三七总皂苷含药血清对溶血磷脂酸诱导血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制研究

目的:观察三七总皂苷含药血清对溶血磷脂酸(LPA)诱导的血管平滑肌细胞增殖效应的影响,分析该作用与细胞外信号调节激酶ERK信号通路的关系。方法:采用贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞;以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察不同分组对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量。结果:空白血清+LPA组较空白血清组OD值升高(P<0.05),S期指数升高(P<0.01);三七总皂苷含药血清+LPA组与卡托普利含药血清+LPA组比较OD值降低(P<0.05),S期指数无差异;三七总皂苷含药血清+LPA+PD98059组较空白血清组OD值降低(P<0.05),S期指数无差异。结论:三七总皂苷对LPA诱导的VSMC增殖有拮抗作用,且作用强于卡托普利,其作用机制可能与抑制LPA对ERK信号通路的激活,从而抑制DNA合成,阻止细胞进入S期有关。     

不同预处理的沥水调脂胶囊含药血清对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨用不同方法处理的含沥水调脂胶囊药物血清对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:用3H-TdR掺入法观察不同浓度3种含药血清对2种浓度mox-LDL诱导VSMC DNA合成率变化的影响.结果:除蛋白含药血清可抑制mox-LDL诱导的VSMC DNA合成率增加,而未经处理和灭活含药血清无明显影响.结论:在血管平滑肌增殖研究中,使用除蛋白含药血清可能有利于排除对实验的干扰.     

活血潜阳胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察活血潜阳胶囊对血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法：贴块法行SD大鼠胸主动脉VSMC分离培养。倒置相差显微镜，透射电镜，α-SM-actin鉴定，以血清药理学方法进行实验。采用通法采集药物血清，10^-6mol/LATⅡ为刺激因子，卡托普利（Captopril)为对照，活血潜阳胶囊药物血清分为10%，7.5%,5%,2.5%共4个浓度，采用结晶紫染色法观察细胞生长曲线，测定氚标-胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR)掺入量了解DNA合成的变化。并用透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果：（1）经活血潜阳胶囊处理后。细胞增殖速度明显下降，生长曲线下移，^3H-TdR掺入量减少，DNA合成明显受到抑制，其作用与Captopril相当，且在一定范围内有剂量依赖性。（2）活血潜阳胶囊可以改善ATⅡ引起的细胞超微结构改变，使VSMC仍保持收缩型的特征，与Captopril的作用相似。结论：活血潜阳胶囊能抑制ATⅡ引起的VSMC增生和结构改变，从细胞水平初步探讨了活血潜阳胶囊改善高血压血管重构的机理。     

沥水调脂胶囊对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞c-jun、c-fos、c-myc mRNA表达的影响

目的：探讨沥水调脂胶囊抑制血管平滑肌细胞增殖的机制。方法：用消化法获取血管平滑肌细胞(VSMC)，DMEM培养，以甲醇除蛋白后的沥水调脂胶囊含药血清、弱氧化型低密度脂蛋白(mox-LDL)和vitE分组处理细胞，RT-PCR扩增c-jun、c-fos、c-myc，用凝胶成像分析仪分析琼脂糖电泳结果，与GAPDH对照进行半定量分析。结果：在处理后30min含药除蛋白血清和vitE对mox-LDL诱导VSMCc-jun、c-fos、c-myc mRNA表达均无明显影响，在1h、2h vitE组与对照纪比较均有明显差异(P＜0．05)。含药除蛋白血清组c-jun、c-fos在1h、2h与对照组比较无明显差异，c-jun则明显降低(P＜0．05)，与vitE的作用不相同。结论：降低JNK／SAPK途径信号途径可能是沥水调脂胶囊抑制VSMC增殖的机制之一。     

降压宝蓝片含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移及MMP-9表达的影响

目的:研究降压宝蓝片含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移MMP-9表达的影响。方法:组织贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,分为空白对照组、模型对照组、降压宝蓝片含药血清低、中、高浓度组(体积分数为5%、10%、15%),用10-6mol/L AngⅡ诱导细胞,用噻唑蓝法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移,免疫组化法检测MMP-9表达。结果:与模型对照组比较,15%的降压宝蓝片含药血清可抑制Ang II诱导的平滑肌细胞增殖和迁移(P0.05或P0.01),10%、15%的降压宝蓝片含药血清显著降低细胞的MMP-9表达(P0.05或P0.01)。结论:降压宝蓝片含药血清能抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移,降低MMP-9的表达。     

消斑通脉合剂对PDGF-BB诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

[目的]观察中药复方消斑通脉合剂药物血清对体外培养的VSMCs细胞周期的作用。[方法]体外培养VSMCs,取对数生长期细胞用作实验,MTT法检测不同浓度药物血清对体外培养的VSMCs增殖活力;应用流式细胞仪分析各组细胞周期分布。[结果] MTT法显示药物血清呈剂量依赖性抑制VSMCs增值,高剂量与低剂量比较有统计学差异(P<0.05),流式细胞仪显示药物血清可明显阻滞VSMCs细胞进程,高剂量与低剂量比较有统计学差异(P<0.01)。[结论]中药复方消斑通脉合剂药物血清可以阻滞VSMCs的细胞周期进程,达到抑制VSMCs增殖的作用。     

血府逐瘀胶囊对兔主动脉SMC增殖脂质过氧化的影响

目前,经皮冠状动脉腔内成形术(percutaneous trans.1uminal coronary angioplasty,PTCA)已发展成为一种较成熟的介入性治疗手段,但PTCA术后约有25%～50%患者在PTCA术后3～6个月内发生再狭窄.PTCA术后再狭窄的形成是一复杂机制.血管平滑肌细胞(VSMC)增殖是PTCA术后再狭窄形成的关键环节[1].有资料显示[1],再狭窄的危险因素与自由基和脂质过氧化物有关.血府逐瘀汤源于<医林改错>,作为活血化瘀的经典名方在防治PTCA术后再狭窄的研究中,已经取得了一些成果,但尚未见有用含PTA术后动物血清合并药物血清进行离体定位靶细胞药理研究的实验.本实验主要观察PTA术后血府逐瘀胶囊治疗药物血清对SMC增殖、脂质过氧化的影响.     

通脉宁胶囊对LPC诱导的血管平滑肌细胞增殖及钙超载的影响

通脉宁胶囊是陈淑长教授多年来应用于临床治疗周围血管疾病血瘀证的有效方药,具有益气活血、通络止痛的作用.由黄芪、党参、丹参、当归、赤芍等组成.本实验室前期采用兔颈动脉球囊损伤模型研究通脉宁胶囊对PTA术后RS的预防作用,结果显示通脉宁可明显降低内膜及中膜厚度,减少管壁胶原,使管壁血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达下降,提示抑制VSMC的bFGF及ⅥEGF表达可能是通脉宁胶囊减轻PTA后RS程度的作用机制之一[1],从而为通脉宁胶囊治疗气虚血瘀所致的PTA术后RS提供了一定的理论依据.本实验应用细胞培养技术观察通脉宁胶囊全方及拆方药物血清对LPC诱导VSMC增殖及钙超载的影响.     

通冠胶囊对兔血管平滑肌细胞增殖的影响

目的采用血清药理方法观察通冠胶囊对体外培养的兔血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法给SD大鼠灌胃通冠胶囊水煎剂,每日1次,连续9d,制备含药血清;培养并传代兔的VSMC,采用噻唑蓝(MTT)比色法观察通冠胶囊含药血清对VSMC增殖的影响。结果通冠胶囊含药血清组测得的MTT值小于对照组,两者之间差异有显著性。结论通冠胶囊可以明显抑制VSMC增殖。     

通冠胶囊对球囊血管成形术后血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的：探讨通冠胶囊对兔球囊血管成形术后再狭窄血管平滑肌细胞细胞凋亡的影响。方法：建立兔髂动脉粥样硬化模型，病变血管行球囊血管成形术，2周后处死动物，目的血管段行病理组织学分析。结果：与对照组比较，治疗组血管最终管腔面积较大、内膜／中膜厚度较小，P〈0．05；血管平滑肌细胞增殖（PCNA）降低，细胞凋亡（TUNEL）增加，P〈0．05。动脉粥样硬化组血管平滑肌增殖与细胞凋亡均较血管成形术后组降低，P〈0．01。结论：通冠胶囊防治球囊成形术后再狭窄，机制抑制血管新生内膜增殖、促进细胞凋亡以及调节细胞增殖／细胞凋亡的平衡。     

小白菊内酯对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨小白菊内酯对血管平滑肌细胞增殖的影响及作用机制。方法:培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),Western印迹杂交法检测c-fos,c-myc,p15,p16,p18,p19蛋白表达,流式细胞仪检测VSMC周期情况,[³H]TdR参入测定VSMC的DNA合成。结果:小白菊内酯以时间依赖关系抑制c-fos,c-myc蛋白表达,但不影响p15,p16,p18,p19蛋白表达,以剂量依赖关系使VSMC周期中的G₀/G₁期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,同时抑制VSMC的[³H]TdR参入。结论:小白菊内酯可能通过抑制c-fos,c-myc蛋白表达,而不是影响p15,p16,p18,p19蛋白表达来抑制VSMC增殖。     

中药对血管平滑肌细胞的影响

整理和分析中药对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)的影响。血管疾病对患者的危害较大,VSMC的表型转化、过度增殖和迁移是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)、血管成形术后再狭窄和高血压等血管疾病形成的主要环节,故研究中药对VSMC的调节作用对血管疾病的防治意义重大。对中药促使VSMC表型转化、抑制细胞异常增殖和迁移及其分子机制、基础动物实验等方面的研究文献报道进行总结,并对血管平滑肌细胞与内皮细胞、内皮祖细胞及巨噬细胞之间的关系进行分析。结果表明,中药在AS等血管疾病的防治中具有良好的效果,但由于其成分复杂,作用机制难以明确、质量难以控制及毒副作用限制了其在临床中的应用,故结合中药血清药理学等方法,加强中药活性单体化合物对VSMC调节作用的深入研究或将给血管疾病的防治带来新的希望。     

芦荟大黄素对动脉损伤后血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :探讨中药大黄的活性提取成分———芦荟大黄素对兔髂动脉损伤后离体培养的平滑肌细胞的增殖动力学的影响。方法 :纯种日本大耳白兔髂动脉内皮剥脱术后 48h ,取中膜做平滑肌细胞原代培养。指数增长期中的平滑肌细胞同步化于G0 期后 ,加入浓度梯度为 1 0 - 1 ～ 1 0 - 5g/L的芦荟大黄素于含 1 0 %胎牛血清的细胞培养液中 ,2 4h后 ,用3H TdR脉冲标记 6h ,然后测平滑肌细胞中TdR掺入量 (cpm ,每份样品每分钟脉冲数 )。同样地 ,细胞同步化于G0 期后 ,加入 2 0mg/L芦荟大黄素于含 1 0 %胎牛血清的细胞培养液中 ,作用 2 4h后 ,用流式细胞仪对细胞周期时相进行了测定。以上两实验与对照组加入等体积的细胞培养液。结果 :药物组与对照组比较 ,3H TdR的掺入量有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,药物浓度为 1 0 - 1 ～ 1 0 - 2g/L时 ,抑制率 (对照组cpm -药物组cpm/对照组cpm× 1 0 0 % )高达 90 %以上。药物对平滑肌细胞的抑制呈剂量依赖关系 ,药物浓度越高 ,抑制作用越大。与对照组比较 ,加入芦荟大黄素后 ,G0 /G1 期细胞百分比升高 ,S期百分比下降。细胞由G0 期向S期的转化受到阻滞。结论 :芦荟大黄素是一种强平滑肌细胞抑制剂 ,这种药理作用在体内可能有利于减轻平滑肌细胞的增殖 ,从而减轻导致动脉损伤后再狭?     

大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的改进大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）的培莽方法。方法采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果镜下培养细胞呈典型的“谷-峰状”生长,免疫组化染色显示胞浆内α—actin阳性表达。结论拳法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs。     

芎芍胶囊对动脉粥样硬化兔血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究芎芍胶囊对实验性兔动脉粥样硬化（AS）血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响,并探讨其可能的机制。     

中药抑制生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的研究进展

本文总结了近年来直接抑制某些生长因子诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖,或者利用电镜、免疫组化、印迹法及原位杂交方法直接测量增殖VSMC中生长因子的mRNA或其受体的表达,观察中药及复方对生长因子诱导的VSMC增殖抑制作用的研究。     

淫羊藿苷对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生和平滑肌细胞凋亡的影响

目的:研究淫羊藿苷对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生和平滑肌细胞凋亡的影响。方法:大鼠44只随机分为正常对照组8只,淫羊藿苷60 mg.kg-1组、淫羊藿苷120 mg.kg-1组和模型组各12只。后3组建立鼠颈动脉球囊损伤术后狭窄模型,淫羊藿苷组术前6 d开始ig至实验结束;模型组以等体积生理盐水ig。术后14 d和28 d分批处死动物。取各组动物颈动脉损伤段,常规制片,HE染色,采用计算机图像分析系统测量内膜面积和中膜面积,并计算新生内膜/中膜面积比(I/M);采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TUNEL)检测平滑肌细胞凋亡。结果:给药两组术后14,28 d,损伤部位血管内膜、中膜面积明显小于模型组,差异非常显著(P0.01);球囊损伤后14,28 d,各手术组新生内膜区均出现明显的凋亡细胞,其中淫羊藿苷组较模型组细胞凋亡率显著增高(P0.01),结论:淫羊藿苷可能通过促进平滑肌细胞的凋亡而减轻球囊损伤后新生内膜的增生。     

藿酮胶囊诱导人体血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的：从细胞凋亡水平研究藿酮胶囊抗动脉样硬化的作用机理。方法：实验培养人胚胎胸主动脉平滑肌细胞,用白细胞介素－１（ＩＬ－１）刺激平滑肌细胞建立血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＶＳＭＣ）增生模型,从细胞形态学,ＤＮＡ凝胶电泳,流式细胞术３个方面观察用藿酮胶囊诱导增生的ＶＳＭＣ凋亡现象。结果：透射电镜观察发现：藿酮胶囊处理的ＶＳＭＣ出现细胞皱缩,染色质凝集后细胞