经典瞬时受体电位蛋白在大鼠远端肺静脉平滑肌细胞的表达

目的:研究经典瞬时受体电位(TRPC)蛋白在大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)的表达.方法:利用胶原酶消化法培养大鼠远端PVSMC,并通过形态学和免疫学鉴定PVSMC;采用Real-time PCR和免疫印迹法检测TRPC蛋白在大鼠远端PVSMC的表达.结果:原代培养的PVSMC呈长梭形,表现出典型的血管平滑肌细胞生长特点,并对平滑肌细胞α-actin免疫荧光显色呈阳性反应;Real-time PCR显示,在已知的7个TRPC成员(TRPC1-7)中,大鼠远端PVSMC有TRPC-1、TRPC-2、TRPC-3、TRPC-4、和TRPC-6的mRNA表达,表达强弱顺序为:TRPC-6＞ TRPC-1＞ TRPC-4＞ TRPC-3＞TRPC-2,不表达TRPC-5和TRPC-7;免疫印迹法进一步表明,在大鼠远端PVSMC有TRPC-1、TRPC-4和TRPC-6的蛋白表达,表达强弱顺序为TRPC-6＞TRPC-1＞TRPC-4.结论:大鼠远端PVSMC主要表达TRPC-1和TRPC-6,其可能与肺静脉平滑肌细胞内Ca2+浓度调节有关.     

鸟-胞内分枝杆菌复合群与龟-脓肿分枝杆菌肺病并发支气管扩张的CT征象比较

目的 探讨鸟-胞内分枝杆菌复合群(MAC)肺病与龟-脓肿分枝杆菌肺病并发支气管扩张患者CT征象的差异,提高对两种疾病并发支气管扩张的鉴别诊断水平。 方法 搜集2017年1—12月在广州市胸科医院门诊及住院治疗并经临床确诊的25例并发支气管扩张的鸟-胞内分枝杆菌复合群肺病患者(简称“A组”)和26例并发支气管扩张的龟-脓肿分枝杆菌肺病患者(简称“B组”),两组患者均为初诊或未经抗结核和抗非结核分枝杆菌(NTM)治疗。对两组患者的CT扫描资料进行回顾性分析,主要就两组患者支气管扩张(CT分型、分布)、肺内病灶的形态(微结节、树芽征、结节、实变等)、伴发空洞(类型、分布)的CT征象特点及并发症发生情况进行对比分析。 结果 B组左肺下叶支气管扩张、左肺下叶微结节、肺体积收缩的比率分别为57.69%(15/26)、84.62%(22/26)、61.54%(16/26),均明显高于A组[分别为28.00%(7/25)、56.00%(14/25)、32.00%(8/25)],差异均有统计学意义(χ ²值分别为4.58、5.03、4.46,P值分别为0.032、0.025、0.035)。A组柱状型支气管扩张占52.00%(13/25),高于B组(15.38%,4/26);B组囊状型支气管扩张占50.00%(13/26),高于A组(16.00%,4/25),差异均有统计学意义(χ ²值分别为7.69、6.63,P值分别为0.006、0.010)。结论 龟-脓肿分枝杆菌肺病患者的CT表现中,左肺下叶支气管扩张、左肺下叶微结节、肺体积收缩的发生率高于MAC肺病患者;龟-脓肿分枝杆菌肺病多并发囊状型支气管扩张,而MAC肺病多并发柱状型支气管扩张,以上特征性CT征象有助于两种疾病的鉴别。     

MAV3104与鸟胞内分枝杆菌复合群耐克拉霉素作用研究

目的：研究鸟胞内分枝杆菌复合群（MAC）MAV3104基因编码蛋白与药物外排的关系。方法以MAC 标准株基因组为模板,扩增 MAV3104基因,构建 pMV261-MAV3104c 重组质粒;测序正确后,转化重组质粒到大肠杆菌 DH5并在 MAC 标准株中诱导表达,Western Blot 鉴定 MAV3104表达;按照 CLSIM24-A2的操作要求检测 MAC标准株对克拉霉素的敏感性及外排泵抑制试验。结果经基因测序及 Western Blot 蛋白表达验证重组质粒构建成功;MAV3104过表达能提高鸟分枝杆菌对克拉霉素的 MIC,且硫利达嗪能抑制该作用;MAV3104过表达也能提高胞内分枝杆菌对克拉霉素的 MIC,但硫利达嗪对其没有抑制效应。结论 MAV3104转运蛋白介导的药物外排在鸟分枝杆菌耐克拉霉素中起重要作用。     

耐药结核性胸膜炎胸液生化及临床特点

目的 对耐药结核性胸膜炎胸液生化指标及临床特点进行分析,探讨其临床特点.方法 回顾性分析59例耐药结核性胸膜炎患者(耐药组),同时选择同期住院63例敏感结核性胸膜炎患者作为对照(敏感组).对两组患者的人口学资料、全身多器官影像学特征、痰涂片找抗酸杆菌及培养、颈部淋巴结活检病理、脑脊液检查、大便培养结核分枝杆菌、外周血及胸液腺苷脱氨酶(ADA)、乳酸脱氢酶(LDH)、蛋白含量、白细胞及分类细胞计数、胸液吸收时间等指标进行分析.结果 (1)耐药组复治病例45例(76.27%),敏感组复治病例22例(34.92%)(x2=21.04,P<0.01).(2)耐药组合并肺外结核13例(22.03%),敏感组为5例(7.94%)(P=0.02).(3)胸膜厚度耐药组为(0.66±0.33)cm,敏感组为(0.44±0.22)cm(P<0.01).(4)耐药组胸液吸收时间为(9.39±8.56)d,敏感组为(4.73±3.69)d(P=0.0001).(5)耐药组患者胸液白细胞数目为(5444.76±4270.35)×106·L-1,较敏感组患者的(3427.95±2294.60)×106·L-1明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),中性粒细胞及淋巴细胞数目均较敏感组升高(P<0.05).但分析耐药组中耐多药(MDR)与非MDR组患者间白细胞及分类细胞数目间比较差异无统计学意义(P>0.05).(6)两组患者胸液及外周血的ADA、LDH、蛋白含量等理化方面的比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 耐药结核性胸膜炎患者的临床特点以复治患者多见、多同时合并其他肺外结核、胸膜增厚明显及胸液吸收时间延长.胸液白细胞总数及淋巴细胞及中性粒细胞计数均较敏感组明显升高,考虑耐药胸膜炎多发展为结核性脓胸或合并感染.其他理化性质(ADA、LDH、蛋白含量)与敏感组对照,差异无统计学意义.胸液理化检测未能作为预测耐药结核性胸膜炎的早期预测指标,期盼更简便、快速、准确、经济的检测方法.     

母牛分枝杆菌菌苗联合化疗对老年细胞免疫功能低下肺结核的疗效分析

目的 通过循证医学方法观察和评价母牛分枝杆菌菌苗对于细胞免疫功能状况不同的老年初治免疫功能低下肺结核患者的疗效及安全性。方法 采用前瞻性研究方法,将80例老年初治菌阳肺结核患者随机分入化疗联合母牛分枝杆菌菌苗（微卡）的治疗组和单纯化疗对照组各40例;同时,根据老年患者治疗前外周血CD4+T淋巴细胞状况分为低下组（Ⅰ组）,正常组（Ⅱ组）,四组分别在治疗前、治疗2个月、6个月末观察其外周血T淋巴细胞亚群、痰抗酸杆菌涂片及培养结果。结果 ⑴治疗组2月末CD4+T淋巴细胞和CD4+/CD8+T细胞比值显著升高、CD8+T淋巴细胞显著下降（P<0.05）;对照组治疗前、2月末及6月末上述指标均变化不大（P>0.05）。治疗组2月末痰菌阴转率较对照组高（P<0.05）。⑵治疗I组2月末CD4+T淋巴细胞和CD4+/CD8+T细胞比值显著升高、CD8+T淋巴细胞显著下降（P<0.05）;对照I组治疗前、2月、6月末上述指标变化不大（P>0.05）。治疗I组2月末痰菌阴转率较对照组高（P<0.05）。⑶治疗II组治疗前、2月、6月末CD4+T淋巴细胞变化不大（P>0.05）;2月末CD8+T淋巴细胞显著下降（P<0.05）;CD4+/ CD8+T比值明显升高（P<0.05）;对照II组治疗前、2月末、6月末上述指标变化不大（P>0.05）。两组2月和6月末痰菌阴转率相似（P>0.05）。结论 治疗前CD4+T淋巴细胞低下的老年患者,采用母牛分枝杆菌菌苗联合治疗能显著改善患者的细胞免疫功能,提高治疗2月末痰菌阴转率。在治疗前CD4+T淋巴细胞正常的老年患者,采用母牛分枝杆菌菌苗,未能提高临床疗效。     

环匹阿尼酸对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度的影响

目的研究环匹阿尼酸(CPA)对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响及可能机制。方法原代培养大鼠远端PVSMC,并通过形态学和免疫荧光染色鉴定,利用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测高钾(60 mmol/L KCl)溶液及CPA对PVSMC的[Ca2+]i影响。结果原代培养的PVSMC表现出典型血管平滑肌细胞生长特征,并对平滑肌α-actin免疫荧光染色呈阳性反应;高钾溶液使PVSMC的[Ca2+]i显著升高,5μmol/L硝苯地平能完全阻断PVSMC的[Ca2+]i对高钾溶液的反应;10μmol/LCPA能使含5μmol/L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后,10μmol/L CPA能使含5μmol/L硝苯地平的Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i迅速升高。结论 CPA能够使大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高,其机制可能与Ca2+从肌浆网释放,并诱发细胞外Ca2+通过钙池操纵性钙通道(SOCC)内流有关。     

分次胶原酶消化法分离、培养成人肺微小动脉平滑肌细胞

目的：建立一种简便、高效分离和培养成人肺微小动脉平滑肌细胞的方法并鉴定该方法培养的传代细胞生物学特性。方法：分次胶原酶消化法与传统胶原酶消化法进行细胞获得率、细胞存活率及培养成功率比较;绘制生长曲线对原代与传代细胞的生长特性进行分析;细胞形态学观察、平滑肌肌动蛋白（SMα-actin）测定及细胞免疫荧光化学法进行细胞鉴定及纯度计算;比较原代与第10代细胞形态、SMα-actin含量、染色体数量及形态。结果：分次胶原酶消化法优于传统胶原酶消化法,细胞获得率（3.10±0.29 vs 1.20±0.35）×108 cells/L、细胞存活率(69% vs 21%)及培养成功率（61.5% vs 16.7%）（P＜0.01);传代细胞长至融合时间7 d快于原代细胞21 d;细胞显典型的“峰-谷”状生长,胞浆内表达SMα-actin,细胞纯度达98%以上;原代与第10代细胞形态、SMα-actin含量、二倍体数量（78.13% vs 76.47%）及形态无明显差别（P＞0.05）。结论：分次胶原酶消化法是一种简便、可行,获得高纯度、功能良好的成人肺微小动脉平滑肌细胞的方法。经过此方法分离、培养的细胞在10代以内传代培养细胞生物学及遗传学特性稳定,可用于实验。     

新一代氟喹诺酮类药物在抗结核治疗中的作用

目的探讨新一代氟喹诺酮类药物在抗结核中的作用。方法采用罗氏终点法对340株结核分枝杆菌临床分离株进行体外药敏试验。结果340株结核分枝杆菌对CPLX,LVFX,MXFX的耐药率分别为78.15%,15.88%,5.88%,LVFX,MXFX对初、复治无慢性呼吸道合并症,初、复治伴有慢性呼吸道合并症及MDR-TB的耐药率分别为7.61%、41.18%、25%、49.49%、28.57%、59.53%,1.41%、8%、11.78%、21.11%、19.05%、35.71%。结论环丙沙星不宜用于抗结核治疗,初治无慢性呼吸道疾患合并症患者可以应用左氧氟沙星抗结核治疗,而对于有慢性呼吸道疾患合并症或MDR-TB的患者最好应用莫西沙星。     

常压慢性持续缺氧大鼠肺动脉高压模型的建立

目的 探索大鼠肺动脉高压模型的建立方法,为慢性缺氧性肺动脉高压发病机制等方面研究提供实验动物模型。方法 Wistar大鼠常压持续缺氧3周,观测大鼠体重、平均肺动脉压(MPAP)、右心室收缩压（RVSP）、右心室肥大指数[RV/(LV+S)] 、红细胞比容,并观测肺血管病理学改变及血管壁相对厚度指数(RTI)。结果 缺氧组大鼠体重增长缓慢,MPAP、RVSP、RV/(LV+S)、红细胞比容明显高于对照组(P﹤0.05)。肺组织病理检查示缺氧组大鼠肺内血管管壁明显增厚,管腔狭窄,RTI较对照组显著增加(P﹤0.05)。结论 常压慢性持续缺氧3周能形成较理想的大鼠肺动脉高压模型。