匹那地尔对大鼠心肌细胞内钙及舒缩功能的影响

目的探讨匹那地尔对高钾停搏液处理后大鼠离体心肌细胞内游离钙与舒缩功能的影响。方法SD大鼠心室肌细胞酶解分离静息1~2 h后随机分为对照组,高钾停搏液组,匹那地尔强化组,格列苯脲拮抗组。四组细胞均在24℃下保存2 h,此后对细胞进行复氧、复灌20 m in并测定细胞收缩、[Ca2 ]i瞬态、肌浆网内贮钙释放功能。结果匹那地尔使心肌细胞在缺血再灌注中收缩功能,[Ca2 ]i瞬态,肌浆网内贮钙释放能力明显优于高钾停搏液组(P<0.01〉及细胞内钙释放后的钙峰回落时间明显短于高钾停搏液组(P<0.01〉。结论匹那地尔通过维持良好的肌浆网和细胞膜Na /Ca2 交换体功能来调节钙瞬态变化,减少细胞内钙超载从而改善心肌细胞缺血后收缩功能,同时避免了高钾停搏液的负面效应。     

匹那地尔对大鼠停跳心肌的能量保存作用

为探讨匹那地尔 (Pinacidil)冷超极化停搏液对大鼠缺血心肌的能量保存作用 ,并与传统高钾去极化停搏液(St.Thom as液 )进行比较 ,在改良 L angendorff离体大鼠工作心模型基础上进行低温缺血再灌注实验。把 4 0只大鼠随机分为 4组 ,每组 10只 ,S1组停搏液为 4℃ St.Thomas液 ,停搏时间为 1h;P1组为 4℃含匹那地尔的超极化停搏液 ,停搏时间为 1h;S2组停搏液同 S1组 ,停搏时间为 2 h;P2组停搏液同 P1组 ,停搏时间为 2 h。再灌注转为工作心 30 min后 ,取心肌标本置入液氮罐中 ,用荧光素酶法分别测定心肌 ATP含量。结果显示 :在保存心肌 ATP含量方面 P1组优于 S1组 (P<0 .0 5 ) ,而 P2组与 S2组相当。提示 :匹那地尔可作为心肌保护成分。含匹那地尔的冷超极化停搏液对大鼠停跳心肌保存作用优于或等同于传统高钾冷晶体停搏液     

超极化停搏对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的观察超极化停搏对体外循环(extracorporeal circulation,ECC)中缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,评价其对心肌的保护作用。方法将75只健康家猫随机均分为3组。应用猫ECC模型。并行循环组:ECC建立后不阻断上、下腔静脉和主动脉,仅并行循环150 min;去极化停搏组:主动脉阻断(ACC)60 min,再灌注60min,心脏停搏液使用去极化高钾St.Thomas液;超极化停搏组:心脏停搏液使用含吡那地尔的低钾St.Thomas液,余处理与去极化停搏组相同。应用Annexin-V/PI联合染色、流式细胞仪检测心肌细胞膜磷脂酰丝氨酸的外翻,比较超极化停搏处理组及去极化停搏组ECC过程中心肌细胞坏死和凋亡的数量。结果去极化停搏组于ACC 60min及再灌注60 min时坏死心肌细胞率分别为(2.727±0.436)%及(5.622±1.389)%;而超极化停搏组分别为(1.514±0.333)%和(3.052±0.403)%。两组ACC 60 min时,均未检出凋亡心肌细胞,但在再灌注60 min时,去极化停搏组和超极化停搏组凋亡细胞率分别达(2.253±0.581)%和(0.875±0.232)%。超极化停搏处理组缺血再灌注期间坏死及凋亡的心肌细胞明显减少。结论超极化停搏不仅能减少ECC缺血再灌注导致的细胞坏死,而且能够抑制再灌注期间发生的细胞凋亡。     

家兔未成熟心肌缺血再灌注肌浆网摄钙功能的初步研究

目的 :从亚细胞水平研究未成熟心肌缺血 -再灌注损伤中肌浆网 (SarcoplasmicReticulum ,SR)摄钙功能。方法 :36只家兔随机分为 4组 ,进行离体心灌注。组Ⅰ :幼兔 ,单纯灌注 30min ;组Ⅱ :幼兔 ,停搏 6 0min ,再灌注 30min。组Ⅲ、组Ⅳ为成兔 ,处理分别同组Ⅰ、组Ⅱ ,进行对照。测定各组心功能、冠状动脉流出液血气 ,单细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i) ,肌浆网Ca2 + -ATPase活性 ,肌浆网45Ca2 + 摄取。结果 :缺血 -再灌注后 ,成熟与未成熟心肌均发生钙超载 (P >0 .0 5 )。未成熟心肌肌浆网Ca2 + ATPase活性 ,肌浆网45Ca2 + 摄取恢复率 ,明显高于成熟心肌 (P <0 .0 5 )。结论 :未成熟心肌缺血 -再灌注损伤钙超载机制不同于成熟心肌 ,肌浆网钙摄取功能 ,在钙超载损伤中不起主要作用。     

尼可地尔对心肌功能的保护作用研究

目的研究尼可地尔对心肌功能的保护作用。方法采用间生态离体兔心共生支持系统模型。16只心脏随机分为实验组和对照组各8只,分别采用尼可地尔停搏液或者高钾停搏液进行心肌保护。常温缺血30min。再灌注60min,比较平衡期和再灌注60min的左室收缩压、舒张压和组织含水率。结果缺血再灌注后高钾组收缩功能恢复率为(38.43±16.58)%,尼可地尔组为(40.38±18.10)%。两组间差异没有统计学意义(P>0.05)。缺血后两组之间舒张功能的下降也无显著性差异。结论尼可地尔作为停搏液的停搏因子对心脏功能的保护与高钾停搏液没有明显差异。     

吡那地尔对低氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的 :研究低氧 /复氧 (H/R)对心肌细胞内Ca2 浓度 ([Ca2 ]i)的影响以及吡那地尔 (Pinacidil)减轻H/R过程中钙超载的作用。　方法 :采用新生SD大鼠进行心肌细胞培养 ,建立心肌细胞H/R模型。实验分 :①正常对照组 ;②H/R组 :细胞低氧 30min/复氧 30min ;③吡那地尔组 :先加入终浓度为 2 5 μmol/L的吡那地尔 ,再行低氧 30min/复氧 30min。以Fluo 3/AM荧光指示剂负载 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞 [Ca2 ]i变化。　结果 :对照组心肌细胞 [Ca2 ]i荧光强度和荧光光密度值较低。低氧 30min后复氧即刻 ,[Ca2 ]i荧光光密度值开始增加 ,复氧 30min后 [Ca2 ]i荧光强度和荧光光密度值显著增高 (与对照组相比 ,P <0 .0 1 )。而吡那地尔组细胞内荧光光密度值较H/R组显著降低 (P <0 .0 1 )。　结论 :心肌细胞H/R导致钙超载 ;而吡那地尔有明显减轻心肌细胞H/R时Ca2 超载的作用     

TNF-α的心肌负性肌力作用机制研究

目的 :探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对心肌的负性肌力作用机制。方法 :采用离体大鼠乳头肌张力测定 ,细胞内双波长钙荧光检测和 ATP酶分析方法。结果 :1TNF-α抑制大鼠右心室乳头肌的收缩力 ,2 0 U/ ml和 2 0 0U/ ml TNF-α灌流 10 min后 ,乳头肌收缩力分别减小到对照的 91%和 76 % (P均 <0 .0 1) ;2 TNF-α处理后对心肌细胞钙瞬态变化幅度无明显影响 (0 .97± 0 .0 5 vs0 .95± 0 .0 7,P>0 .0 5 ) ;3TNF- α明显抑制肌浆网 Ca2 + - ATPase活性 ,平均抑制率达到 2 0 % ;4 TNF- α拮抗肌浆网 Ca2 + - ATPase对底物中不同水平的 Ca2 +和 ATP的正反应性 ;5TNF- α对肌膜 Ca2 + - ATP酶和 Na+ / K+ - ATP酶活性无明显抑制作用。结论 :TNF- α抑制心肌收缩力的负性肌力作用机制可能部分与心室肌浆网 Ca2 + - ATP酶活性下降有关 ,而与膜上的 Ca2 + - ATP酶和 Na+ / K+ - ATP酶活性无关。     

体外循环中血液或晶体超极化停搏对心肌能量代谢的影响

目的　比较观察体外循环中血液和晶体超极化停搏对心肌能量代谢的影响。方法　 18条犬分为 3组 ,每组 6条。高钾组、血液超极化组和晶体超极化组分别以 4℃标准St.Thomas液 (K 16mmol/L)、含吡那地尔 5 0 μmol/L4℃血液停搏液 (K 5mmol/L)和含吡那地尔 5 0 μmol/L的 4℃St.Thomas(K 5mmol/L)为心停搏液。CPB血液温度 2 6～ 2 8℃ ,阻断循环共 6 0min ,恢复循环后观察 30min。并观察缺血和再灌注期间心肌腺苷酸含量的变化。结果　高钾组在阻断 6 0min和开放 30min ,显示心肌有严重的能量耗竭和代谢障碍 ;而超极化组能量消耗和代谢障碍较轻 ,恢复迅速。结论　超极化停搏组的心肌能量保存良好 ,氧化代谢恢复迅速 ,而血液和晶体超极化停搏之间对心肌能量代谢无明显影响。     

激活线粒体钙激活钾通道加强心脏停搏液心肌保护作用的观察

目的:探讨线粒体钙激活钾通道(mitochondrial Ca2+-activated K+channels,mitoKCa)的激活是否加强改良St.Thomas心脏停搏液的心肌保护作用。方法:采用离体大鼠心脏灌流方法,全心停灌30 min和复灌60 min复制局部缺血/再灌注损伤模型;实验分单纯缺血复灌组、改良St.Thomas停搏液组、改良St.Thomas停搏液+NS1619组和改良St.Thomas停搏液+NS1619+Paxilline组,观察各组心室力学指标、冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量及心肌含水量的变化。结果:与单纯缺血/复灌组比较,改良St.Thomas停搏液组左心室舒张末期压力抬高程度下降(P<0.01),做功增加(P<0.01),冠状动脉流量增加(P<0.05),心肌含水量减少(P<0.01),LDH释放减少(P<0.01);与St.Thomas停搏液组比较,线粒体钙激活钾通道激动剂NS1619能进一步降低St.Thomas停搏液灌注时LDH的释放(P<0.01),心肌含水量进一步降低,促进左心室功能的恢复(P<0.01);线粒体钙激活钾通道阻断剂Paxilline取消了NS1619的作用(P<0.05~P<0.01)。结论:线粒体钙激活钾通道的激活可加强心脏停搏液的心肌保护作用。     

PARS抑制剂PJ34联合镁钾心停搏液对老年心肌的保护作用

[摘要] 目的 探讨多聚ADP腺苷合成酶 (Poly ADP-ribose synthetase，PARS) 抑制剂PJ34联合镁钾心停搏液对老年心肌的保护作用。方法 建立老年兔Lngendorff离体灌注模型，分4组进行实验：A组为全心缺血-再灌注组，B组为镁钾心停搏液诱导停跳组,C组为PJ34保护组，D组为J34联合镁钾心停搏液保护组。比较各组左心室舒展末期压（left ventricular end-diastolic pressure, LVEDP）、左心室峰发展压（left ventricular peak-developed pressure, LVPDP）、左室压力上升速率(the positive first derivative of pressure over time. +dp/dt)、 冠脉流量 (coronary flow CF)、心肌梗死量（Infarction volume,IV）、心肌组织湿重/干重比。结果 左心功能恢复以D组最佳，明显优于其他组（P<0.05）。 四组IV分别为：32.8%±1.6%（组①）、25.2%±1.3%（组②）、13.4%±0.7%（组③）、12.3%±0.5%（组④），以D组最小，明显少于其他三组（P<0.05）。结论 PARS抑制剂PJ34联合镁钾心停搏液，能改善左心功能恢复，降低IV，减轻心肌损伤, 有可能为另一种有效的心肌保护方法。 [关键词] 老年心肌 兔 多聚ADP腺苷合成酶抑制剂 镁钾心停搏液 心肌保护     

Nerve Growth Factor Inhibits Gd^3＋ -sensitive Calcium Influx and Reduces Chemical Anoxic Neuronal Death

To investigate whether glutamate and voltage-gated calcium channels-independent calcium influx exists during acute anoxic neuronal damage and its possible relationship to neuronal protective function of NGF. In in vitro model of acute anoxia, hippocampal cultures from newborn rats were exposed to 3 mmol/L KCN. Changes of intracellular Ca^2＋ concentration （[Ca^2＋]i） were monitored by con-focal imaging and cell viability was assayed by PI and cFDA staining. The results showed that after treatment with primary hippocampal cultures with 3 mmol/L KCN for 15 min, [Ca^2＋]i was significantly increased 6.27-fold compared to pre-anoxia level and 73.3% of the cells died. When combination of 20 μmol/L MK-801 （glutamate receptor antagonist）, 40 μmol/L CNQX （AMPA receptor antagonist） and 5 μmol/L nimodipine （voltage-gated calcium channel antagonist） （hereafter denoted as MCN） were administrated to hippocampal cultures, levels of [Ca^2＋]i and cell death rate induced by KCN were partially reduced by 35.9% and 47.5% respectively. However, Gd^3＋ （10 μmol/L） almost completely blocked KCN-mediated [Ca^2＋]i elevation by 81.9% and reduced neuronal death by 88.8% in the presence of MCN. It is noteworthy that NGF, used in combination with MCN, inhibited KCN-induced [Ca^2＋]i increase by 77.4% and reduced cell death by 87.1%. Only PLC in- hibitor U73122 （10 μmol/L） abolished NGF effects. It is concluded that Gd^3＋-sensitive calcium influx, which is NMDA （glutamate receptor） and voltage-gated calcium channels-independent, is responsible for acute anoxic neuronal death. NGF can inhibit Gd^3＋-sensitive calcium influx and reduce anoxic neuronal death through activating PLC pathway.     

Effects of remifentanil on intracellular Ca2+ and its transients induced by electrical stimulation and caffeine in rat ventricular myocytes

Background Preconditioning with remifentanil confers cardioprotection. Since Ca^2＋ overload is a precipitating factor of injury, we determined the effects of remefentanil on intracellular Ca^2＋ （[Ca^2＋]i） and its transients induced by electrical stimulation and caffeine, which reflects Ca^2＋ handling by Ca^2＋ handling proteins, in rat ventricular myocytes. Methods Freshly isolated adult male Sprague-Dawley rat myocytes were loaded with Fura-2/AM and [Ca]i was determined by spectrofluorometry. Remifentanil at 0.1-1000 μg/L was administered. Ten minutes after administration, either 0.2 Hz electrical stimulation was applied or 10 mmol/L caffeine was added. The [Ca^2＋]i, and the amplitude, time resting and 50% decay （t50） of both transients induced by electrical stimulation （E[Ca^2＋]i） and caffeine （C[Ca^2＋]i） were determined. Results Remifentanil （0.1-1000.0 μg/L） decreased the [Ca^2＋]i in a dose-dependent manner. It also decreased the amplitude of both transients dose-dependently. Furthermore, it increased the time to peak and tso of both transients dose-dependently. Conclusion Remifentanil reduced the [Ca^2＋]i and suppressed the transients induced by electrical stimulation and caffeine in rat ventricular myocytes.     

氯化钾除极对分离的豚鼠心室肌细胞胞浆内[Ca^2＋]i的影响

用酶解法分离单个豚鼠心室肌细胞，以荧光探针Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ标记胸浆内游离钙离子，用激光扫人聚焦显微镜实时测定胞浆内「Ｃａ＾＋」变化。分别观察了在正常台氏液和无钙台氏液中３０ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ除极对胞浆内「Ｃａ＾２＋」ｉ的影响。     

铁对白细胞介素-2舒血管效应的调制作用

目的 :研究微量元素铁对白细胞介素 - 2 (IL- 2 )舒血管效应的调制作用及其机理。方法 :采用离体主动脉环灌流模型 ,在苯肾上腺素 (1μmol/ L)预收缩基础上 ,测定经柠檬酸铁胺 (FAC)处理后 IL- 2对血管张力的变化 ;用分光光度法测定血管一氧化氮合酶 (NOS)活性。结果 :FAC(0 .1～ 10μmol/ L )孵育 30 min后对血管的张力无影响 ,却能浓度依赖性的抑制 IL - 2 (1～ 10 0 0 U/ ml)的舒血管效应 (P<0 .0 5～ 0 .0 1)。 IL - 2 (1、10、10 0、10 0 0 U/ ml)单独作用后的血管张力分别为加药前的 (78.4 7± 4 .31) %、(6 6 .86± 5 .5 5 ) %、(5 2 .6 2± 4 .5 1) %和 (4 2 .39± 4 .2 7) %。10 μmol/ L FAC预处理后再加 IL- 2 ,血管张力为 (89.81± 1.94 ) %、(86 .13± 3.11) %、(77.16± 5 .6 6 ) %和 (6 8.76± 5 .6 9) %。L-精氨酸 (1mmol/ L)孵育取消了 FAC对 IL- 2舒血管效应的抑制作用。IL- 2 (10 0 0 U/ ml)使 NOS的活性从 (9.86± 0 .5 4) U/ ml prot显著增高为 (2 2 .10± 1.87) U/ ml prot。FAC(10 μmol/ L)单独孵育 30 min NOS的活性为 (10 .5 9± 0 .5 9) U/ ml prot,但是 FAC预处理再加 IL - 2后 ,NOS活性显著降低为 (15 .71± 0 .89) U/ ml prot;高钙 (2 .5 mmol/ L )预处理 ,不改变 FAC对     

The effects of local anesthetics on intracellular Ca2+ release from ryanodine-sensitive Ca2+ stores in gerbil hippocampal neurons

Objective To examine the effects of procaine and lidocaine on intracellular Ca(2+) release from sarcoplasmic reticulum ryanodine-sensitive Ca(2+) stores. Methods The experiment was performed on hippocampal slices from 60-80 g male Mongolian gerbils. Levels of intracellular Ca(2+) concentration in the slices were measured by microfluorometry. The slices were perfused with 50 mmol/L KCl containing medium for 30 seconds. Then, the medium was switched to physiological medium. After 5 min of incubation, the slice was perfused with 20 mmol/L caffeine containing physiology medium for 2 min. Following incubation, the slice was superfused with physiological medium until the end of the experiment. The effects of procaine and lidocanin (100 μmol/L) on caffeine-evoked Ca(2+) release were evaluated by adding them to the medium after high K(+) medium perfusion. Results Caffeine induced a marked increase in intracellular Ca(2+) concentration which was then decreased 12% upon the addition of procaine (P&lt;0.05); however, lidocaine, did not induce a similar inhibitory reaction.Conclusion Procaine inhibits ryanodine-receptor mediated Ca(2+) release from intracellular Ca(2+) stores, while lidocaine may inhibit Ca(2+) release through other mechanisms.     

维生素K3通过钙依赖钾通道影响豚鼠结肠平滑肌收缩

目的 探讨维生素K3松弛胃肠道平滑肌的机制.方法 采用TD-112S型传感器测量豚鼠结肠平滑肌肌条收缩幅值、频率;用EPC10膜片钳放大器测量全细胞模式下细胞膜钙依赖钾电流[IK(ca)].结果 浓度为40、100、400、800 μmol/L的维生素K3作用后,肌条收缩频率分别为对照组的79%±4%,58%±5%,33%±4%,12%±3%(均P＜0.01).收缩强度分别为对照组的77%±10%,54%±7%,30%±6%,11%±4%(均P＜0.01).在+60 mV,I K(ca)值分别为对照组的120%±18%,149%±12%,197%±19%,223%±14%(均P＜0.01).结论 维生素K3能抑制平滑肌自发性收缩频率和强度,增强细胞膜IK(ca),且呈浓度依赖性.其机制与钙依赖钾通道的激活,促进钾离子外流有关.     

SKF96365和氯化镍对环匹阿尼酸诱导的大鼠PASMC［Ca2＋］i升高的影响

目的：研究SKF96365和氯化镍（NiCl2）对环匹阿尼酸（CPA）诱导的大鼠远端肺动脉平滑肌细胞（PASMC）内游离钙离子浓度（[Ca2＋]i）变化的影响。方法培养大鼠PASMC,运用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测CPA、SKF96365和NiCl2对PASMC[Ca2＋]i的影响。结果含5μmol／L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育PASMC,10μmol／LCPA使PASMC[Ca2＋]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2＋至2．5mmol／L后,10μmol／LCPA使PASMC[Ca2＋]i迅速显著升高;50μmol／LSKF96365和500μmol／LNiCl2均能明显抑制10μmol／LCPA引起的PASMC[Ca2＋]i升高,但对高钾（60mmol／LKCl）溶液引起的PASMC[Ca2＋]i升高无影响。结论CPA可致大鼠PASMC[Ca2＋]i升高,且能被SKF96365和NiCl2阻断,提示CPA可能诱发细胞外Ca2＋经钙池操纵性钙通道（SOCC）内流,SKF96365和NiCl2能选择性抑制SOCC活性使经SOCC的Ca2＋内流减少。     

小檗碱对急性分离成年大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的　研究小檗碱对急性分离大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ] i)的影响。方法　采用酶解法分离单个大鼠心肌细胞 ,用钙敏感的荧光指示剂Fluo 3/AM染色 ,以荧光强度 (FI)来代表 [Ca2 + ] i,应用激光扫描共聚焦显微镜实时监测FI的变化。结果　在静息状态下 ,小檗碱 (3～ 1 0 0 μmol/L)对 [Ca2 + ] i 无影响。 3～ 1 0 0 μmol/L小檗碱对KCl 60mmol/L介导的钙内流也无影响。但小檗碱 (30和 1 0 0 μmol/L)对caffeine 1 0mmol/L引起的钙动员有明显促进作用 (P <0 .0 1 )。结论　小檗碱对于KCl通过电压依赖性钙通道 (VDC)介导的 [Ca2 + ] i 升高无影响 ;但小檗碱 (30和 1 0 0 μmol/L)可能通过影响RyRs而促进肌浆网 (SR)内钙外流 ,也可能对SR钙摄取 ,钙的跨膜转运及Na+ Ca2 + 交换有抑制作用     

钙介导As2O3诱导的线粒体通透性转变孔道开放

目的研究Ca^2＋在AS2O3介导的PTP开放中的作用,探讨AS2O3诱导粒体通透性转变孔道（PTP）开放的机制。方法提取大鼠肝线粒体,通过紫外分光光度仪检测Res作用下线粒体的膨胀,借此测定线粒体PTP的开放状态;借助荧光探针Rh123检测线粒体膜电位的变化。结果用10μmol／L,加10μmol／LCa^2＋处理线粒体,PTP开放。单独使用10μmol／LAS2O3处理,或先用0．5mmol／LEGTA螯合C矿,然后用10 mol／LAS2O3加10μmol／LCa^2＋处理,线粒体D540不下降。分别用0、5、10和20μmol／LAS2O3,处理线粒体,D540变化可分别被50、20、10和5μmol／LCa^2＋介导。结论C矿能介导AS2O3,诱导的PTP开放;AS2O3,诱导细胞凋亡通过降低诱发PTP开放所需的Ca^2＋阈值促使PTP开放,有可能通过调节细胞内的Ca^2＋来调控线粒体PTP开放进而调控细胞凋亡。