LHR真核表达载体构建及表达

目的构建黄体生成素受体（LHR）真核表达质粒载体和建立稳定高表达LHR的乳腺癌细胞株。方法KpnI／Hpa工双酶切LHR-cDNA质粒载体获得目的基因,定向克隆构建pcDNA3．1（4-）真核表达载体,酶切图谱和序列分析鉴定;重组质粒载体经脂质体转染MCF-7乳腺癌细胞,G418筛选,RT-PCR、细胞内cAMP测定,筛选鉴定高表达LHRMCF-7细胞。结果重组质粒pcDNA3．1（4-）-LHR酶切图谱分析结果、序列分析证明pcDNA3．1（4-）-LHR载体中LHR序列与GenBank的LHR基因序列完全相符。RT-PCR检测MCF-7细胞LHRmRNA,MCF-7细胞内cAMP浓度测定,证实MCF-7细胞高表达LHR。结论构建并转染pcDNA3．1（4-）-LHR真核表达载体,在MCF-7细胞中稳定表达,为探讨hCG对乳腺癌细胞的作用提供实验基础。     

可溶性白细胞分化抗原137检测法及初步临床应用

白细胞分化抗原 137(ＣＤ137)是活化淋巴细胞的膜表面共刺激分子 ,与配体结合后 ,能促进Ｔ淋巴细胞进一步活化与增殖[1] 。近来Ｍｉｃｈｅｌ等[2 ] 发现一种分子量为 16 0 0 0的人可溶性ＣＤ137(ｓＣＤ137)分子 ,由活化淋巴细胞分泌。本研究建立了一种检测ｓＣＤ137链霉亲和素 酶联免疫吸附试验(ＳＡ ＥＬＩＳＡ) ,用以检测类风湿性关节炎 (ＲＡ)患者血清中的ｓＣＤ137含量 ,并探讨其在ＲＡ中的临床应用。一、材料和方法1.标本来源 :(1)ＲＡ活动期患者 30例 ,男 7例 ,女 2 3例 ,年龄 17～ 6 8岁。 (2 )ＲＡ缓解期患者 30例 ,男 7例 ,女 2 3…     

转化生长因子β1与乙型肝炎患者肝细胞损伤和肝纤维化的关系

目的观察慢性乙型肝炎、重型乙型肝炎和肝硬化患者血清转化生长因子β1(TGF-β1)与肝细胞损伤、肝纤维化的关系.方法采用酶联免疫吸附试验测定20例健康献血员、70例不同临床分型乙肝患者血清TGF-β1,放射免疫法检测血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原蛋白(PⅢP)、层粘连蛋白(LN)及Ⅳ型胶原(CⅣ).结果 (1)慢性乙肝(轻、中、重度)、重型乙肝、肝硬化患者血清TGF-β1水平(pg/mL)分别为109.29±55.59,210.00±120.74,497.73±276.73,1138.44±580.45,1017.06±502.50(P＜0.01,P＜0.05);明显高于对照组(43.00±10.51,P＜0.01).(2)血清TGF-β1升高与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、凝血酶原活动度(PTA)、胆碱酯酶(CHE)相关(P＜0.01,P＜0.05).(3)血清TGF-β1与PⅢ P、CⅣ、LN、HA呈正相关(P＜0.01,P＜0.05).结论 TGF-β1在肝纤维化的发病机制中发挥重要作用,血清TGF-β1检测有助于判断肝纤维化和肝细胞受损程度.     

肿瘤坏死因子受体研究近况

肿瘤坏死因子α(TNFα)是单核巨噬细胞系统产生的一种重要的细胞调节因子,具有多种生物学功能,与干扰素等一些细胞因子一样,发挥作用需要细胞表面高亲和性受体的介导。近几年国外为了探讨TNFα的作用机理,对TNF_α受体(TNFR)作了深入的研究,并取得进展,本文综述TNFR的研究近况。1 TNFR的存在形式和分布 1985年Baglioni等首先用~(125)I标记重组人TNF_α,以受体结合分析法证实细胞膜上存在TNFR,随后许多研究者测定了各种肿瘤细胞和正常细胞的TNFR,实验表明上皮细胞系肿瘤细胞(子宫颈癌、结     

亚硒酸钠对HL—60细胞的分化诱导作用

目的观察亚硒酸钠对人急性髓系白血病ＨＬ－６０细胞系的诱导分化作用。方法ＨＬ－６０细胞在含８×１０－６ｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠的ＲＰＭＩ１６４０培养液中置３７℃、５％ＣＯ２、９５％空气、饱和湿度培养５天，于第５天查细胞形态学及硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）试验。结果硒在上述条件下可使ＨＬ－６０细胞形态学分类中较成熟细胞的比例增高（Ｐ＜０．０５），ＮＢＴ试验阳性率增高（Ｐ＜０．０１）。结论硒在一定条件下可能有潜在的诱导分化作用     

cAMP对胰岛素刺激的NIH3T3细胞丝裂原激活蛋白激酶活性的抑制作用

目的 探讨cAMP-PKA信号途径对胰岛素激活的Ras-丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径的影响。方法 以3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)提高细胞内环腺苷酸(cAMP)浓度，藉四唑蓝比色法(MTT法)和蛋白免疫印迹试验分别观察cAMP对胰岛素刺激的小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)的生长增殖和胞内丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)活性的影响。结果 IBMX(0．5mmol/L)抑制静息的和胰岛素(10mU／mL)刺激的NIH3T3细胞的增殖，作用呈时间依赖性。在胰岛素(10mU／mL)刺激的NIH3T3细胞，MAPK出现酪氨酸磷酸化；而以IBMX(0．5mmol/L)预处理细胞30min后，再以胰岛素作用10min，胰岛素刺激的MAPK的酪氨酸磷酸化受抑制。结论：cAMP可通过抑制MAPK磷酸化活化对NIH3T3细胞增殖起抑制作用。     

亚硒酸钠对HL—60细胞生长,分化和环核苷酸水平的影响

研究亚硒酸钠对人急性白血病细胞（ＨＬ－６０细胞，ＡＭＬ－Ｍ２型白血病细胞）生长、分化及胞内环核苷酸水平的影响。方法ＨＬ－６０细胞用ＲＰＭＩ１６４０培养液培养，对比研究加与不加亚硒酸钠的差别，环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）、环磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）水平的测定用放射免疫分析法。结果１．５×１０－５ｍｏｌ／Ｌ或３．０×１０－５ｍｏｌ／Ｌ的亚硒酸钠能显著抑制ＨＬ－６０细胞的生长，且呈剂量依赖性，１．５×１０－５ｍｏｌ／Ｌ的亚硒酸钠能促进ＨＬ－６０细胞的分化，对静息的胞内ｃＧＭＰ水平有明显的降低作用，对照组（０．０７±０．０２９）ｐｍｏｌ／１０６ｃｅｌｓ，３０ｍｉｎ，亚硒酸钠组（０．０６±０．０１７）ｐｍｏｌ／１０６ｃｅｌｓ，３０ｍｉｎ（Ｐ＜０．０５）。对肾上腺素刺激的胞内ｃＧＭＰ水平也有明显的降低作用，对照组（０．０７±０．０１８）ｐｍｏｌ／１０６ｃｅｌｓ，３０ｍｉｎ，亚硒酸钠组（０．０５±０．０１４）ｐｍｏｌ／１０６ｃｅｌｓ，３０ｍｉｎ（Ｐ＜０．０５）。结论亚硒酸钠的抑瘤作用可能与降低细胞内ｃＧＭＰ水平有关。     

全反式维甲酸对人肝细胞癌细胞生长的影响

研究全反式维甲酸对人肝细胞癌细胞ＢＥＬ７４０４细胞生长的影响。方法藉ＭＴＴ法观察ＡＴＲＡ对ＢＥＬ７４０４细胞的生长及其对人表皮生长因子刺激的反应性的影响。结论ＡＴＲＡ可能藉降低细胞对表皮生长因子刺激的反应性抑制人肝细胞癌细胞的增殖。     

研究生高级生物化学教学改革的探索与实践

研究生的教学是以培养和提高其综合科研素质为目的，高级生物化学课程，是基础医学和临床医学各学科和各专业研究生的一门重要基础课程，总结了多年来本课程教学改革的探索与实践，以及在修订教学大纲、更新教学内容、培养学生综合素质和创新能力等方面的体会。