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1.
目的 观察胃癌SGC-7901细胞株中hyrdC基因的不同表达水平对细胞增殖的影响.方法 分别将已构建的携带hyrdC基因的Ad-hyrdC重组腺病毒和靶向抑制hyrdC基因表达的AdshyrdC重组腺病毒,转染人胃癌SGC-7901细胞株,同时设空病毒Ad-null组和正常对照组,利用绘制生长曲线法和MTT法观察各组间胃癌细胞增殖的差异;将各组胃癌细胞接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型,比较各组胃癌细胞瘤体生长率的差异.结果 Ad-hyrdC组胃癌SCC-7901细胞增殖显著快于Ad-shyrdC组、Ad-null组和正常对照组,48 h后细胞数与Ad-shyrdC组、Ad-null组和正常对照组比较有统计学差异(P<0.05):Ad-shyrdC组胃癌SCC-7901细胞的光吸收值明显低于Ad-hyrdC组、Ad-null组和正常对照组(P<0.05):Ad-shyrdC组瘤体生长率较Ad-hyrdC组、Ad-null组以及正常对照组明显减慢(P<0.05),Ad-hyrdC组瘤体生长率较Ad-shyrdC组、Ad-null组以及正常对照组明显加快(P<0.05).结论 hyrdC基因具有促进胃癌细胞生长的功能,而靶向沉默hyrdC基因表达可抑制胃癌细胞的生长,hyrdC基因有望成为胃癌基因治疗领域的新靶点.  相似文献   
2.
目的:研究肝细胞生长因子(HGF)抑制慢性缺血性心脏病心肌纤维化及心肌细胞凋亡的作用。方法: 采用磷酸钙/DNA-TPC方法构建携带HGF基因的重组腺病毒(Ad.HGF)。经18只小型猪的左胸冠状动脉回旋支放置Ameroid环建立慢性心肌缺血猪动物模型,并随机分为3组即盐水组、AdHGF组和缺陷型空病毒Ad5(AdNull)组,每组6只(n=6)。于缺血心肌处,分别注射4×109 pfu 200 μl AdHGF、4×109 pfu 200 μl AdNull及200 μl盐水。4周后做超声心动图检查各组的心脏功能,并行病理学心肌纤维化、心肌凋亡检测。结果: 心脏彩超检测显示,AdHGF组室壁增厚,运动增加,左室舒张末容积(LVEDV)、左室射血分数(LVEF)及短轴缩短率(FS)等明显改善(P<0.05)。AdHGF组心肌组织切片缺血坏死区纤维组织增生明显低于AdNull组(P<0.05)。AdHGF组心肌中Ⅲ型胶原蛋白的量明显低于AdNull组(P<0.05)。AdHGF组心肌细胞的凋亡率(%)明显低于对照组(P<0.05)。结论: HGF具有抑制慢性缺血性心脏病心肌纤维化及心肌细胞凋亡的作用,从而可抑制心室重构和改善心功能。  相似文献   
3.
背景:组织工程心脏瓣膜研究中的核心和难点是种子细胞在支架材料上的黏附.层层静电自组装技术能够将多聚阴阳离子组装成多层膜状结构增加材料表面的生物相容性.目的:拟对猪去细胞瓣膜在体外进行层层静电自组装成多聚电解质共混膜,并且检测共混膜列种子细胞黏附的效果.设计时间及地点:细胞学体外观察性实验,于2008-09/2009 02在解放军第二军医大学长海医院胸心外科实验室和复旦大学高分子科学系实验室完成.材料:新鲜猪心脏瓣膜取自上海五丰上食肉联厂,采用酶消化法将猪主动脉瓣叶行脱细胞处理.密度梯度离心法从骨髓中获取骨髓单个核细胞,体外扩增培养后鉴定.方法:通过层层静电自组装技术构建20,10,5,0层的壳聚糖,透明质酸共混膜履盖在猪去细胞瓣膜支架上.将骨髓基质干细胞在涂膜支架上种植培养并检测支架对种子细胞的黏附效果.主要观察指标:扫描电镜观察、细胞计数、MTT检测组织工程心脏瓣膜上种子细胞的形态和细胞黏附效果.结果:扫描电镜观察20层壳聚糖,透明质酸多层膜样品上细胞生长情况比较好,样品上可以铺满细胞.而在组装层数为5层和10层的样品上,细胞生长的比较少.构建层数为20层的瓣叶,其细胞计数及吸光值高于10层和5层构建的瓣叶(P<0.01).构建层数为10层和5层的瓣叶与0层比较差异无显著性意义(P>0.05).结论:通过层层静电自组装技术构建的共混膜能够促进种子细胞的黏附,而且有一定的量效关系.  相似文献   
4.
目的 观察中低温下半身停循环时经下腔静脉(IVC)逆行灌注方法对猪肠系膜微循环变化的影响.方法 选择健康小型猪20只,随机分为A、B两组(n=10).两组均在体外循环(ECC)下肛温降到28℃时停循环60 min,同时经右无名动脉行顺灌脑保护.A组单纯下半身停循环.B组停循环同时联合经IVC逆灌行腹腔脏器保护,灌注压力...  相似文献   
5.
背景与目的促血管生成素-2(Ang-2)是一类调节血管生成的重要细胞因子,与肿瘤的发生发展有密切的联系.本研究通过腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)抑制肺腺癌细胞A549Ang-2的表达,观察其对癌细胞生物学特性的影响.方法构建H1启动子驱动的表达针对Ang-2的小干扰RNA(siRNA)重组腺相关病毒(AAV-Ang-2shRNA),转染A549细胞,同时以正常A549细胞及其转染空病毒(AAV-Null)的A549细胞作为对照,观察RNAi沉默Ang-2表达在体外及体内对A549细胞生长、致瘤、增殖、凋亡及肿瘤微血管密度的影响.结果体外实验结果表明重组腺相关病毒转染A549细胞48 h后Ang-2蛋白表达比对照组明显降低(P<0.001);细胞生长明显减慢(P<0.001).RNA干扰后A549细胞细胞周期分析结果提示A549细胞对照组、AAV-Null对照组和AAV-Ang-2thRNA验组的增殖指数(proliferation index,PI)分别为0.51±0.43、0.48±0.29和0.26±0.31.AAV-Ang-2shRNA验组与对照组比较,PI明显减少(P=0.001).体内实验结果表明,AAV-Ang-2shRNA实验组在胸腺缺陷小鼠成瘤体积、瘤质量均明显低于两对照组(P<0.01).各组微血管密度分析结果分别为46.4+13.1、44.2+13.6和34.9±12.8;AAV-Ang-2shRNA实验组肿瘤组织内新生血管数目明显低于对照组(P<0.001).各组凋亡指数(apoptosisindex,AI)分别为(5.98±3.11)%、(7.51±4.42)%及(17.06±7.43)%.AAV-Ang-2shRNA组比PBS组、AAV-Null组凋亡百分率明显增高(P=0.005,P=0.007).各组细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)阳性表达率分别为(92.75+9.7)%、(85.8±11.8)%、(69.8+16.5)%;AAV-Ang-2shRNA组PCNA指数低于两对照组(P=0.014,P=0.021).结论腺相关病毒介导的siRNA表达能明显抑制A549细胞中Ang-2的表达,减慢肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长.  相似文献   
6.
我们采用携带肝细胞生长因子(HGF)基因重组腺病毒(AdHGF)干预猪慢性缺血性心肌模型,研究HGF改善缺血性心脏病心脏功能的重要机制,探讨其抑制缺血心肌细胞纤维化及凋亡的作用. 一、材料与方法 1.材料:相同遗传背景的实验用贵州小型香猪18只,体质量(30±5)kg,雌雄不拘(第二军医大学动物实验中心提供).术前禁食、禁水24h以上.  相似文献   
7.
目的 构建表达大鼠caspase-3 siRNA腺病毒,体外观察其抑制内毒素诱导神经元凋亡的效果.方法 合成正、反义寡核苷酸并克隆入pShuttleH1载体,与含caspase-3及绿色荧光增强蛋白序列的质粒pEGFPC1-Cas3共转染293细胞,流式细胞仪分析荧光强度;pShuttleH1-siCas3线性化后转化到含pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中获取重组质粒,脂质体转染293细胞获取重组腺病毒Ad-siCas3;TCIDs.法测定病毒滴度;感染海马神经元,观察内毒素诱导神经元caspase-3 mRNA的表达及凋亡情况.结果 目的基因序列正确,pShuttleH1-siCas3可明显减弱pEGFPC1-Cas3绿色荧光,Ad-siCas3滴度为1.06×1010 pfu/ml.转染病毒的海马神经元内毒素诱导的凋亡效应及caspase-3 RNA的表达明显减弱.结论 成功地构建了表达大鼠caspase-3 siRNA腺病毒,具有良好的抑制神经元凋亡作用.  相似文献   
8.
目的:观察血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠实验性关节炎模型中的表达,探讨VEGF在类风湿关节炎(RA)发病机制中的作用。方法:30只雄性Wistar大鼠采用皮下注射Ⅱ型胶原的方法诱导实验性关节炎模型,并随机分为6组,每组5只。致敏1、2、3、4、5、6周后分别将各组动物处死,采用免疫组织化学方法对组织中表达的VEGF进行观察,并采用计算机图像分析的方法对各时期VEGF的表达量进行定量分析。结果:大鼠在接受胶原致敏后2周左右发病,滑膜组织中的VEGF蛋白的分泌与炎症发展密切相关。结论:VEGF参与了实验性关节炎滑膜血管翳的形成过程,在RA的发病机制中具有重要意义。  相似文献   
9.
人食管鳞癌细胞的体外培养及生物学性状   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的研究人食管鳞癌细胞的体外培养及生物学性状。方法自原发食管鳞癌组织中获取标本,应用消化培养法培养出可连续传代的肿瘤细胞,对培养的细胞进行形态学观察、免疫组织化学鉴定;MTT法测定细胞数,绘制生长曲线和计算细胞倍增时间,平板克隆实验以测定平板克隆形成率、流式细胞仪测定细胞周期分布。结果30例患者的肿瘤组织有6例成功体外培养出肿瘤细胞,培养出的细胞符合鳞癌特性;细胞生长具有平台期,细胞倍增时间(33.12±6.10)h,平板克隆形成率(15.73±4.46)%;(77.57土6.57)%细胞处于细胞增殖的G0、G1期,少数细胞处于活跃的增殖期。结论人食管鳞癌细胞成功获得了体外培养;肿瘤细胞的增殖能力不同,只有少数细胞增殖活跃。  相似文献   
10.
目的评价动态三维超声心动图(DTDE)对基因转染骨髓基质细胞(BMSCs)移植治疗慢性缺血心肌研究价值.方法在猪冠脉左旋支放置Ameroid环建立慢性心肌缺血模型;4周后分组注射编码血管生长素(ANG)基因腺病毒(Ad)转染的自体BMSCs(Ⅰ组)、编码ANG基因的Ad(Ⅱ组)、单纯BMSCs(Ⅲ组)和空Ad磷酸盐缓冲液(Ⅳ组).再4周后行病理学检查.分别于正常状态、置环后4周和注射后4周开胸时采集二维图像,应用TomTec 4D cardio-view软件进行三维重建和分析,观测各时期左室形态、侧后壁(LPW)回声和运动、左室舒张和收缩末期容积(LVEDV, LVESV)和射血分数(LVEF)变化.结果慢性心肌缺血模型均出现左室重构和LPW室壁运动减弱、回声增强,LEDV明显增大,LVEF明显降低(P<0.01).注射后4周, Ⅰ~Ⅲ组均不同程度出现左室重构现象减轻,LVEDV缩小(P<0.05),LVEF增大(P<0.05),其中以Ⅰ组治疗效果最好,侧后壁室壁回声减弱,运动增强(P<0.05).Ⅳ组与缺血时无明显差异(P>0.05).结论 DTDE对评价基因转染细胞移植治疗慢性缺血心肌具有重要应用价值.  相似文献   
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