不同品系小鼠的体外受精、胚胎冷冻及移植的比较研究

目的　探讨不同品系小鼠的体外受精、胚胎和精子的低温保存效果。方法　本实验分别在中国科学院上海实验动物中心 (SLAC)和日本熊本大学动物资源开发中心 (CARD)对 13个品系小鼠 (C57BL 6J、BALB c、C3H HeJ、ICR、KM、FVB、MRL、NOD、CBA、DBA 2、CD 1、BDF1、B6C3F1)的体外受精 (IVF)率、胚胎培养及移植成绩进行了比较研究。结果　各品系小鼠新鲜精子的IVF率 15 1%～ 87 9% ,冻融精子的IVF率 8%～ 80 % ;冷冻胚胎的复苏率4 2 6 %～ 83 9% ;冻融胚胎移植后的产仔率在 17 8%～ 5 1 8%。结论　遗传背景不同的小鼠体外受精率、冷冻胚胎复苏率和胚胎移植的产仔率差异有显著性。但同一品系两个实验室间的新鲜精子的IVF率、冷冻胚胎的复苏率及移植产仔率差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;冻融精子的体外受精率CARD明显高于SLAC(P <0 0 1)。     

胚胎质量对冷冻结果的影响分析

自 198 3年冻融胚胎移植临床妊娠首先在澳大利亚获得成功至今 ,冻融胚胎在助孕技术中的作用越来越得到广大学者的重视[1 ,2 ] 。在 90年代初国内人冻融胚胎移植临床妊娠首例在北医三院获得成功。本中心自 1996年开展体外授精 ( IVF)工作后 ,于1997年开始胚胎冷冻工作。本文旨在从胚胎冷冻前质量对冷冻结果的影响方面进行分析。1　对象和方法对象　取 1998～ 2 0 0 0年在本中心行 IVF或单精子卵浆内注射 ( ICSI)并有多余胚胎冷冻解冻的病人 17例 ,年龄为 2 9～ 3 9岁。 17例中 ,IVF为 14例 ,ICSI为 3例 ,按本中心常规 IVF操作[3] ,至…     

小鼠品系影响胚胎移植成功率的比较研究

目的:探讨不同受体鼠和供体鼠品系对胚胎移植成功率的影响以及不同品系胚胎混合移植的可行性. 方法:以Balb/c雄鼠和C57BL/6雌鼠杂交F1代(B6CF1)小鼠24只和昆明鼠(KM鼠)14只作为供体鼠,共取状态良好的受精卵362颗,分别或混合回种于8只B6CF1和16只KM受体鼠输卵管内,比较两种品系鼠的产仔率. 结果:除同品系回种可产仔外,KM鼠和B6CF1杂交鼠受精卵交叉回种B6CF1或KM受体鼠以及两品系受精卵混合回种均可产仔. 其中B6CF1受体鼠产仔率(29.0%)明显高于KM受体鼠(7.0%),B6CF1供体鼠产仔率(16.0%)也略高于KM供体鼠(11.0%);杂交B6CF1受精卵同品系回种产仔率最高(32.0%),KM鼠受精卵同品系回种产仔率仅4.0%,而B6CF1和KM鼠作为受体鼠混合回种两品系受精卵的产仔率分别为25.0%和15.0%. 结论:不同品系小鼠胚胎可交叉或混合回种,小鼠胚胎移植技术不受品系限制,但同品系胚胎移植成功率更高;B6CF1作为胚胎移植实验动物明显优于KM鼠.     

一种以小鼠精子为主导的综合性保种体系

目的 利用活体保种、精子冷冻技术及辅助生殖技术建立一套安全的综合性保种体系.方法 以单侧睾丸摘除方法获得ICR、BDF1、C57BL/6J和GFP四种小鼠的附睾精子进行冷冻保存实验,术后恢复的公鼠继续用于自然繁育.如果无法自然繁育,则将冻融精子用于体外受精(IVF).如果冻融精子仍无法受精获得后代,则需要借助卵胞质内单精子注射技术(ICSI)进行胚胎构建,胚胎移植,直至获得后代.结果 单侧睾摘除的BDF1、C57BL/6J的公鼠可以继续繁育;不育的ICR和GFP小鼠的冻融精子IVF后,只有ICR小鼠可以得到正常的胚胎和子鼠;而以C57BL/6J 为遗传背景的GFP小鼠,其冻融精子只有采用ICSI技术,才可以得到子代.结论 精子冻融小鼠的遗传背景是影响IVF成功与否的关键性因素,同时还建立了一种以小鼠精子为主导的综合性保种体系,既可以达到品系保存的目的,同时又可以最大限度地利用小鼠品系.     

两种玻璃化胚胎冷冻方法对不同品系小鼠胚胎冷冻结果比较

目的 探讨EFS和DAP两种玻璃化冷冻方法对不同品系小鼠胚胎冷冻的效果。方法6个品系小鼠（KM、ICR、BALB/c、C57BL/6J、OB/OB、LAP/rtTA0F59）的2-cell胚胎分别用EFS和DAP两种玻璃化冷冻方法进行冷冻和复苏,比较两种冷冻方法的胚胎复苏率和着床率。结果 6个品系小鼠冷冻胚胎EFS方法的平均复苏率为69.97%（47.9%～83.6%）,DAP方法的平均复苏率47.23%（26.3%～76.7%）EFS方法明显优于DAP方法。其中KM、ICR和BALB/c小鼠EFS方法的冷冻复苏率显著高于DAP方法（P<0.01）;冻融胚胎移植后EFS方法的平均着床率27.23%（1.75%～45.0%）,DAP方法的平均着床率31.43%（7.0%～46.3%）。除KM、ICR小鼠外,其他4个品系小鼠的着床率DAP方法高于EFS方法。结论 KM和ICR远交群小鼠胚胎适合用EFS方法冷冻保存;C57BL/6J、OB/OB、LAP/rtTA0F59三个品系小鼠DAP方法优于EFS方法,但差异不大; BALB/c小鼠两种玻璃化冷冻方法的冻融胚胎着床率均较低,需进一步研究。     

两种抗冷冻剂对不同品系小鼠精子冷冻的影响

目的建立一套比较理想的小鼠精子冷冻复苏的方法。方法采用R18S3和FERTIUPTM-CPA两种保护剂,对DBA/2、C57BL/6J、KM和B6.129S7-Ldlrtm1Her/J四个品系的小鼠精子进行冷冻,冷冻精子用三种方法复苏,以体外受精率来评价精子冷冻的效果。结果以R18S3作为冷冻保护剂,DBA/2(73.3%,88.4%,55.6%)和KM(64.9%,60.2%,39.6%)品系小鼠冷冻精子复苏后体外受精率差异显著(P<0.05),C57BL/6J(3.0%,10.3%,3.7%)和B6.129S7-Ldlrtm1Her/J(0%,5.0%,0%)结果差异不显著(P>0.05);以FERTIUPTM-CPA作为冷冻保护剂,DBA/2(33.6%,14.1%,91.6%)、C57BL/6J(8.4%,21.0%,4.9%)和B6.129S7-Ldlrtm1Her/J(8.2%,10.0%,28.9%)品系小鼠冷冻精子复苏后体外受精率差异显著(P<0.05),而KM(48.1%,48.0%,48.1%)小鼠冷冻精子复苏后体外受精率差异不显著(P>0.05)。结论对于DBA/2和KM品系小鼠来说,用R18S3或FERTIUPTM-CPA冷冻精子,选择一种恰当的复苏方法,均可以得到较理想的体外受精率,而C57BL/6J和B6.129S7-Ldlrtm1Her/J品系小鼠无论采用哪种冷冻保护剂,选择何种方法复苏精子,得到的体外受精率都较低。     

小鼠冷冻胚胎和精子SNP遗传鉴定方法的建立

【摘要】目的 建立小鼠冷冻胚胎和精子SNP(Single-Nucleotide Polymorphism)分型方法,用于冷冻胚胎和精子快速遗传鉴定方案。方法 本研究以中科院上海实验动物中心（国家啮齿类实验动物种子中心上海分中心）提供的小鼠冷冻胚胎和精子为样本,采用全基因组扩增技术和PCR-LDR分型技术建立小鼠冷冻物SNP遗传鉴定方法。结果 全基因组扩增技术能大幅度增加冷冻胚胎样本的DNA总量;PCR-LDR分型方法适用于小鼠全基因组45个SNPs的分型;分型确定C57BL/6, BALB/c, FVB/NJ 等胚胎和精子各10种近交系,SNP位点信息与测序结果一致;小鼠冷冻胚胎个数与SNPs检出个数成正比,当胚胎数达到12以上时SNP检出率100%。结论 实现近交系小鼠冷冻胚胎和精子快速SNP基因分型,及遗传质量鉴定。     

系统低温生物学技术在实验小鼠资源保存中的建立与应用

目的 建立小鼠胚胎与配子冷冻库,以安全、有效地保存小鼠资源.方法 选择不同遗传背景(近交系、远交群、免疫缺陷、疾病模型和基因改变等)的实验小鼠,系统进行了超数排卵、体外受精(IVF)率、胚胎与精子的冷冻复苏效果、卵巢冷冻与移植、辅助体外受精等比较研究.结果 ①小鼠年龄和遗传背景的不同,其超数排卵的结果也不同(P<0.01).三个日龄段中,28日龄最好,其次为112日龄,56日龄最差;不同遗传背景小鼠的超数排卵结果显示,封闭群和大部分近交系小鼠优于转基因小鼠(P<0.05),自发性疾病小鼠和基因剔除小鼠的结果最差;②不同品系小鼠的新鲜精子和冻融精子的体外受精率差异有显著性(P<0.05),特别是C57BL/6J 小鼠冻融精子的IVF率(10.3±4.2%)与新鲜精子(89.8±4.8%)相比,差异极显著(P<0.01);③不同品系小鼠的胚胎复苏率,除MRL/mp小鼠的复苏率略低外,其他小鼠品系均有较高的冷冻胚胎复苏率(58.2%～83.9%),表明,不同遗传背景小鼠之间差异有显著性(P<0.05),但均可以达到有效保存小鼠资源的目的.④小鼠的遗传背景、年龄等对小鼠精子的冷冻效果都有影响,采用改良的FERTIUP冷冻保护剂和细胞质内单精注射(ICSI)技术可有效提高以C57BL/6J为背景的基因改变小鼠的精子冷冻复苏率.⑤卵巢冷冻保存可以改善雌性小鼠的繁殖困难或不孕.结论 小鼠资源的安全保存,除了长期连续繁殖保种外,最好的或最保险的方法是低温保存.通过将胚胎、配子、卵巢等长期保存在液氮(-196℃)中避免遗传性状的改变,并在将来复苏后获得正常的小鼠后代,以用于生物学和医学等研究.     

不同冷冻保护剂用于C57BL／6J小鼠精子冷冻的比较研究

目的 通过对不同冷冻保护剂用于C57BL/6J小鼠精子冷冻后冻融精子体外受精率的比较,建立一套更适合C57BL/6J小鼠精子冷冻的方法.方法 以R18S3为基础液添加不同体积浓度的卵黄和甘油作为冷冻保护剂对C57BL/6J和Y3F小鼠精子进行冷冻,并采用同种方法复苏精子,以体外受精率来评价精子冷冻的效果.结果 以R18S3为基础液分别添加体积浓度为5%、10%、15%、20%、25%卵黄离心后获得的上清液作为冷冻保护剂,C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率分别为18.7%、15.6%、36.0%、40.0%、29.7%,差异显着( P<0.05); 以R18S3为基础液分别添加体积浓度为1%、2%、3%、4%、5%、6%的甘油作为冷冻保护剂, C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率分别为7.8%、10.0%、16.9%、6.0%、10.3%、18.1%,差异显著( P<0.05); 以R18S3+5%卵黄离心后获得的上清液+6%甘油、R18S3+15%卵黄离心后获得的上清液+2%甘油、R18S3+20 %卵黄离心后获得的上清液+1%甘油作为冷冻保护剂,C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率分别为: 16.7%、36.0%、22.9%,差异显著(P<0.05); 以R18S3作为冷冻保护剂,C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率为25%,异常卵裂率为2.6%.Y3F小鼠冻融精子体外受精率为52.2%,异常卵裂率为 5.1%.结论 以R18S3为基础液添加15%或20%的卵黄离心后获得的上清液可以有效提高C57BL/ 6J小鼠冻融精子的体外受精率但添加不同浓度的甘油却降低C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率.添加卵黄和甘油冷冻效果不如卵黄但好于甘油.     

C57BL/6J小鼠冻融IVF原核胚用于Cas9显微注射探讨

目的探讨小鼠体外受精(IVF)冻融后用于Cas9注射的可行性。方法新鲜C57BL/6J小鼠卵子IVF后采用冻存管法(EFS20/40)冷冻原核胚(单细胞胚)和2细胞胚胎,次日复苏后培养。比较冻融原核胚和2细胞胚胎的回收率及成活率。选取部分冻融原核胚与新鲜原核胚同时进行Cas9和稀释液胞质注射并培养至2细胞,分别比较注射后的存活率及2细胞发育率。结果冻融后的B6小鼠原核胚的回收率为92.5%、成活率为92.8%,2细胞胚的回收率为90.5%、成活率95.8%,两组数据差异无显著性(P0.05)。新鲜原核胚Cas9注射后的存活率为92.7%,空白组注射组为97.5%,冻融原核胚Cas9注射后的存活率为82.6%,空白组为92%,冻融组Cas9注射与各组差异有显著性(P0.05),其它各组差异无显著性(P0.05)。注射后的2细胞胚发育率差异无显著性(P0.05)。结论冻融原核胚可用于Cas9显微注射。     

人子宫内膜异位症裸鼠模型的建立及雌、孕激素受体的表达

目的　为子宫内膜异位症 (EM)的临床研究提供实验动物模型。方法　实验组 :取EM和正常育龄妇女分泌晚期子宫内膜 ,剪碎 ,随机置入裸鼠盆腹腔 ,实验Ⅰ组切除卵巢 ,实验Ⅱ组不切除卵巢 ;对照组 :同法置入人大网膜。术后给雌激素支持。各组裸鼠分别于 5、10、15、2 0、2 5、3 0d脱颈椎处死 ,观察异位病灶生长情况。免疫组化SP法检测异位病灶雌、孕激素受体表达。结果　子宫内膜种植 5d即见异位病灶牢固粘附 ,主要发生在腹壁(56% )、膀胱旁脂肪 (2 1% )等部位 ,可见腺体细胞及散在间质细胞 ,时间越长 ,病灶与裸鼠组织融合越明显 ,盆腹腔粘连越重。用EM患者和正常育龄妇女内膜移植的异位病灶无差别 ,实验Ⅰ组和实验Ⅱ组的裸鼠所形成的异位病灶亦无差别 ,它们的雌、孕激素受体表达未显示差别 ,多数呈弱表达。结论　裸鼠做为EM早期动物模型科学、简便、可行。     

三种不同受精方式的冻融胚胎和囊胚分娩结局及新生儿状况

目的比较三种不同受精方式的冻融胚胎和囊胚解冻移植后分娩结局及新生儿状况。方法回顾分析2012年1月～2013年4月于广西科技大学附属妇产医院生殖中心行冷冻胚胎移植（frozen—thawedembryotrans—fer,FET）治疗的2384个周期,按受精方式分为三组：A组常规体外受精（IVF）冻融胚胎解冻周期1436例,移植周期1429例,妊娠481例,分娩385例;冻融囊胚解冻周期545例,移植周期539例,妊娠284例,分娩238例。B组卵胞浆内单精子注射（ICSI）冻融胚胎解冻周期240例,移植周期239例,妊娠77例,分娩63例;冻融囊胚解冻周期66例,移植周期64例,妊娠28例,分娩23例。C组早期补救性卵胞浆内单精子注射（r-ICSI）冻融胚胎解冻周期65例,移植周期65例,妊娠16例,分娩14例;冻融囊胚解冻周期32例,移植周期31例,妊娠17例,分娩17例。比较三组妊娠率、流产率、异位妊娠率、早产率、平均早产孕龄、足月产率、平均足月产孕龄、新生儿男女性别比例、出生体重、出生缺陷等指标是否存在差异。结果A、B、C三组的冻融胚胎的妊娠率分别为33．6％、32．6％、24．6％,囊胚的妊娠率分别为52．7％、43．7％、54．8％,差异均无统计学意义（P〉0．05）。三组冻融胚胎和囊胚的流产率、异位妊娠率、早产率、平均早产孕龄、足月产率、平均足月产孕龄、出生体重、出生缺陷比较差异无统计学意义（P〉0．05）。A、B、C三组冻融胚胎的新生儿男女性别比差异有统计学意义（P〈0．05）,而冻融囊胚的新生儿男女性别比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论与常规IVF相比,ICSI、r-ICSI的冻融囊胚和冻融胚胎是安全有效的治疗手段。     

蛋白4.1R基因敲除小鼠的引种及繁殖

目的:引种、繁殖4.1R基因敲除小鼠,用于蛋白4.1R功能的研究.方法:按照国家进出境动物检验检疫的具体要求,对引种自美国的3对4.1R基因敲除小鼠进行隔离、检疫.引进的种鼠按照SPF动物饲养标准操作规程在IVC屏障系统中进行1雄1雌长期同居方式繁殖,C57BL/6J对照组小鼠采用同样方式饲养繁殖.定期观察记录种鼠的繁...     

昆明(KM)小鼠获得性大肠杆菌肺部感染初探

<正> 作者在山东医大实验动物中心的昆明(KM)小鼠饲育室,从39只有呼吸道症状的小鼠肺部检出大肠艾希氏菌27株,结果表明为获得性大肠杆菌感染。动物室环境条件愈     

豫医无毛小鼠正常肝脏功能指标的测定

对河南医科大学实验动物中心培育的豫医无毛小鼠(YYHL)肝脏功能正常指标进行测定,结果表明所测8项指标中雌雄小鼠间无显著性差异。ALT,AL值高于文献报导的正常昆明鼠。G值偏低,AKP,TBIL,TP与文献报导基本一致,提示豫医无毛小鼠部分肝脏功能指标正常值已发生改变。     

我国商业化SPF级小鼠病原体污染分析

目的 按现行国标《实验动物微生物学检测方法》和《实验动物寄生虫学检测方法》对我国商品化的无特殊病原体(specific pathogen free,SPF)小鼠进行微生物状况检测,为生产高质量的实验动物提供依据.方法 对五家主要实验动物生产单位生产的ICR、KM、C57 BL/6、BALB/c及BA LB/c-nu品系的SPF级小鼠进行随机抽检.检测抽检小鼠所携带的微生物和寄生虫情况.结果 在抽检的SPF级小鼠中,病毒污染主要包括呼肠孤病毒Ⅲ型( Reo-3)、小鼠肺炎病毒(PVM)和多瘤病毒(POLY);主要细菌污染为肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌.这些微生物病原体中,除条件性致病菌绿脓杆菌外,其他病原体对小鼠本身和实验研究均具有一定的影响.     

国家上海KM小鼠种子群体遗传状况分析

目的 对国家啮齿类实验动物种子中心上海分中心KM小鼠种子群体进行群体遗传质量分析与评价。方法 利用筛选出的30个微卫星位点设计引物,对种群中随机抽取的30只KM小鼠样本进行PCR扩增,扩增产物利用STR扫描技术进行测定,用Popgen1.32软件对所得结果进行处理分析。结果 KM小鼠种子群体共得到123个等位基因型,平均有效等位基因数为2.3989,平均杂合度为0.5342,平均多态性信息含量(PIC)为0.4735。结论 上海分中心KM小鼠种子群体具有良好的遗传稳定性和多样性,符合封闭群动物的群体遗传概貌特征。     

C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎冷冻保种技术研究

目的 建立C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎的冷冻保种技术.方法 通过直接收集体内发育的2-细胞胚或者通过体外受精方法获得2-细胞胚,采用玻璃化冷冻法冷冻、复苏、移植,后代经PCR检测.结果 体内发育至2细胞期胚胎90枚,解冻后的平均复苏率是67.78％,移植产仔率是21.31％,后代的阳性率是23.08％;体外受精的2细胞期胚胎203枚,解冻复苏60枚,平均复苏率是63.33％,移植产仔率是15.78％,后代的阳性率是33.33％.结论 两种胚胎冷冻途径均获得了C57-ras癌症转基因动物模型阳性小鼠,建立了该模型动物的低温保存方法.