沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白影响内皮细胞Bcl-2、Bax、p53和caspase-3蛋白表达的调节

目的：研究沥水调脂胶囊抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的机制。方法：沥水调脂胶囊舍药血清和ox-LDL与人脐静脉内皮细胞(hUVEC)共同孵育15h，用免疫荧光标记结合流式细胞仪分别测定Bcl—2、Bax、p53和caspase-3蛋白表达量。结果：发现ox-LDL可使hUVEC Bcl—2蛋白表达降低，Bax、p53和caspase-3蛋白表达量升高，而沥水调脂胶囊可使ox-LDL对Bcl-2、p53和caspase-3的上述作用明显减弱，但对Bax未见明显影响。结论：沥水调脂胶囊抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡，可能是从正反两个方面、多条途径调节与凋亡密切相关的基因表达以及保护细胞结构功能有关。     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨沥水调脂胶囊血清对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞凋亡的影响。方法：复制氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导血管内皮细胞凋亡模型，采用流式细胞术、形态学观察、DNA片段琼脂糖凝胶电泳等方法，观察沥水调脂胶囊含药血清对氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的作用。结果：200μg/ml ox-LDL作用于培养的人脐静脉内皮细胞24h后，凋亡率明显升高，Hoechst33342染色，荧光显微镜上可观察到早、中、晚期各种典型的凋亡细胞，DNA电泳可见细胞凋亡特有的梯形条带。沥水调脂胶囊血清使内皮细胞凋亡率明显下降，DNA凋亡带减弱。结论：沥水调脂胶囊对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡有一定的抑制作用。     

氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对内皮细胞损伤的可能机制.方法 用不同质量浓度的ox-LDL处理体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24h,观察HUVECs的形态学变化,评价细胞增殖,观察PI染色后细胞核的形态改变.使用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比,100mg/L ox-LDL能够促进细胞增殖,200mg/L ox-LDL对细胞增殖无影响,400mg/L ox-LDL明显抑制细胞增殖并可明显引起细胞凋亡,与空白对照组比较差异有统计学意义.结论 ox-LDL能抑制内皮细胞增殖并引起细胞凋亡,这可能与其致动脉粥样硬化(AS)作用机制有关,可用ox-LDL刺激体外培养的内皮细胞进行AS研究.     

沥水调脂胶囊对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞c-jun、c-fos、c-myc mRNA表达的影响

目的：探讨沥水调脂胶囊抑制血管平滑肌细胞增殖的机制。方法：用消化法获取血管平滑肌细胞(VSMC)，DMEM培养，以甲醇除蛋白后的沥水调脂胶囊含药血清、弱氧化型低密度脂蛋白(mox-LDL)和vitE分组处理细胞，RT-PCR扩增c-jun、c-fos、c-myc，用凝胶成像分析仪分析琼脂糖电泳结果，与GAPDH对照进行半定量分析。结果：在处理后30min含药除蛋白血清和vitE对mox-LDL诱导VSMCc-jun、c-fos、c-myc mRNA表达均无明显影响，在1h、2h vitE组与对照纪比较均有明显差异(P＜0．05)。含药除蛋白血清组c-jun、c-fos在1h、2h与对照组比较无明显差异，c-jun则明显降低(P＜0．05)，与vitE的作用不相同。结论：降低JNK／SAPK途径信号途径可能是沥水调脂胶囊抑制VSMC增殖的机制之一。     

沥水调脂胶囊在体外对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨沥水调脂胶囊治疗动脉粥样硬化的作用机理和弱氧化型低密度脂蛋白在动脉粥样硬化由痰致瘀过程中的作用。方法：以甲醇除蛋白后的沥水调脂胶囊含药血清和弱氧化型低密度脂蛋白(mox-LDL)处理血管平滑肌细胞(VSMC)，用^3H—TdR掺入法检测DNA合成率。结果：低浓度的除蛋白含药血清(5％、10％)在5、10μg／ml的nox-LDL处理VSMC细胞组中与对照组比较，差异均无显著性意义；高浓度除蛋白含药血清(20％)对两个不同浓度的mox-LDL诱导的VSMC增殖均有明显的抑制作用(抑制率分别为40％、42％，P＜0．05)；其作用方式与维生素E相似。结论：沥水调脂胶囊呈浓度依赖方式抑制mox-LDL诱导的VSMC增殖，其机制可能与该药的抗氧化作用有关，进一步提示氧化损伤是由痰致瘀过程中的关键环节，以及抗氧化可能是阻止由痰致瘀的主要手段。     

不同预处理的沥水调脂胶囊含药血清对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨用不同方法处理的含沥水调脂胶囊药物血清对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:用3H-TdR掺入法观察不同浓度3种含药血清对2种浓度mox-LDL诱导VSMC DNA合成率变化的影响.结果:除蛋白含药血清可抑制mox-LDL诱导的VSMC DNA合成率增加,而未经处理和灭活含药血清无明显影响.结论:在血管平滑肌增殖研究中,使用除蛋白含药血清可能有利于排除对实验的干扰.     

银杏黄酮苷元对氧化型低密度脂蛋白诱导的人主动脉内皮细胞氧化损伤的影响

目的 观察银杏黄酮苷元（Ginkgo flavone aglycone,GA）对氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）诱导的人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAECs）氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法 体外培养HAECs,分为6组,即空白对照组、ox-LDL组、VitE组以及GA30、60、90 mg/L组。除空白对照组外,其余5组均加入ox-LDL 150 mg/L复制氧化损伤模型;GA30、60、90 mg/L组分别给予相应剂量GA干预;VitE组给予VitE 200 μmol/L干预。采用MTT法检测细胞存活率;CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧（ROS）含量;酶联免疫吸附法检测NADPH氧化酶含量;硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）水平;Griess reagent法测定一氧化氮（NO）含量;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）的含量。结果 与空白对照组（100.00%）比较,ox-LDL组（70.68%）细胞存活率明显降低（P<0.05）;VitE组、GA30 mg/L组、GA60 mg/L组细胞存活率分别为88.95%、83.25%、94.93%,均明显高于ox-LDL组（P<0.05）,以60 mg/L GA作用更强。与空白对照组比较,ox-LDL组细胞内ROS、MDA及NADPH氧化酶水平增加,NO含量及SOD活性降低,差异均有统计学意义（P<0.05）;与ox-LDL组比较,GA30 mg/L组、GA60 mg/L组及VitE组细胞内ROS、MDA及NADPH氧化酶水平降低,NO含量及SOD活性增加,差异均有统计学意义（P<0.05）,以60 mg/L GA作用更强。结论 GA可明显抑制ox-LDL诱导的ROS合成,降低MDA水平,升高NO。其作用机制可能与SOD活性增加及NADPH氧化酶活性降低有关。     

天麻素对氧化低密度脂蛋白诱导牛主动脉内皮细胞损伤的保护作用

目的：研究天麻素对氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）所致牛主动脉内皮细胞损伤的保护作用。方法：本实验采用Cu^2＋体外介导人低密度脂蛋白（LDL）模型,利用Ox—LDL诱导新生牛主动脉内皮细胞损伤,观察天麻素对LDL的氧化修饰以及对Ox—LDL所致内皮细胞毒性和O2-产生的抑制作用。结果：Ox-LDL对血管内皮细胞的毒性作用得到有力证实：Ox-LDL可以剂量依赖性地降低内皮细胞存活率,并可损伤细胞膜,引起乳酸脱氢酶的泄露;同时观察到Ox-LDL损伤内皮细胞的形态变化。天麻素能够显著抑制LDL氧化过程中的脂褐素和维生素E含量,并从生化和形态学方面显著减轻Ox-LDL对内皮细胞的细胞毒性;其作用可能与降低O2-的产生量有关。结论：天麻素在保护人血浆中LDL、抑制LDL的过氧化修饰并减少Ox-LDL对细胞损伤方面具有重要作用。     

黄酮醇类化合物对心肌细胞凋亡过程caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达影响

 目的研究槲皮素、杨梅素、桑色素和芦丁对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法体外培养Wistar乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞凋亡模型;随机分组:正常组,损伤组和用药组。用药组分别加入30μmol·L^-1的4种黄酮醇类化合物,孵育1h后,除正常组之外,加入H₂O₂诱导细胞凋亡。加入不同浓度的药物后,采用MTT法观察细胞存活情况,来进行药物有效浓度的筛选。采用TUNEL、流式细胞仪法检测心肌细胞凋亡情况,免疫组化法检测caspase-3蛋白、Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果MTT结果显示,4种黄酮醇类在5和30μmol·L^-1时对细胞没有毒性。4种黄酮醇类化合物与损伤组比较,槲皮素、杨梅素、桑色素的心肌细胞凋亡率降低、Bcl-2/Bax比值增大、抑制caspase-3蛋白的活化。结论槲皮素、杨梅素和桑色素对心肌细胞凋亡有保护作用,可以通过抑制caspase-3蛋白的活化、上调Bcl-2蛋白的表达或是降低Bax的表达来发挥作用,槲皮素表现出较强的抗凋亡活性。     

小檗碱对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨小檗碱是否具有保护内皮细胞的作用。方法用不同浓度的小檗碱预处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs),再用400mg/L的氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导HUVECs损伤,通过评价细胞增殖、上清液中一氧化氮(NO)及内皮素(ET-1)含量来评价小檗碱对内皮细胞的保护作用。结果 400mg/LOX-LDL能明显抑制HUVECs增殖,下调细胞分泌NO含量,上调ET-1含量;而与模型组相比,小檗碱预处理组细胞增殖活性明显增加,NO含量增加,ET-1含量降低,但随着小檗碱浓度的增加,这种保护作用逐渐减弱。结论小檗碱能够减轻OX-LDL对HUVECs的损伤,对HUVECS具有一定的保护作用。     

黄芩苷对氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞凋亡的防护作用

目的：研究黄芩苷抑制氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的血管内皮细胞凋亡及其介导机制。方法：应用大鼠模型,以低密度脂蛋白（LDL）体内诱导血管内皮细胞凋亡,并以黄芩苷进行干预,观察其对LDL诱导血管内皮细胞凋亡的影响。原位末端标记技术（TUNEL）法检测凋亡细胞,比色法测半胱天冬蛋白酶3（Caspase-3）的活性。结果：LDL组与氯化钠对照组比较,血管内皮细胞凋亡数显著增加,caspase-3酶活性显著增高,黄芩苷干预组与LDL组比较,凋亡细胞数显著减少,caspase-3酶活性下降。结论：LDL可能通过激活caspase-3使大鼠血管内皮细胞凋亡;黄芩苷可通过抑制caspase-3酶活性抑制LDL诱导的细胞凋亡。     

绞股蓝总苷对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用研究

目的:探讨绞股蓝总苷对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用的研究。方法:采用ox-LDL对血管内皮细胞造成损伤模型,并将HUVEC分为空白对照组、模型组、绞股蓝高、中、低剂量组,空白对照组给予常规DMEM液+5%血清,模型组除与空白对照组相同常规DMEM液+5%血清外,予加入100mg/L ox-LDL干预,绞股蓝低、中、高剂量组在分别给予10、50、100 mg/L绞股蓝提取物24 h后,加入100mg/L ox-LDL。观察各组细胞生存活性、线粒体膜电位、iNOS、MMP-9、NF-κB p65、NO、SOD水平等指标变化,其结果应用统计学软件SPSS 19.0进行数据分析。结果:与空白对照组相比,模型组细胞生存活性、线粒体膜电位、NO、SOD等指标水平明显低于空白对照组,iNOS、MMP-9、NF-κB p65等指标水平明显高于空白对照组;对模型组相比,绞股蓝低、中、高剂量组细胞生存活性、线粒体膜电位、NO、SOD等指标水平明显高于模型组,iNOS、MMP-9、NF-κB p65等明显低于模型组。以上结果差异均有统计学意义(P0.05)。结论:绞股蓝总苷具有保护血管内皮细胞活性,维持线粒体膜电位水平,提高血管内皮细胞抗氧化活性等药理作用,并通过以上作用机制起到对氧化低密度脂蛋白损伤的血管内皮细胞的保护作用。     

加味补阳还五汤对氧化型低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:观察加味补阳还五汤(BHT)含药血清和含药血浆对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤血管内皮细胞(VEC)的保护作用及机制,同时比较加味BHT含药血清和含药血浆对VEC生成影响的差异。方法:制备加味BHT含药血清和含药血浆,体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),采用ox-LDL造模,通过噻唑蓝(MTT)法观察细胞活力和Hoechst33258染色法、流式细胞术观察细胞凋亡率,并通过测定一氧化氮(NO),丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力,探讨加味BHT含药血清和含药血浆对ox-LDL损伤VEC的保护作用及含药血清和含药血浆之间的差异。结果:与空白组比较,模型组细胞死亡和凋亡率明显升高(P0.05),和模型组比较,加味BHT含药血清组和含药血浆组能显著降低ox-LDL造成的HUVECs的凋亡和死亡率(P0.05),细胞活性显著增强(P0.05),NO含量,SOD和GPx活力显著提高,MDA含量均显著下降(P0.05)。此外,含药血清组与含药血浆组比较细胞凋亡和死亡率更低(P0.05),含药血浆组与含药血清组比较产生NO含量明显增加(P0.05)。结论:加味BHT含药血清和含药血浆对于oxLDL损伤的VEC具有一定保护作用,其机制可能与改善内皮细胞功能、抗氧化损伤、抑制细胞凋亡有关。在一定条件下对于加味BHT含药血浆保护VEC的作用强于含药血清。     

六味地黄方含药血清对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的：观察六味地黄方大鼠含药血清对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）损伤血管内皮细胞（VEC）的保护作用。方法：以MTT法观察人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的活力和流式细胞仪测定内皮细胞凋亡率,并通过测定胞内丙二醛（MDA）含量及细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）含量与超氧化物歧化酶（SOD）活力,探讨六味地黄方对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。结果：六味地黄方含药血清能促进ox LDL损伤的血管内皮细胞增殖、抑制ox LDL造成的内皮细胞凋亡、降低胞内MDA含量、减少细胞LDH释放量,提高SOD活力及NO含量。结论：六味地黄方对氧化低密度脂蛋白损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用。