沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白影响内皮细胞Bcl-2、Bax、p53和caspase-3蛋白表达的调节

目的：研究沥水调脂胶囊抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的机制。方法：沥水调脂胶囊舍药血清和ox-LDL与人脐静脉内皮细胞(hUVEC)共同孵育15h，用免疫荧光标记结合流式细胞仪分别测定Bcl—2、Bax、p53和caspase-3蛋白表达量。结果：发现ox-LDL可使hUVEC Bcl—2蛋白表达降低，Bax、p53和caspase-3蛋白表达量升高，而沥水调脂胶囊可使ox-LDL对Bcl-2、p53和caspase-3的上述作用明显减弱，但对Bax未见明显影响。结论：沥水调脂胶囊抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡，可能是从正反两个方面、多条途径调节与凋亡密切相关的基因表达以及保护细胞结构功能有关。     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨沥水调脂胶囊血清对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞凋亡的影响。方法：复制氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导血管内皮细胞凋亡模型，采用流式细胞术、形态学观察、DNA片段琼脂糖凝胶电泳等方法，观察沥水调脂胶囊含药血清对氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的作用。结果：200μg/ml ox-LDL作用于培养的人脐静脉内皮细胞24h后，凋亡率明显升高，Hoechst33342染色，荧光显微镜上可观察到早、中、晚期各种典型的凋亡细胞，DNA电泳可见细胞凋亡特有的梯形条带。沥水调脂胶囊血清使内皮细胞凋亡率明显下降，DNA凋亡带减弱。结论：沥水调脂胶囊对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡有一定的抑制作用。     

土槿皮乙酸体外诱导A375-S2细胞凋亡

目的 :研究土槿皮乙酸 (pseudolaricacidB)诱导A375 S2细胞凋亡的作用 ,探讨其抗癌作用机制。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)法、形态学观察、DNA凝胶电泳及Westernblot检测法。结果 :土槿皮乙酸可剂量 时间依赖性的诱导A375 S2细胞凋亡 ,5 μmol·L^-1土槿皮乙酸处理 36h的细胞 ,Hoechst 332 5 8荧光染色后有明显的凋亡小体出现 ;凝胶电泳法显示有明显的DNAladder出现。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl 2 ,Bcl xL和caspase激活的DNA酶抑制物(ICAD)表达量时间依赖性地减少 ,而促凋亡蛋白Bax表达量增加。结论 :土槿皮乙酸对A375 S2细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡 ,降低Bcl 2 ,Bcl xL和ICAD蛋白的表达 ,增加Bax蛋白表达为其诱发A375 S2细胞凋亡的机制之一。     

连豆清脉方水提液干预ANGⅡ诱导内皮细胞凋亡及Bax/Bcl-2,caspase9/XIAP mRNA表达的实验研究

目的观察连豆清脉方水提液对ANGⅡ诱导内皮细胞凋亡干预及Bax/Bcl-2、caspase9/XIAP mRNA表达的影响。方法体外培养大鼠动脉内皮细胞株(RAOEC),连豆清脉方水提液干预ANGⅡ诱导RAOEC凋亡,采用流式细胞仪检测ANGⅡ诱导凋亡及线粒体膜电位改变,RT-PCR荧光相对定量检测Bax/Bcl-2及caspase9/XIAP mRNA表达水平变化,组间差异统计性分析采用Students T-test。结果 ANGⅡ诱导模型组内皮细胞诱导10 h后线粒体膜电位为(0.580±0.137),24 h凋亡率为30.4%±5.2%,连豆清脉方(500μg)组内皮细胞线粒体膜电位(4.361±1.251),24 h凋亡率为13.5%±3.8%,连豆清脉方能够部分抑制ANGⅡ诱导内皮细胞作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR荧光相对定量显示ANGⅡ组Bax和caspase9 mRNA水平显著升高(P<0.05),连豆清脉方干预组下调促凋亡蛋白Bax和caspase 9表达,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达(P<0.05)。结论连豆清脉方脉方能够稳定线粒体膜电位,通过干预Bax、Bcl-2和caspase 9 mRNA表达,抑制ANGⅡ诱导的内皮细胞凋亡。     

沥水调脂胶囊对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞c-jun、c-fos、c-myc mRNA表达的影响

目的：探讨沥水调脂胶囊抑制血管平滑肌细胞增殖的机制。方法：用消化法获取血管平滑肌细胞(VSMC)，DMEM培养，以甲醇除蛋白后的沥水调脂胶囊含药血清、弱氧化型低密度脂蛋白(mox-LDL)和vitE分组处理细胞，RT-PCR扩增c-jun、c-fos、c-myc，用凝胶成像分析仪分析琼脂糖电泳结果，与GAPDH对照进行半定量分析。结果：在处理后30min含药除蛋白血清和vitE对mox-LDL诱导VSMCc-jun、c-fos、c-myc mRNA表达均无明显影响，在1h、2h vitE组与对照纪比较均有明显差异(P＜0．05)。含药除蛋白血清组c-jun、c-fos在1h、2h与对照组比较无明显差异，c-jun则明显降低(P＜0．05)，与vitE的作用不相同。结论：降低JNK／SAPK途径信号途径可能是沥水调脂胶囊抑制VSMC增殖的机制之一。     

姜黄煎对大鼠血管损伤后Bcl-2与Bax和p53的表达影响意义

目的:探讨姜黄煎对大鼠血管损伤后血清中Bcl-2与Bax和p53的表达影响意义。方法:模拟PCI术,采用ELISA法检测144只大鼠血清中Bcl-2与Bax和p53含量。其中姜黄煎干预组36只,生理盐水干预组36只,并与36只假手术组和36只正常组作为对照。结果:姜黄煎组,生理盐水组,假手术组,血清Bcl-2与Bax和p53含量与正常对照组比较差异明显(P0.05);假手术组血清Bcl-2水平含量接近于正常对照组,差异不明显(P0.05);姜黄煎组血清Bcl-2与Bax含量和p53含量与生理盐水干预组,假手术组比较有明显差异(P0.05);与正常对照组比较差异不明显(P0.05)。结论:姜黄煎可上调大鼠Bcl-2蛋白表达,使Bax的蛋白表达明显下降,说明Bc1-2过量表达,Bax/Bc1-2的比值增大,能抑制内皮细胞过度凋亡。二者的比例是决定细胞是否发生凋亡的重要调控因素。同时姜黄煎能够阻滞细胞周期降低P53蛋白的表达,迅速恢复内皮功能,保持完整血管内皮结构。因此,Bcl-2与Bax和p53参与了再狭窄的病理生理变化。检测患者血清Bcl-2与Bax和p53含量的异常变化,可能有助于评估血管损伤后凋亡因子对血管内皮功能和结构的影响。     

藁本内酯抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大及其作用机制

目的:研究藁本内酯(LIG)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的影响,并探讨其作用机制。方法:分离纯化SD大鼠心肌细胞后进行原代培养;将培养的心肌细胞经AngⅡ(0.5 mg·L)诱导和不同质量浓度LIG(20,40,80 mg·L-1)作用1~3 d,另设空白组,在倒置显微镜下观察细胞形态,测定细胞表面积;运用BCA蛋白浓度测定方法测定各组心肌细胞中总蛋白含量;流式细胞术测定各组心肌细胞凋亡率;蛋白质免疫印迹(Western blot)测定各组心肌细胞中p53,Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果:与空白组比较,原代培养的新生大鼠心肌细胞经AngⅡ诱导后细胞形态发生明显变化,心肌细胞出现肥大效应,细胞表面积和细胞总蛋白含量明显增加(P0.05),细胞凋亡率明显上升(P0.05),诱导凋亡p53和Bax蛋白表达明显上升而抑制凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低(P0.05);与AngⅡ单独作用组比较,不同浓度LIG和AngⅡ联合作用能够明显抑制心肌细胞肥大效应,细胞表面积、细胞总蛋白含量及细胞凋亡均逐渐下降并呈剂量依赖效应(P0.05)。结论:LIG能够抑制由AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,并可能通过诱导Bcl-2蛋白表达,抑制p53,Bax蛋白表达而降低细胞凋亡率发挥作用。     

白毛藤诱导人肺癌A549细胞凋亡及其作用机制的研究

目的：研究白毛藤诱导肺癌细胞凋亡的作用及其机制。方法：荧光显微镜观察不同浓度白毛藤诱导A549细胞凋亡的作用,RT—PCR检测Bcl—xl、p53基因表达量的变化。结果：白毛藤具有诱导A549细胞凋亡的作用,并且上调p53基因、降低Bcl—xl基因的表达。结论：白毛藤促进A549细胞凋亡,其机制可能与激活p53基因、抑制Bel—xl基因表达有关。     

丹参酮Ⅱ_A通过miR30b-p53信号通路诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的:研究丹参酮Ⅱ_A诱导人肝癌细胞HepG_2凋亡的作用及其机制。方法:用不同浓度的丹参酮Ⅱ_A处理细胞24 h后,检测LDH释放水平,观察丹参酮Ⅱ_A对HepG_2活力的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡;Real-time PCR检测microRNA30家族主要亚型(a,b,c,d)表达;Western Blot检测肝癌细胞内凋亡相关分子Bax、Bcl-2、Caspase-3及p53蛋白表达水平。结果:丹参酮Ⅱ_A对HepG_2细胞内LDH释放及细胞凋亡的诱导均存在量效关系。≥20μmol/L丹参酮Ⅱ_A能显著诱导细胞凋亡(P0.05),在80μmol/L时最大诱导率达20%。Real-time PCR结果显示,丹参酮Ⅱ_A对miR30b的抑制最为显著。同时丹参酮Ⅱ_A通过抑制miR30b从而诱导了下游分子p53的表达。Western Blot检测结果显示,丹参酮Ⅱ_A上调p53蛋白水平,诱导Bax/Bcl-2及凋亡执行分子Caspase-3的表达。结论:丹参酮Ⅱ_A能诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能为通过调控miR30b-p53介导的细胞凋亡信号通路。     

实验性急性心肌缺血心肌细胞凋亡与p53和Bcl-2蛋白表达的药物干预相关性研究

目的:探讨冠心康干预对实验性急性心肌缺血大鼠p53和Bcl-2蛋白在心肌细胞凋亡表达的影响.方法:通过冠心康胶囊的干预,观察运用TUNEL法检测急性心肌缺血大鼠的心肌细胞凋亡及用免疫组化法检测p53和Bcl-2蛋白在心肌细胞中的表达水平.结果:实验性急性心肌缺血大鼠心肌细胞明显发生凋亡,p53基因蛋白表达显著增强,Bcl-2基因蛋白表达轻度增强,通过冠心康胶囊的干预能明显下调p53基因的蛋白表达,上调Bcl-2基因的蛋白表达,对心肌细胞凋亡的发生起到明显的抑制和阻断作用.结论:冠心康胶囊抗心肌缺血的分子病理机制可能是通过调节缺血心肌p53、Bcl-2基因的蛋白表达,进而抑制和阻断心肌细胞凋亡有关.     

浅论周学海升降出入辨证理论及治法

在中医学发展史中有六经辨证、卫气营血辨证和三焦辨证,晚清医家周学海继承前人的学术思想,并结合自己的临床实践,提出了新的辨证体系--升降出入辨证.在他的代表作<读医随笔>中,他分别从病机、证候类型、治疗宗旨以及升降出入产生障碍的原因等方面阐述了升降出入辨证理论体系的形成,对中医理论和临床有着重大的意义.     

蒲公英采收、初加工、贮藏、包装环节的调查

目的:调查不同产地蒲公英的采收、初加工、贮藏、包装现状并进行有效成分的含量评价,了解蒲公英的多个产后环节,为规范化生产提供依据。方法:对多个产区和药材市场进行实地调研,辅以文献查阅和分析,通过实际生产和有效成分的含量综合,探讨影响蒲公英质量的各种因素。结果:归纳总结蒲公英采收、初加工方法、贮藏条件和包装方面的现状以及存在的问题,通过有效成分的含量比较对蒲公英进行了质量评价。蒲公英在生长旺盛期时,绿原酸、咖啡酸、多糖、总黄酮、总皂苷等有效成分的含量普遍较高。结论:蒲公英以人工栽培为主,采收期对蒲公英质量的影响较大。蒲公英市场需求大时,不能为了产量忽视质量。为控制和提升蒲公英的质量,需要从上述多个环节进行质量全过程控制系统的构建,并制定采后标准操作规程。     

七叶皂苷A～D体外转化规律研究

目的建立HPLC法同时测定七叶皂苷A~D量的方法,考察不同因素水平影响下七叶皂苷A~D的体外转化规律,并优化出最佳转化条件,为调控生产中七叶皂苷A~D的比例提供参考。方法采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05%磷酸水溶液(34∶66)为流动相,柱温为35℃,体积流量为1.0 m L/min,检测波长为200 nm,外标法定量;以七叶皂苷A~D的转化率及有关物质的量为指标,通过单因素实验设计,考察p H值、温度、时间3个因素对七叶皂苷A~D体外转化的影响趋势,再采用中心组合设计-响应面法优选转化条件,利用Design Expert 8.0.5软件分析预测最佳转化条件并进行验证试验。结果七叶皂苷A~D分别在0.39~3.49 mg/m L(r=0.999 5)、0.28~2.55 mg/m L(r=0.999 5)、0.19~1.67 mg/m L(r=0.999 7)、0.07~0.59 mg/m L(r=0.999 7)与峰面积呈良好的线性关系;单因素实验表明,p H值、温度、时间对七叶皂苷A和B、C和D转化率的影响呈现相似的趋势,在p H值5.0~10.0,温度45~85℃,时间0.25~8 h时,七叶皂苷A、B部分转化成七叶皂苷C、D,其他条件下七叶皂苷A~D均转化为有关物质;中心组合设计-响应面法研究得到最佳转化条件为p H值6.9,温度54℃,时间7.4 h,在此条件下,七叶皂苷C、D转化率的综合评分为11.50%,与预测值的偏差5%。结论不同p H值、温度、时间影响下,七叶皂苷A~D的体外转化呈现出一定的规律,响应面法优选出的最佳转化条件稳定可行,可为调控生产中七叶皂苷A~D的比例提供科学的依据。     

荧光光谱法测定人体足三里经穴内、外钙、镁含量的实验研究

足三里经穴人们谓之保健穴,如结合其他经穴使用可主治多种疾病和疼痛。钙和镁是人体不可缺少的无机元素。钙是构成骨骼和牙齿的主要成分,还有维持神经的传导功能、肌肉的伸缩性、心动节律、毛细血管的正常渗透及酸碱平衡的作用,又是多种酶的激活剂,参与血液凝结过程。...     

黄酮类化合物吸收、分布和代谢的研究进展

各种资料及相关实验表明,黄酮类化合物是一种非常重要的生理活性物质,有着很强的药理活性,是中草药的重要成分。笔者就近几年国内外关于黄酮类化合物的文献资料进行分析、归纳和总结,分别按胃、肠和肝脏几个主要吸收和代谢部位及其在体内的分布情况进行介绍。对于黄酮类化合物的吸收、分布和代谢的研究将为开发黄酮类新药打下坚实的理论基础。     

玛拉干·扎拉-乌布斯提取工艺的研究

目的:筛选玛拉干.扎拉-乌布斯总黄酮提取工艺的最佳工艺条件。方法:通过正交设计对玛拉干.扎拉-乌布斯总黄酮提取工艺的条件进行了优化。结果:玛拉干.扎拉-乌布斯总黄酮提取的最佳工艺条件为:药材每次加入12倍量75%乙醇回流提取,提取3次,每次2小时。     

脉诊寸关尺长度探讨

历代医家对寸关尺各部的长度有着不同的见解,其中以“脉取三寸,三部各为一寸”的观点得到了多数医家的认同。研究认为,三部总长度应根据人腕部桡动脉比较浅露肤表的一段长度来确定,在前臂中所占长度比例应与前臂在人身长中所占长度比例相适应;而各部的长度应按寸关尺分别反映人体上、中、下三段的身长比例来确定。按照上述原则计算,三部总长度以2寸最合理,寸关尺长度分别为6分、2分、12分。     

利肝宁对肝纤维化大鼠血清HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN含量的影响

目的 通过观察利肝宁对猪血清诱发的大鼠肝纤维化模型血清胶原含量的影响，阐明本药治疗慢性肝病的机理。方法 猪血清诱发的大鼠肝纤维化模型，用利肝宁灌胃治疗，并用鳖甲煎丸、秋水仙碱作为对照组，观察各组对HA、PcⅢ、IV—C、LN的影响。结果 治疗各组均有不同程度的降低HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN的作用，而以利肝宁组效果最好。结论 利肝宁能够促进胶原降解，对实验性肝纤维化有明显的治疗作用。     

辛热药附子对类阳虚状态的干预实验研究

[目的]以氢化可的松诱导大鼠类阳虚状态为基础,用辛热药附子进行干预,通过检测肾上腺皮质、甲状腺功能、物质能量代谢、心肌酶、钙等相关指标,观察给药后大鼠生物学效应的改变,初步揭示辛热药附子的性-效特征,为辛热药药性理论的阐释提供参考。[方法]SD雄性大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、附子大、小剂量组;模型和附子大、小剂量组肌肉注射氢化可的松,正常组注射等量的生理盐水;造模两周后,正常和模型组眼眶取血并继续造模,附子大、小剂量组开始灌胃,7 d后各组腹股静脉取血,对相关指标进行测定。[结果]附子大剂量对类阳虚大鼠的17-羟皮质类固醇(17-OHCS)、甘油三酯(TG)、钙(Ca)有纠正作用;附子小剂量对类阳虚大鼠的17-羟皮质类固醇(17-OHCS)、三碘甲腺原氨酸(T3)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)、肌酸激酶(CK)、钙(Ca)有纠正作用。[结论]附子大、小剂量组都不同程度的纠正了类阳虚状态,附子小剂量尤为突出。