MAPKs在硫化氢抗大鼠肢体缺血再灌注所致肺损伤中的作用

目的观察丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）在外源性硫化氢（H2S）抗大鼠肢体缺血再灌注（IR）所致肺损伤中的作用.方法健康SD大鼠,随机分为四组（每组n=8）：对照组（Control）,Control＋NaHS组,IR组和IR＋NaHS组.应用双大腿根部止血带复制大鼠双后肢缺血及再灌注后肺损伤模型.Control和IR组动物分别于再灌注前10 min和相应的对照时间点腹腔注射无菌生理盐水（0.5 mL/kg）;IR＋NaHS和Control＋NaHS组动物分别于再灌注前10 min和相应的对照时间点腹腔注射NaHS（28μmol/kg）;观察大鼠肺组织学、肺组织中中性粒细胞（PMN）数目、肺组织湿重和干重之比（W/D）、丙二醛（MDA）含量以及动物生存情况等变化.应用Westernblotting检测肺组织中三种磷酸化MAPKs-细胞外信号调节激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38表达的变化.结果与Contorl组相比,IR组动物死亡率、肺组织PMN数目、W/D、MDA含量以及磷酸化ERK、JNK和p38表达均显著增高（P〈0.05）;与IR组相比,IR＋NaHS组动物死亡率、肺组织中PMN数目、W/D和MDA含量均显著降低、肺损伤减轻,磷酸化ERK表达显著增高、p38表达显著降低（P〈0.05）,JNK表达无显著变化.结论 MAPKs信号通路参与了外源性H2S抗大鼠肢体IR所致肺损伤作用的分子机制.     

糖代谢异常对大鼠肝脏组织中巨噬细胞移动抑制因子及C-Jun氨基端激酶表达水平的影响

目的 观察巨噬细胞移动抑制因子（MIF）和C-Jun氨基端激酶（JNK）在糖代谢异常大鼠肝脏组织中表达水平的变化，探讨糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝（NAFLD）的病理机制。方法 将60只大鼠随机分为糖耐量受损（IGT）模型组（n=20）、2型糖尿病（T2DM）模型组（n=20）、IGT对照组（n=10）及T2DM对照组（n=10），高脂饲料喂养复制IGT大鼠模型，高脂饲料喂养加腹腔注射小剂量链脲佐菌素（STZ）制备T2DM大鼠模型，采用TUNEL法检测各组大鼠肝脏细胞凋亡；实时荧光PCR 技术检测肝脏组织中MIF mRNA的表达； Western Blot方法检测肝脏组织中MIF 、Caspase-3、JNK蛋白表达及磷酸化JNK （p-JNK）的表达。结果 IGT大鼠及T2DM大鼠肝组织凋亡细胞明显增多；IGT组和T2DM组肝组织MIF基因表达较各自对照组明升高（P<0.01），MIF 、Caspase-3、JNK蛋白表达及JNK磷酸化水平也明显升高（P<0.05或P<0.01）；与IGT组相比，T2DM组Caspase-3、MIF、JNK蛋白表达水平明显降低（P<0.01），而JNK磷酸化水平是明显升高（P<0.01）。结论 糖代谢异常大鼠肝组织的损伤以及非酒精性脂肪肝的发生可能与肝组织MIF 、Caspase-3、JNK表达水平的升高及JNK磷酸化水平的增强有关。     

哇巴因诱导血液肿瘤细胞增殖的信号通路研究

目的揭示哇巴因诱导急性淋巴细胞白血病细胞株Jurkat增殖的信号传导途径.方法采用MTT、Western Blot等方法,观察哇巴因及不同激酶抑制剂对Jurkat细胞生长的影响,同时检测酪氨酸活化水平和丝裂原活化蛋白激酶MAPK（ERK1/2）的磷酸化程度.结果哇巴因促使Jurkat细胞膜酪氨酸磷酸化水平增高,并激活ERK1/2.激酶抑制剂PD98059,PP2,HerbimycinA和PP3均可阻断哇巴因诱导ERK1/2 的活化并抑制哇巴因诱导Jurkat细胞的增殖.结论哇巴因激活钠泵的信号传导功能,引起细胞膜酪氨酸磷酸化水平增高,MAPK（ERK1/2）信号途径级联样活化,从而导致Jurkat的增殖反应.Src激酶和EGFR参与了钠泵介导的信号传导.     

罗氟司特抑制吸烟诱导的慢性阻塞性肺疾病大鼠气道黏液高分泌的分子机制研究

目的探讨磷酸二酯酶4抑制剂罗氟司特对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺组织MUC5AC表达的影响及其分子机制．方法Wistar大鼠随机分为对照组、烟雾组、罗氟司特组、烟雾＋罗氟司特组．对照组和罗氟司特组大鼠置于无烟环境中饲养,烟雾组和烟雾＋罗氟司特组大鼠暴露于有烟环境,免疫组化法检测各组大鼠肺组织MUC5AC、p-ERK1/2及p-JNK1/2的表达,WesternBlot检测MUC5AC、ERK1/2、P-ERK1/2、JNK1/2p-JNK1/2蛋白的表达情况．结果与对照组相比,烟雾组大鼠肺组织MUC5AC的阳性率显著升高．且相关通路分子ERKl／2及JNKl／2的磷酸化水平明显升高．而烟雾＋罗氟司特组MUC5AC的表达水平较烟雾组显著降低,其ERK1/2及JNK1/2的磷酸化水平低于烟雾组．结论磷酸二酯酶4抑制剂罗氟司特可能通过抑制ERK、JNK等通路活化而减少吸烟鼠肺组织MUC5AC的表达,改善COPD．     

牙龈卟啉单胞菌重组牙龈蛋白酶刺激牙龈成纤维细胞内钙离子浓度变化及其机制

目的：探讨牙龈卟啉单胞菌重组牙龈蛋白酶（rRgpB）刺激蛋白酶激活受体（PAR）介导的人牙龈成纤维细胞（HGF）内钙离子浓度（[Ca²⁺]_i）的动态变化及细胞内信号转导通路。方法：流式细胞术检测 HGF 表达的 PAR 类型,CCK-8 法检测细胞增殖,以牙龈卟啉单胞菌rRgpB作用于 HGF,激光共聚焦显微镜观察 HGF 内[Ca²⁺]_i的动态变化及 PAR-1 拮抗剂的阻断作用;蛋白质印迹法检测 HGF 内 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）、胞外信号调节激酶 1/2（ERK1/2）、p38 丝裂原激活的蛋白激酶（p38 MAPK）、p65 蛋白水平的变化。结果：HGF 表达 PAR-1 和 PAR-3,且 rRgpB 可促进 HGF 生长。细胞受到 rRgpB 作用后能激发瞬时增强的[Ca²⁺]_i荧光信号,并且这种作用能够被 PAR-1 拮抗剂完全阻断;与空白对照组比较,rRgpB 诱导细胞6、12?h后,JNK、ERK1/2、p65 磷酸化蛋白表达均显著上调（均P<0.05）,但 p38 MAPK 磷酸化蛋白水平未见明显变化（P>0.05）;PAR-1 拮抗剂成功抑制了 rRgpB 诱导的 JNK、ERK1/2、p65 磷酸化蛋白表达的上调。结论：rRgpB 通过 PAR-1 诱导 HGF 内[Ca²⁺]_i增加,并激活细胞内 JNK、ERK1/2、核因子κB 信号通路。     

动态观察肝脏JNK信号通路在非酒精性脂肪肝病中的表达

目的 动态观察c-jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号传导通路在非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver diseaae,NAFLD)大鼠肝脏中的表达及探讨其在该病发生中的意义.方法 雄性SD大鼠192只,随机分为对照组(NG)和高脂组(HG)各96只,各组分别于第1周开始至第16周末,每2周随机抽取8只大鼠使用正糖高胰岛素钳夹实验技术检测葡萄糖输注率( GIR),另抽取8只大鼠门静脉采血检测转氨酶、血脂等指标,制备肝匀浆测定氧化指标;Western blot检测肝组织JNK1、胰岛素受体底物1(IRS-1)、胰岛素受体底物1 丝氨酸307磷酸化(p-IRS-1 Ser307)、蛋白激酶B(PKB)、蛋白激酶B丝氨酸473磷酸化( p-PKBSer473)水平.结果 从第4周末起,HG与同期NG比较,HG各组间两两比较:GIR水平降低,差异均有显著性(均P＜0.05).从第2周末起,HG与同期NG比较,HG各组间两两比较:肝组织JNK1蛋白表达、p-IRS1 Ser307水平增高,p-PKBSer473水平降低,差异均具有显著性(均P＜0.05).JNK1的蛋白表达强度与IR呈正相关(Pearson相关系数为0.968,P＜0.01).结论 高脂饮食可诱导肝组织JNK1增高,通过影响胰岛素信号蛋白IRS-1、PKB的磷酸化功能导致IR;肝组织的IR出现在全身IR和肝脏脂肪变性之前,肝组织的IR可能是NAFLD发病的启动因素.     

IL-1β对A549细胞分泌IL-8的诱导作用及其机理

目的：研究白细胞介素1β（IL-1β）对A549细胞分泌趋化因子白细胞介素8（IL-8）的诱导作用、相关的细胞内信号通道的激活和传导机理。方法：使用IL-1β刺激A549细胞后,Western blot检测细胞内磷酸化ERK1／2（PERK1／2）,磷酸化p38（p-p38）和磷酸化JNK（p-JNK）蛋白的表达水平;逆转录一聚合酶反应（RT—PCR）检测IL-8 mRNA的表达;ELISA检测IL-8的蛋白水平。结果：IL-113刺激后细胞内PERK1／2、p-p38和p-JNK的蛋白表达明显增加;A549细胞IL-8 mRNA表达明显升高;IL-8的蛋白表达水平明显高于未干预组。MEK1／2激酶抑制物U0126完全阻断了细胞内p-ERK1／2蛋白表达的升高,显著减低了IL-1β诱导的IL-8 mRNA和蛋白表达的增高;p38激酶抑制物SB203580部分阻断了细胞内p-p38表达的增高,对IL-8 mRNA无明显的影响但减低了IL-8蛋白表达的增高。c—Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路抑制物SP600125不表现对p-JNK抑制作用,没有影响IL-8 mRNA和蛋白的表达。结论：IL-1β通过激活ERK1／2,p38信号通道,介导了A549细胞分泌IL-8。     

细胞外信号调节激酶在大鼠胰腺纤维化中作用的研究

目的研究细胞外信号调节激酶（ERK1/ERK2）在大鼠胰腺纤维化中的作用。方法通过对大鼠胰管内注射2%三硝基苯磺酸（TNBS）的方法制备大鼠胰腺纤维化模型。采用免疫组化技术检测第四周胰腺组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、血小板衍化生长因子（PDGF）、磷酸化细胞外信号调节激酶1、2（P-ERK1/P-ERK2）的含量。结果 PDGF、P-ERK1/P-ERK2、α-SMA在模型组的表达均强于对照组（P〈0.01）。α-SMA与PDGF、P-ERK1、P-ERK2定量分析成正相关（P〈0.05）。结论 ERK1/ERK2信号传导通路在慢性胰腺炎发生纤维化过程中具有重要作用。     

磷酸化ERK1／2在糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达意义

目的：探讨细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）在糖尿病脑缺血再灌注大鼠神经元中表达的作用.方法：采用链脲佐菌素（STZ）诱导和双血管阻塞联合放血法建立糖尿病大鼠全脑缺血模型,应用TUNEL、免疫组化方法观察糖尿病脑缺血组与正常血糖脑缺血组在全脑缺血15min、再灌注1,3h海马CA4区神经元凋亡和磷酸化ERK1/2（P-ERK1/2）的表达变化.结果：糖尿病脑缺血组在缺血15min、再灌注1,3h各时间点海马CA4区神经元凋亡发生率均明显高于正常血糖脑缺血组（P〈0.05）;糖尿病脑缺血组在各时间点磷酸化ERK1/2均有较高表达,于再灌注1,3h明显高于正常血糖组（P〈0.01）.结论：ERK1/2可能参与并介导了糖尿病加重的脑缺血再灌注神经元的损伤.     

L-瓜氨酸预处理对大鼠缺血／再灌注损伤肾的功能及蛋白表达影响

目的研究L-瓜氨酸对大鼠缺血／再灌注（ischemia—reperfusion,I／R）损伤肾组织的保护作用机制。方法18只雄性SD大鼠分为假手术组（Sham组）、模型组（I／R组）和L-瓜氨酸组（L—Cit组）,每组6只。采用夹闭双肾动脉45min后再灌注制备肾L／R损伤模型。L—Cit组于造模前连续7天灌胃给予L-瓜氨酸600mg／kg。于再灌注3h活体摘取双肾,并行腹主动脉穿刺抽血2ml。检测各组大鼠血清肌酐、尿素氮,Western blot检测肾组织ERK1／2、p38MAPK和Akt的磷酸化表达。结果与Sham组相比,I／R组大鼠血清肌酐、尿素氮水平升高,肾组织ERK1／2和Akt的磷酸化表达明显降低,p38MAPK的磷酸化表达明显增高;L—Cit组与I／R组相比,ERK1／2和Akt的磷酸化表达明显增高,而p38MAPK的磷酸化表达明显降低,血清尿素氮、肌酐水平明显降低。结论L-瓜氨酸可能通过激活ERK1／2和Akt信号通路、抑制p38MAPK信号来保护大鼠肾缺血／再灌注损伤。     

Ceramide from sphingomyelin hydrolysis differentially mediates mitogen-activated protein kinases （MAPKs） activation following cerebral ischemia in rat hippocampal CA1 subregion

Objective： To explore the role that ceramide plays in the activation of mitogen-activated protein kinases （MAPKs） during cerebral ischemia and reperfusion. Methods： Rats were subjected to ischemia by the fourvessel occlusion （4-VO） method. The sphingomyelinase inhibitor TPCK was administered to the CA1 subregion of the rat hippocampus before inducing ischemia. Western blot was used to examine the activity of extracellular- signal regulated kinase （ERK） and c-Jun N-terminal protein kinase （JNK） using antibodies against ERK, JNK and diphosphorylated ERK and JNK. Results： At lh reperfusion post-ischemia, JNK reached its peak activity while ERK was undergoing a sharp inactivation （P 〈 0.05）. The level of diphosphorylated JNK was significantly reduced but the sharp inactivation of ERK was visibly reversed （P 〈 0.05） by the sphingomyelinase inhibitor. Conclusion： The ceramide signaling pathway is up-regulated through sphingomyelin hydrolysis in brain ischemia, promoting JNK activation and suppressing ERK activation, culminating in the ischemic lesion.     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在金黄色葡萄球菌α-毒素所致人外周血单核细胞凋亡中的作用

目的研究丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在金黄色葡萄球菌α-毒素所致人外周血单核细胞凋亡中的作用。方法以Annexin V异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染流式细胞仪检测人外周血单核细胞的凋亡率,以Western blot法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及c-Jun N末端激酶(JNK)等蛋白的表达。结果随着α-毒素作用时间的延长,磷酸化-p38 MAPK和JNK1/2等蛋白的表达逐渐增高,而磷酸化-ERK1/2蛋白的表达不变。用SB203580和SP600125阻断p38 MAPK和JNK1/2后,单核细胞凋亡率明显降低,分别为(17.7±1.8)%和(15.3±1.6)%,与感染60 min时(35.7±3.6)%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MAPK信号通路的成员p38 MAPK和JNK1/2在金黄色葡萄球菌的致病过程中起重要作用。     

鞘内注射GDNF对神经病理性疼痛大鼠的影响及可能机制

目的评价鞘内注射胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对神经病理性疼痛大鼠行为学的影响,以及脊髓背角C—Jun氨基末端蛋白激酶（JNK）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）蛋白表达的影响。方法取鞘内置管成功的健康雄性sD大鼠120只,随机分为对照组（C组）、假手术组（S组）、神经病理性疼痛组（P组）和GDNF治疗组（G组）,每组30只。P组和G组采用结扎大鼠右侧坐骨神经建立坐骨神经慢性压迫损伤（chronicconstric—tioninjury,CCI）模型。C组不给予任何处理;S组只暴露坐骨神经,但不结扎;P组鞘内注射生理盐水10叫,隔日1次,连续14天;G组鞘内注射GDNF2I,zg,用生理盐水稀释至10μl,隔日1次,连续14天。各组大鼠分别于处理前及处理后3、7、14天测定热刺激缩足反射潜伏期（pawwithdrawthermallatency,PWTL）和机械刺激缩足反射阂值（pawwithdrawalmechanicalthreshold,PWMT）,然后每组取10只大鼠处死,取L4-6脊髓背角,采用Westernblot法测定磷酸化JNK（P—JNK）蛋白和磷酸化ERK（P—ERK）蛋白的表达水平。结果与C组比较,P组和G组PWTL和PWMT均缩短,脊髓背角P—JNK蛋白和P—ERK蛋白表达上调（P〈0．05）;与P组比较,G组PWTL和PWTL均延长,脊髓背角P—JNK蛋白和P—ERK蛋白表达下调（P〈0．05）。结论鞘内注射GDNF可以通过抑制脊髓背角P—JNK蛋白及P—ERK蛋白的表达减轻大鼠神经病理性疼痛。     

脑缺血再灌注损伤中FKBP51对JNK通路的影响

目的 探讨脑缺血再灌注损伤中FK506结合蛋白51（FKBP51）对c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的影响.方法 采用四血管阻塞制作大鼠全脑缺血模型.将体质量220 ～ 250 g健康雄性清洁级SD大鼠按随机数字表法进行分组：假手术组、缺血再灌注组、FKBP51反义寡核苷酸组、FKBP51错义寡核苷酸组、溶剂对照组.假手术组仅电凝双侧椎动脉,不夹闭双侧颈总动脉;缺血再灌注组电凝双侧椎动脉,夹闭双侧颈总动脉;FKBP51反义寡核苷酸组在电凝双侧椎动脉时侧脑室注射反义寡核苷酸进行干预,连续注射3d,第4天夹闭双侧颈总动脉;FKBP51错义寡核苷酸组和溶剂对照组侧脑室分别注射等体积错义寡核苷酸和TE buffer.除假手术组外,其余各组均缺血15 min后复灌不同时间点,然后分别断头取海马用于免疫印迹和免疫沉淀,检测各组中FKBP51蛋白表达;检测FKBP51反义寡核苷酸对FKBP51蛋白表达和JNK、c-Jun磷酸化的影响.结果 （1）FKBP51反义寡核苷酸组的FKBP51蛋白表达量明显减少,与假手术组差异有统计学意义（P＜0.05）.（2）各组之间JNK总蛋白的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）.假手术组p-JNK的表达量明显少于其他组,差异有统计学意义（P＜0.05）;缺血再灌注3h组、溶剂对照组、FKBP51错义寡核苷酸组p-JNK的表达较高,三组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）;与FKBP51错义寡核苷酸组比较,FKBP51反义寡核苷酸组p-JNK的表达量较少,差异具有统计学意义（P＜0.05）.（3）各组之间c-Jun总蛋白的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）.假手术组p-c-Jun的表达量明显少于其他各组,差异有统计学意义（P＜0.05）;缺血再灌注6h组、溶剂对照组、FKBP51错义寡核苷酸组p-c-Jun的表达量较高,三组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）;与FKBP51错义寡核苷酸组比较,FKBP51反义寡核苷酸组p-c-Jun的表达量较少,差异具有统计学意义（P?     

急性寒冷应激对大鼠血糖及血清激素水平的影响

目的：观察急性寒冷暴露对大鼠体温、血糖水平、激素水平的影响．方法：采用-15℃,3h低温暴露建立寒冷应激动物模型,分别使用肛温计和血糖仪测定直肠温度和血糖水平,荧光分光光度法和放射免疫分析法测定血清中激素水平．结果：冷暴露后,大鼠直肠温度降低2。80％,血糖水平降低1．09mmol／L,且30min后均未恢复正常水平（P〈0．01）;肾上腺皮质酮,促肾上腺皮质激素,5-羟色胺水平显著增高,而NE水平则显著降低（P〈0．01）,DA水平无显著变化．结论：寒冷暴露可以影响机体的体温调节和能量代谢,并可以引起下丘脑-垂体-肾上腺轴的激活,从而使血液中多种激素水平显著改变．     

c-Jun氨基末端激酶1和2在角质形成细胞系Hacat细胞中的作用

目的研究同工酶JNK1和JNK2在Hacat细胞中的功能差异,探讨其在皮肤肿瘤治疗中的潜在价值。方法分别将JNK1和JNK2的siRNA导入Hacat细胞,通过Western Blot技术在蛋白质水平对其敲低效果进行鉴定。CCK-8法检测细胞增殖曲线,流式细胞术检测细胞周期,不同剂量的Taxol进行凋亡诱导实验,分析正常Hacat细胞与JNK1/2敲低细胞的区别。结果细胞增殖实验表明,JNK1或JNK2敲低均可导致增殖变缓,JNK1敲低效果更明显。细胞周期结果显示,JNK1敲低可导致S期细胞减少,G2/M期升高。Taxol凋亡诱导实验表明,JNK2敲低组凋亡显著增加,而对照组和JNK1敲低组凋亡变化不明显。结论在细胞增殖方面,JNK1作用强于JNK2;而在抗凋亡方面,JNK2作用强于JNK1。     

肺缺血再灌注损伤时丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)活性的变化及意义

目的探讨肺缺血再灌注损伤时丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）活性的变化规律及意义。方法取健康Sprague-Dawley大鼠建立在体肺缺血再灌注模型，左肺门夹闭30min，复灌0、10、30、60、90、120min，采用蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测肺组织中3种丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）：ERK（extracellular signal regulated protein kinase，ERK1／2）、JNK（c—Jon NH2-terminal protein kinase，JNK）和p38MAPK在假手术对照（Sham）组、缺血30min和缺血后再灌注不同时间点的活性变化。结果与假手术对照组相比，ERK、JNK的活性随缺血和再灌注时间的延长而逐渐升高直到复灌120min。p38的活性只在缺血及缺血早期激活而在复灌30rain后活性恢复至假手术对照组水平。缺血／再灌注各时点组间ERK、P38、JNK蛋白水平差异无统计学意义（P＞0．05）。结论3种丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）在肺缺血再灌介导细胞凋亡中发挥不同的作用。     

乃豆蛋白A通过ERK信号分子对小鼠脾脏细胞表达纤维化蛋白的诱导作用

目的：探讨刀豆蛋白A（ConA）对小鼠脾脏细胞表达纤维化蛋白（FBRS）的诱导作用及可能的分子信号机制。方法：选择雄性BALB／c小鼠,制备小鼠脾脏细胞悬液。采用实时荧光定量PCR检测ConA刺激不同时间脾脏细胞后FBRS的mRNA表达水平,Westernblot检测ConA刺激不同时间后FBRS的蛋白表达水平,以及信号通路阻滞剂对FBRS的蛋白表达的影响和ConA对胞外信号调节激酶（ERK）信号表达的活化作用。结果：ConA能刺激小鼠脾脏细胞FBRS的mRNA和蛋白表达,ERK信号通路阻断剂PD98059可以明显抑制ConA引起的FBRS蛋白表达,且ConA刺激后能够明显活化ERK的表达。结论：ConA可通过活化ERK信号通路,诱导小鼠脾脏细胞FBRS的表达。     

淫羊藿苷介导MAPK信号通路促进间充质干细胞株C3H10T1／2成骨分化的体外研究

目的：探索补肾中药淫羊藿有效成分淫羊藿苷对间充质干细胞株C3H10T1／2的促成骨分化作用,及该作用与丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路的相关性。方法：体外培养间充质干细胞株C3H10T1／2,给予淫羊藿苷（0、10^-7、10^-6、10^-5和10^-4mol／L）联合成骨诱导液干预26d后,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色观察成骨分化情况。10^-5mol／L淫羊藿苷干预C3H10T1／2细胞2、8、24与48h后,实时荧光定量聚合酶链式反应法（polymerase chain reaction,PCR）检测p38、细胞外调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated protein kinase,p42／44）mRNA的表达。10^-5mol／L淫羊藿苷干预C3H10T1／2细胞10、30、60和120min后,蛋白质印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogenactivated proteinkinase,p38）、p42和p44,以及翼式转录因子氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）及其磷酸化产物的蛋白表达情况。结果：10^-5mol／L淫羊藿苷联合成骨诱导液的促进C3H10T1／2细胞成骨分化能力最强。PCR结果显示,淫羊藿苷作用2h后p38基因表达显著下调（P〈0．01）;p42和p44mRNA水平在淫羊藿苷干预2h后均显著下调（P〈0．01）,而在淫羊藿苷干预48h后表达均上调（P〈0．05,P〈0．01）;其他时间点各通路基因表达情况均无显著变化（P〉0．05）。10^-5mol／L淫羊藿苷作用10min后,磷酸化p42／44蛋白表达减弱,磷酸化p38蛋白表达增强,并持续到30min,但对JNK蛋白的表达无明显影响。结论：淫羊藿苷促进间充质干细胞株C3H10T1／2向成骨细胞分化,其作用可能与激活p38和抑制ERK蛋白的表达有关。     

丝胶对高糖所致足细胞损伤和JNK信号通路的影响

目的 探讨丝胶对高糖所致足细胞损伤时c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路相关蛋白的表达及足细胞凋亡的影响,阐明丝胶的保护作用及其可能机制。 方法 分化成熟的条件永生化小鼠足细胞随机分为正常对照组（含5.5 mmol·L^－1葡萄糖的培养基）、高渗对照组（含5.5 mmol·L^－1葡萄糖+24.5 mmol·L^－1甘露醇的培养基）、高糖组（含30.0 mmol·L^－1葡萄糖的培养基）、低浓度丝胶组（含30.0 mmol·L^－1葡萄糖+150.0 mg·L^－1丝胶的培养基）、中浓度丝胶组（含30.0 mmol·L^－1葡萄糖+300.0 mg·L^－1丝胶的培养基）和高浓度丝胶组（含30.0 mmol·L^－1葡萄糖+600.0 mg·L^－1丝胶的培养基）。采用光学倒置显微镜观察各组足细胞形态表现,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组足细胞中裂孔膜蛋白（Nephrin）、丝裂原活化蛋白激酶激酶1（MEKK1）、丝裂原活化蛋白激酶激酶4（MKK4）、c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）和c-Jun mRNA表达水平,Western blotting法检测各组足细胞中Nephrin、MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun蛋白表达水平,AnnexinⅤ/PI双染法检测各组足细胞凋亡率。 结果 正常对照组足细胞胞体较大,并延伸生出树枝状突起;与正常对照组比较,高糖组足细胞胞体回缩变小,细胞间隔增大,脱落和悬浮的足细胞数目增多;与高糖组比较,不同浓度丝胶组足细胞形态逐渐趋于正常。高糖组足细胞中Nephrin mRNA和蛋白表达水平较正常对照组均明显降低（P<0.05）,表明高糖致足细胞损伤模型建立成功。高糖组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1、c-Jun mRNA和蛋白表达水平较正常对照组明显升高（P<0.05）;不同浓度丝胶组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun mRNA及蛋白表达水平较高糖组明显降低（P<0.05）,且高浓度丝胶组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun mRNA及蛋白表达水平较中浓度丝胶组明显降低（P<0.05）,中浓度丝胶组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun mRNA及蛋白表达水平较低浓度丝胶组明显降低（P<0.05）。高糖组和高渗对照组足细胞凋亡率较正常对照组明显升高（P<0.05）;不同浓度丝胶组足细胞凋亡率较高糖组明显降低（P<0.05）,且高浓度丝胶组足细胞凋亡率较中浓度丝胶组明显降低（P<0.05）,中浓度丝胶组足细胞凋亡率较低浓度丝胶组明显降低（P<0.05）。 结论 丝胶对高糖所致足细胞损伤发挥保护作用,其机制可能与抑制JNK信号通路中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun的表达及抑制足细胞凋亡有关联。