NF-κB蛋白表达有关。     

三氧化二砷对人乳腺癌细胞增殖抑制作用及对NF-kβ、P65、P53蛋白表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As_2O_3)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制作用及核转录因子NF-kβ,P65和P53蛋白表达的影响。方法体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,分别加入不同浓度As_2O_3处理作为实验组,未用As_2O_3处理的细胞作为对照组,采用MTT法检测As_2O_3对乳腺癌细胞增殖抑制作用;采用Western bolt法检测核转录因子NF-kβ、P65和P53蛋白表达水平。结果 As_2O_3能显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,且呈现浓度-时间依赖关系(P0.05),Western bolt显示核转录因子NF-kβ水平降低、P65和P53表达水平增高。结论 As_2O_3具有明显抑制乳腺癌细胞增殖的作用,且呈药物-剂量依赖性,其可能通过下调NF-kβ,上调P65和P53蛋白表达水平诱导细胞凋亡。     

富血小板纤维蛋白对粗糙钛板表面牙龈成纤维细胞增殖和分化的影响

目的探讨富血小板纤维蛋白对粗糙钛板表面人牙龈成纤维细胞增殖和分化的影响。方法体外培养人牙龈成纤维细胞，传至第4代与粗糙钛板联合培养用于实验。分别在普通培养基和含富血小板纤维蛋白的培养基中培养，MTT、RT—PCR、蛋白印迹技术进行检测。结果MTY结果显示含加入富血小板纤维蛋白能明显促进粗糙钛板表面人牙龈成纤维细胞的增殖，差异有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR提示两组均有Type（I）collagen和bFGF的mRNA表达，含富血小板纤维蛋白组mRNA表达比普通组明显增强。WB提示，I型胶原蛋白表达在含富血小板纤维蛋白组中明显增强。结论富血小板纤维蛋白能促进粗糙钛板表面人牙龈成纤维细胞的增殖和分化。     

miR-145抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖活性及其与CDK6的靶向关系

目的 在口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞中验证miR-145靶向CDK6对其细胞增殖活性的影响. 方法 构建pcD-NATM6.2-GW-pre-miR-145重组表达质粒并转染入Tca-8113细胞,以荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测转染后癌细胞miR-145的表达水平.MTT法评价miR-145对Tca-8113细胞增殖活性的影响,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-145对候选靶基因CDK6的调控作用,同时采用Western blot法检测miR-145对CDK6蛋白表达水平的影响. 结果 成功构建miR-145真核表达载体,qRT-PCR显示miR-145组中miR-145的表达显著高于内源性表达量（P＜0.001）,说明miR-145在Tca-8113细胞中具有较高的转染效率.MTT法提示miR-145的过表达能够显著抑制Tca-8113细胞的增殖（P＜0.01）,同时双荧光素酶报告基因分析表明,共同转入miR-145与CDK6野生型（CDK6-WT）会显著抑制Tca-8113细胞中的荧光酶表达（P=0.002）;Western blot进一步证实了miR-145的过表达能够抑制内源性CDK6蛋白的表达. 结论 miR-145可能通过直接靶向CDK6来抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞的增殖活性.     

异甘草酸镁对鼠源胃癌MFC细胞系PLA2G4A表达的影响

目的 观察异甘草酸镁（magnesium isoglycyrrhizinate,MI）对鼠源胃癌细胞株MFC增生的抑制作用,并通过mRNA和蛋白水平检测磷脂酶A2 IVA（group IVA phospholipase A2,PLA2 G4A）探讨其可能的作用机制.方法 以不同浓度的异甘草酸镁处理鼠源性胃癌MFC细胞后,用MTT法和平板克隆形成实验检测细胞增生,采用RT-PCR的方法检测PLA2G4A mRNA水平的变化,采用Western blot法检测PLA2G4A蛋白水平的变化.结果 在所设加样量范围内,异甘草酸镁低剂量组和高剂量组与对照组相比,鼠源性胃癌细胞株MFC的生长增生能力减弱（P＜0.05）,克隆形成率明显下降（P＜0.05）,PLA2G4A mRNA和蛋白表达均明显下调（P＜0.05）,并呈浓度依赖性.结论 异甘草酸镁可抑制鼠源胃癌细胞株MFC的增生,其机制可能与PLA2G4A的表达下调有关.     

ABCE1基因通过RNaseL途径抑制人大细胞肺癌H460细胞凋亡

摘要：目的研究ABCEl基因表达对人大细胞肺癌H460细胞增殖、凋亡的影响并初步探讨其机制。方法体外培养H460细胞,分为A组（转染ABCE1-siRNA-1组）、B组（转染ABCEl-siRNA-2组）、C组（转染空质粒组）以及D组（空白对照组）。将构建好的ABCEl的siRNA（小干扰RNA）载体转染人培养的细胞中,荧光显微镜下观察转染效率,WesternBlot法检测ABCEl蛋白以及RNaseL蛋白的表达,RT—PCR法检测ABCElmRNA的表达,MTT法分析细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果将构建好的载体成功转入了H460细胞,转染后A、B组的细胞活性降低,ABCEl的表达受到阻断俨〈0．01）,RNaseL蛋白含量明显增加（P〈0．01）,细胞的增殖能力明显降低并逐渐凋亡（P〈0．01）。结论ABCEl基因可促使人大细胞肺癌H460细胞增殖并抑制细胞凋亡,其机制是阻断了2-5A／RNaseL细胞通路。     

转移粘附基因下调对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨转移粘附基因（metadherin,MTDH）表达下调对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制.方法 采用RNA干扰技术,下调乳腺癌SK-BR-3细胞MTDH基因的表达,Western blot实验验证MTDH表达下调.四甲基偶氮唑盐比色法（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）实验检测MTDH下调对SK-BR-3细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况.Western blot实验检测细胞增殖、周期和凋亡相关蛋白表达变化情况.结果 MTDH基因表达下调后,乳腺癌SK-BR-3细胞增殖能力减弱,作用48和72h后,空白对照组、阴性对照组和实验组吸光度A值分别为（2.0 ±0.1）vs（1.9±0.3） vs（0.9 ±0.1）（P =0.02）和（2.7±0.2） vs（2.5 ±0.4）vs（1.3±0.2）（P =0.008）.细胞阻滞于G0/G1期,S期和G2/M期细胞比例下降.MTDH表达下调可诱导乳腺癌细胞凋亡,空白对照组、阴性对照组和实验组细胞的凋亡率分别为（1.3±0.2）％、（1.4±0.3）％和（19.6±2.7）％（P=0.012）.MTDH表达下调可显著降低细胞cyclinD1和Bcl-2的表达,但P21表达升高,并可使caspase-3活化.结论 下调MTDH基因表达可抑制乳腺癌SK-BR-3细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与cyclinD1和Bcl-2的表达下调、P21表达上调及caspase-3活化有关.     

姜黄素抑制刺猬信号诱导小细胞肺癌细胞凋亡

目的：探讨姜黄素对小细胞肺癌NCI- H446细胞的作用及可能机制。方法不同浓度（5、10、15μmol/L）的姜黄素作用于小细胞肺癌NCI- H446细胞后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot技术检测索尼克刺猬信号（Shh）、脑胶质瘤相关癌基因1（Gli1）的表达水平。结果不同浓度的姜黄素与小细胞肺癌NCI- H446细胞共培养后,浓度为15μmol/L的姜黄素能明显抑制NCI- H446细胞的增殖。与其余各组相比,差异有统计学意义（P＜0.01）。小细胞肺癌NCI- H446细胞经姜黄素处理后,姜黄素15μmol/L与其余各组比较,细胞凋亡率的差异有统计学意义（P＜0.01）。经姜黄素（15μmol/L）处理的NCI- H446细胞,Shh和Gli1表达均明显降低,与对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论姜黄素能通过抑制刺猬信号通路,抑制小细胞肺癌细胞的增殖,诱导其凋亡。     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。     

自噬在白藜芦醇调节胶质瘤干细胞辐射敏感性中的作用

目的研究白藜芦醇联合x射线对胶质瘤干细胞辐射抗性的影响。方法采用甲基四唑蓝（MTT）法检测白藜芦醇和X射线对胶质瘤干细胞增殖的抑制作用;光镜下观察胶质瘤干细胞的形态变化;采用Hoechst荧光染色观察凋亡小体;采用单丹磺酞尸胺（MDC）染色和Westernblot分析自噬在x射线诱导胶质瘤干细胞死亡中的作用。结果MTT检测结果显示,与阴性对照组和单独X射线处理组相比,白藜芦醇联合X射线可明显抑制胶质瘤干细胞生长（均P〈0．05）;在加入自噬抑制剂3-MA后,胶质瘤干细胞抑制率下降（P〈0．05）。显微镜下观察联合处理组的细胞形态,细胞不再成球形生长;Hoeehst33258荧光染色结果显示,联合处理组细胞出现凋亡形态;MDC染色结果显示,联合处理组细胞出现大量自噬泡;Westernblot分析结果显示,联合处理组细胞的Bel一2表达减少（P〈0．01）,LC3Ⅱ／LC3I的比值增大（P〈0．01）。结论白藜芦醇可提高胶质瘤干细胞的辐射敏感性,白藜芦醇联合X射线处理可诱导胶质瘤干细胞发生凋亡和自噬;自噬对于提高胶质瘤干细胞的辐射敏感性起到重要作用。     

ELAC2对前列腺癌细胞Du-145生长影响的体内外实验研究

目的研究ELAC2在体内外对前列腺癌生长的影响。方法利用脂质体转染法将ELAC2基因转入Du-145细胞,建立稳定表达ELAC2的细胞株,同时设立未转染Du-145和转染空载体的Du-145/pcDNA3作为对照。采用RT-PCR和Western blot法检测转染前后ELAC2的mRNA和蛋白表达水平;MTT法检测细胞生长和增殖情况。采用BALB/c裸鼠建立Du-145前列腺癌移植瘤动物模型,检测在体内ELAC2对前列腺癌生长的影响。结果 RT-PCR检测结果显示,ELAC2在Du-145/ELAC2细胞中mRNA表达明显增加,Western blot法检测同样发现ELAC2蛋白表达水平显著升高。MTT检测结果表明,Du-145/ELAC2细胞增殖较对照组细胞明显减缓（P〈0.05）。在体内,Du-145/ELAC2组平均瘤质量和瘤体积均较对照组明显降低（P〈0.05）。结论提高ELAC2基因表达水平能明显抑制体内外前列腺癌细胞Du-145的生长,提示ELAC2可作为前列腺癌治疗的一个新基因。     

沙巴棕提取物对肺癌细胞增殖抑制及促凋亡的

目的观察沙巴棕提取物与人肺癌细胞增殖和凋亡之间的关系,并探索其作用机制。方法应用MTT比色法、流式细胞仪法观察人类肺癌细胞成活、凋亡情况。应用Westernblot法观察PARP、CASP3、P27、CDKNB、p-STAT3蛋白的表达情况。结果沙巴棕提取物以剂量依赖性的方式抑制了肺癌细胞的增殖,并通过上调PARP、CASP3、P27等凋亡相关蛋白促进凋亡。沙巴棕提取物降低了P—STAT3水平;STAT3磷酸化的一种选择性抑制剂——AG490,同样通过降低p-STAT3的水平而抑制了肺癌细胞的生长。相比于以上二者任意一种的单独治疗,沙巴棕提取物和AG490的联合治疗显著降低了肿瘤细胞的增殖（P〈0．05）。结论沙巴棕提取物可通过促进凋亡信号和下调p-STAT3蛋白而抑制肺癌细胞增殖。这些观察可能为沙巴棕提取物诱导肿瘤生长抑制的机制研究提供有价值的参考。