生长抑素抑制胰腺癌细胞株生长的作用

目的：观察生长抑素对人胰腺癌细胞株HS766T生长的作用；测定神经鞘磷脂（sphingomyolin,SM）、cAMP、细胞内Ca^2 水平，探讨生长抑素的受体后信息传递作用。方法：细胞培养，分别加入不同浓度的生长抑素，PACAP1－38。应用MTT法来观察细胞增殖程度；薄层层析法测定细胞内SM，放免法测定细胞内cAMP含量；Fura-2/AM测定[Ca^2 ]i。结果：不同浓度的生长抑素（10^-6-10^-12mol/L）均能有效地抑制S766T的生长。能抑制HS766T细胞内SM、cAMP生成和细胞内Ca^2 水平，cAMP生成量和细胞内Ca^2 水平与生长抑素浓度呈负相关。结论：生长抑素能抑制HS766T细胞的生长，它的抑制作用是通过受体介导的。     

生长抑素对人结肠癌细胞株的调控及受体后的信息传导

目的：研究生长抑素（somatostatin,SS)对人结肠癌细胞株的生长调控及受体后的信息传导途径。方法：以不同浓度的生长抑素处理人低分化结肠癌细胞株Clone A细胞,观察细胞的生长情况;先分别提取细胞内三磷酸肌醇（inositol,1,4,5-trisphosphate,IP3)及环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP),分别应用液体闪烁测量法、γ-闪烁记数仪测定其含量;用Fura-2负载及荧光测定细胞内游离Ca^2 浓度([Ca^2 ]i);分别提取细胞浆及细胞膜中的蛋白激酶C（protein kinase C,PKC),参考Takai法测定共活性。结果：不同浓度的生长抑素（10^-10-10^-5mol/L)能明显抑制Clone A细胞的生长,且呈剂量依赖关系;生长抑素能显著地抑制Clone A细胞内IP3、[Ca^2 ]i、cAMP的生成和PKC活性。结论：生长抑制抑制人低分化结肠癌细胞株Clone A的生长,可能通过磷酸肌醇途径,使细胞内IP3和[Ca^2 ]i减少或通过抑制PKC活性而抑制细胞生长;另一方面可能通过腺苷环化酶途径,使细胞内cAMP减少,抑制cAMP依赖的蛋白激酶,而抑制细胞增值。     

PACAP对人胰腺癌细胞株JF305的促生长作用

目的：观察垂体腺苷酸环化酶激活多肽（pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)对人胰腺癌细胞株JF305的生长调控作用；通过测定cAMP含量、[Ca^2 ]i浓度，探讨PACAP受体后信息传导。方法：细胞培养，分别加入不同浓度的PACAP1-38、PACAP6-38。应用MTT法观察细胞增殖程度。放免法测定细胞内cAMP含量；Fura-2/AM测定[Ca^2 ]i浓度。结果：PACAP1-38促进JF305的生长，促进JF305cAMP,Ca^2 的生成，呈剂量依赖性，PACAP6-38拮抗PACAP1-38的上述作用。结论：PACAP促进JF305的增殖；PACAP6-38能拮抗其促生长作用，受体后信息传递是通过腺苷酸环化酶途径和钙-钙调素途径。     

思他宁对人胰腺癌细胞株ASPC-1的生长调控

目的:观察思他宁对人胰腺癌细胞ASPC-1的生长作用.方法:细胞培养,分别加入不同浓度的思他宁.应用MTT法来观察细胞增殖程度;放免法测定细胞内cAMP含量;荧光法测定[Ca2 ]i.结果:不同浓度的思他宁(10-11～10-6mol/L)均能有效地抑制ASPC-1的生长,能抑制ASPC-1细胞内cAMP生成和细胞内钙离子水平,cAMP生成量和细胞内钙离子水平与思他宁浓度呈负相关.结论:思他宁能抑制ASPC-1细胞的生长,经过特异性受体调节.     

CRH对培养下丘脑神经元胞浆内cAMP和Ca2+变化的影响

目的 研究促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing hormone，CRH)对下丘脑神经元胞浆内cAMP浓度和Ca^2 的调节作用。方法 取孕17d胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元，采用PTI(Photon technology international，PTI)测量和分析外源性CRH对培养下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度([Ca^2 ]i)变化的影响，放射免疫方法测定神经元内cAMP含量。结果 正常对照组的下丘脑神经元[Ca^2 ]i和cAMP含量较低，外源性CRH刺激后，[Ca^2 ]i立即升高，神经元胞浆内cAMP生成明显增加；CP-154526可明显抑制CRH(10^-6～mol／L)刺激的下丘脑神经元[Ca^2 ]i和cAMP的生成增加。结论 cRH可通过与其1受体结合直接作用于下丘脑神经元，使神经元[Ca^2 ]i和cAMP含量明显增加，在调节下丘脑神经元激活过程中下丘脑合成和分泌的CRH可能起了重要作用。     

生长抑素对人胃癌细胞BGC-823生长的调控作用

目的观察生长抑素对人体分化胃癌细胞株BGC-823的生长调控作用，测定细胞内环磷酸腺苷（cAMP）含量及蛋白激酶c（PKC）活性，探讨受体后信息传导途径。方法BGC-823细胞在合10％小牛血清的RPMI1640培养液中，于37℃、5％CO2条件下培养，分别加入不同浓度的生长抑素，应用MTT法观察细胞的增殖程度。应用放射免疫分析方法测定细胞内cAMP含量，应用[γ-^32p]ATP掺入外源性底物的方法测定PKC活性。结果生长抑素能抑制BGC-823细胞的生长，且与剂量呈正相关。生长抑素能抑制细胞PKC活性，而对细胞内cAMP生成无明显影响。结论1、生长抑素能抑制胃癌细胞BGC-823的生长。2、生长抑素可降低PKC活性，提示其受体后信息传递途径可能涉及DG-PKC系统。     

HL-60细胞内游离钙对环核苷酸水平的影响

目的 藉离子霉素提高细胞内游离钙浓度（[C^2 ]i），观察其对急性白血病HL－60细胞内环核苷酸水平的影响。方法 在IBMX抑制磷酸二酯酶作用后加入离子氯素提高[C^2 ]i，比较[C^2 ]i升高对静息水平和肾上腺素刺激水平的HL－60细胞内cAMP,cGMP水平的影响，cAMP,cGMP水平以环核苷酸的累积量表示。结果 [C^2 ]i升高可使静息和肾上腺素刺激水平的cAMP累积量明显降低，cGMP累只量无明显改变，[C^2 ]i升高对硒诱导分化后的HL－60细胞环核苷酸的影响同分化前一致。结论 [C^2 ]i升高能够降低HL－60细胞内cAMP水平，对cGMP水平无影响，这种作用不因细胞分化而改变。     

细胞内Ca2+在HMG-CoA还原酶抑制剂抑制MCF-7细胞增殖中的作用

目的：探讨HMG－CoA还原酶抑制剂洛伐他汀（LOV）对人乳腺癌MCF－7细胞增殖功能和细胞内游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i）变化的影响。方法：4、8、16μmol/L　LOV处理MCF－7细胞1－3d后，MTT比色法检测细胞增殖功能，流式细胞仪测定细胞周期相的分布及凋亡率，激光共聚焦显微技术观察细胞[Ca^2 ]i变化以及RT－PCR方法分析LOV对MCF－7细胞质膜钙泵PMCA1 mRNA表达的影响。结果：LOV对MCF－7细胞增殖有明显的抑制作用，并使细胞的生长阻滞于G0/G1期，该作用存在一定的剂量和时间关系，但其诱导MCF－7细胞凋亡的作用不明显；同时LOV可持续升高MCF－7细胞[Ca^2 ]i，但对MCF－7细胞质膜钙泵PMCA1 mRNA表达无明显影响。结论：LOV导致的[Ca^2 ]i持续升高可能与LOV影响MCF－7质膜PMCA1功能有关；[Ca^2 ]i的升高及相关信号通路的变化可能参与了LOV对MCF－7细胞增殖抑制作用的调控。     

滨蒿内酯对豚鼠气管平滑肌细胞细胞内钙离子浓度的影响

目的：探讨滨蒿内酯（Scop)松弛豚鼠气管平滑肌的机制。方法：进行豚鼠气管平滑肌细胞分离。通过负荷钙离子荧光指示剂fluor-3-AM进行[Ca^2 ]i测定。结果：Scop可直接降低豚鼠气管平滑肌[Ca^2 ]ii，并且能抑制磷酸组织胺（His)和咖啡因（caffeine)对气管平滑肌[Ca^2 ]i的升高作用。结论：Scop松弛豚鼠气管平滑肌的主要作用机制是抑制细胞内钙浓度水平。     

生长抑素类似物诱导人胆管癌细胞株凋亡及对胞内游离钙的影响

目的 探讨生长抑素类似物SMS201－995（SMS）是否通过诱导人胆管癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长，以及与细胞内游离钙的关系。方法 采用人胆管癌细胞系SK－ChA-1，应用MMT比色法，Annexin V-FITC技术及激光共聚焦显微镜技术等进行检测和观察。结果 在SMS作用下CK－ChA-1细胞生长受抑制。SMS处理SK－ChA-1细胞后，Annexin V标记的凋亡细胞增多。细胞凋亡的同时细胞内游离钙浓度升高。结论 SMS可能通过诱导SK－ChA-1细胞[Ca^2 ]i依赖性细胞凋亡，抑制胆管癌生长。     

吗啡对大鼠培养海马神经元钙离子作用机制的研究

目的 研究吗啡对海马神经元游离子浓度([Ca^2 ]i)影响的机制，探索吗啡成瘾的神经生物学机制及对吗啡成瘾可能的治疗途径。方法 运用新型荧光探针Fluo-4 , 利用激光共聚焦显微镜研究吗啡对大鼠培养海马神经元[Ca^2 ]i作用机制。结果 10μmol/L吗啡急性刺激引起海马神经元[Ca^2 ]i升高，μ阿片受体选择性拮抗剂CTOP（1μmol/L）不能阻断吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i增加，δ2阿片受体选择性拮抗剂Naltrindole(1μmol/L）阻断了吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i反应，特异性的内质网钙泵抑制剂Thapsigargin(TG,1μmol/L）预处理海马神经元组断吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i增加，L－钙通道阻断剂Verapamil(20μmol/L）预处理海马神经元不能完全抑制吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i增加；100μmol/L吗啡长时程（24h）作用于海马神经元，细胞内[Ca^2 ]i升高，加入10μmol/L纳络酮急性戒断后，不能阻断细胞内[Ca^2 ]i升高，反而引起[Ca^2 ]i异常升高。结论 吗啡急性刺激引起的海马神经元内钙增加主要来源于δ2阿片受体介导的IP3敏感的钙库释放。     

脑缺血—再灌流损伤后生长抑素及其mRNA表达及[Ca^2＋]i改变与尼莫地平影响的

目的：研究大鼠短暂性全脑缺血-再灌流损伤后，海马齿状回门（DH）、CA1区和大脑皮质纹状18a(Str18a)区生长抑素（SS）、SSmRNA表达及脑组织细胞内钙离子浓度[Ca^2 )i的改变与尼莫地平对这些改变的影响。方法：大鼠麻醉后烧闭双侧椎动脉，右侧颈总动脉（CCA）注射尼莫地平（治疗组）或生理盐水（对照组），夹闭双侧CCA持续2min,5min或10min，松钳形成再灌流（持续2h)。脑组织石蜡切片免疫组化、原位杂交检测SS、SSmRNA的表达；Fura-2/AM检测脑组织[（Ca^2 ]i。结果：治疗组与对照组短暂缺血（5min、10min)-再灌流损伤后DH区内SS、SSmRNA神经元显著减少，其它区域无明显变化。尽管治疗组差；（2）尼莫地平虽可减轻缺血后细胞内钙超载，但对于缺血诱导的DH区SS神经元的丢失无保护作用。     

创伤后神经元细胞内游离钙的变化及其影响因素的研究

目的 研究液压冲击伤时体外培养的单个大鼠神经细胞内游离钙([Ca^2 ]i)的变化，探讨尼莫地平（Nimo-dipine)、D－2氨基戊酸（D－AP－5）和亚低温对创伤后细胞内[Ca^2 ]i的影响及其机制。方法 以Fluo-3/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂，用激光用聚焦显微镜测定液压冲击伤时体外培养的大鼠神经细胞内[Ca^2 ]i的变化。结果 液压冲击伤后脑皮质细胞内[Ca^2 ]i迅速升高，24h达高峰，随后逐渐下降，48h仍维持较高水平。Nimodip-ine、D－AP－5于各时相均降低细胞内[Ca^2 ]i，其中Nimodipine 10h内应用最佳，D－AP－5于1－10h之间应用较好，而亚低温30min内显著降低细胞内[Ca^2 ]i（P＜0.001），最佳时机在伤后15min内，伤后1h以上无效。创伤后 细胞内钙超载，Nimodipine、D－AP－5和亚低温均降低细胞内[Ca^2 ]i，但各自应用的最佳时间窗不同。结论 对创伤后神经细胞Ca^2 超载应注意综合治疗，并选定各自作用最佳时间窗。     

子宫内膜异位症患者腹腔巨噬细胞第二信使系统—胞浆游离钙浓度的变化

目的：探讨子宫内膜异位症患者腹腔巨噬细胞第二信使系统－胞浆游离钙浓度的变化与其活性关系。方法：选择19例行腹腔镜检查的不孕患者，根据术后诊断分为两组：异位症组（n=10)和正常盆腔组（n=8），术时抽取腹腔液，分离巨噬细胞，应用Frua-2检测屠 腹腔巨噬细胞浆游离钙浓度（Ca^2 )i。同时在腹腔巨噬细胞中加入浓度为100ng/ml丹那唑，观察丹那唑体外对腹腔巨噬细胞[Ca^2 ]i的影响。结果：异位症患者腹腔巨噬细胞[Ca^2 ]i明显高于正常盆腔组（P＜0．01），浓度为100ng/ml的丹那唑体能明显降低患者腹腔巨噬细胞[Ca^2 ]i。结论：异位症患者腹腔巨噬细胞活性改变涉及细胞内第二信使系统的变化，丹那唑可通过降低细胞内[Ca^2 ]i抑制巨噬细胞活性。     

WIN 55,212-2对培养的大鼠三叉神经节神经元胞内游离钙离子浓度的影响

目的检测WIN55，212—2对培养的大鼠三叉神经节神经元细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响并探讨其机制。方法以Fura一2／AM为钙探针，用细胞内双波长钙荧光系统检测细胞[Ca^2＋]i的变化。结果WIN55，2122（0．01～10μmol／L）可浓度依赖性地升高三叉神经节神经元细胞内[Ca^2＋]i，EC50为0．47μmol／L；用大麻素Ⅰ型受体（CBI受体）阻断剂AM251孵育后，发现10μmol／L的AM251可明显抑制10μmol／L WIN55。212—2对三叉神经节神经元细胞内[Ca^2＋]i的作用（P〈0．01）。结论WIN55，212—2可浓度依赖性地升高三叉神经节神经元细胞内[Ca^2＋]i，该作用可能是由CBI受体所介导。     

大枣中性多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的 研究大枣中性多糖（JDP－N）对小鼠脾细胞增殖作用及其对刀豆素A（ConA)活化脾细胞内游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i)的影响。方法 采用MTT法测定增殖程度,用激光扫描共聚焦显微镜技术测定细胞内[Ca^2 ]i。结果 JDP－N能促进小鼠脾细胞自发增殖反应和混合淋巴细胞培养反应,但对经ConA活化、IL－2诱导的脾细胞无促进增殖作用,且对ConA活化的脾细胞内[Ca^2 ]i无影响。结论 JDP－N仅对未活化的小鼠脾细胞有促进增殖作用。     

肾上腺素对视网膜色素上皮细胞ATP酶活性及细胞内cAMP和钙离子浓度的影响

目的 研究。肾上腺素对培养的成人视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium，RPE）钠-钾三磷酸腺苷酶（Na^＋-K^＋ATP酶）、钙离子三磷酸腺苷酶（Ca^2＋-ATP酶）和细胞内环腺嘌呤核苷酸（CAMP）、[Ca^2＋]i的影响与超微结构的变化，以探讨视网膜下液转运和吸收的机制。方法 采用不同浓度。肾上腺素诱导RPE细胞24h后，采用ATP酶试剂盒检测细胞Na^＋-K^＋ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活力，^125I-cAMP放免试剂盒检测胞内cAMP浓度，Fura-2／AM荧光探针检测细胞内[Ca^2＋]i，并采用透射电镜技术观察细胞超微结构的改变。结果 0．1～100nmol／L。肾上腺素能显著降低RPE细胞Na^＋-K^＋ATP酶活性，并提升Ca^2＋-ATP酶活性（均P〈0．01）。10nmol／L。肾上腺素可明显升高REP细胞内cAMP水平，加入10nmol／L。肾上腺素30min可明显引起RPE细胞内[Ca^2＋]i降低，透射电镜观察发现。肾上腺素诱导后的RPE细胞内水肿样改变。结论 肾上腺素可能通过β-肾上腺素能受体-cAMP途径影响RPE细胞离子与液体转运。     

苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内游离钙含量的影响

目的：观察苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内游离钙([Ca^2 ]i)含量的影响。方法：体外培养大鼠皮层神经细胞，加入谷氨酸观察细胞内[Ca^2 ]i,培养液一氧化氮（NO含量的变化及苯海索的干预作用。结果：加入谷氨酸后细胞内[Ca^2 ]i、细胞死亡数、NO含量显著升高，苯海索各浓度显著抑制[Ca^2 ]i及NO的升高，减少细胞死亡。结论：苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内[Ca^2 ]i、NO含量的升高具有抑制作用，其机制可能与钙拮抗作用有关。     

高胰岛素对肾小球系膜细胞内[Ca2+]i和Fn影响的体外研究

目的：研究高胰岛素通过对肾小球系膜细胞(GMC)内游离钙（[Ca^2 ]i及其产物纤维连结蛋白(Fn)的影响，探讨其对GMC的增生及在糖尿病肾病(DN)发生发展中的作用。方法：以含10％灭活小牛血清的BPMI 1640培养、传代GMC及细胞鉴定。按培养液中胰岛素浓度不同，分为三组，各加入相应培养液，进行细胞内[Ca^2 ]i浓度测定及培养上清Fn测定。结果：胰岛素浓度上升可引起[Ca^2 ]i水平上升(P＜0．05)，同时对Fn的生成亦有促进作用(尸＜0.05)，但与其作用时间无关。结论：高胰岛素水平与GMC中[Ca^2 ]i浓度增高及培养上清液中Fn的浓度上升有密切关系，因而可能与GMC的增生和纤维化有关。     

吗啡对大鼠海马星形胶质细胞[Ca2+]i的影响

目的 研究吗啡对大鼠海马星形胶持细胞[Ca^2 ]i的影响，探索吗啡对星形胶质细胞的作用效应。方法 运用荧光探针Fluo-4，利用激光共聚焦显微镜研究培养纯化大鼠海马星形胶质细胞[Ca^2 ]i的变化。结果 经0.5,1,2,10μmol/L浓的吗啡短期处理3d后，细胞内[Ca^2 ]i浓度与正常细胞比较差异无显著性（P＞0．05）。吗啡急性作用于正常星形胶质细胞后，[Ca^2 ]i呈单峰样升高；而作用于吗啡处理后的细胞，作用浓度需高于处理浓度出现[Ca^2 ]i呈单峰样升高的现象，纳络酮可阻断上述效应，NMDA受体阻断剂MK－801则不能。结论 星形胶质细胞[Ca^2 ]i对吗啡的反应性变化可能参与吗啡耐受的形成。