沥水调脂胶囊在体外对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨沥水调脂胶囊治疗动脉粥样硬化的作用机理和弱氧化型低密度脂蛋白在动脉粥样硬化由痰致瘀过程中的作用。方法：以甲醇除蛋白后的沥水调脂胶囊含药血清和弱氧化型低密度脂蛋白(mox-LDL)处理血管平滑肌细胞(VSMC)，用^3H—TdR掺入法检测DNA合成率。结果：低浓度的除蛋白含药血清(5％、10％)在5、10μg／ml的nox-LDL处理VSMC细胞组中与对照组比较，差异均无显著性意义；高浓度除蛋白含药血清(20％)对两个不同浓度的mox-LDL诱导的VSMC增殖均有明显的抑制作用(抑制率分别为40％、42％，P＜0．05)；其作用方式与维生素E相似。结论：沥水调脂胶囊呈浓度依赖方式抑制mox-LDL诱导的VSMC增殖，其机制可能与该药的抗氧化作用有关，进一步提示氧化损伤是由痰致瘀过程中的关键环节，以及抗氧化可能是阻止由痰致瘀的主要手段。     

不同预处理的沥水调脂胶囊含药血清对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨用不同方法处理的含沥水调脂胶囊药物血清对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:用3H-TdR掺入法观察不同浓度3种含药血清对2种浓度mox-LDL诱导VSMC DNA合成率变化的影响.结果:除蛋白含药血清可抑制mox-LDL诱导的VSMC DNA合成率增加,而未经处理和灭活含药血清无明显影响.结论:在血管平滑肌增殖研究中,使用除蛋白含药血清可能有利于排除对实验的干扰.     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白影响内皮细胞Bcl-2、Bax、p53和caspase-3蛋白表达的调节

目的：研究沥水调脂胶囊抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的机制。方法：沥水调脂胶囊舍药血清和ox-LDL与人脐静脉内皮细胞(hUVEC)共同孵育15h，用免疫荧光标记结合流式细胞仪分别测定Bcl—2、Bax、p53和caspase-3蛋白表达量。结果：发现ox-LDL可使hUVEC Bcl—2蛋白表达降低，Bax、p53和caspase-3蛋白表达量升高，而沥水调脂胶囊可使ox-LDL对Bcl-2、p53和caspase-3的上述作用明显减弱，但对Bax未见明显影响。结论：沥水调脂胶囊抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡，可能是从正反两个方面、多条途径调节与凋亡密切相关的基因表达以及保护细胞结构功能有关。     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白影响内皮细胞Bcl-2、Bax、p_(53)和caspase-3蛋白表达的调节

目的 :研究沥水调脂胶囊抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的机制。方法 :沥水调脂胶囊含药血清和ox LDL与人脐静脉内皮细胞 (hUVEC)共同孵育 15h ,用免疫荧光标记结合流式细胞仪分别测定Bcl 2、Bax、p53 和caspase 3蛋白表达量。结果 :发现ox LDL可使hUVECBcl 2蛋白表达降低 ,Bax、p53 和caspase 3蛋白表达量升高 ,而沥水调脂胶囊可使ox LDL对Bcl 2、p53和caspase 3的上述作用明显减弱 ,但对Bax未见明显影响。结论 :沥水调脂胶囊抑制ox LDL诱导的血管内皮细胞凋亡 ,可能是从正反两个方面、多条途径调节与凋亡密切相关的基因表达以及保护细胞结构功能有关。     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨沥水调脂胶囊血清对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞凋亡的影响。方法：复制氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导血管内皮细胞凋亡模型，采用流式细胞术、形态学观察、DNA片段琼脂糖凝胶电泳等方法，观察沥水调脂胶囊含药血清对氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的作用。结果：200μg/ml ox-LDL作用于培养的人脐静脉内皮细胞24h后，凋亡率明显升高，Hoechst33342染色，荧光显微镜上可观察到早、中、晚期各种典型的凋亡细胞，DNA电泳可见细胞凋亡特有的梯形条带。沥水调脂胶囊血清使内皮细胞凋亡率明显下降，DNA凋亡带减弱。结论：沥水调脂胶囊对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡有一定的抑制作用。     

血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对溶血磷脂酸诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察血府逐瘀胶囊及血塞通胶囊含药血清对溶血磷脂酸（LPA）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖效应的影响。方法采用贴块法培养大鼠主动脉VSMC并分为7组：空白血清组，血府逐瘀胶囊含药血清组，血塞通胶囊含药血清组，3组分别＋LPA组，卡托普利含药血清＋LPA组。以四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察不同含药血清对细胞增殖的影响；采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量。结果空白血清＋LPA组、血府逐瘀胶囊含药血清组较空白血清组0D值升高（P〈0．05），S期指数升高（P〈0．01）。血府逐瘀胶囊含药血清＋LPA组、血塞通胶囊含药血清＋LPA组较卡托普利含药血清＋LPA组0D值降低（P〉0．05，P〈0．01）；S期指数升高（P〈0．01，P〉0．05）。结论LPA、血府逐瘀胶囊对体外培养的VSMC有促增殖作用，血塞通胶囊无促增殖作用。血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对LPA诱导的VSMC增殖有拮抗作用，血塞通胶囊作用更强。其作用机制部分与抑制DNA合成、阻止细胞进入S期有关。     

通冠胶囊对兔血管平滑肌细胞增殖的影响

目的采用血清药理方法观察通冠胶囊对体外培养的兔血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法给SD大鼠灌胃通冠胶囊水煎剂,每日1次,连续9d,制备含药血清;培养并传代兔的VSMC,采用噻唑蓝(MTT)比色法观察通冠胶囊含药血清对VSMC增殖的影响。结果通冠胶囊含药血清组测得的MTT值小于对照组,两者之间差异有显著性。结论通冠胶囊可以明显抑制VSMC增殖。     

小白菊内酯对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨小白菊内酯对血管平滑肌细胞增殖的影响及作用机制。方法:培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),Western印迹杂交法检测c-fos,c-myc,p15,p16,p18,p19蛋白表达,流式细胞仪检测VSMC周期情况,[³H]TdR参入测定VSMC的DNA合成。结果:小白菊内酯以时间依赖关系抑制c-fos,c-myc蛋白表达,但不影响p15,p16,p18,p19蛋白表达,以剂量依赖关系使VSMC周期中的G₀/G₁期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,同时抑制VSMC的[³H]TdR参入。结论:小白菊内酯可能通过抑制c-fos,c-myc蛋白表达,而不是影响p15,p16,p18,p19蛋白表达来抑制VSMC增殖。     

血府逐瘀汤对血管平滑肌细胞c-fos及c-jun蛋白表达影响的实验研究

目的探讨血府逐瘀汤及其拆方对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞MAPK下游效应因子c-fos、c-jun蛋白表达的影响。方法采用高脂饲料复制动脉粥样硬化模型,免疫组织化学法检测主动脉c-fos、c-jun的表达。结果与空白组比较,模型组c-fos、c-jun表达显著增高（P〈0.01）;与模型组比较,血府逐瘀汤组和桃红四物组c-fos表达均降低（P〈0.05或P〈0.01）;血府逐瘀汤组、桃红四物组和四逆散组c-jun蛋白表达均降低（P〈0.05）;四逆散组c-fos差异无统计学意义（P〉0.05）。结论血府逐瘀汤可以有效降低血管平滑肌c-fos、c-jun阳性颗粒的表达,可能是其抗动脉粥样硬化血管平滑肌细胞增殖的机制之一。     

疏肝调神针法对偏头痛大鼠脑中c-fos、c-jun表达的影响

目的:通过颈后皮下注射硝酸甘油构建偏头痛模型大鼠,观察疏肝调神针法对偏头痛模型大鼠中脑c-fos、c-jun基因、蛋白的表达,探讨疏肝调神针法对偏头痛防治的作用机制。方法:Wistar大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、普通针刺组、疏肝调神组。采用颈后皮下注射硝酸甘油制备偏头痛模型。疏肝调神组取百会、风池(双)、内关(双)、太冲(双)、普通针刺组取百会、风池(双)进行针刺,余组只抓取固定。分别采用荧光定量PCR法、Western Blot法检测大鼠中脑c-fos、c-jun基因、蛋白的表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠中脑c-fos、c-jun基因、蛋白表达均显著升高(P 0. 01);与模型组比较,疏肝调神组、普通针刺组大鼠中脑c-fos、c-jun基因、蛋白表达均有明显降低(P 0. 01);与普通针刺组比较,疏肝调神组大鼠中脑c-fos、c-jun基因、蛋白表达均有不同程度降低(P 0. 01)或(P0. 05)。结论:针刺可以下调偏头痛模型大鼠中脑部c-fos、c-jun基因、蛋白的表达,抑制三叉神经血管系统痛觉信号的传导,缓解偏头痛的发生,而疏肝调神针法在抑制c-fos、c-jun基因、蛋白的表达上更具优势。     

草果知母汤在阻断PTZ点燃癫痫模型中对大鼠脑内c-fos、c-junmRNA表达的影响

目的：探讨草果知母汤抗痫作用的分析生物学机制。方法：选用ＳＤ大鼠以戊四唑（ＰＴＺ）诱导产生癫痫动物模型，应用分子原位杂交技术观察草果知母汤对ＰＴＺ点燃癫痫大鼠脑内ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ基因表达的影响。结果：ＰＴＺ点燃癫痫大鼠脑内ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ基因表达明显增强，草果知母汤能明显阻断其表达，并显示出良好的抗痫作用。结论：草果知母汤的抗痫作用机制可能与降低脑内ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ基因表达水平有     

调脂积冲剂对脂肪肝大鼠肝脏PPAR-γmRNA表达的影响

目的：观察调脂积冲剂对高脂饮食诱导的脂肪肝大鼠的防治作用及对肝脏PPAR-γmRNA表达的影响,探讨其可能作用机制。方法：将SD大鼠49只随机分成空白组、模型组、易善复组、调脂积组。上午,正常组给予普通饲料喂养,模型组、易复善组和调脂积组给予高脂乳剂;下午,两个治疗组分别给予对应药物,空白组和模型组给予生活饮用水灌胃。8周末处死实验大鼠。测定肝脏总胆固醇（TC）和甘油三脂（TG）的含量;HE染色观察肝组织病理变化;采用RT-PCR检测大鼠肝脏PPAR-γmRNA的表达。结果：肝组织出现明显的脂肪变和炎性侵润;与模型组相比,调脂积组TG明显降低;模型组大鼠肝组织PPAR-γmRNA表达减少,调脂积组则显著升高。结论：调脂积冲剂能增加肝脏PPAR-γmRNA的表达。     

“肾应冬”调控机制的分子生物学实验研究

目的：“肾应冬”是中医基础“五脏应时”理论的一个部分。方法：采用大鼠松果体摘除模型,运用原位杂交技术,探讨了在冬至、夏至SD雄性大鼠睾丸c-fos和c-jun的mRNA的变化规律。结果：睾丸c-fos和c-jun的mRNA具有冬至表达强、表达量多,夏至表达弱、表达量少的特点和趋势。摘除松果体在冬至使睾丸c-fos和c-jun的mRNA明显减弱,而在夏至则使睾丸c-fos和c-jun的mRNA明显增强。结论：1.“肾应冬”在生殖方面的调控机制可能是,通过对肾所藏的生殖之精的两种调控成分即促进生殖之精的物质和抑制生殖之精的物质而起作用。肾封藏的抑制生殖之精的物质和功能在冬季加强,而所储藏的促进生殖之精的物质和功能在冬至减弱,故在冬至,肾外泻生殖之精的功能减弱,生殖机能处于低潮。2.“肾应冬”的调控机制是肾中精气随季节的变化以松果体为中介,通过影响睾丸的c-fos和c-jun的mRNA表达来调节季节性生殖活动。3.中医“肾应冬”具有客观物质基础,,中医“以时测脏”具有正确性和科学性。     

滋补肝肾、益气活血方药对血管平滑肌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的:采用血清药理学方法研究滋补肝肾、益气活血方药对内皮素(ET)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及相关基因表达的影响。方法:采用3HTdR掺入实验检测VSMC增殖状态,应用Northern杂交、反转录聚合酶链反应(RTPCR)检测中药血清对VSMC诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因和ET诱导的cjun、增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达活性的影响。结果:中药血清可明显抑制ET对VSMC的促丝裂作用(P<005);抑制原癌基因cjun和PCNA基因表达,促进iNOS转录。结论:滋补肝肾、益气活血方药通过调节iNOS和细胞增殖相关基因的表达活性进而阻止VSMC增殖。     

滋补肝肾,益气活血方药对血管平滑肌细胞增殖及相关基因表 …

目的：采用血清药理学方法研究滋补肝肾、益气活血方药对内皮素（ＥＴ）诱导的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和ＷＫＹ大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖及相关基因表达的影响。方法：采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验检测ＶＳＭＣ增殖状态,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交,反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测中药血甭中ＶＳＭＣ诱导一氧化氮合酶基因和ＥＴ－诱导和ｃ－ｊｕｎ、增殖细胞怕（ＰＣＮＡ）基因表达活性的影响。结果：中导型一氧     

一氧化氮对培养的兔动脉平滑肌细胞c-fos及c-jun基因表达的影响

目的：研究一氧化氮对动脉平滑肌细胞ｃｆｏｓ及ｃｊｕｎ基因表达的影响及其机制。方法：①用贴块法培养兔动脉平滑肌细胞。②细胞计数判定一氧化氮,ＦｅＳＯ４,亚甲蓝有无细胞毒作用。③用异硫氰酸胍一步法提取ＲＮＡ。④用地高辛标记检测试剂盒进行ＲＮＡＤＮＡ斑点杂交。结果：在没有细胞毒作用的前提下,一氧化氮明显抑制兔动脉平滑肌细胞的ｃｆｏｓ及ｃｊｕｎ基因表达,而ＦｅＳＯ４和亚甲蓝均对抗这种作用。结论：一氧化氮通过ｃＧＭＰ途径抑制动脉平滑肌细胞ｃｆｏｓ及ｃｊｕｎ基因表达,很可能是它抑制动脉平滑肌细胞增殖的重要机制之一。     

青蒿素对糖尿病大鼠肾组织c-jun及c-fos基因表达上调的抑制作用

目的探讨青蒿素对糖尿病大鼠肾组织c-jun及c-fos基因表达上调的抑制作用。方法15只大鼠分成正常对照组（A组）、糖尿病非治疗组（B组）及糖尿病青蒿素治疗组（c组）,B组、c组应用腹腔单剂量注射链脲佐菌素（STZ）65mg／kg制备糖尿病大鼠实验模型,c组大鼠给予青蒿素300mg／（kg·d）腹腔注射。在实验进行到第4周时每组处死大鼠,留取右侧肾脏部分皮质,采用免疫组化及RT-PCR方法分别检测大鼠肾细胞c-iunmR-NA、c-fosmRNA及其蛋白表达情况,并观察肾组织细胞的病理改变。结果B组大鼠肾细胞C-junmRNA、c-fosmRNA及其蛋白表达显著增加;C组上述指标表达水平分别对2组患者,大鼠肾脏组织病理学改变明显改善。结论青蒿素可通过抑制糖尿病大鼠肾组织细胞c-jun及c-fos基因表达上调而缓解糖尿病大鼠肾脏功能损伤及病理学改变。     

芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体感染的影响

目的探讨芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体感染的影响。方法采用MTT、流式细胞术考察体外芩百含药血清对肺炎支原体感染的A549细胞增殖能力和凋亡的影响。运用RT-PCR、免疫组织化学检测体内小鼠肺组织MEK、c-jun mRNA及蛋白表达,HE染色观察肺组织病理改变。结果与模型组比较,芩百含药血清(10%、20%)组能促进肺炎支原体感染的A549细胞增殖并抑制细胞凋亡(P<0.05)。体内实验表明,芩百清肺浓缩丸能减轻MP感染小鼠肺组织损伤;促进肺组织MEK、c-jun mRNA及蛋白表达(P<0.05)。结论芩百通过激活MEK和c-jun因子表达促进肺炎支原体感染肺上皮细胞的修复。     

新清开灵干预脑出血后急性期ERK1/2、c-fos、c-jun的实验研究

目的:观察大鼠脑出血后血肿周围组织48 h、72 h后ERK1/2、c-fos、c-jun的表达,探讨新清开灵注射液干预大鼠脑出血后MMP-9表达从而抑制血肿周围脑水肿的作用途径。方法:采用尾状核注射胶原酶的方法复制大鼠脑出血的动物模型,并给予新清开灵注射液进行干预,Western blot方法对脑组织ERK1/2、c-fos、c-jun进行检测。结果:脑出血后模型组c-jun各时间点表达水平均升高,72 h达到高峰,皆有统计学意义(P<0.01)。与脑出血48 h模型组相比较,同一时间点新清开灵小剂量组血肿周围脑组织c-jun表达减少,在统计学上有显著性差异(P<0.01)。与脑出血模型72 h组比较,同一时间点新清开灵小剂量组血肿周围脑组织c-jun表达减少,具有统计学意义(P<0.05),大剂量组血肿周围脑组织中c-jun表达亦减少,在统计学上有显著性差异(P<0.01)。脑出血模型组ERK1/2、c-fos各时间点表达水平均升高,48 h达高峰,但均无统计学意义(P>0.05)。与同一时间点模型组相比较,新清开灵小剂量组、大剂量组血肿周围脑组织ERK1/2、c-fos表达均降低,但在统计学上均无差异(P>0.05)。结论:通过抑制c-jun干预MMP-9表达是新清开灵注射液干预脑出血后MMP-9表达,并以进一步减轻脑水肿的可能途径。