姬松茸不同提取物对UVB致HaCaT细胞光损伤的保护作用研究

[目的]研究姬松茸不同提取物对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)致人永生化角质形成细胞(HaCaT)光损伤的保护作用。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定不同剂量UVB对正常HaCaT细胞存活率的影响,姬松茸不同提取物对正常HaCaT细胞存活率的影响,以及姬松茸不同提取物对UVB所致光损伤的HaCaT细胞存活率的影响。[结果](1)不同剂量UVB照射后细胞存活率均下降,且呈剂量依赖性,当UVB达20mj/cm2时,细胞存活率为53.23%。(2)姬松茸水提物浓度在0.2~4mg·m L~(-1)、醇提物在0.1~2mg·m L~(-1)、粗多糖在0.2~1mg·m L~(-1)时具有促进HaCaT细胞增殖的作用,醇提物和粗多糖浓度增大则抑制细胞生长。(3)姬松茸水提物浓度在1~4mg·m L~(-1)、醇提物在1~2mg·m L~(-1)、粗多糖在0.5~1mg·m L~(-1)均能显著提高20mj/cm2 UVB照射后HaCaT细胞的存活率(P0.01)。[结论]姬松茸不同提取物可以在一定程度上减轻UVB诱导的HaCaT细胞的光损伤,具有抗皮肤光老化的潜力。     

纳米氧化铈对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的增殖影响

目的：研究纳米氧化铈对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的毒性作用和对细胞的增殖影响;考察纳米氧化铈作用于细胞的生物效应是否存在剂量和粒径效应。方法：不同终浓度200、100、50、20、10、5、2.5、1.25、0.625μg/m L的20.8 nm Ce O2-NPs体外作用于96孔板中NR8383细胞24 h,采用CCK-8试剂盒检测细胞活力;四种粒径20nm、50-100 nm、300-500 nm、1-5μm Ce O2分别以四种终浓度100、50、20、10μg/m L作用于NR8383细胞24 h,采用CCK-8试剂盒检测检测细胞活力。结果：不同浓度20.8 nm Ce O2-NPs作用于NR8383细胞,与对照组相比,除1.25、2.5、5μg/m L外,其他浓度下细胞存活率随浓度增大而升高,100、200μg/m L最明显;有剂量效应。四种粒径四种浓度的纳米氧化铈作用于NR8383细胞,50-100 nm的20μg/m L浓度和1-5μm的50、10μg/m L浓度Ce O2-NPs抑制细胞增殖,但不明显;其他各组均促进细胞增殖,其中20 nm的20μg/m L,50-100 nm的50μg/m L、100μg/m L最明显。剂量尺寸效应不明显。结论：小粒径纳米氧化铈对NR8383细胞增殖有促进作用,无明显毒性;微米级氧化铈有些浓度下细胞存活率降低,可能对细胞造成毒性。     

高浓度氧抑制兔动脉平滑肌细胞的增殖

目的　探讨缺氧和高氧环境对兔主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,间接判断缺氧与冠脉再狭窄的关系和研究氧疗是否能用于 PTCA支架后冠脉再狭窄的防治 .方法　用含 10 0 m L· L- 1小牛血清的 RPMI16 40培养液体外培养新西兰白兔的主动脉平滑肌细胞至 3～ 7代 ,将含 5 0 m L· L- 1小牛血清的 RPMI16 40培养液与动脉平滑肌细胞的混悬液10 0 μL 加入 96孔培养板中培养 ,按照实验分组分别在 10 0 ,2 10 ,2 5 0 ,5 0 0和 75 0 m L· L- 1 O2 及纯氧环境中培养主动脉平滑肌细胞 48h.用 MTT法和 3H- Td R掺入法检测动脉平滑肌细胞增殖的数量 .结果　以 2 10 m L· L- 1 O2 环境下动脉平滑肌细胞增殖的数量为基准对照组 ,其他各组为实验组 .5 0 0 m L· L- 1 O2 至纯氧环境下动脉平滑肌细胞的增殖显著低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,2 5 0 m L· L- 1 O2 与 2 10 m L·L- 1 O2环境下主动脉平滑肌细胞的增殖无显著差异 (P>0 .0 5 ) ,10 0m L· L- 1 O2 环境下动脉平滑肌细胞的增殖显著高于对照组(P<0 .0 5 ) .结论　动脉平滑肌细胞的增殖随着培养环境中氧浓度升高而降低 ,缺氧促进动脉平滑肌细胞的增殖 ,高氧对动脉平滑肌细胞增殖具有显著的抑制作用 ;氧疗可能有助于降低冠脉再狭窄率 ,并为高压氧治疗其他以动脉血管     

用低浓度过氧化氢建立心肌细胞氧化损伤模型

目的　观察低浓度 (10 0μm ol· L- 1 )过氧化氢对心肌细胞的时间损伤效应 ,探讨在细胞水平建立心肌氧化损伤模型 .方法　胰酶消化法分离培养心肌细胞 ,随机分为两组 :H2 O2 处理组和对照组 .在处理后不同的时间点 ,倒置显微镜下观察心肌细胞每分钟搏动频率 ;硫代巴比妥酸法检测心肌细胞脂质过氧化代谢产物丙二醛 (MDA) ;生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶 (L DH) ;台盼蓝排斥试验检测细胞的存活率 .结果　 H2 O2 处理后细胞搏动频率先有一个增加过程 ,而后迅速下降直至停止搏动 ;细胞 MDA的含量随作用时间的延长逐渐升高 ,30 min开始与对照组均差异显著 (P<0 .0 1) ;L DH漏出量也逐渐增加 ,40 min后与对照组均差异显著 (P<0 .0 1) ;H2 O2 处理 30 min后细胞存活率就开始下降 ,与对照组相比组间差异显著 (P<0 .0 1) .结论　 10 0 μmol· L- 1的H2 O2 随着时间的延长表现出明显的细胞损伤效应 ,可以用它建立模型来研究心肌细胞氧化损伤     

三氧化二砷诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡的初步研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导子宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡,探讨As2O3 对子宫颈癌的临床应用意义。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0μmol/L的As2O3 作用1、2、3、4 d后HeLa细胞的存活率,并进行形态学观察;采用细胞凋亡原位检测(TUNEL)法进行细胞凋亡的检测。结果:2.0μmol/L As2O3 处理HeLa细胞48 h后,可见细胞的存活率明显降低(P<0.05),处理96 h后,细胞的存活率进一步降低(P<0.01),经5.0μmol/L As2O3 处理的HeLa细胞24 h后就明显可见细胞的存活率降低;As2O3 作用后,HeLa细胞具有明显的凋亡特征性改变;TUNEL法检测可发现HeLa细胞有DNA的断裂。结论:As2O3 可以诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡,抑制细胞增殖,随着As2O3 浓度增加,作用时间延长,效果越明显,其作用具有浓度和时间依赖性。     

骨桥蛋白在缺氧对滋养细胞侵袭力影响机制中的作用

目的研究不同氧浓度下滋养细胞骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达与相应氧浓度下滋养细胞侵袭力的相关性,探讨OPN在缺氧对滋养细胞侵袭力影响机制中的作用。方法利用气体混配缺氧装置(QT-MTX-3),模拟子痫前期胎盘缺氧的低氧环境,培养人胎盘绒毛膜癌滋养细胞系BeWo细胞。采用Western印迹和实时荧光定量PCR方法,检测不同氧浓度对BeWo细胞OPN表达的影响。采用Transwell侵袭模型,探讨缺氧对BeWo细胞侵袭力的影响。结果 Western blot检测结果显示,缺氧48h后,低氧组OPN蛋白的表达水平均明显下降,且2%O2组OPN蛋白下降更显著。实时荧光定量PCR检测结果表明,缺氧对滋养细胞OPN mRNA的表达影响呈现出浓度时间依赖性,随着氧浓度的降低和缺氧时间的延长,OPN mRNA的表达呈显著下降趋势。Transwell侵袭实验结果显示,与常氧对照组相比,低氧组细胞侵袭力明显降低,8%O2组和2%O2组的细胞浸润指数分别为0.298 8和0.091 7(P<0.01)。采用Spearman相关分析法,比较OPN表达水平与BeWo细胞侵袭力的相关性,结果显示,随着OPN表达的降低,滋养细胞的侵袭力进一步下降,OPN表达水平与侵袭指数成正相关(rs=0.944,P<0.01)。结论缺氧降低滋养细胞OPN的表达,表现为浓度和时间依赖性;随着OPN表达的降低,滋养细胞的侵袭力下降。OPN低表达可能是子痫前期滋养细胞侵袭力下降的分子机制之一。     

高晶体-高胶体渗透压混合液对人脐静脉内皮细胞内钙离子浓度和线粒体膜电位的影响

目的 探讨高晶体-高胶体渗透压混合液(HHS)对缺氧/氧再灌状态下人脐静脉内皮细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i)、线粒体膜电位和细胞存活率的影响.方法 将人脐静脉内皮细胞分为A、B、C、D 4组,A组细胞于常氧状态下(37 ℃,95% 空气, 5%CO2)培养24 h;B组细胞经HHS作用15 min后,在常氧状态下培养24 h;D组细胞先经HHS处理15 min,C、D组细胞在缺氧环境(37 ℃, 95% N2, 5% CO2)中培养8 h,然后在常氧状态下培养16 h.[Ca2 ]i采用Fluo-2荧光分光光度计测定,线粒体膜电位采用罗丹明123(rhodamine123)流式细胞仪测量,细胞存活率则采用锥虫蓝染色法检测.结果 常氧状态下培养的A、B组细胞[Ca2 ]i、线粒体膜电位和细胞存活率间的差异无显著性意义(P>0.05).与A组相比,缺氧/氧再灌状态下,C、D组细胞[Ca2 ]i明显增加(P<0.05), 线粒体膜电位和细胞存活率明显降低(均P<0.05). 而D组细胞[Ca2 ]i 较C组降低,线粒体膜电位和细胞存活率较C组明显增高.结论 HHS可阻止缺氧/氧再灌引起的人脐静脉内皮细胞的钙超载,并减轻线粒体膜电位和细胞存活率的下降.     

氧浓度对人胎盘间充质干细胞生物学特性的影响

[摘要]　目的　比较不同氧浓度对人胎盘间充质干细胞生物学特性的影响。　方法　组织块培养法分离人胎盘间充质干细胞pMSCs,并利用流式细胞技术进行表面标志鉴定。将第3代pMSCs分别培养于常氧（21%O2）及不同浓度的低氧（5%O2、3%O2、1%O2、0.5%O2）环境中,观察各组细胞形态,MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移能力,ELISA检测细胞VEGF分泌表达量情况。　结果　成功从人胎盘组织分离出间充质干细胞pMSCs,阳性表达CD29、CD44,阴性表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR。低氧培养的pMSCs形态均一,细胞伸展为长梭形,漩涡状排列明显。与常氧组相比,一定范围内低氧（5%O2~1%O2） 培养的pMSCs增殖、迁移增快,分泌VEGF增多,氧浓度越低,变化越明显。过低氧浓度（0.5%O2）培养的pMSCs增殖减慢,分泌VEGF减少。 　结论　一定范围内的低氧可促进pMSCs增殖、迁移及分泌VEGF,氧浓度越低,促进作用越明显。而过低氧浓度则产生抑制作用。     

半紧闭装置低流量时的第二气体效应

目的　研究半紧闭装置低流量时可能存在的第二气体效应。方法　 4 0例ASAⅠ～Ⅱ级全麻患者随机分为A、B两组 ,各 2 0例 ,分别在新鲜气流量 (A组O2 0 .4L min +N2 O 0 .6L min ,B组O2 1L min)下接受 1%异氟烷。用Datex气体监测仪校正挥发罐输出浓度 (Fd) ,使异氟烷输出浓度为 1% ,气管导管连接处连续监测麻醉气体吸入浓度 (Fi)、呼气末浓度 (FA)、呼气末二氧化碳分压 (PETCO2 )、吸入氧浓度。观察 30min。比较 2组各相同时间点异氟烷FA Fi 和FA Fd。结果　异氟烷的FA Fi 上升速率 2组无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,FA Fd 上升速率 2组有差异 ,但不显著 (P >0 .0 5 )。结论　第二气体效应在低流量时表现不明显。     

HSPA1L在H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用

目的 研究HSPA1L蛋白在H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用.方法 将SH-SY5Y细胞用不同浓度的H2O2(1 200、800、600、400、200、100、50、0μmol/L)处理24 h,倒置显微镜观察SH-SY5Y细胞形态学的变化,MTF法检测SH-SY5Y细胞存活率,Western-blot检测SH-SY5Y细胞HSPA1L蛋白表达水平的变化.结果 与0 μmol/L组比较,不同浓度H2O2处理后,细胞形态发生了剂量依赖性损伤;SH-SY5Y细胞的存活率随H2O2浓度升高,呈现剂量依赖性降低;HSPA1L蛋白的表达水平随H2O2浓度升高,呈现剂量依赖性升高.结论 HSPA1L在H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型中,呈现剂量依赖性升高,这可能是细胞应对氧化应激损伤的一种补偿机制.     

Immunosuppressive effect of cultured Cordyceps sinensis on cellular immune response

The immunosuppressive effect of cultured Cordyceps sinensis (Bei Lin Capsule) was studied in vitro and in vivo. When the drug was added from 0.6 mg/ml to 5 mg/ml a significant dose-dependent inhibition effect was shown in the following immune reactions of mice (P less than 0.05-0.01): phagocytic function of peripheral blood leucocytes assayed by chemiluminescence; mitogenic response of spleen lymphocytes to Con A; mixed lymphocyte culture and LPS induced interleukin-1 release of macrophages. The survival rate of mice spleen lymphocytes cultured with Cordyceps sinensis 5 mg/ml in 37 degrees C 5% CO2 for 5 days was more than 80%. Cordyceps sinensis 4 g/kg daily significantly prolonged the mice skin allograft survival time (12.7 +/- 2.2 days v.s. 8.3 +/- 0.7 days in the control, P less than 0.01) and its immunosuppressive effect was close to that of Cyclosporin A 5 mg/kg daily on skin allograft.     

TP方案与NP方案治疗晚期乳腺癌的临床观察

目的：比较TP方案与NP方案治疗晚期乳腺癌的临床疗效和不良反应。方法：60例晚期乳腺癌患者随机分成TP方案组（30例）和NP方案组（30例）。TP方案：紫杉醇75mg/m^2,持续静脉滴入3h,d1、d8和d15;DDP30mg/m^2,静脉滴入,d1～d3。NP方案：NVB30mg/m^2,静脉推注,d1、d8;DDP30mg/m^2,静脉滴入,d1～d3。上述2个方案,每4周为1个疗程。结果：TP方案的总有效率为50%（15/30）,中位疾病进展时间（TTP）为8.1个月,中位生存时间为16个月,1年生存率为56.7%（17/30）;NP方案的总有效率为46.7%（14/30）,中位疾病进展时间（TTP）为6.9个月,中位生存时间为15.0个月,1年生存率为43.3%（13/30）。两组方案的主要不良反应为骨髓抑制及胃肠道反应。结论：两组方案对晚期乳腺癌患者均有较好疗效,不良反应可耐受,近期疗效无明显差异。     

MxEP与EP方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效比较

目的: 观察和比较MxEP与EP方案治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效和不良反应。方法: 30例Ⅲ~Ⅳ期NSCLC采用MxEP方案[足叶乙甙(VP16)75mg/m2,第1~5天;顺铂(DDP)30mg/m2,第1~3天;米托蒽醌(MxT)10mg,第2天]联合化疗。27例Ⅲ~Ⅳ期NSCLC采用EP方案(VP16 75mg/m2,第1~5天;DDP 30mg/m2,第1~3天)联合化疗。结果: MxEP组CR和PR共17例,有效率56.7%,中位缓解期6个月,中位生存期13个月;EP组CR和PR共11例,有效率33.3%,中位缓解期3个月,中位生存期8个月,两组疗效差异有显著性(Ρ<0.05)。主要的毒副反应为食欲减退、恶心呕吐、白细胞、血小板减少,患者均可耐受。结论: MxEP是治疗晚期非小细胞肺癌的一种可以选择的方案。     

Protection of carbon monoxide intraperitoneal administration from rat intestine injury induced by lipopolysaccharide

Background Treatment with inhaled carbon monoxide （CO） has been shown to ameliorate intestinal injury in experimental animals induced by lipopolysaccharide （LPS） or ischemia-reperfusion. We hypothesized that CO intraperitoneal administration （i.p.） might provide similar protection to inhaled gas. This study aimed to investigate the effects of continuous 2 L/min of 250 ppm CO i.p. on rat intestine injury induced by LPS and to try to develop a more practical means of delivering the gas. Methods A total of 72 male Sprague-Dawley rats were randomly assigned to 4 groups： control group, CO i.p. group, LPS group and LPS＋CO i.p. group. One hour after intravenously received 5 mg/kg LPS, the rats in LPS group and LPS＋CO i.p. group were exposed to room air and 2 L/min of 250 ppm CO i.p., respectively, and the rats of control group and CO i.p. group intravenously received an equal volume of 0.9% NaCI and 1 hour later, were exposed to room air and 2 L/min of 250 ppm CO i.p., respectively. One, 3 and 6 hour of each group after treated with room air or CO i.p., the animals （n=-6 for each time point） were sacrificed and intestinal tissues were collected for determinating the levels of platelet activator factor （PAF） and intercellular adhesion molecule-1 （ICAM-1） with enzyme-lined immunosorbent assays. The maleic dialdehyde （MDA） content and the myeloperoxidase （MPO） activity were determined with a chemical method. The phosphorylated p38 mitogen activated protein kinase （MAPK） expression was assayed with Western blotting and the cell apoptotic rate with flow cytometery. The arterial oxygenation was measured by blood gas analysis, and the pathology determined by light microscope. Results After treatment with 2 L/min of 250 ppm CO i.p., the increase of PAF, ICAM-1, MDA, MPO, and cell apoptotic rate induced by LPS was markedly reduced （P 〈0.05 or 0.01）, and accompanied by ameliorating intestine injury. Western blotting showed that these effects of CO i.p. were mediated by p38 MAPK pathway. There were no significant differences in all observed parameters between control group and CO i.p. group. Conclusion The injury to the intestine via anti-oxidant, anti-inflammation and anti-apoptosis, which may involve the p38 MAPK pathway, was induced by 2 L/min of 250 ppm CO i.p. exerting potent protection against LPS.     

Indoor Air pollution in Four Cities in China

The study reports the investigation of indoor air pollution carried out in four cities in China (Chengde, Shanghai, Shenyang and Wuhan). The concentrations of RP, SO_2, CO and NO_2 were measured in kitchens and bedrooms, both in summer and in winter. The results showed that indoor air pollution, as measured by RP, SO_2, CO, was heavy when coal was used as domestic fuel. This was particularly severe in winter. For example, the concentrations of SO2 in homes with coal stoves were more than 10 times higher than those in homes with gas or LPG in Shanghai. The concentratins of pollutants in kitchens were higher than those in bedrooms. The source of pollutants was fuel combustion from kitchen. The highest concentrations in kitchen could reach 665 μg/m~3 (RP), 860 μg/m~3 (SO2) and 14.07 mg/m~3 (CO). The concentrations in bedrooms were up to 270 μg/m~3 502μg/m~3, and 13.67mg/m~3, respectively.     

化学发光法测试3种佛手粗多糖体外抗氧化活性的研究

目的：：通过化学发光分析法评价3种佛手粗多糖的体外抗氧化活性。方法：采用 O2-·、·OH和H2 O23种自由基体外清除体系的特性对得到3种佛手粗多糖产物(FSP-1、FSP-2、FSP-3)进行测试。结果：3种粗多糖对羟基自由基的清除能力较强,对过氧化氢的清除能力相对较弱,且3种粗多糖中 FSP-3对超氧自由基、羟基自由基及过氧化氢的清除作用均为最大,表现出优于其他2种多糖的体外抗氧化能力。结论：佛手多糖具有一定的体外抗氧化活性,可作为一种潜在的天然抗氧化剂。     

过氧化氢诱导条件下人黑素细胞树突变化及其胞内Ca2+浓度变化的研究

目的:通过体外过氧化氢诱导模拟体内氧化压力条件下,联合观察人黑素细胞树突变化及其细胞内Ca2+浓度变化,初步说明黑素细胞经表皮丢失病理生理学基础。方法:采用常规分离培养人黑素细胞,分别用终浓度为0.1%和0.05%的H2O2作用于黑素细胞培养基中,于30、60、90、120和150 min后观察黑素细胞的树突变化,并通过目镜标尺测定树突变化率。另用Flu-3/AM染色,流式细胞术测定黑素细胞内钙离子荧光强度值。结果:使用不同浓度的H2O2诱导黑素细胞后树突显著回缩,0.1%H2O2对树突缩短作用强于0.05%H2O2;细胞内钙离子的荧光探针检测显示黑素细胞经过H2O2诱导后细胞内钙离子浓度升高,并且钙离子出现的峰值在诱导30 min时,早于黑素细胞树突缩短变化第1高峰60 min节点。结论:黑素细胞树突缩短可能与细胞内钙离子堆积,不能发生钙内流有关。     

多西紫杉醇联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌临床观察

目的: 观察多西紫杉醇每周疗法联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌临床疗效及毒副反应。方法: 多西紫杉醇每周20~30mg/m2(中位剂量每周24.5 mg/m2)静脉滴注,连用6周休息2周,并于第1~3天、22~24天分别给予顺铂每天25 mg/m2静脉滴注,用多西紫杉醇前24 h口服地塞米松8 mg,2次/天,连服3天。所有患者均接受8周以上的化疗。结果: 34例可评价疗效,部分缓解14例,稳定16例,进展4例,有效率41.2%。中位生存期11.6个月,1年生存率48%。毒性反应主要为骨髓抑制、腹泻、肌肉痛、恶心、呕吐、肝功能损害和皮疹。大部分患者为1~2度反应。经常规预防用药后未观察到过敏反应、水肿等。结论: 多西紫杉醇每周疗法联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效好,毒副反应轻,耐受性好,值得临床推荐应用。     

放疗联合顺铂、氟尿嘧啶方案同步治疗局部晚期食管癌的效果观察

目的:探讨同步放化疗治疗局部晚期食管癌的疗效及不良反应。方法:根据入选标准随机将49例局部晚期食管癌患者分为单纯放疗组(单放组)24例和放疗+化疗组(放化组)25例。2组均采用60CO或6MV-X线放射治疗,食管癌原发灶剂量单放组为60～68 Gy,30～34分次,6.0～6.5周;放化组为54～60 Gy,27～30分次,5.5～6.0周,区域淋巴结剂量50～60Gy,25～30分次,5.0～6.0周。放化组从放疗第1天起给予氟尿嘧啶500 mg/m2静脉滴注5 d,顺铂20 mg/m2静脉滴注4 d。结果:放化组与单放组治疗有效率分别为92.00%和79.17%,差异无统计学意义(P0.05)。放化组和单放组的1、2年生存率分别为68.00%、32.00%和58.33%、20.80%,差异均无统计学意义(P0.05)。放化组和单放组的1、2年局控率分别为72.00%、36.00%和66.67%、25.00%,差异均无统计学意义(P0.05)。放化组不良反应较单放组略有增加,但多数患者均能耐受。结论:放疗联合顺铂、氟尿嘧啶治疗局部晚期食管癌的近期疗效和局控率相对较好,有提高生存率可能,虽不良反应增加但多数患者可以耐受。